小鼠c-Kit和Sca-1阳性干细胞的多器官年龄分布特征

目的 本研究旨在研究c-Kit和Sca-1两种干细胞亚型在小鼠多脏器的年龄分布规律,为后续进行相关组织的干细胞抗损伤研究奠定基础。方法 选取C57/BL6雄性成年小鼠（3月龄、6月龄、9月龄）,分离其骨髓、肝脏、肾脏、肺及胰腺组织,采用组织块酶解法分选各脏器中直径小于30μm的细胞,用CD45、c-Kit及Sca-1荧光抗体标记细胞,流式细胞仪记录CD45^-c-Kit⁺以及CD45^- Sca-1⁺细胞百分比。结果 在小鼠骨髓中,CD45^-c-Kit⁺细胞数显著多于CD45^- Sca-1⁺（P<0.05）;而在肝、肾、肺和胰腺组织中,CD45^- Sca-1⁺的细胞数量远多于CD45^-c-Kit⁺干细胞（P<0.05）。除胰腺组织,9月龄CD45^- Sca-1⁺的细胞数目较3、6月龄有所升高外,其他组织中干细胞的年龄分布趋势差异不显著（P>0.05）。结论 CD45^-c-Kit⁺和CD45^- Sca-1⁺两种干细胞亚型在小鼠多脏器中均有存在,尤其是数量上占据优势的CD45^- Sca-1⁺干细胞可能在多数器官的发育及修复中发挥重要作用。     

儿童过敏性鼻炎治疗前后外周血CD4+CD25+CD127lo/-Treg细胞与炎症因子变化分析

目的 探讨儿童过敏性鼻炎（AR）治疗前后外周血CD4⁺CD25⁺CD127^lo/-Treg及白细胞介素2（IL-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、人转化生长因子β1（TGF-β1）的水平变化及临床意义。方法 将厦门长庚医院收治的108例AR患儿作为AR组,根据疾病严重程度分为轻度、中重度组,另采用单纯随机抽样法选取年龄、性别匹配的80例健康儿童作为对照组,检测两组对象入院时CD4⁺CD25⁺CD127^lo/-Treg、IL-2、TNF-α、TGF-β1水平;AR患者均给予对症治疗,检测治疗前、治疗1个月、治疗6个月CD4⁺CD25⁺CD127^lo/-Treg、IL-2、TNF-α、TGF-β1水平,采用Pearson相关分析疾病严重程度与外周血CD4⁺CD25⁺CD127^lo/-Treg的相关性及两者与IL-2、TNF-α、TGF-β1相关性。结果 AR患者CD4⁺CD25⁺CD127^lo/-Treg、IL-2、TGF-β1水平分别为（6.264±0.135）%、（50.16±11.67）ng/L、（14.21±5.34）ng/L,均低于对照组;TNF-α为（1.82±0.62）ng/L,高于对照组的（0.34±0.19）ng/L,差异均有统计学意义（P<0.05）。轻度AR患者CD4⁺CD25⁺CD127^lo/-Treg、IL-2、TGF-β1水平分别为（6.305±0.137）%、（59.34±13.05）ng/L、（16.97±4.69）ng/L,均高于中重度AR组患者,TNF-α水平为（1.64±0.57）ng/L,低于中重度AR组患者的（1.93±0.65）ng/L,差异均有统计学意义（P<0.05）。AR组治疗后第1、6个月CD4⁺CD25⁺CD127^lo/-Treg、IL-2、TGF-β1水平高于治疗前,TNF-α水平低于治疗前,差异均有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关分析显示：外周血CD4⁺CD25⁺CD127^lo/-Treg、TNF-α与疾病严重程度呈正相关关系（r=0.681、0.581,P<0.05）,IL-2、TGF-β1与疾病严重程度呈负相关关系（r=-0.613、-0.579,P<0.05）;外周血CD4⁺CD25⁺CD127^lo/-Treg与IL-2、TGF-β1呈负相关性（r=-0.675、-0.691,P<0.05）,与TNF-α呈正相关关系（r=0.618,P<0.05）。结论 AR患者存在CD4⁺CD25⁺CD127^lo/-Treg及IL-2、TGF-β1下降,TNF-α上升,且与病情程度有关,治疗后均明显改善。     

