HO-1介导H2O2 预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对H2O2预处理的适应性细胞保护效应的介导作用。方法PI染色流式细胞仪(Flowcytometer,FCM)检测PC12细胞凋亡,流式细胞仪检测PC12细胞HO-1蛋白的表达。结果PC12细胞经10μmol/L H2O2预处理90 min后,20、30、50、100μmol/L H2O2对PC12细胞凋亡的诱导作用明显下降;10μmol/L H2O2预处理90 min后,PC12细胞HO-1蛋白表达量明显增加;给予10μmol/L的HO-1蛋白特异性阻断剂ZnPP后,可显著阻断10μmol/L H2O2预处理90 min对50μmol/L H2O2损伤PC12细胞的保护作用。结论血红素氧合酶-1(HO-1)介导了H2O2预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用。     

7-二氟甲基金雀异黄素对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨7-二氟甲基金雀异黄素对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用。方法:采用过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞氧化应激损伤的模型,MTT法检测细胞增殖活性,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,多功能生化分析仪测定培养液上清中的乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:7-二氟甲基金雀异黄素能有效拮抗40.0μmol/L的H2O2孵育24h对PC12细胞增殖活性的抑制作用和对PC12细胞凋亡的诱导作用,并能减少40.0μmol/L的H2O2诱导的PC12细胞的LDH释放。结论:7-二氟甲基金雀异黄素对过氧化氢诱导PC12细胞的氧化应激损伤具有保护作用。     

AMPK/STAT1通路参与土木香内酯改善H2O2引起的神经细胞PC12凋亡

目的：研究土木香内酯（ALA）对H2O2诱导神经细胞PC12凋亡的影响。方法：用不同浓度（1、5、10、20、50和100 μmol/L）的ALA处理细胞后进行MTT检测细胞增殖;用不同浓度（1和5 μmol/L）的ALA预先处理细胞后加入H2O2刺激细胞,进行流式和MTT检测细胞增殖情况;设立对照组、H2O2（100 μmol/L）组、ALA（1和5 μmol/L）组,ALA干预H2O2处理的细胞进行细胞流式检测细胞凋亡情况,MTT检测细胞增殖情况,Western blot检测AMPK和STAT1的磷酸化;利用siRNA沉默AMPK表达后再用ALA处理,Western blot检测STAT1的磷酸化的表达。结果：高浓度ALA抑制PC12细胞增殖;与对照组比,经H2O2刺激后PC12细胞凋亡增高;与H2O2组比较,ALA组细胞凋亡明显降低,并呈剂量依赖性;沉默AMPK表达不影响H2O2诱导PC12细胞STAT1的磷酸化表达;在沉默AMPK后再用ALA处理,与单沉默AMPK比较,STAT1的磷酸化的表达差异无统计学意义。结论：ALA可通过AMPK的激活调控H2O2诱导PC12细胞的STAT1的磷酸化表达,从而影响细胞凋亡。     

大黄素通过抑制p38 MAPK活化下调H2O2诱导PC12细胞COX-2表达的实验研究

目的探讨大黄素能否通过抑制p38 MAPK活化下调H2O2诱导的PC12细胞COX-2表达。方法将神经元PC12细胞分为3组:对照组(Control组)、大黄素+H2O2组(Emodin+H2O2组)和H2O2组。在300μM的H2O2干预4小时后使用RT-PCR法和western blot法对各组PC 12细胞COX-2mRNA和蛋白的表达水平进行检测;并使用western blot法对PC12细胞p38MAPK磷酸化水平(Phospho-p38MAPK/total p38MAPK比值)进行测量。结果与对照组相比较,在300μM的H2O2干预4小时后PC12细胞COX-2mRNA和蛋白的表达水平以及p38 MAPK磷酸化水平均明显升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);但H2O2组较Emodin+H2O2组COX-2mRNA和蛋白的表达的升高以及p38 MAPK磷酸化水平的增加更加显著,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论大黄素可以有效抑制H2O2诱导的PC12细胞COX-2表达,并与下调p38 MAPK活化水平密切相关。     

