白杨黄素通过调控氧化应激反应保护脂多糖介导的炎症环境中人牙周膜干细胞的成骨分化能力

目的: 探讨白杨黄素对牙龈卟啉单胞菌(P.g)脂多糖(P.g LPS)介导的炎症环境中人牙周膜干细胞 (hPDLSCs)成骨分化能力的影响。方法：原代培养hPDLSCs, 采用流式细胞术鉴定后取第4代细胞进行实验。采用四唑盐(MTT)试验检测不同浓度P.g LPS (1, 10, 100 和1000 ng/mL)及白杨黄素 (0.1, 0.4, 1.6, 6.25, 25, 50, 100 μmol/L) 对hPDLSCs增殖能力的影响;P.g LPS与成骨诱导剂共培养24h, 48h, 72h和96h后,活性氧 (ROS)试剂盒检测hPDLSCs 的ROS含量, 实时荧光定量聚合酶链式反应 (RT-PCR)检测hPDLSCs锰超氧化物歧化酶(MnSOD), 铜锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)和过氧化氢酶 (CAT) mRNA的表达; P.g LPS与成骨诱导剂共培养3天, 7天, 14天后, 碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测hPDLSCs 的ALP活性, RT-PCR法检测成骨相关转录因子(RUNX2), 锌指结构转录因子(OSX), 碱性磷酸酯酶(ALP) 和骨钙素(OCN) mRNA表达; 25 μmol/L 白杨黄素作用hPDLSCs后, 通过ROS试剂盒检测hPDLSCs 的ROS含量, 及实时PCR法检测抗氧化因子MnSOD、Cu/ZnSOD、CAT及成骨分化基因RUNX2、OSX、OCN和ALP的mRNA表达。结果：与对照组相比, MTT结果显示1000 ng/mL P.g LPS 作用hPDLSCs 72h [(0.51±0.03) 比 (0.68±0.02), 96h后(0.62±0.06) 比 (0.97±0.07), P均<0.05]均对细胞增殖活性受到显著抑制。并且25 μmol/L 的白杨黄素对hPDLSCs 增殖活性无抑制效应 [(99.8±1.02) 比 (100±1.02) %, P>0.05). 与常规成骨诱导液培养细胞相比, P.g LPS显著增加hPDLSCs的ROS含量至 (17.3±1.34) 比(3.12±1.21) ng/ml (P<0.01), 并显著降低抗氧化因子[Cu/ZnSOD, (0.89±0.24) 比 (2.84±0.27); CAT, (1.12±0.09) 比 (2.64±0.28), P均<0.05]和成骨分化基因表达 [ALP活性, (0.94±0.11) 比 (1.25±0.14); RUNX2, (1.42±0.13) 比 (1.97±0.16); OSX (1.97 ±0.16) 比 (2.68 ±0.19); OCN (1.23±0.11) 比 (2.56±0.17), P均<0.05]; 与P.g LPS+成骨诱导液组相比, 白杨黄素显著改善P.g LPS介导hPDLSCs的氧化状态及增强其成骨分化能力[RUNX2, (1.96±0.28) 比 (1.67±0.23); OSX (2.16±0.31) 比 (1.64±0.17), P均<0.05]。结论: 白杨黄素可能对P.g LPS介导的炎症环境中人牙周膜干细胞的成骨分化能力具有促进作用。     

老鹳草素对炎性微环境中人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的 探究老鹳草素(geraniin, GER)对炎性微环境中人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨分化及核因子-κB(NF-κB)的影响。方法 将从人牙周膜组织中分离鉴定的hPDLSCs分为对照组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、0.1μmol/L老鹳草素组(0.1GER组)、1μmol/L老鹳草素组(1GER组)、10μmol/L老鹳草素组(10GER组)和100μmol/L老鹳草素组(100GER组)。对照组hPDLSCs用成骨诱导培养液培养,TNF-α组hPDLSCs用含有10 ng/mL TNF-α的成骨诱导培养液培养,0.1GER组、1GER组、10GER组和100GER组hPDLSCs分别用含有10 ng/mL TNF-α以及0.1,1,10,100μmol/L的老鹳草素的成骨诱导培养液培养。培养21 d,采用可见光比色法检测各组细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性。采用茜素红染色观察钙化结节形成。通过qRT-PCR检测Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、osterix(OSX)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)mRNA相对表达量。通过West...     