异基因造血干细胞移植后小鼠共刺激分子表达与急性移植物抗宿主病的关系

目的 探究异基因造血干细胞移植后小鼠共刺激分子表达及其与急性移植物抗宿主病（aGVHD）发病的关系。方法 供体为5只C57BL/6J（H2KD^-H2KB⁺）雄性小鼠,受体为30只CB6F1（H2KD⁺H2KB⁺）雌性小鼠。将受体小鼠随机分为单纯照射组、骨髓移植组和aGVHD组,每组10只。单纯照射组：受体小鼠接受γ射线照射后不注射任何细胞;骨髓移植组：受体小鼠接受γ射线照射后注射5×10⁶个供体来源去T淋巴细胞的骨髓有核细胞;aGVHD组：受体小鼠接受γ射线照射后,同时注射5×10⁶个供体来源去T淋巴细胞的骨髓有核细胞和3×10⁷个供体来源脾细胞。采用log-rank生存曲线分析各组小鼠移植后生存情况。分别在移植后7、14、21、28 d采用流式细胞术检测骨髓移植组和aGVHD组小鼠外周血CD4⁺T淋巴细胞和CD8⁺T淋巴细胞表面共刺激分子细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）、程序性死亡蛋白1（PD-1）、可诱导共刺激分子（ICOS）和CD28的表达情况,以及移植后21 d两组小鼠脾组织CD4⁺T淋巴细胞内白细胞介素（IL）-17、γ干扰素、IL-4的表达情况,并在移植后21 d采用3,3''-二氨基联苯胺（DAB）染色检测两组小鼠结肠组织共刺激分子配体的表达情况。结果 单纯照射组受体小鼠均在γ射线照射后19 d内死亡;骨髓移植组小鼠在γ射线照射后均未出现aGVHD症状,30 d内均存活;aGVHD组小鼠在γ射线照射后出现aGVHD症状的时间为14（11~18）d,生存时间为22（13~30）d。随着时间的推移,aGVHD组小鼠外周血CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞表面CTLA-4、PD-1表达在移植后均呈下降趋势,ICOS、CD28表达均呈上升趋势。在移植后28 d时aGVHD组小鼠外周血CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞表面CTLA-4、PD-1表达均低于骨髓移植组,ICOS、CD28表达均高于骨髓移植组,差异均有统计学意义（P均<0.05）。DAB染色结果示,骨髓移植组结肠组织CD80、ICOS配体（ICOSL）、PD-1配体（PD-L1）表达均为阴性,aGVHD组结肠组织CD80、ICOSL、PD-L1阳性表达率分别为40%、80%、80%。与骨髓移植组比较,aGVHD组小鼠脾组织CD4⁺T淋巴细胞内IL-17、γ干扰素表达均增加,IL-4表达减少,差异均有统计学意义（P均<0.05）。结论 异基因造血干细胞移植小鼠发生aGVHD后,共刺激分子CTLA-4表达随时间推移逐渐降低。CTLA-4、ICOS、PD-1均可能通过调节辅助性T细胞（Th）1、Th2、Th17等T淋巴细胞亚群分布参与aGVHD的发生、发展。     

胸腺五肽对新辅助化疗的乳腺癌患者局部组织中浸润淋巴细胞的影响

目的 探讨胸腺五肽对新辅助化疗的乳腺癌组织微环境中浸润淋巴细胞的影响。方法 自2012年1月~2014年1月,前瞻性收集笔者医院收治的接受新辅助化疗的乳腺癌患者80例,将患者随机分为研究组和对照组,所有患者均行新辅助化疗,研究组在新辅助化疗期间给予胸腺五肽,化疗结束后进行手术切除肿瘤组织,留取乳腺癌组织标本,观察乳腺癌组织中和外周血中CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺T细胞比例、外周血中IL-6、IL-10、TGF-β1水平。结果 与对照组比较,研究组患者乳腺癌组织中CD4⁺T细胞显著降低（21.47%±3.29% vs 23.88%±3.43%,P=0.002）;CD8⁺T细胞显著增高（30.36%±4.38% vs 28.43%±4.16%,P=0.047）;CD4⁺/CD8⁺T细胞显著降低（0.71±0.14 vs 0.84±0.18,P=0.001）。两组患者治疗前外周血CD4⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺T细胞、IL-6、IL-10、TGF-β1等比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,研究组患者术后外周血CD4⁺T细胞水平显著增加（27.67%±4.24% vs 25.09%±3.68%,P=0.005）;CD4⁺/CD8⁺T显著增加（0.83±0.14 vs 0.75±0.18,P=0.029）;IL-6水平显著增高（12.39±2.87 vs 9.24±3.38ng/L,P=0.000）;IL-10水平显著降低（8.49±2.59 vs 12.59±3.65ng/L,P=0.006）;TGF-β1水平显著降低（12.47±3.88 vs 17.76±4.12ng/ml,P=0.000）。两组患者住院时间、切口感染、手术部位出血、复发率和病死率等比较,差异均无统计学意义（P > 0.05）。结论 胸腺五肽联合新辅助化疗可能有助于改善乳腺癌组织微环境中免疫状态和全身免疫功能。     

