用HPLC-DAD的方法评价不同产地当归药材的质量△

目的：测定不同产地当归中的阿魏酸和藁本内酯的含量。方法：采用AlltimaC18（4．6mm×250mm,51μm）色谱柱,0．5％乙酸水溶液-乙腈为流动相进行色谱分离,检测波长为325nm。结果：同一产地不同等级的当归药材中,归尾中藁本内酯和阿魏酸含量均比归头高。综合比较不同产地的当归（全归）藁本内酯的含量,发现云南当归藁本内酯含量略高于甘肃当归。不同产区的当归中阿魏酸的含量无明显差异。结论：不同等级当归药材中有效成分（藁本内酯）的含量具有明显差异,临床处方应当区别应用。     

RP-HPLC法测定川芎中丁基苯酞

川芎为伞形科植物川芎Ligusticum wallichii Franch.的干燥根茎，具有活血行气、祛风止痛之功效。川芎中的苯酞类成分藁本内酯（ligustilide）、丁基苯酞（butylphthalide）、丁烯基苯酞（butylidenephthalide）、新蛇床内酯（neocinidilide）等是其主导香味成分，并具有广泛的生理活性。日本也曾以苯酞类成分来评价川芎的质量。虽然藁本内酯在川芎中的量较高，但藁本内酯很不稳定，易分解，这给质量检测带来了很大的麻烦。     

藁本内酯通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善脂多糖诱导 小鼠肾足细胞损伤

【目的】探讨藁本内酯对脂多糖 （LPS） 诱导小鼠肾足细胞损伤的改善作用及机制。 【方法】（1） 体内实验：将小鼠随机分 为空白对照组,LPS诱导组,藁本内酯低、高剂量组及藁本内酯高剂量+pcDNA-NC （RhoA阴性对照） 组、藁本内酯高剂量+ pcDNA-RhoA （RhoA过表达） 组。除空白对照组,其他各组小鼠采用LPS诱导法构建急性肾损伤 （AKI） 模型。干预结束后,检 测小鼠血清中尿素氮 （BUN） 和肌酐 （Cr） 水平,高碘酸-希夫 （PAS） 染色法观察小鼠肾脏组织的病理变化,Western Blot法检测 肾脏组织中RhoA、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 （ROCK） 蛋白的表达。 （2） 体外实验：将培养的小鼠足细胞MPC5分为空白 对照组,LPS诱导组,藁本内酯低、高剂量组,藁本内酯高剂量+pcDNA-NC组,藁本内酯高剂量+pcDNA-RhoA组,细胞计 数试剂盒8 （CCK-8） 法检测足细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,鬼笔环肽染色法分析细胞骨架,Western Blot法检测 细胞RhoA、ROCK蛋白的表达。 【结果】与空白对照组比较,LPS诱导组小鼠血清中BUN和Cr的水平、肾小管损伤评分、 RhoA和ROCK蛋白表达水平升高 （P＜0.05） ;与LPS诱导组比较,藁本内酯低、高剂量组小鼠血清中BUN和Cr水平、肾小管 损伤评分、RhoA和ROCK表达水平降低 （P＜0.05） 。与空白对照组比较,LPS诱导组MPC5细胞增殖活性、F-肌动蛋白荧光 强度、RhoA和ROCK的表达降低 （P＜0.05） ,凋亡率升高 （P＜0.05） ;与LPS诱导组比较,藁本内酯低、高剂量组MPC5细胞 增殖活性、F-肌动蛋白荧光强度、RhoA和ROCK的表达升高 （P＜0.05） ,凋亡率降低 （P＜0.05） 。利用过表达RhoA进行回补 实验发现,RhoA过表达逆转了藁本内酯对LPS诱导小鼠肾组织和足细胞损伤的缓解作用 （P＜0.01） 。 【结论】藁本内酯可能通 过抑制RhoA/ROCK信号通路改善LPS诱导小鼠肾足细胞损伤。     