SIRT3/MnSOD/ROS参与调控脂肪源性干细胞成骨分化的机制研究

目的:研究脂肪源性干细胞成骨分化过程中,SIRT3/MnSOD/ROS信号通路的调控作用.方法:提取SD大鼠脂肪源性干细胞(adipose derived stem cell,ADSC)并通过细胞表面标志物(CD29、CD44、CD34、CD45)及成骨、成脂多向分化鉴定.体外诱导其成骨分化,检测SIRT3表达情况;利用慢病毒转染抑制SIRT3表达,用茜素红染色检测ADSC成骨分化情况,qPCR检测成骨相关基因Runx2、ALP、OCN的表达,同时利用试剂盒检测锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)的活性及胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平.结果:ADSC成骨分化过程中,细胞内SIRT3 mRNA表达(7 d:1.71±0.03,15.21 ±0.17,P=0.014,n=5;14 d:1.44±0.04,9.70±0.18,P=0.002,n=5)及蛋白质表达(7 d:0.70±0.01,2.99±0.07,P=0.012,n=5;14 d:1.00±0.08,2.74±0.50,P=0.009,n=5)增加.转染SIRT3慢病毒可抑制SIRT3 mRNA表达(7 d:1.02±0.05,0.36±0.01,P=0.011,n=5;14 d:1.04±0.08,0.30±0.02,P=0.002,n=5)及蛋白质表达(7 d:0.88±0.04,0.29±0.01,P=0.034,n=5;14 d:1.18±0.03,0.43±0.01,P=0.014,n=5),导致ADSC成骨分化能力降低,MnSOD活性减弱(0.91±0.13,0.29±0.01,P=0.002,n=5),细胞内ROS水平升高(7 d:1.00±0.10,2.66±0.32,P=0.013,n=5;14 d:1.24±0.10,2.59±0.31,P=0.014,n=5),与成骨相关的相应靶基因Runx2、ALP、OCN表达下降(Runx2:1.07±0.02,0.19±0.01,P=0.001,n=5;ALP:1.09±0.02,0.53±0.01,P=0.001,n=5;OCN:0.95±0.02,0.33±0.01,P=0.004,n=5).加入NAC预处理细胞,可逆转敲减SIRT3对ADSC成骨分化的抑制作用(ROS:2.63±0.20,1.07±0.19,P=-0.010,n=5).结论:ADSC成骨分化过程中,线粒体内SIRT3表达增加.SIRT3通过增强MnSOD的活性来降低胞内ROS水平,从而介导ADSC成骨分化.     

脂多糖和肿瘤坏死因子α对人牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响

目的 探讨脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖和分化的影响。方法 体外分离培养hDPSCs,分别用不同浓度LPS(0,0.1,1,10μg/mL)和TNF-α(0,1,10,100 ng/mL)培养细胞。培养24,48,72 h,应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测hDPSCs增殖活性变化;培养7,14,21 d应用茜素红(AR)染色试剂盒和5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(BCIP)/氯化硝基四氮唑蓝(NBT)碱性磷酸酯酶(ALP)显色试剂盒检测hDPSCs肉眼观AR染色变化、钙结节定量、ALP染色和ALP活性等成骨分化指标。结果 (1)CCK-8实验显示1,10,100 ng/mL TNF-α作用于hDPSCs 24,48,72 h后细胞增殖活力降低(P<0.05)。AR成骨诱导染色结果显示培养7,14 d, TNF-α各浓度组肉眼观AR染色无明显差异;培养21 d, 10 ng/mL和100 ng/mL TNF-α组矿化程度相比0 ng/mL组低(P<0.05)。ALP染色和ALP活性试剂盒分析显示诱导培养7,14,21...     

芍药苷调节LKB1-AMPK信号通路对LPS诱导的牙周膜干细胞凋亡和成骨分化的影响

目的:探讨芍药苷(PF)调节肝激酶B1(LKB1)-腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的牙周膜干细胞(PDLSCs)凋亡和成骨分化的影响。方法:收集对数生长期PDLSCs,分为对照组、LPS组(10μg/mL),LPS+PF低浓度(PF-L,10μg/mL LPS+5μmoL/L PF)组、LPS+PF中浓度(PF-M,10μg/mL LPS+10μmoL/L PF)组、LPS+PF高浓度(PF-H,10μg/mL LPS+20μmoL/L PF)组、LPS+PF-H+LKB1抑制剂(radicicol, 10μg/mL LPS+20μmoL/L PF+10μmoL/L radicicol)组。ELISA检验细胞中炎症因子[白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6]水平；茜素红染色观察矿化结节变化；碱性磷酸酶(ALP)检测细胞成骨分化；流式细胞仪检测细胞凋亡；qRT-PCR检测成骨基因(OPN、RUNX2及OCN)表达水平；Western blot检测LKB1-AMPK通路蛋白及凋亡蛋白(caspase-1)表达水平。结果:与对照组相...     