支气管哮喘患者外周血CD3+T细胞趋化因子受体表达的研究

目的 探讨支气管哮喘患者外周血CD3⁺T细胞趋化因子受体表达情况。方法 选取2017年1月—2017年12月山东省立第三医院就诊的40例支气管哮喘患者及同期该院体检的27例健康志愿者，采用流式细胞仪检测所有受试者外周血CD3⁺CD8⁺和CD3⁺CD8^-T细胞上趋化因子受体CXCR1、CXCR2、CXCR3、CCR3、CCR4、CCR5、CCR7、CCR8的表达。比较轻、中度支气管哮喘患者、重度支气管哮喘患者及健康志愿者，以及不同剂量糖皮质激素使用者趋化因子受体表达的差异。结果 轻、中度支气管哮喘组、重度支气管哮喘组、对照组受试者CD3⁺CD8⁺T细胞上CXCR1、CCR7阳性表达率差异有统计学意义（P <0.05）。重度支气管哮喘组CD3⁺CD8⁺T细胞上CXCR1阳性表达率低于轻、中度支气管哮喘组和对照组（P <0.05）。重度支气管哮喘组CD3⁺CD8⁺T细胞上CCR7阳性表达率低于对照组（P <0.05）。轻、中度支气管哮喘组、重度支气管哮喘组、对照组受试者CD3⁺CD8^-T细胞上CXCR1、CXCR2阳性表达率差异有统计学意义（P <0.05）。重度支气管哮喘组CD3⁺CD8^-T细胞上CXCR1、CXCR2阳性表达率低于轻、中度支气管哮喘组和对照组（P <0.05）。3组吸入不同剂量糖皮质激素患者CD3⁺CD8⁺和CD3⁺CD8^-T细胞上CXCR1的阳性表达率差异有统计学意义（P <0.05）。每天吸入>800 μg/g布地奈德组的患者CD3⁺CD8⁺和CD3⁺CD8^-T细胞上CXCR1阳性表达率低于每天吸入< 400 μg/g布地奈德组的患者（P <0.05）。结论 重度支气管哮喘组患者外周血CD3⁺T细胞部分趋化因子表达减少，轻、中度哮喘患者Th1和Th2相关的趋化因子受体参与免疫应答，而重度支气管哮喘患者Th1/Th2应答下降。     

乳腺癌组织CD44+CD24-/LowESA+Lin-干细胞比例及影响因素分析

目的 研究乳腺浸润性导管癌组织CD44⁺CD24^-/LowESA⁺Lin^-乳腺癌干细胞比例及其相关影响因素。方法 收集四川大学华西医院甲状腺乳腺外科2011年4月至2011年12月经病理诊断为浸润性导管癌的新鲜标本40例进行流式细胞学检测,分析患者年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学分级、腋窝Ⅰ-Ⅱ水平淋巴结转移状况、免疫组化指标 〔雌激素受体（ER)、孕激素受体(PR)、上皮因子生长受体-2(C-erbB-2)、Ki-67〕等与CD44⁺CD24^-/LowESA⁺Lin^-乳腺癌干细胞比例的关系。结果 在乳腺浸润性导管癌组织中,CD44⁺CD24^-/LowESA⁺Lin^-乳腺癌干细胞全部为阳性表达 （干细胞比例0.5%～16.8%）,平均值为4.38%,其中,低表达 （≤4.38%)20例,高表达 （＞4.38%）20例。单因素分析显示CD44⁺CD24^-/LowESA⁺Lin^-细胞比例与患者的年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移状态、ER、PR以及C-erbB-2均无相关性。而以32.0%为界,把Ki-67分为高表达组 (＞32.0%)和低表达组 (≤32.0%),两组间干细胞比例差异有统计学意义 (P=0.008)。多因素logistic回归发现,Ki-67表达强度是CD44⁺CD24^-/LowESA⁺Lin^- 表达比例的独立影响因素 (P=0.012,OR=6.926, 95%可信区间1.529～31.377）。结论 乳腺癌组织中,Ki-67表达强度是CD44⁺CD24^-/LowESA⁺Lin^- 表达比例的独立影响因素。但干细胞比例与临床疗效和预后的关系仍需进一步研究。     