酰化4-羟基查耳酮对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的抗氧化保护作用及初步机制

目的:研究查尔酮化合物B1、B2对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其对Nrf2/ARE信号通路的影响。方法:建立H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的模型,用MTT法检测化合物B1和B2的抗氧化活性及细胞毒性;用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法检测其对转录相关因子Nrf2调控基因谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)、血红素氧合酶-1(HO-1)m RNA表达的影响;用Hoechst染色检测其对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用。结果:分别加了B1、B2的细胞孵育1 h后,B1、B2对H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤无保护作用,而孵育24 h后,B1、B2均具有较好的保护作用,两者在浓度为10μmol/L时对细胞无毒性;B1对Nrf2下游GCLC、HO-1基因的表达无明显影响,而B2可明显激活GCLC、HO-1基因的表达,且明显抑制H2O2诱导的PC12细胞的凋亡。结论:B1、B2均对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有较好的抗氧化保护作用,B2的作用机制可能是通过激活Nrf2/ARE抗氧化信号通路来实现,B1可能是通过其他机制起到抗氧化作用。     

薯蓣皂苷元对PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨薯蓣皂苷元(diosgenin,DG)对H2O2诱导损伤的PC12细胞的保护作用。方法:用H2O2损伤PC12细胞建立氧化应激损伤细胞模型,在电子显微镜下观察其细胞形态学特征,并通过MTT法检测不同浓度DG对正常PC12细胞和模型细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测DG对模型细胞凋亡率和细胞周期的影响。结果:与正常组比较,不同浓度H2O2(100、200、400μmol/L)损伤组PC12细胞生存率均显著下降(P0.01),DG 3个浓度组(1.25、2.5、5.0μmol/L)PC12细胞生存率均显著提高(P0.01)。与模型组比较,DG 3个浓度组(1.25、2.5、5.0μmol/L)PC12细胞生存率均显著提高(P0.01);2.5μmol/L的DG可显著抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡(P0.01),在细胞周期上表现为G0~G1期细胞减少,同时S期增多。结论:DG能促进PC12细胞增殖,对H2O2氧化损伤的PC12细胞具有保护作用。     

山楂叶总黄酮对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制的研究

目的探讨山楂叶总黄酮(flavone mixture of crataegus leaves,FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其分子机制.方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,用流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率,用Western blot 法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3P20蛋白及用RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA表达量的变化.结果与模型组比较FMCL 100μg/ml剂量组PC12细胞凋亡率下降,Bcl-2蛋白及mRNA表达量明显升高,而Bax、Caspase-3P20蛋白及Bax mRNA表达量明显降低(P<0.05或P<0.01),且在一定范围内存在剂量依赖关系.结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因及蛋白的表达从而抑制Caspase-3活化有关.     

PLC-γ1信号通路在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨磷酸脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路对H2O2诱导的PC12细胞凋亡作用的影响.方法 利用PLC-γ1特异性抑制剂U73122(10 pμmol/L)预处理PC12细胞,阻断50 μmol/LH2O2诱导的PLC-γ1信号通路,Hoechst/P1双染观察细胞形态改变,MTT评估细胞活力,流式细胞仪分析凋亡和坏死细胞比例,DNA电泳验证细胞凋亡状态的改变.结果 H2O2对PC12细胞活力的影响呈时效和量效关系.PLC-γ1信号通路阻断后,PC12细胞出现了凋亡形态学改变,细胞活力明显降低.流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达35.7%,DNA电泳呈现明显的梯形条带.结论 PLC-γ1信号通路在50 μmol/L H2O2诱导的PC12细胞凋亡中发挥重要的保护作用.     

Fas/FasL信号通路在铅暴露致PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨Fas/Fas L信号在铅诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)发生细胞凋亡中的作用。方法 醋酸铅的暴露剂量设为0、0.1、1.0与10.0μmol/L,暴露时间为48 h。免疫荧光技术观察细胞内Fas蛋白的表达,Westernblot法检测Fas与Fas L蛋白表达水平,比色法测定细胞内caspase-8与caspase-3的活性,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 免疫荧光技术与Western blot法均表明,与对照组比较,1.0与10.0μmol/L醋酸铅暴露可致PC12细胞内Fas表达明显增加(P0.05),10.0μmol/L醋酸铅可诱导Fas L蛋白表达显著增加(P0.01)。此外,与对照组相比,caspase-8活性在10.0μmol/L醋酸铅暴露后显著升高(P0.01),而caspase-3活性在1.0与10.0μmol/L醋酸铅染毒后均显著上升(P0.05)。流式细胞术结果显示,0.1、1.0与10.0μmol/L醋酸铅染毒均增加PC12细胞凋亡率(P0.05),与对照组比较,差异有统计学意义。结论 铅暴露可诱导PC12细胞凋亡,其机制可能与死亡受体途径的激活有关。     