R-spondin1在促进人骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用

目的:研究Wnt信号通路激活剂R-spondin1在人骨髓间充质干细胞(hBMSC)成骨分化中的作用.方法:用0、5、10、20 μg/L R-spondin1处理hBMSC,利用荧光素酶实验检测R-spondin1对hBMSC中Wnt信号通路的作用,Western blot检测R-spondin1对Wnt信号通路下游靶基因β-catenin蛋白表达的影响;在成骨分化培养基中添加20 μg/L R-spondin1诱导hBMSC成骨分化,检测R-spondin1对早期成骨分化指标ALP活性及成骨分化晚期钙沉积、成骨分化标志物OSX、OCN和成骨分化关键转录因子RUNX2表达的影响.结果:R-spondin1增强hBMSC中Wnt信号通路,R-spondin1增强ALP活性和钙沉积,促进OSX、OCN及RUNX2的表达.结论:R-spondin1增强hBMSC中Wnt信号通路的作用,促进hBMSC成骨分化.     

白杨素通过JAK-STATs 信号通路抑制内毒素诱导的巨噬细胞炎症反应

目的探讨白杨素对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症的调控机制。方法分别用不同浓度（0、5、10、20、40、60、80、100、150、 200 μg/mL）白杨素作用RAW264.7 细胞24 h 后,采用CCK-8 检测细胞活力值;分别用（10、30、60 μg/mL）白杨素预处理 RAW264.7细胞2 h后,用LPS刺激RAW264.7细胞18 h后,采用ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-6和MCP-1的释放水平;分 别用（10、30、60 μg/mL）白杨素预处理RAW264.7 细胞2 h 后,用LPS刺激RAW264.7 细胞4 h 后,运用Western blotting 法检测 JAK-1、JAK-2、STAT-1、STAT-3 的磷酸化水平;分别用（10、30、60 μg/mL）白杨素预处理RAW264.7 细胞2 h 后,用LPS 刺激 RAW264.7 细胞15 min 后,运用CM-H2DCFDA荧光探针检测RAW264.7 细胞内活性氧簇水平;运用ROS清除剂NAC处理 RAW264.7细胞,检测ROS对LPS诱导RAW264.7细胞JAK-STATs信号和炎症反应的影响;运用激光共聚焦显微镜观察转录因 子STAT-1和STAT-3核转位情况。结果在白杨素浓度低于60 μg/mL时,对RAW264.7细胞活力没有显著影响,因此我们选择 10、30、60 μg/mL白杨素作为抑制炎症作用的低、中、高剂量组;白杨素剂量依赖性地抑制LPS诱导的炎症蛋白iNOS的表达;白 杨素剂量依赖性的下调LPS诱导的RAW264.7细胞中促炎因子TNF-α、IL-6和MCP-1的释放（P<0.01）;白杨素抑制RAW264.7 细胞中JAK-STATs信号活化并抑制STAT-1和STAT-3核转位;白杨素抑制RAW264.7细胞内ROS的产生;ROS作为上游信号介 导JAK-STATs信号通路的活化。结论白杨素能有效阻断ROS介导的JAK-STATs信号活化,从而抑制LPS诱导的RAW264.7 细胞炎症反应。     