肿瘤相关成纤维细胞通过IL-6/STAT3通路介导胰腺癌中髓源性抑制细胞的分化

目的 探讨胰腺导管腺癌（PDAC）中肿瘤相关成纤维细胞（CAF）介导髓源性抑制细胞（MDSC）分化相关作用机制及生物学意义,为揭示CAF和MDSC通过重塑胰腺癌微环境促进胰腺癌进展提供理论基础和实验依据。方法 分离纯化PDAC肿瘤组织中原代CAF,以人包皮成纤维细胞（HFF）作为对照,通过实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附试验检测筛选CAF中表达上调的细胞因子。分别使用CAF和HFF培养上清培养人外周血单个核细胞（PBMC）,观察PBMC的分化情况,研究上述细胞因子参与调节MDSC分化、发挥募集作用的具体机制。结果 分离的原代CAF表达活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和成纤维细胞激活蛋白a（FAPa）,对照细胞HFF不表达α-SMA和FAPa。CAF培养上清中白细胞介素6（IL-6）、基质细胞衍生因子1（SDF-1）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的表达量均高于HFF培养上清（P均<0.01）,而且IL-6、SDF-1、MCP-1的表达量随培养时间的延长而增加（P均<0.01）。与HFF培养上清相比,CAF培养上清能够促进更多的PBMC分化成CD13高表达的中性粒细胞样MDSC（CD13^hi-nMDSC;P<0.01）。在培养体系中单独加入人重组IL-6蛋白可以诱导PBMC向CD13^hi-nMDSC分化（P<0.01）,单独加入人重组SDF-1或MCP-1蛋白不能诱导CD13^hi-nMDSC亚群的增加;加入IL-6中和抗体或信号转导与转录激活因子3（STAT3）抑制剂FLLL32后能够明显减少由CAF培养上清诱导的分化（P<0.05）。结论 CAF可通过IL-6/STAT3通路促进PBMC分化为CD13^hi-nMDSC。     

甘草养阴汤在改善小鼠银屑病样皮损和调节炎症反应中的作用

[目的] 探索自拟方甘草养阴汤（GNY）对咪喹莫特（IMQ）诱导的银屑病样皮肤损伤小鼠模型的疗效。[方法] 将小鼠分为健康对照组、模型组（IMQ诱导银屑病小鼠）和治疗组（给予银屑病小鼠GNY,浓度为2.5、5 g/kg）;共4组（动物数=8/组）。采用银屑病病灶面积和严重程度指数（PASI）、苏木-精伊红染色和Baker评分用于评估疾病的严重程度。采用免疫组织化学或免疫荧光染色法对真皮的Gr-1,CD11c,RORγt和TGF-β阳性的炎性细胞进行计数。采用流式细胞仪分析脾脏细胞中的CD4⁺IL-17+Th17细胞和CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例。使用qPCR半定量IL-6、IL-10、IL-17A、IL-22、IL-23、TNF-α、TGF-β和AMPK-1的相对mRNA表达。[结果] 与模型组相比,GNY治疗的小鼠在两种浓度下均能够改善了病灶的形态学特征,包括PASI评分和上皮角质细胞增生。较高浓度的GNY可显着降低银屑病小鼠模型真皮中的Gr-1,CD11c,RORγt和TGF-β阳性细胞比例;下调脾脏Th17细胞比例,增加Treg细胞的表达。此外,IMQ模型组小鼠的真皮内IL-6、IL-10、IL-17A、IL-22、IL-23、TNF-α、TGF-β和AMPKɑ1的相对mRNA表达升高,在以5g/kg浓度的GNY治疗的模型小鼠中表达明显降低。[结论] 研究表明GNY可改善IMQ诱导的小鼠银屑病样皮肤损伤表现、减轻炎症反应;为临床治疗银屑病提供依据。     

PSGL-1缺失导致MDSCs上调

目的 P-选凝素糖蛋白配体1(P-selectin glycoprotein ligand 1, PSGL-1)主要特异性表达在白细胞上, 我们的研究PSGL-1缺失在小鼠体内脾脏、骨髓中MDSCs的变化。方法 利用我们实验室现有的PSGL-1^-/-小鼠进行试验, 经过鉴定后, PSGL-1^-/-后代小鼠;利用流式细胞术检测C₅₇和PSGL-1^-/-小鼠脾脏、骨髓中Gr-1和CD11b阳性细胞的变化。结果 与对照组C₅₇小鼠相比, PSGL-1^-/-基因工程小鼠MDSCs在脾脏、骨髓中显著上调(P<0.001), 结论 PSGL-1的缺失导致小鼠脾脏、骨髓中MDSCs升高。     