H2O2对平滑肌细胞凋亡及p38MAPK活性的影响

目的 :了解H2 O2 对兔血管平滑肌细胞 (VSMC)p38蛋白激酶 (p38MAPK)磷酸化的影响及其与细胞凋亡的关系。方法 :取兔主动脉血管平滑肌细胞培养 ,加或不加H2 O2 孵育 ,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应 (MTT)法检测平滑肌细胞活性 ,以Western杂交检测p38MAPK磷酸化。结果 :①随着H2 O2 浓度增加 ,VSMC活性呈剂量依赖性降低 ;②磷酸化p38MAPK的表达随H2 O2 浓度的增高而增加 ,且磷酸化的p38MAPK在H2 O2 作用后 15min时达到峰值。③加用特异性的p38MAPK抑制剂SB2 0 35 80后可显著降低p38MAPK的活化 ,并能逆转H2 O2 诱导细胞凋亡的作用。结论 :H2 O2 通过激活p38MAPK而使平滑肌细胞凋亡增加 ,这也许是糖尿病患者更易患心血管疾病的原因之一     

蜕皮甾酮对H2O2诱导的PC12细胞毒的保护作用

目的观察蜕皮甾酮(ecdysterone,ECR)对H2O2作用不同时间诱导PC12毒的保护作用。方法通过MTT(3-4,5-d im ethylth iazolyl-2,5-d iphenyltetrazolium brom ide,MTT)法检测H2O2对PC12的毒性及ECR的保护作用。PC12细胞的形态学改变通过荧光显微镜观察(acrid ine orange/eth id ium brom ide染色,AO/EB),完整无损的PC12细胞呈绿色,受损或死亡细胞呈橘黄色和红色。结果1、25、50和100μmol.L-1ECR与PC12细胞分别作用6h,12hand 24h时,PC12细胞的MTT吸光值无明显改变;50、100、200μmol.L-1H2O2分别与PC12作用6h,12h,24h时,PC12细胞的MTT吸光值明显降低(P<0.05,P<0.01 andP<0.01);如果用不同浓度的ECR(1、25、50 and100μmol.L-1)预处理PC12细胞0.5 h后,再加入H2O2(100μmol.L-1)并分别作用6h,12h,24h,则PC12细胞的MTT吸光值相对增加(P<0.05 at 50μmol.L-1,P<0.01 at 100μmol.L-1)。AO/EB染色后荧光显微镜下观察,ECR对H2O2引起的PC12细胞损伤有保护作用。结论ECR能够相对增加PC12细胞的存活率,对H2O2的PC12细胞毒性有保护作用。     

莫达非尼抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡

目的:研究莫达非尼(modafinil)对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用,并对其机制进行探讨.方法:以噻唑兰(MTT)法测定PC12细胞存活率;用流式细胞术检测PC12细胞凋亡的百分率;测定细胞内罗丹明123(Rhodamine123)的荧光强度,反映细胞线粒体膜电位的改变.结果:莫达非尼能抑制过氧化氢(200 μmol/L)、硝普钠(500μmol/L)和连二亚硫酸钠(2 mmol/L)对PC12细胞的损伤.过氧化氢(200 μmol/L)24h可以诱导PC12细胞凋亡(凋亡率为32.65%).莫达非尼(15,7.5 μmol/L)显著降低凋亡细胞的百分率(凋亡百分率分别为7.95%、15.46%).并且莫达非尼可以抑制过氧化氢引起的线粒体膜电位降低.结论:莫达非尼对PC12细胞有保护作用.能抑制过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡,这一作用可能与其抑制过氧化氢引起的线粒体膜电位降低有关.     