基于一测多评法的当归药材质量控制研究

目的 建立一测多评法（quantitative analysis of multi-components by a single marker，QAMS）同时测定当归中阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、阿魏酸松柏酯、藁本内酯和丁烯基苯酞的含量。方法 采用Waters X-Select CSH色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以0.085%磷酸-水溶液（A）-乙腈（B）为流动相，梯度洗脱，体积流量1.0 mL/min，柱温40 ℃，检测波长265 nm。结果 在线性范围内各成分线性良好（R²＞0.999）。以藁本内酯为内标，阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、阿魏酸松柏酯和丁烯基苯酞的相对校正因子分别为1.073 4、0.564 8、0.468 1、0.926 2、1.083 5；同时采用外标法测定这6个成分的含量，将2种方法进行分析比较，结果没有明显差异。结论 建立了当归药材中阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、阿魏酸松柏酯、藁本内酯和丁烯基苯酞6个成分的QAMS法，该法可用于当归的质量控制。     

茶芎挥发油中抗惊有效成分的分离和鉴定

从中药茶芎LigusticumsinenseOliv.cv.Chaxiong的挥发油中分得5个具抗惊活性的苯酞类化合物，经化学和光谱分析鉴定为丁烯基苯酞（Ⅰ）、藁本内酯（Ⅱ）、丁基苯酞（Ⅲ）、新蛇床内酯（Ⅳ）和东川芎内酯（Ⅴ）。     

藁本内酯对阿霉素所致心肌损伤的保护作用

目的探讨藁本内酯对阿霉素所致心肌损伤的作用及机制。方法采用MTT 法检测藁本内酯对阿霉素 诱导的大鼠心肌细胞H9c2 细胞存活率的影响。通过流式细胞术分析藁本内酯对阿霉素诱导的活性氧（ROS）水 平及H9c2 细胞焦亡的影响。采用免疫印迹法检测H9c2 细胞NLRP3、Caspase-1 蛋白表达情况。通过加入过氧 化氢,探究藁本内酯对阿霉素所致H9c2 细胞焦亡是否由ROS 所介导。将小鼠随机分成4 组,每组5 只,即正 常组、藁本内酯组、模型组（阿霉素）、治疗组（阿霉素+藁本内酯）。以阿霉素（5 mg·kg-1）腹腔注射,每周1 次, 共注射3 周,累积量为15 mg·kg-1。3 周后,以藁本内酯（20 mg·kg-1）腹腔注射,每天1 次,连续给药3 周。记 录心脏质量与体质量比值及心脏超声检查,结合HE 和Masson 染色观测心脏病理变化,探究藁本内酯对阿霉 素小鼠心脏功能和心肌损伤的影响。采用免疫印迹法检测藁本内酯对阿霉素小鼠心肌NLRP3、Caspase-1 蛋白 表达的影响情况。结果与正常组比较,模型组H9c2 细胞存活率明显降低（P＜0.05）;细胞内ROS 含量、 NLRP3 蛋白表达、Caspase-1 水解切割和Caspase-1/7-AAD 双阳性心肌细胞率明显升高（P＜0.05）。与模型组 比较,治疗组细胞存活率增加（P＜0.05）;细胞内ROS 含量、NLRP3 蛋白表达、Caspase-1 水解切割和 Caspase-1/7-AAD 双阳性心肌细胞率减少（P＜0.05）。而藁本内酯对Caspase-1/7-AAD 双阳性心肌细胞率的作 用可被过氧化氢所拮抗（P＜0.05）。与正常组比较,模型组小鼠心肌纤维排列紊乱,心肌纤维化明显;左心室 收缩末期内径和左心室舒张末期内径明显增大（P＜0.05）,心脏射血分数和短轴缩短率、心脏质量与体质量比 值明显减少（P＜0.05）;心肌组织NLRP3 蛋白表达和Caspase-1 水解切割明显增多（P＜0.05）。与模型组比较, 治疗组小鼠心功能和心肌损伤检测指标均得到有效改善（P＜0.05）;心肌组织NLRP3 蛋白表达、Caspase-1 水 解切割明显减少（P＜0.05）。结论藁本内酯可改善阿霉素所致心肌细胞损伤。     

藁本内酯的稳定性及β-环糊精包合工艺的考察

目的考察藁本内酯的稳定性,并采用β-环糊精包合,避免藁本内酯的异构化。方法自然条件或密闭、避光情况下,含藁本内酯的量下降显著。采用β-环糊精进行包合,正交试验优选了包合的最佳工艺,采用多种方法对包合物的形成进行了验证。结果DSC法、红外分光光度分析、GC分析显示:按最佳工艺制得的包合物与混合物有明显区别,藁本内酯被β-环糊精包合在分子腔中已经形成新的物相。结论藁本内酯常温下不稳定,β-环糊精包合可以改善它的稳定性。     