C1型尼曼-匹克病小鼠生长繁殖及血液生理生化指标的测定分析

目的 测定SPF级C1型尼曼-匹克病小鼠（Npc1^-/-小鼠）的生长繁殖及血液生理生化指标,为开展NPC1病人的研究提供理论性的基础资料。方法 ①选取0~77日龄Npc1^-/-、Npc1^+/-和Npc1^+/+小鼠雌雄各40只,定期称重并绘制生长曲线;②Npc1^-/-小鼠由Npc1^+/-小鼠交配繁殖产生,统计Npc1^+/-小鼠连续4代的繁殖数据;③检测60日龄Npc1^-/-和Npc1^+/+小鼠的血液生理生化指标。结果 ①Npc1^-/-小鼠的体重在7周前随着日龄的增加而增加,7周后随着日龄的增加而减少,直至11周左右死亡。Npc1^+/+和Npc1^+/-小鼠的体重均随着日龄的增长而逐渐增加,两者之间并没有显著差别。4周后雄性比雌性体重增加明显比雌性小鼠快;②Npc1^+/-小鼠不同代内交配分娩间隔、窝产仔数、离乳仔数、离乳仔数中雌雄数量及阳性数量差异无显著性（P>0.05）,而第2代的离乳率明显大于第1代（P<0.05）;③Npc1^-/-和Npc1^+/+小鼠血液生理指标中平均红细胞血红蛋白含量（MCH）和平均过氧化物酶指数（MPXI）差异有显著性（P<0.05）,其余差异无显著性（P>0.05）。生化指标中尿素（UREA）差异有极显著性（P<0.01）,而天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、葡萄糖（GLU）、乳酸脱氢酶（LDH）、钾（K）和铜（Cu）等差异有显著性（P<0.05）,其余差异无显著性（P>0.05）。结论 ①Npc1^-/-、Npc1^+/-和Npc1^+/+小鼠的生长曲线因基因型和性别的不同而存在差异;②Npc1^+/-小鼠不同代的繁殖能力差异无显著性;③Npc1^-/-和Npc1^+/+小鼠的部分血液生理生化指标差异有显著性。     

HIV/AIDS患者CD4+T淋巴细胞检测结果与抗病毒治疗效果

目的 探讨某地区HIV/AIDS患者CD4⁺T淋巴细胞检测结果与抗病毒治疗效果,同时进行相关性分析。方法 2013年2月~2016年1月选择在笔者医院诊治的HIV/AIDS患者60例作为观察组,同期选择在笔者医院进行健康体检的健康人60例作为对照组,观察组都给予HAART标准治疗方案,观察组在治疗前后、对照组在入院时都进行CD4⁺T淋巴细胞与细胞因子表达的检测。结果 观察组外周血的CD4⁺CD45RA⁺、CD4⁺CD28⁺、CD4⁺CD45RO⁺的细胞比例明显低于对照组（P<0.05）,两组CD4⁺CD25⁺的细胞比例对比,差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组相比,观察组的血浆IL-10和TGF-β1含量都显著升高（P<0.05）。治疗后观察组的CD4⁺CD45RA⁺、CD4⁺CD28⁺、CD4⁺CD45RO⁺的细胞比例都明显上升（P<0.05）,而血浆IL-10和TGF-β1含量明显降低（P<0.05）。在观察组中,Spearman秩相关分析显示CD4⁺CD45RA⁺、CD4⁺CD28⁺、CD4⁺CD45RO⁺的细胞比例与IL-10、TGF-β1水平均呈负相关（P<0.05）。结论 HIV/AIDS患者只有较低的免疫功能,具有较低的CD4⁺T淋巴细胞亚群比例和较高的IL-10和TGF-β1水平,HAART治疗能改善免疫功能,为此通过CD4⁺T淋巴细胞就能判断HIV/AIDS患者的治疗效果和病情。     