N-硬脂酰酪氨酸对H2O2诱导PC12细胞氧化应激损伤的影响

目的研究N-硬脂酰酪氨酸（NsTyr）预处理对过氧化氢（H2O2）诱导的PC12细胞氧化应激损伤的影响。方法体外培养传代的PC12细胞分为空白对照组、H2O2损伤组（不同浓度H2O2诱导16h）和NsTyr预处理组（不同浓度NsTy预处理30min后加入100μmol／LH2O2诱导16h）。流式细胞仪检测细胞凋亡率及活性氧类（ROS）生成,Westernblotting检测Bax和Bcl-2的表达。结果与H2O2（100μmol／L）损伤组比较,5、10μmol／LNsTyr预处理组PC12细胞存活率显著升高（P〈0．01）,凋亡细胞率降低（P〈0．05）,细胞内ROS生成减少（P〈0．05,P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值升高（P〈0．05）。结论NsTyr能提高PC12细胞的抗氧化应激损伤能力,上调Bcl-2表达和下调Bax表达,抑制细胞凋亡。     

过氧化氢诱导HUVECs氧化应激模型的构建

目的 利用过氧化氢 (H2O2) 诱导人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cells, HUVECs) 构建体外氧化应激细胞模型.方法 H2O2分6个浓度梯度处理HUVECs不同时间, 倒置显微镜观察细胞形态变化, CCK-8法检测细胞存活率, 流式细胞术检测细胞凋亡率, DCFH-DA荧光探针和流式细胞仪检测细胞内活性氧水平, 筛选H2O2的最佳作用浓度和时间.结果 不同浓度H2O2处理细胞不同时间, 对HUVECs均有损伤作用;400、600、800μmol/L H2O2处理HUVECs 24 h, 细胞存活率显著降低 (P<0.05) , 800μmol/L H2O2作用HUVECs不同时间, 细胞存活率随处理时间延长逐渐降低 (P<0.01) ;各组H2O2处理HUVECs 24 h, 细胞凋亡率显著增加 (1 000μmol/L除外, P<0.05) , 坏死率亦显著增加 (100μmol/L除外, P<0.05) ;800μmol/L H2O2处理HUVECs不同时间, 细胞凋亡率随处理时间延长逐渐增加, 24 h时达到最高 (P<0.05) , 细胞坏死率亦逐渐增加, 48 h时达到最高 (P<0.05) ;各组H2O2作用HUVECs 24 h, 浓度400μmol/L时, 细胞内ROS水平达到最高 (P<0.01) , 800μmol/L H2O2处理HUVECs, 胞内ROS水平随处理时间延长而递增 (P<0.01) .结论800μmol/L H2O2与HUVECs作用24 h可构建体外细胞氧化应激模型.     

不同浓度的氯化钴对 PC12分化细胞增殖与凋亡的影响

目的：观察不同浓度的氯化钴（CoCl2）对肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）分化细胞增殖与凋亡的影响,探讨合理的体外化学模拟缺氧模式。方法应用不同浓度CoCl2作用于PC12分化细胞不同时间,建立化学性缺氧诱导细胞凋亡的实验模型;将PC12细胞分为空白对照组、不同浓度不同时间的CoCl2处理组;应用细胞计数、MTT、Hoechst33342/PI双染色法检测不同浓度CoCl2对PC12分化细胞的增殖与凋亡的影响。结果①CoCl2（≤200μmol/L）在6h内使PC12细胞存活率轻度增加,12h后开始出现细胞存活率降低,并呈现比较明显的剂量和时间依赖关系;CoCl2（≥300μmol/L）诱导PC12分化细胞6h即开始出现存活率降低（P＜0．01）;②150μmol/L CoCl2诱导PC12分化细胞24h后细胞数量明显减少（P＜0．01）;③通过荧光显微镜可见150μmol/L CoCl2诱导PC12分化细胞24h内受损细胞多为早期凋亡,48h后开始出现晚期凋亡和坏死细胞增多。结论 CoCl2对PC12分化细胞增殖与凋亡的影响呈时间和浓度依赖性,进行化学模拟缺氧要考虑CoCl2的作用浓度和作用时间。     