水蒸汽蒸馏法对当归挥发油提取过程中成分异构化的影响

目的：考察水蒸汽蒸馏法对当归挥发油提取过程中成分异构化的影响。方法：水蒸汽蒸馏法、GC分析、GC-MS检测。结果：水蒸汽蒸馏法提取当归挥发油的时间总计约为14h,其中（Z）-藁本内酯的收率约为药材中藁本内酯总量的67.1%,当归挥发油中产生了4-羟基-3-甲基乙酰苯、三甲基苯甲醛等次生物质。结论：水蒸汽蒸馏法对当归挥发油的提取具有很多弊端。     

当归内酯类成分的结构鉴定与抗氧化活性筛选

目的分离当归中内酯类成分,并对其血管内皮细胞保护活性进行筛选。方法当归经CO2超临界萃取,萃取物通过硅胶柱层析分离得到单体成分,波谱法鉴定其结构;采用过氧化氢(H2O2)建立体外培养的人脐静脉内皮细胞(HU-VEC)氧化应激损伤模型,设立模型组、对照组和药物组,其中药物组给予5种当归内酯类成分预培养24 h后加入25mmol/LH2O2,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率。结果分离得到(Z)-藁本内酯(Ⅰ),(Z)-正丁烯基苯酞(Ⅱ),exo-Z,Z’-3α.7α’,7α.3α’-双藁本内酯(Ⅲ),3,9-二羟基藁本内酯(Ⅳ),(Z,Z’)-6.8’,7.3’-双藁本内酯(Ⅴ)等5种内酯类成分。其中(Z)-藁本内酯、3,9-二羟基藁本内酯具有显著的血管内皮细胞保护活性。结论当归中某些内酯类成分具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,符合当归的功效、主治。     

不同产地川芎中藁本内酯的含量及其质量指标

目的：测定不同产地川芎中藁本内酯的含量以控制其质量。方法：HPLC采用Alltima C₁₈ (4.6 mm× 150 mm, 5 μm)色谱柱,以乙腈-水 (60∶40) 为流动相,流速为1.0 mL·min^-1,柱温为室温,检测波长350 nm,以外标法测定川芎中藁本内酯的含量。结果：Z-藁本内酯在0.10～4.0 μg 呈线性关系,平均回收率为98.5% (n=5)。21份川芎原药材中Z-藁本内酯的平均质量分数为7.40 mg·g^-1,即川芎原药材中Z-藁本内酯的含量以干燥品计,应不少于0.66%。结论：本方法简便,准确,重复性好,可用于川芎中藁本内酯的含量测定。不同产区川芎中藁本内酯的含量差异较大,道地产区药材中藁本内酯的含量较高。     

RP-HPLC测定川芎挥发油中藁本内酯的含量

目的 :测定川芎挥发油中藁本内酯的含量。方法 :采用RP HPLC法 ,内标法定量 ,内标物尼群地平 ,HypersilODS₂ 色谱柱 (4.6mm× 200mm ,5 μm) ,流动相为甲醇-乙腈-水 (33∶2 1∶4 6 ) ,检测波长 275nm。 结果 :藁本内酯在 2.92～ 29.2mg·L^-1线性关系良好 ,藁本内酯在川芎挥发油中的含量为 34.79% ,藁本内酯平均回收率 95 .1% ,RSD为 2.3%。结论 :本方法简便 ,准确 ,重现性好 ,可用于藁本内酯的含量测定。     

当归化学成分分离与鉴定

目的:探讨当归化学成分的分离与鉴定方法。方法:采用硅胶色谱、薄层色谱等分离当归有效成分,参考理化性质及波谱数据鉴定内酯类结构。结果:分离获取厚朴酚、反式阿魏酸、正丁基苯酞、双藁本内酯、4-(2-羟基-1-乙痒乙基)-苯酚等15个化合物。当归挥发油提取物分离得到4个化合物,鉴定为(Z)-6,7-反式-二羟基藁苯内酯、(Z)-6,7-环氧藁本内酯、(Z)-藁本内酯、当归酸(Z)-藁本内酯-11-醇酯。结论:采用薄层色谱及硅胶柱色谱分离鉴定当归化学成分操作简单、重复性好,可为当归成分的深入研究提供一定参考。     

高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱法同时测定舒脑欣滴丸中藁本内酯、洋川芎内酯I等6种成分含量