TSC1基因对调节性T细胞发育分化的免疫调控作用

【目的】 本研究利用TSC1的T细胞特异缺失小鼠探讨TSC1对T细胞尤其是调节性T细胞(Treg)发育的免疫调控效应。 【方法】 主要应用T细胞特异性TSC1基因敲除小鼠(Lck-cre; TSC1loxp/loxp)及细胞分子免疫学技术, 阐明TSC1基因对CD4⁺ Treg发育分化及其免疫功能的重要调控作用和规律。 【结果】 (1)TSC1基因缺失小鼠,其胸腺CD4⁺CD8^-T (CD4SP),CD8⁺CD4^-T(CD8SP),CD4^-CD8^-T(DN)和CD4⁺CD8⁺T(DP)细胞百分率无显著差异;(2)TSC1基因缺失小鼠CD4⁺Foxp3⁺Tregs百分率和细胞绝对数均明显增加;(3)小鼠外周免疫器官(脾脏)的CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺T细胞百分率和绝对数均无显著差异;(4)小鼠胸腺中CD4⁺CD25⁺Foxp3^-T细胞百分率和绝对数有下降的趋势;(5)小鼠胸腺中Treg其他亚型如CTLA-4以及GITR型均有所增加。 【结论】 TSC1缺失可以影响nTreg的发育和分化,而对iTreg发育和分化无明显影响,并且TSC1对于nTreg的调节可能是通过调控其前体发育分化而实现的。     

扶正胶囊提取物对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠免疫调节作用研究

[目的] 探讨扶正胶囊提取物对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用。[方法] 将60只昆明小鼠进行随机分组,每组10只,分为空白组、模型组、阳性对照组以及扶正胶囊提取物低、中、高剂量组。采用环磷酰胺腹腔注射建立小鼠免疫功能低下模型,检测各组小鼠的胸腺指数和脾脏指数、单核细胞吞噬能力、血清中白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素10（IL-10）、白细胞介素-17（IL-17）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）水平和脾T淋巴细胞亚群CD3⁺T淋巴细胞（CD3⁺）、CD4⁺T淋巴细胞（CD4⁺）、CD8⁺T淋巴细胞（CD8⁺）的分布与比例。[结果] 扶正胶囊提取物能提升由环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠的胸腺指数和脾脏指数,增强单核细胞吞噬功能,显著提高小鼠细胞免疫因子IL-4、IL-10、IFN-γ含量,降低IL-17、TNF-α含量,上调脾淋巴细胞亚群CD3⁺CD4⁺的表达程度和提升CD3⁺CD4⁺/CD3⁺CD8⁺比值。[结论] 扶正胶囊提取物能够提升环磷酰胺所致的免疫抑制小鼠的免疫功能。     

Coq4基因全敲除小鼠胚胎发育的表型分析

目的：通过分析辅酶Q生物合成蛋白4同系物（coenzyme Q biosynthesis protein 4 homolog ,COQ4）的编码基因Coq4 敲除（Coq4^-/- ）小鼠表型,探讨Coq4在小鼠胚胎发育中的作用。方法：引进Coq4基因全身杂合（Coq4^+/- ）小鼠模型,利用基因组 PCR鉴定小鼠基因型。观察并记录Coq4^+/-小鼠后代出生情况;通过解剖、组织学和免疫荧光法,观察野生型（wild type,WT）和 Coq4^-/- 胚胎和胎盘组织的形态结构。结果：Coq4^-/- 小鼠在胚胎日（embryonic day,E）7.5 d（E7.5）出现原肠胚形成障碍,于E10.5死亡。组织形态分析显示,与WT相比,Coq4^-/-小鼠胚胎发育严重迟缓,胎盘结构缺陷。免疫荧光染色分析发现,Coq4^-/-小鼠胎盘滋养层细胞侵袭能力减弱。结论：Coq4基因敲除导致小鼠发生胎盘缺陷和原肠胚形成障碍,Coq4为小鼠胚胎发育所必需的基因。     

姜黄素类似物D33对大鼠机体免疫耐受的影响及机制

目的 姜黄素类似物D33对同种异体肢体移植原位再植模型大鼠的免疫功能的作用及机制。方法 构建SD/Wistar大鼠的同种异体肢体移植原位再植模型,随机分为对照组和D33组,D33组每日腹腔注射20mg/kg D33,对照组注射等体积生理盐水。另选择正常Wistar大鼠作为正常组。流式细胞术分析各组T细胞亚型分布以及血液中炎性因子TNF-α、IL-1、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-5和IL-10 的含量。从D33组大鼠的胰岛和淋巴组织中分别分选受者来源DC细胞和供者来源DC细胞,Western blot法检测DC细胞中NF-κB、p38/MAPK、ERK/MAPK和Ⅰ型 IFN（IFN-α/β）通路的激活情况。结果 D33的大鼠的移植手术效果较佳。D33组受鼠血液中CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺的比例均低于对照组,但高于正常组。D33组中TNF-α、IFN-γ、IL-1、IL-2和IL-5水平均低于对照组,而IL-4和IL-10水平高于对照组。受者来源DC细胞中,D33可明显抑制NF-κB、p38/MAPK、ERK/MAPK和Ⅰ型IFN（IFN-α/β）通路的激活,在供者来源DC细胞中,D33的影响并不明显。结论 D33通过抑制TLR4相关通路诱导机体免疫耐受。     