维生素B12对氧化应激损伤下神经细胞的保护机制

目的：探索维生素B12预处理对H2O2诱导下的神经细胞损伤的保护作用及自噬和凋亡蛋白表达的影响。方法：将大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞（PC12）分为对照组（Control组）RPMI 1640培养、损伤组（H2O2组）RPMI 1640培养并加入200 μmol/L的H2O2刺激,维生素B12保护组（H2O2+VitB12组）RPMI 1640培养加入200 μmol/L维生素B12预处理和200 μmol/L的H2O2刺激。24 h后检测细胞的活性,Western blot和免疫荧光检测凋亡及自噬相关蛋白表达水平。结果：与Control组比较,H2O2组的细胞存活率、细胞DNA复制水平降低,Bcl-2和P62蛋白的表达量下降,Bax、ATG-5和LC3蛋白的表达量明显上升,胞浆内LC3的激活数量上升（均P＜0.05)。与H2O2组比较,H2O2+VitB12组细胞存活率和细胞DNA复制水平上升,Bcl-2和P62蛋白的表达量上升,Bax、ATG-5和LC3蛋白的表达量显著下降,胞浆内LC3的激活数量下降（均P＜0.05)。结论：维生素B12能通过调控自噬抑制氧化应激诱导下的细胞凋亡。     

PC12细胞应激损伤中能量限制的效应及SIRT3的表达

目的 研究H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤中,能量限制(CR)及SIRT3参与的调控效应.方法 实验分4组:H2O2组,H2O2+CR组,CR组和正常对照组;MTT法检测不同浓度H2O2作用下CR对细胞生存率的影响;TUNEL染色法检测过氧化氢作用后CR对细胞的凋亡的影响;免疫荧光检测PC12细胞中SIRT3的表达定位;RT-PCR及Western印迹检测SIRT3、Caspase-3的表达变化.结果 60μmol/L H2O2作用6 h后,H2O2组细胞生存率(74.01±2.21)%可维持在70%以上,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);120μmol/L H2O2作用下,H2O2组的细胞活力显著下降(38.22±3.34)%,后续研究选取60μmol/L H2O2浓度作为应激源;60μmol/L H2O2作用6 h后H2O2组细胞生存率(74.01±2.21)%与CR+H2O2组(97.26±1.92)%间比较差异有统计学意义(P＜0.05).TUNEL凋亡检测H2O2+CR组凋亡率较H2O2组显著降低.免疫荧光双染色证实PC12细胞中SIRT3为一种线粒体蛋白.Western印迹显示与正常对照组(5256±144)比较,CR组中SIRT3表达升高(6857±157),差异有统计学意义(P＜0.05)、H2O2组中表达降低(3786±160),差异有统计学意义(P＜0.05).与H2O2组(3786±160)比较,CR+H2O2组中SIRT3表达上升(5056±121),差异有统计学意义(P＜0.05).与正常对照组比较(5342±420),H2O2组中Caspase-3表达升高(8499±426),差异有统计学意义(P＜0.001).CR+H2O2组(5750±438)中Caspase-3表达较H2O2组表达下降(8499±426),差异有统计学意义(P＜0.001).RT-PCR显示与正常对照组(6204±134)比较,CR组(7214±148)中SIRT3表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05)、H2O2组中表达降低(4807±143),差异有统计学意义(P＜0.05).与H2O2组(4807±143)比较,CR+H2O2组中SIRT3表达上升(6195±166),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PC12细胞中,CR具有抗氧化应激损伤及凋亡的效应;CR可上调PC12细胞中SIRT3的表达,在H2O2诱导的PC12应激损伤中CR-SIRT3的调控具有保护效应,SIRT3是否具有延缓神经元衰老作用值得进一步研究.