经皮微创钛缆内固定治疗髌骨骨折的效果及对患者应激反应、骨代谢指标的影响

目的探讨经皮微创钛缆内固定治疗髌骨骨折的效果及对患者应激反应、骨代谢指标的影响。方法选取我院自2018年1月至2020年1月收治的77例髌骨骨折患者,按照术式的不同分为对照组38例、观察组39例。对照组给予传统切开复位术治疗,观察组给予经皮微创钛缆内固定术治疗,比较两组一般手术指标、并发症、应激反应指标、骨代谢指标。结果观察组手术时间、出血量、术后住院时间、骨折愈合时间少于对照组(P0.05);观察组并发症总发生率为12.82%,低于对照组的34.21%(P0.05);观察组膝关节功能评分在术后15 d[(65.21±5.97)分vs (56.47±6.23)分]、术后1个月[(70.28±4.96)分vs (61.65±5.17)分]、术后3个月[(82.68±3.25)分vs(77.62±4.02)分]时高于对照组(P 0.05);术后24 h,观察组血清Cor [(13.82±2.02)ng/mL vs (21.36±3.79)ng/mL]、PGE2[(131.25±17.64)pg/mL vs (162.49±21.05)pg/mL]、E [(35.02±6.37)ng/mL vs (60.63±7.59)ng/mL]、NE[(45.65±5.22)ng/mL vs (76.94±7.06)ng/mL]水平低于对照组(P0.05);术后24 h,观察组血清OC[(6.30±0.74)μg/L vs (5.28±0.71)μg/L]、PⅠNP[(38.52±6.09)ng/mL vs(23.19±3.57)ng/mL]水平高于对照组(P0.05),CTX-Ⅰ[(312.07±50.36)pg/mL vs(558.39±62.98)pg/mL]、CTX-Ⅱ[(211.45±32.18)pg/mL vs (342.62±40.92)pg/mL]水平低于对照组(P0.05)。结论经皮微创钛缆内固定治疗髌骨骨折创伤小,术后并发症少,可明显改善膝关节功能,减轻应激反应,改善术后骨代谢。     

重组人Slit2蛋白预处理可减轻内毒素诱导的大鼠葡萄膜炎

目的 探讨重组人Slit2蛋白(recombinant human slit2,rhSlit2)对内毒素诱导的Sprague-Dawley(SD)大鼠葡萄膜炎(endotoxin-induced uveitis,EIU)的作用.方法 给予SD大鼠玻璃体腔内分别注射rhSlit2(10、30、100 ng/眼).24 h后,将2 g/L的脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)注射到大鼠双侧后足底肉垫内(200 μg/鼠).LPS注射24 h后观察大鼠前房炎症并进行临床评分;取大鼠房水进行房水蛋白浓度测定和房水细胞计数;LPS注射24 h后摘除大鼠眼球,制作石蜡切片HE染色后观察大鼠眼部形态学变化;采用Real-time PCR检测大鼠眼部炎症因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA水平的表达;Western blot检测大鼠眼部IL-6、TNF-α和PI3 K/Akt信号通路蛋白的表达.结果 在LPS注射24 h后,rhSlit2对前房炎症有明显的抑制作用,且具有剂量依赖性.LPS+rhSlit2(100 ng/眼)组临床评分明显低于LPS+PBS组[(1.40 ±0.84)vs(5.60 ±0.97)分,P＜0.01];HE染色可见各组大鼠眼内结构层次完好.与LPS+PBS组比较,LPS+rhSlit2(100 ng/眼)组眼内炎症细胞渗出数量明显减少[(65.21±18.38)×106/mL vs(319.60±28.88)×106/mL,P＜0.01];房水蛋白浓度明显降低[(12.59 ±3.04)vs(31.50 ±3.09) mg/mL,P＜0.01];眼内炎症因子IL-6(19.69±5.28 vs 77.09±12.61)、TNF-α(1.78±0.33 vs4.06±0.58)的mRNA表达降低(P＜0.01);大鼠眼内IL-6(1.92 ±0.60 vs 4.42 ±0.11)、TNF-α(1.33 ±0.11 vs 1.69±0.21)和P-Akt(0.18 ±0.37 vs 0.55 ±0.34)蛋白水平也降低(P＜0.01).结论 大鼠玻璃体腔RhSlit2预注射对内毒素诱导的SD大鼠葡萄膜炎具有抑制作用.RhSlit2可通过抑制PI3K/Akt信号通路的活化以抑制LPS诱导炎症反应.     