TP方案联合放射治疗对食管癌患者miR-802 Smad4及食管黏膜组织黏蛋白1表达的影响

目的 探讨多西他赛+顺铂化疗(TP)方案联合放射治疗对食管癌的临床疗效及其疗效增殖和迁移的可能机制。方法 选取2017年1月至2019年12月安阳市肿瘤医院收住院的食管癌患者80例,采用随机数字表法将患者分为对照组和观察组各40例,对照组给予放射治疗,观察组给予TP方案联合放射治疗。治疗14天后,比较两组临床疗效及不良反应,以及miR-802、食管黏膜组织黏蛋白1和Smad 4的水平变化,同时比较两组T淋巴细胞亚群(CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8)⁺水平。结果 治疗14天后,观察组治疗有效率(95%)高于对照组(77.50%),差异有统计学意义(P＜0.05)。观察组不良反应发生率(62.50%)高于对照组(62.00%),但差异无统计学意义(P＞0.05)。与对照组相比,观察组miR-802、Smad4、食管黏膜组织黏蛋白1表达量以及CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺水平均较高,CD8⁺水平较低,差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 对于食管癌患者来说,TP方案联合放射治疗可提高临床疗效,有效调控患者体内miR-802、Smad4和食管黏膜组织黏蛋白1表达水平及缓解疾病严重程度。     

白细胞介素33在脑胶质瘤组织中的表达及临床价值

目的 探讨脑胶质瘤组织中白细胞介素33（IL-33）表达水平与临床-病理特征及预后的关系。方法 选取2018年1月1日至2020年12月31日就诊于南阳市中心医院的140例脑胶质瘤患者（脑胶质瘤组）和35例脑外伤行颅内减压的手术患者（对照组）作为研究对象，采用免疫组化方法检测脑胶质瘤组肿瘤组织和对照组正常脑组织中IL-33表达水平。采用logistic回归分析脑胶质瘤患者发生不良预后的影响因素，肿瘤组织中IL-33表达水平诊断脑胶质瘤患者发生不良预后的临床效能采用受试者工作特征曲线（ROC）分析。结果 脑胶质瘤组IL-33高表达107例，低表达33例，对照组IL-33高表达11例，低表达24例，与对照组相比，脑胶质瘤组织中IL-33高表达率升高（χ²=25.817，P<0.001）。脑胶质瘤组织中IL-33主要表达于胞浆中，呈黄色、棕黄色或棕褐色颗粒。脑胶质瘤组织中IL-33表达水平与肿瘤直径、KPS评分、组织学分级和远处转移相关（P<0.05）。脑胶质瘤患者发生不良预后85例，预后良好55例，KPS评分（OR=2.221，95% CI：1.431~4.092，P=0.002）、组织学分级（OR=2.786，95% CI：1.231~8.002，P=0.001）、远处转移（OR=5.117，95% CI：1.661~9.234，P<0.001）及IL-33表达（OR=6.322，95% CI：1.432~10.221，P<0.001）是脑胶质瘤患者发生不良预后的影响因素。组织中IL-33表达诊断脑胶质瘤患者发生不良预后的AUC为0.912（95% CI：0.837~0.915），当截断值为4.56分时，诊断灵敏度和特异度分别为92.22%和91.45%。结论 IL-33在脑胶质瘤组织中高表达，与不良预后有关。     