Abstract：

Objective To study the regulation effects of CR (caloric restriction) and SIRT3 in the H2O2-induced oxidative stress injury of PC12 cell. Methods The cells were divided into four groups:H2O2, H2O2+CR, CR and control (high glucose). For control and H2O2 group, cells were cultured in DMEM containing 0.45% glucose; for group in CR condition, cells were treated with the medium containing 0.1% glucose. For groups with H2O2, the H2O2 was diluted in EMEM medium to obtain the final concentration containing 60 μmol/L. Viability of PC12 cells were measured by MTT assay. The medium was refreshed with different concentration of H2O2 (from 10 to 120 μmol/L). The absorbance of the samples was measured at 492 nm using a microtiter plate reader. We detected TUNEL-positive cells using the In Situ Cell Apoptosis Detection kit pretreated with CR and H2O2. Immunofluorescence double staining detected the expression and localization of SIRT3. RT-PCR and Western-blot mehtods detected the expression of SIRT3,Caspase-3. Results After pretreating with 60 μmol/L H2O2 for 6 h, the viability of PC12 cells in H2O2 group (74.01±2.21)% retained above 70%, and have statistical significance contrasted with control group (P＜0.05); After pretreating with 120μmol/L H2O2, the viability of PC12 cells declined significantly (38.22±3.34)%. So 60μmol/L H2O2 is our experiment concentration . The viability of H2O2 group (74.01±2.21)% was much lower than CR + H2O2 group (97.26±1.92)% (P＜0.05). After pretreating with H2O2, TUNEL staining showed the apoptosis cells of CR+H2O2 group decreased significantly contrasted with H2O2 group. The immunofluorescence double staining results showed that SIRT3was a mitochondria protein. Western-blot showed the expression of SIRT3 in CR group (6857±157) (P＜0.05) increased and decreased in H2O2 group (3786±160) (P＜0.05) contrasted with control group (5256±143). The expression of SIRT3 in CR + H2O2 group(5056±121)(P＜0.05)increased contrasted with H2O2 group(3786±160). We also detected that Caspase-3 in H2O2 group(8499±426)(P＜0.001 )was much higher than control group than (5342±420), but in the CR + H2O2 group (5750±438 ) theexpression of Caspase-3 was much lower than H2O2 group(8499±426) (P＜0.001). RT-PCR also showed that the expression of SIRT3 in CR group (7214±148) increased and decreased in H2O2 group (4807±143 ) (P＜0.05) contrasted with control group (6204 ± 134 ). The expression of SIRT3 in CR + H2O2 group (6195 ± 166) increased contrasted with H2O2 group (4807 ± 143 ) ( P＜0.05). Conclusion CR causes anti-oxidative injury and has apoptotic effects in PC12 cell. It up-regulates the expression of SIRT3 and the effects of CR-SIRT3 can prevent PC12 cell from H2O2-induced apoptosis. And SIRT3 may be a novel molecule of regulating target in the delay of neuronal senescence.     

二苯乙烯苷上调Bcl-2抑制内皮细胞凋亡

目的研究二苯乙烯苷（TSG）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用,以及对抗凋亡基因Bcl-2表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,筛选造模内皮细胞凋亡的H2O2浓度,以不同浓度二苯乙烯苷作用24 h。采用MTT法检测细胞生长活力,Hoechst33258染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western-blot检测Bcl-2蛋白的含量。结果过氧化氢能引起内皮细胞损伤,抑制细胞增殖,并且随着浓度增加,细胞生存率逐渐降低。其中300μmol/L H2O2作用后细胞增殖明显受到抑制,Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞,流式细胞仪检测出明显的凋亡峰,Bcl-2蛋白的表达量显著减少;加入二苯乙烯苷作用后,随着TSG浓度增加,细胞生存率增加,凋亡率逐渐降低;与H2O2造模组比较,10μmol/L的二苯乙烯苷预处理能够显著提高细胞生存率,抑制细胞的凋亡,并且使Bcl-2表达增加（P〈0.05）。结论二苯乙烯苷能抑制过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡,该作用与上调Bcl-2表达有关。     

原花青素对体外阿尔茨海默病的预防作用

目的:研究原花青素(PC)对体外阿尔茨海默病模型(AD)的预防作用。方法:H2O2100μmol/L诱导PC12细胞损伤18 h复制体外阿尔茨海默病模型,原花青素80 mg/L、40 mg/L、20 mg/L、Tempol 800μmol/L于造模前30 min预处理后,双抗体一步夹心法酶联吸附实验(ELISA)检测细胞上清液中硫氧还蛋白(Trx)含量;黄嘌呤氧化酶法检测细胞中的总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力;硫代巴比妥酸盐法测定细胞上清液的丙二醛(MDA)。结果:H2O2100μmol/L诱导PC12细胞损伤后,细胞内Trx浓度和T-SOD活力显著降低,MDA含量显著升高(P<0.01);原花青素各剂量组可增高Trx浓度和T-SOD活力,降低MDA含量(P<0.01,P<0.05)。结论:原花青素能减轻H2O2引起PC12细胞的氧化应激损伤。