大黄提取物对脂多糖诱导的内皮细胞的保护作用研究

目的以脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为脓毒症内皮损伤的模型,研究大黄提取物对内皮细胞的保护作用。方法使用大黄提取物(1、2.5、5、10、20、40μg/mL)干预1μg/mL LPS处理的HUVEC细胞,实验分为空白对照组、LPS刺激组、大黄提取物组;CCK-8法检测HUVEC增殖;ELISA法检测HUVEC的血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素(Ang)的分泌变化;WB法研究大黄提取物对NF-κB和ERK信号通路激活的作用。结果 HUVEC用1μg/mL的LPS处理后,细胞增殖吸光度值与空白对照组相比有明显下降(0.36±0.02比0.65±0.02,P0.01);使用1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL和40μg/mL大黄提取物干预LPS诱导的HUVEC,细胞增殖吸光度分别为(0.40±0.03)、(0.44±0.03)、(0.52±0.03)、(0.55±0.04)、(0.57±0.03)和(0.57±0.02),其中浓度5μg/mL的大黄提取物组与LPS处理组相比,差异有统计学意义(P均0.01)。5μg/mL大黄提取物处理组与单纯LPS处理组相比,VEGF分泌下降[(240.92±3.09)pg/mL比(283.59±1.38)pg/mL,P0.01],Ang1分泌上升[(115.64±0.61)pg/mL比(104.30±2.38)pg/mL,P0.05],Ang2分泌下降[(105.40±1.40)pg/mL比(118.79±6.81)pg/mL,P0.05]。同样,5μg/mL大黄提取物处理组与单纯LPS处理组相比,Ang1的基因表达上升(0.77±0.10比0.35±0.04,P0.01),Ang2的基因表达下降(1.76±0.09比2.30±0.37,P0.05)。5μg/mL大黄提取物处理后,pERK和p-p65明显下降。结论大黄提取物对脂多糖诱导的内皮细胞损伤和功能异常具有保护作用。     

EPHA2在人骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用

目的:研究EPHA2在人骨髓间充质干细胞(hBMSC)成骨分化过程中表达的动态变化及其在成骨分化中的作用.方法:hBMSC成骨分化诱导0、4、10和14 d后分别收集细胞提取RNA和蛋白,采用Real-timePCR和Western blot方法检测EPHA2mRNA及蛋白表达;使用EPHA2的si-RNA下调EPHA2表达后进行成骨分化诱导,检测下调EPHA2表达对早期成骨分化指标ALP活性及晚期成骨分化指标钙沉积、成骨分化标志物OSX、OCN和成骨分化关键转录因子RUNX2表达的影响.结果:EPHA2在hBMSC成骨分化过程中表达逐渐上升,下调EPHA2表达能抑制ALP活性和钙沉积,抑制OSX、OCN及关键转录因子RUNX2的表达.结论:EPHA2在hBMSC成骨分化过程中表达逐渐上升,EPHA2可能通过增强RUNX2的表达从而促进hBMSC成骨分化.     

PTEN在多烯磷脂酰胆碱下调LPS诱导巨噬细胞炎症反应中的抑制作用

目的研究临床护肝药—多烯磷脂酰胆碱(polyene phosphatidyl choline,PPC)对LPS诱导巨噬细胞(macrophages, M?)炎症的调控作用以及第10号染色体上缺失的磷酸酶-张力蛋白同系物(phosphate and tension homology deleted on chromosome ten,PTEN)在上述过程中的作用,初步明确PPC的抗炎效果及机制。方法将Raw264.7细胞铺于细胞培养板,分别加入PPC(20μg/mL)、LPS(100 ng/mL)、PPC(20μg/mL)+LPS(100 ng/mL)、PPC(20μg/mL)+SF1670(PTEN抑制剂,150 ng/mL)、PPC(20μg/mL)+LPS(100 ng/mL)+SF1670(150 ng/mL)以及等体积PBS,培养24 h后,收集细胞沉淀及培养上清,ELISA法检测上清中IL-6、IL-10、TNF-α含量;RT-PCR检测细胞中IL-6的mRNA相对表达量;Western blot检测细胞中PTEN的蛋白表达情况。结果相比PBS组,PPC组TNF-α、IL-6、IL-10分泌量无明显差异;相比LPS组,PPC+LPS组培养上清中TNF-α、IL-6水平明显降低(P0.001),而IL-10水平明显升高(P0.001)。相比LPS组,PPC+LPS组PTEN蛋白表达量明显上高。相比PPC组,PPC+SF1670组TNF-α、IL-6分泌或表达量明显升高(P0.05);相比PPC+LPS组,PPC+LPS+SF1670组TNF-α、IL-6分泌或表达水平明显升高(P0.05),而IL-10分泌量明显降低(P0.05)。结论 PPC可通过上调PTEN表达以抑制LPS诱导M?炎症反应。     