白藜芦醇促进巨噬细胞M2极化并缓解小鼠急性痛风性关节炎

目的 观察白藜芦醇对小鼠急性痛风性关节炎的预防效果,并探讨巨噬细胞M2极化是否介导白藜芦醇的作用。方法 18只C57BL/6小鼠随机分为3组,每组6只：假手术组、造模+溶剂对照组、造模+白藜芦醇组。假手术组用无菌生理盐水处理小鼠右侧后肢踝关节,造模+溶剂对照组小鼠右侧后肢踝关节给予单钠尿酸盐（MSU）晶体构建急性痛风性关节炎模型,造模+白藜芦醇组提前给予DMSO溶解的白藜芦醇干预再进行MSU晶体造模。测定各组小鼠双侧足掌厚度,采用H-E染色观察各组小鼠足掌关节滑膜组织炎症情况。分离、提取正常小鼠腹腔原代巨噬细胞,给予白藜芦醇干预后以MSU晶体刺激,用蛋白质印迹法检测巨噬细胞M1极化标志物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达,用实时荧光定量PCR检测巨噬细胞中炎症指标肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）mRNA的表达水平,用流式细胞术检测M2型巨噬细胞标志物F4/80、CD163的表达。结果 成功构建小鼠急性痛风性关节炎模型。造模前给予白藜芦醇干预后,小鼠右侧后肢足掌厚度明显低于溶剂对照组[（1.98±0.02）mm vs（2.49±0.12）mm,P<0.01],小鼠足掌关节炎滑膜组织中中性粒细胞浸润面积减少。体外实验中,白藜芦醇显著抑制了小鼠腹腔原代巨噬细胞中iNOS蛋白和TNF-α、IL-1β mRNA的表达水平（P均<0.01）,提高了F4/80⁺CD163⁺细胞比例（P<0.01）。结论 白藜芦醇可能通过促进巨噬细胞M2极化,抑制炎性因子的产生,从而有效缓解小鼠急性痛风性关节炎。     

CD19+ CD24high CD27+调节性B细胞在儿童传染性单核细胞增多症中的表达及意义

目的 探讨调节性B细胞（Breg）在儿童传染性单核细胞增多症（IM）中的作用。方法 应用流式细胞术检测53例IM患儿外周血T淋巴细胞亚群,CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达情况。用荧光定量PCR检测血浆EBV-DNA。同时用ELISA方法分析血清IL-10、TGF-β分泌水平。以50例健康儿童为对照。结果 IM急性期组与对照组比较CD3⁺ CD4⁺ T细胞明显降低（t=19.99,P<0.01）,CD3⁺ CD8⁺ T细胞明显增高（t=17.47,P<0.01）,CD4/CD8比值降低（t=16.79,P<0.01）。IM恢复期组与急性期组比较,CD3⁺ CD4⁺ T细胞明显增高（t=21.54,P<0.01）,CD3⁺ CD8⁺ T细胞明显降低（t=17.47,P<0.01）,CD4/CD8比值增高（t=16.68,P<0.01）。IM急性期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平13.4%±1.87%,与对照组比较显著降低,差异有统计学意义（t=14.61,P<0.01）。IM急性期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平与EBV-DNA病毒载量呈负相关（r=-0.52,P<0.01）。经治疗后IM恢复期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平18.3%±2.11%与IM急性期组比较显著增高,差异有统计学意义（t=12.61,P<0.01）。IM急性期组血清IL-10较对照组明显降低,差异有统计学意义（t=11.50,P<0.01）。治疗后IM恢复期组IL-10较IM急性期组明显增高,差异有统计学意义（t=9.40,P<0.01）。结论 IM急性期存在明显免疫失衡,即CD3⁺ CD8⁺ T细胞增多,CD4/CD8比值降低,可能与Breg细胞表达减低导致的免疫抑制功能不足有关。     

Wnt信号通路及靶基因在非小细胞肺癌组织中的表达

目的 研究Wnt信号通路中β-catenin 、TCF-4和Wnt-2在非小细胞肺癌中的活化状态及其与靶基因VEGF和Survivin表达的相关性,探讨Wnt信号通路对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭转移以及对靶基因表达的影响,为非小细胞肺癌多靶点基因治疗提供实验依据.方法 应用RT-PCR、免疫组化和Western blot等方法,检测非小细胞肺癌的癌组织及癌旁正常组织中β-catenin 、TCF-4和Wnt-2的表达,以及在Wnt信号通路的活化状态下靶基因VEGF和Survivin表达情况.结果 在非小细胞肺癌组织中,β-catenin 、TCF-4和Wnt-2的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.01);Wnt^-组与Wnt⁺组在癌旁正常组织和NSCLC组织中分布差异具有统计学意义(P=0.000);VEGF和Survivin在Wnt⁺组中的表达频率均明显高于Wnt^-组.结论 非小细胞肺癌组织中Wnt信号通路被活化,其通路活化可能是导致非小细胞肺癌各靶基因表达增加的重要因素,并与非小细胞肺癌的发生、发展密切相关.