 目的 建立同时测定舒脑欣滴丸中尿苷、鸟苷、阿魏酸、藁本内酯、洋川芎内酯I和H含量的液相色谱-质谱联用方法（UPLC-Q-TOF）。方法 采用Waters Acquity BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.7 μm）,流动相为乙腈-甲酸-水体系梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^-1,PDA检测190~400 nm扫描;进样量：2.0 μL。结果 尿苷、鸟苷、阿魏酸、藁本内酯、洋川芎内酯I和H分别在10.31~206.24,3.28~65.52,6.36~127.24,8.24~164.88,10.18~200.52,3.14~62.72 μg·mL^-1内与峰面积呈良好线性关系;精密度、重复性和稳定性良好;加样回收率在99%~101%之间。结论 所建立的UPLC-Q-TOF方法简便、准确、快速、重复性好,可用于舒脑欣滴丸中尿苷、鸟苷、阿魏酸、藁本内酯、洋川芎内酯I和H的含量测定,为该药的质量控制提供依据。     

基于HPLC指纹图谱及多指标成分定量分析的不同产地当归质量特征研究

目的 建立不同产地当归Angelicae sinensis的HPLC指纹图谱并测定其主要成分的含量,结合化学计量学分析,建立各产地当归的“识别标志”。方法 采用HPLC-DAD方法建立甘肃、四川和云南等地当归的指纹图谱,并对指标成分进行含量测定。进行相似度评价结合主成分分析（principal component analysis,PCA）、偏最小二乘法判别分析（partial leastsquares discrimination analysis,PLS-DA）、Fisher线性判别（fisher linear discrimination analysis,FLDA）等模式识别技术进行分析。结果 HPLC指纹图谱共标定了不同产地当归中的13个共有峰,指认出绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、阿魏酸松柏酯、E-藁本内酯、E-丁烯基苯酞、Z-藁本内酯8个色谱峰,样品相似度均在0.90以上。绿原酸、洋川芎内酯I、E-丁烯基苯酞、总阿魏酸（阿魏酸与阿魏酸松柏酯换算后总量）、Z-藁本内酯6个指标成分含量测定变化范围分别为0.10～0.52 mg/g、0.10～0.24 mg/g、0.19～0.54 mg/g、1.42～2.66 mg/g、21.75～29.15 mg/g。PCA、PLS-DA分析结果表明,Z-藁本内酯、E-藁本内酯、阿魏酸松柏酯、阿魏酸在不同产地当归的中变化显著,Z-藁本内酯、E-丁烯基苯酞、总阿魏酸分别可作为甘肃当归、四川当归、云南剑川当归的成分识别标志。逐步线性判别验证当归产地其中自身判别正确率为96.3%,交叉验证正确率为92.3%。结论 建立的HPLC指纹图谱结合含量测定、PCA、PLS-DA客观、全面、有效地对不同产区当归质量特征进行探究,确认各产地当归的标志性成分,为当归的产地溯源及质量控制提供科技支撑。     

HPLC-DAD法同时测定脑健胶囊中4种指标成分含量

目的：建立脑健胶囊HPLC-DAD指纹图谱,并对其指标成分川芎嗪、阿魏酸、洋川芎内酯A、藁本内酯进行含量测定。方法：采用Elipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,柱温30℃,以0.3%乙酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,采用DAD检测器,检测波长为川芎嗪295 nm,阿魏酸325 nm,洋川芎内酯A 280 nm,藁本内酯328 nm。结果：脑健胶囊中4种指标成分能实现同时分离,川芎嗪、阿魏酸、洋川芎内酯A、藁本内酯的线性范围分别为：0.1033~2.066 g（R2=0.9999）,0.04966~1.9864 g（R2=0.9995）,0.1011~2.022 g（R2=1）,0.4072~2.066 g（R2=1）;平均加样回收率分别为95.60%（RSD 1.50%）,97.44%（RSD 1.63%）,106.2%（RSD 0.25%）,99.36%（RSD 0.71%）。结论：该方法客观可靠,适用于脑健胶囊全成分分析,实现综合质量控制。     