脂多糖对人单核细胞株THP-1细胞HIF-1α及其靶基因GLUT-1表达的影响

目的 研究脂多糖(LPS)对人单核细胞株THP-1细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其靶基因葡萄糖转运载体-1(GLUT-1)表达的影响.方法 以1 μg/mL LPS分别处理体外常规培养的THP-1细胞0、2、4、6、8 h.采用Western blotting检测THP-1细胞HIF-1α蛋白表达,RT-PCR技术检测HIF-1α mRNA与GLUT-1 mRNA表达.以不同浓度的LPS(0、0.01、0.1、1 μg/mL)分别刺激THP-1细胞6 h,Western blotting检测HIF-1α蛋白表达.结果 1 μg/mL LPS作用2 h时,THP-1细胞的HIF-1α蛋白表达开始增加,4 h时显著增加(P＜0.05),6～8 h时达高峰(P＜0.01).0.01 μg/mL LPS刺激6 h,THP-1细胞的HIF-1α蛋白表达较对照组明显升高(P＜0.05);当0.1 μg/mL LPS和1 μg/mL LPS刺激6 h时,HIF-1α蛋白表达更高,与对照组相比差异有高度统计学意义(P＜0.01).提示LPS能够诱导THP-1细胞内HIF-1α蛋白表达,并且呈时间和浓度依赖性.1 μg/mL LPS作用2、4、6、8 h均能上调THP-1细胞HIF-1α与GLUT-1 mRNA水平(P＜0.01),且随时间的延长表达逐渐增加.结论 LPS能够促进人单核细胞株THP-1细胞HIF-1α及其靶基因GLUT-1的表达.     

槐杞黄颗粒对MRL/Lpr狼疮肾小鼠Th17细胞的影响及机制研究

目的探讨槐杞黄颗粒对MRL/Lpr狼疮肾小鼠Th17细胞的影响以及相关机制。方法正常饲养C57BL/6小鼠8只为空白对照组,8~10周龄MRL/Lpr狼疮小鼠24只,随机分为模型组、槐杞黄颗粒治疗组和地塞米松治疗组,每组8只。MRL/Lpr狼疮小鼠12周龄左右开始发病,分别给予槐杞黄颗粒或地塞米松治疗,检测各组处理前后24h尿蛋白定量,血清TGF-β、IL-17含量,肾脏RORC mRNA表达水平。结果与模型组比较,地塞米松组和槐杞黄组小鼠治疗后尿蛋白含量明显下降[(245.87±47.25)mg/L、(333.18±22.19)mg/L比(474.69±48.76)mg/L,P0.05];与空白组比较,地塞米松组、槐杞黄组TGF-β和IL-17均升高[TGF-β:(262.69±23.53)ng/L、(352.05±26.77)ng/L比(166.12±36.44)ng/L,P0.01;IL-17:(265.25±44.29)pg/mL、(317.33±46.83)pg/mL比(172.03±45.21)pg/mL,P0.05,P0.01];与模型组比较,地塞米松组、槐杞黄组TGF-β和IL-17明显降低[TGF-β:(262.69±23.53)ng/L、(352.05±26.77)ng/L比(593.84±35.02)ng/L,P0.01;IL-17:(265.25±44.29)pg/mL、(317.33±46.83)pg/mL比(602.13±58.30)pg/mL,P0.01];与空白组比较,模型组肾脏Th17细胞比例和细胞数、RORC mRNA表达量显著上升[Th17比例:(8.62±0.77)%比(0.05±0.02)%,P0.01;Th17细胞数:(8.62±0.77)104/mL比(0.05±0.02)104/mL,P0.01;RORC mRNA:(11.08±0.89)比(1.00±0.05),P0.01];与模型组比较,地塞米松组、槐杞黄组肾脏Th17细胞比例和细胞数、RORC mRNA表达显著下降[Th17比例:(0.15±0.04)%、(4.06±0.43)%比(8.62±0.77)%,P0.01;Th17细胞数:(0.15±0.04)104/mL、(4.06±0.43)104/mL比(8.62±0.77)104/mL,P0.01;RORC mRNA:(3.67±0.39)、(5.53±0.49)比(11.08±0.89),P0.01]。结论槐杞黄颗粒能减少狼疮肾小鼠尿蛋白排出,调节Th17细胞分化,其机制可能与下调RORCmRNA表达有关。     