川芎化学成分研究

目的 :研究川芎有效部位化学成分。方法 :溶剂提取 ,色谱分离 ,光谱鉴定化合物结构。结果 :共分离鉴定了藁本内酯;4,5-二氢-3-丁基苯肽 ;Z ,Z′ 6 ,6′,7,3α-二聚藁本内酯 ;Z-6 ,8′,7,3′-二聚藁本内酯 ,Z′-3 ,8-二氢 6 ,6′,7,3′α-二聚藁本内酯 ;4-羟基-3 丁基苯肽 ,阿魏酸及川芎三萜等 8个化合物。结论 :川芎三萜为一新化合物。     

川芎挥发油稳定性考察

为考察温度、浓度、光、pH值对川芎蒸馏液中藁本内酯稳定性的影响，采用紫外分光光度法，在27lnm处测定川芎水蒸汽蒸馏液的吸收度(A值)。结果表明，温度和光对藁本内酯稳定性影响较大，pH值对藁本内酯稳定性有一定影响，川芎蒸馏液浓度对藁本内酯稳定性影响不大。提示川芎蒸馏液应采用低温避光法保存，其pH值宜定在5左右，以保证其制剂质量和临床疗效。     

川芎、当归和藁本中挥发油成分比较研究

目的:建立川芎、当归和藁本挥发油的HPLC特征图谱,对特征峰进行比较研究。方法:采用HPLC法,建立川芎、当归和藁本的特征图谱,并采用液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)方法对特征峰进行定性分析。结果:在选定的条件下,得到川芎、当归和藁本的特征图谱,HPLC-MS鉴定出7个特征峰,分别为:洋川芎内酯A、丁苯酞、阿魏酸松柏酯、E-藁本内酯、Z-藁本内酯、新蛇床内酯、E-丁烯基酞内酯。结论:该方法可简便准确地鉴别川芎、当归和藁本,为药材及其中成药的质量控制提供参考。     

当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的测定及大鼠体内的药动学

目的了解市售当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的量及口服后藁本内酯在大鼠体内的药动学。方法用气相色谱法测定当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的量,SD大鼠灌胃给药,在设定的时间点采血0.3 mL,离心分离血浆,HPLC法测定藁本内酯的血药浓度,计算药动学参数,与藁本内酯静脉注射给药比较,对其在大鼠体内的药动学特征进行评价。结果当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的量为0.19 mg/粒。当归腹痛宁滴丸灌胃给药后,藁本内酯25 mg/kg组,其Cmax为(620.395±47.69)μg/L,Tmax0.08 h,AUC(0-∞)(709.346±77.775)μg/L·h,t1/2z(4.331±1.278)h;12.5 mg/kg组Cmax为(173.902±13.654)μg/L,Tmax0.08 h,AUC(0-∞)(365.003±72.813)μg/L·h,t1/2z(2.236±0.188)h;静脉注射藁本内酯25 mg/kg后Cmax(675.965±41.968)μg/L,Tmax0.08 h,AUC(0-∞)(949.501±63.182)μg/L·h,t1/2z(3.085±0.137)h;静脉注射12.5 mg/kg时Cmax(391.402±25.251)μg/L,Tmax0.08 h,AUC(0-∞)(391.078±26.609)μg/L·h,t1/2z(2.985±0.241)h。结论当归腹痛宁滴丸口服,其有效成分藁本内酯胃肠道吸收迅速,生物利用度高,给药后药时曲线呈双吸收峰,可能与滴丸中藁本内酯释放特征有关。     

羟丙基-β-环糊精包合对当归挥发油透皮吸收的影响

目的考察羟丙基-β-环糊精包合对当归挥发油体外透皮吸收的影响。方法采用水蒸气蒸馏法制备当归挥发油并采用GC-MS分析其成分及相对含有量。测定并比较了当归挥发油中藁本内酯与藁本内酯单体的油水分配系数。采用羟丙基-β-环糊精通过饱和水溶液法将当归挥发油制成包合物,以藁本内酯为指标,比较了当归挥发油以溶液、包合物溶液、凝胶和包合物凝胶四种形式给药的体外透皮吸收效果。结果当归挥发油得率为0.27%,含有至少52种成分,并以藁本内酯为主。藁本内酯单体和当归挥发油中的藁本内酯的油水分配系数对数值(lg P)分别为1.88±0.05和2.64±0.06(n=3)。当归挥发油在12 h内的体外透皮吸收动力学符合零级速度方程,溶液、包合物溶液、凝胶和包合物凝胶四种形式的累积透过率分别为28.93%、6.67%、23.70%和11.93%。结论在溶液或凝胶剂中,制成环糊精包合物不利于当归挥发油的透皮吸收。