麦冬多糖对转化生长因子-β1诱导的人胚胎肺成纤维细胞表型转化的影响

目的观察麦冬多糖(OJP)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚胎肺成纤维(HEL)细胞表型转化的影响,探讨其分子机制。方法将经6ng/mL诱导TGF-β1的HEL细胞作为模型组,加入25、50、100μg/mL OJP继续培养的HEL细胞作为OJP干预组。通过电镜观察细胞的超微结构;实时荧光定量RT-PCR检测α-SMA mRNA和COLⅠmRNA表达;Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、Smad2蛋白和p-Smad2蛋白表达。结果模型组及25、50、100μg/mL OJP干预组细胞的存活率分别为(99.65±1.55)%,(88.39±1.68)%,(82.77±1.96)%和(79.48±1.74)%,OJP干预组存活率低于模型组且随浓度的增加呈剂量依赖趋势,差异有统计学意义(P均0.05);100μg/mL OJP干预组细胞表面微绒毛减少、微丝变短,胞浆内线粒体数目下降,粗面内质网减少;模型组和100μg/mL OJP干预组α-SMA mRNA表达量为(1.00±0.09)和(0.69±0.05),COLⅠmRNA表达量为(1.02±0.11)和(0.86±0.09),100μg/mL OJP干预组细胞α-SMA和COLⅠmRNA表达较模型组下调(P均0.05);与模型组比较,100μg/mL OJP干预组α-SMA、COLⅠ、Smad2和p-Smad2蛋白表达明显下降(P均0.01)[α-SMA蛋白:(0.48±0.03)比(1.56±0.02);COLⅠ蛋白:(0.41±0.02)比(1.66±0.02);Smad2蛋白:(0.71±0.01)比(1.34±0.01);p-Smad2蛋白:(0.69±0.01)比(1.52±0.01),P均0.05]。结论麦冬多糖可能通过干预TGF-β/Smads信号通路,在一定程度上抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化。     

IL-10对脂多糖诱导Ana-1细胞的MyD88/核因子κB活性影响的研究

目的探讨IL-10对小鼠巨噬细胞髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)炎症信号活化的影响。方法将小鼠巨噬细胞Ana-1分为脂多糖(LPS)组和LPS+IL-10组,分别于0.5、1及2h收集巨噬细胞和细胞培养上清液,Western blot检测细胞MyD88与胞浆、胞核NF-κBp65亚基表达,ELISA法检测培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果在0～2h,LPS组细胞MyD88表达显著持续上升,LPS+IL-10组于LPS刺激后上升,0.5h达峰值,2h恢复至正常水平,1h和2h相对含量均低于LPS组(11.6±1.3比17.5±0.7,8.8±0.3比21.4±1.8,P0.05);总NF-κB表达量在两组间无明显差异。NF-κB核浆比变化趋势与MyD88类似,LPS+IL-10组1h及2h相对含量亦均低于LPS组(1.1±0.1比2.4±0.4,0.6±0.7比3.1±0.6,P0.05);相应的,LPS+IL-10组1h和2hTNF-α含量亦低于LPS组[(222.5±33.5)pg/mL比(365.2±22.7)pg/mL,(212.7±15.9)pg/mL比(566.2±31.5)pg/mL,P0.05]。结论 IL-10通过抑制减少MyD88/NF-κB信号通路活化,降低TNF-α表达,从而下调炎症反应强度。     

JNK通路在低频脉冲电磁场促进牙周膜干细胞成骨分化的作用研究

目的：通过JNK特异性抑制剂SP600125干预JNK信号通路,探究JNK通路是否参与低频脉冲电磁场(LPEMF)诱导人牙周膜干细胞(hPDLSCs)的成骨分化。方法：LPEMF(15HZ、0-3mT、1h/每隔12h)体外辐照hPDLSCs,通过 qRT-PCR检测细胞内Runt 相关转录因子 2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)等成骨相关基因表达量,来确定LPEMF诱导hPDLSCs成骨分化的能力、并筛选适宜的磁场作用强度;通过Western-blotting检测LPEMF刺激下胞内JNK蛋白和p-JNK蛋白的表达量,以及使用不同浓度SP600125抑制剂干预后细胞内成骨基因表达量的变化,来确定JNK通路在PEMF促进hPDLSCs成骨分化过程中是否发挥作用。结果：15Hz、2.5mT的LPEMF辐照hPDLSCs时,Runx2、ALP、OPN、OCN等成骨基因表达量高于其他磁场强度分组(P ＜ 0.05);LPEMF刺激下明显促进了细胞内JNK蛋白和p-JNK蛋白表达量(P ＜ 0.05);JNK通路抑制后细胞内成骨相关基因表达量降低,且随着SP600125抑制剂浓度的升高对成骨基因表达的抑制效果更明显(P ＜ 0.05)结论：LPEMF物理刺激部分激活了hPDLSCs内JNK通路参与诱导成骨分化。     

脂多糖及TOLL样受体4阻断剂对蜕膜细胞中孕激素受体、IL-1β及COX-2的影响

目的:研究脂多糖(LPS)或拮抗剂TOLL样受体4阻断剂(Toll-like receptor 4 antagonist,TLR4 mAb)作用于体外培养的蜕膜细胞后其孕激素受体(progesterone receptor,PR)、IL-1β及COX-2的表达改变,以探讨LPS及其拮抗剂对蜕膜细胞中PR的影响,以及PR与炎症因子之间的关系。方法:分离培养早孕人蜕膜细胞,将细胞培养至第4代时随机分为6组,对照组:仅加培养液。研究1组:加入终质量浓度为100 ng/mL的LPS。研究2组:加入终质量浓度为1 μg/ mL TLR4 mAb。研究3组:加入终质量浓度为3 μg/mL TLR4 mAb。研究4组:终质量浓度为1 μg/mLTLR4 mAb预处理24 h,再加入质量浓度为100 ng/mL的LPS。研究5组:终质量浓度为3 μg/mL TLR4 mAb预处理24 h,再加入质量浓度为100 ng/mL的LPS。均培养24 h 后,采用RT-PCR半定量技术检测蜕膜细胞中PR,IL-1β及COX-2mRNA的表达情况。结果: LPS使蜕膜细胞中PR mRNA的表达下调(P<0.05),使IL-1β和COX-2 mRNA的表达上调(P<0.05);TLR4 mAb则使LPS作用后的蜕膜细胞中PR mRNA的表达上调(P<0.05)、IL-1βmRNA的表达下调(P<0.05);高质量浓度TLR4 mAb使COX-2 mRNA的表达下调(P<0.05)。结论:LPS作用于体外培养的人蜕膜细胞后,PR mRNA表达下调;IL-1β,COX-2的mRNA表达增加;使用TLR4 mAb后能拮抗LPS对蜕膜细胞中PR,IL-1β以及COX-2的作用。     

白杨素通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路发挥抗炎和抗氧化作用:基于蛋白质芯片方法

目的 探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路在白杨素抗炎抗氧化作用中的机制。方法 分别用0、5、10、15、30、60、120、240 μg/mL白杨素处理RAW264.7细胞24 h后,CCK-8法检测细胞活力。用白杨素预处理细胞2 h,加入脂多糖（100 ng/mL）分别刺激0、10、30 min,1、2、4、8、16 h,运用蛋白质芯片进行相关信号分子的筛选。用白杨素（10、30、60 μg/mL）孵育细胞2 h后,加入脂多糖刺激18 h,ELISA法检测IL-6,MCP-1和TNF-α的释放量;Griess法检测NO浓度;DCFH-DA荧光探针法检测ROS水平。设立空白对照组,白杨素（60 μg/mL）单独处理组,脂多糖（100 ng/mL）单独刺激组,以及白杨素和脂多糖联合处理组,RT-PCR法检测iNOS和COX-2的mRNA的表达量。分别用脂多糖（100 ng/mL）,N-乙酰-半胱氨酸（NAC）（20 μmol/L）或白杨素（10、30、60 μg/mL）单独或共处理细胞后,用Western blot检测炎症相关通路p-AKT、p-PRAS40、p-mTOR、mTOR、p-P70S6k、p-S6RP、 S6RP的表达水平。结果 白杨素剂量在60 μg/mL内,对细胞活力基本无影响（P>0.05）;白杨素能够降低脂多糖刺激诱导的IL-6,MCP-1,TNF-α和炎症介质NO的释放量（P<0.01）,抑制iNOS和COX-2的蛋白表达量和mRNA的表达水平（P<0.01）;蛋白质芯片筛选结果提示,脂多糖能够激活AKT/mTOR信号通路,而白杨素抑制其信号分子的活化,Western blot结果进一步验证了蛋白质芯片的结果（P<0.01）;白杨素显著下调内源性ROS的生成;运用NAC清除细胞内ROS后,炎症蛋白iNOS和COX-2的表达量下调（P<0.05）,而AKT/mTOR通路的活化被阻断（P<0.05）。结论 白杨素通过抑制上游信号分子ROS的合成,进而抑制AKT/mTOR信号通路的活化,调控核糖体的翻译过程,下调促炎细胞因子和炎症介质的合成和释放,发挥抗炎作用。