河豚毒素中和性单抗的制备、鉴定及TTX检测方法的建立

目的研制河豚毒素中和性单抗,建立基于河豚毒素单抗的河豚毒素检测方法。方法用TTX-KLH免疫Balb/c小鼠,用TTX-BSA间接ELISA筛选,建立杂交瘤细胞系,腹腔接种Balb/c小鼠诱生腹水,Protein A Sepharose CL4B亲和柱纯化,SDS-PAGE、间接ELISA鉴定;用常规法确定TTX对昆明小鼠的LD50;将单抗和TTX混合物注入小鼠腹腔,检测单抗对TTX的中和能力;建立检测TTX的竞争ELISA法。结果获得了2株TTX中和性单抗,腹水用Protein A Sepharose CL 4B纯化后抗体纯度大于95%;常规间接ELISA检测,显示单抗5E7的结合能力高于5E4。单抗对2 LD50 TTX攻击昆明小鼠的保护率为50%,建立了基于中和性单抗的TTX检测方法,TTX的最小检出浓度为1.56μg/mL。结论获得了TTX中和性单抗,对致死剂量TTX攻击昆明小鼠的保护率为50%,建立了基于中和性单抗的TTX检测方法,TTX的最小检出浓度为1.56μg/mL。     

TTX通过JAK2/STAT3通路活化SOD减轻心肌细胞凋亡

目的:研究JAK2/STAT3信号通路在河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)心脏停搏液心肌保护中的作用.方法:24只Wistar大鼠随机均分为对照组、TTX组和TTX+AG490组,每组8只.对照组:开胸取左心室肌作为缺血前对照.TTX组:建立离体心脏Langendorff-Neely灌注模型,预灌注K-H缓冲液30rain后,灌注4℃ TTX心脏停搏液,停搏心脏并低温维持60 min,复灌K-H缓冲液60 min后,取左心室肌备用.TTX+AG490组:操作同℃组,但预灌和复灌时均在K-H缓冲液中加入JAK2抑制剂AG490(5μmol/L).分别采用免疫组化法、比色法和TUNEL法测定心肌组织中p-STAT3、SOD活性和MDA含量.以及心肌细胞凋亡指数(Apoptosis index,AI),并比较组间的变化.结果:与对照组相比,TTX组和TTX+AG490组p-STAT3表达量均明显增加(P<0.05);予以AG490处理后,p-STAT3表达量较TTX组明显下降(p<0.05 )与对照组相比,TTX组和TTX+AG490组SOD活性和MDA含量均明显增加(P<0.05);予以AG490处理后,SOD活性较TTX组显著降低(P<0.05),MDA含量却明显增加(P<0.05 ).经历缺血再灌注后,TTX组和TTX+AG490组心肌细胞AI明显高于对照组(P<0.05);与TTX组相比,TTX+AG490组AI显著增加(P<0.05).结论:JAK2/STAT3信号通路通过增强SOD活性,减轻膜脂质过氧化损伤,减少心肌细胞凋亡,介导TTX心脏停搏液对缺血心肌的保护作用.     

JAK2/STAT3通过上调Bcl-2蛋白介导TTX心肌保护作用

目的:研究JAK2/STAT3信号通路在河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)心脏停搏液心肌保护中的作用.方法:24只Wistar大鼠随机分为对照组、TTX组和TTX AG490组,每组8只.对照组:开胸取左心室肌作为缺血前对照.TTX组:建立离体心脏Langendorff-Neely灌注模型,预灌注K-H缓冲液30min后,灌注4℃ TTX心脏停搏液,停搏心脏并低温维持60min,复灌K-H缓冲液60min后,取左心室肌备用.TTX AG490组:操作同TTX组,但预灌和复灌时均在K-H缓冲液中加入JAK2抑制剂AG490(5μmol/L).采用免疫组化法测定心肌组织中p-STAT3(磷酸化STAT3)和Bcl-2表达量(Protein expression index,PEI),TUNEL检测心肌细胞凋亡指数(Apoptesis index,AI),比较2组间的变化.结果:与对照组相比,TTX组和TTX AG490组心肌组织中p-STAT3和Bcl-2的表达量均明显增加(P<0.05);予以AG490处理后,P-STAT3和Bcl-2的表达量较TTX组明显下降(P<0.05).Bcl-2蛋白表达与P-STAT3蛋白表达呈正相关(r=0.743,P<0.05).经历缺血再灌注后,TTX组和TTX AG490组心肌细胞AI明显高于对照组(P<0.05);与TTX组相比,TTX AG490组AI显著增加(P<0.05).结论:JAK2/STAT3信号通路通过上调Bcl-2的表达,抑制心肌细胞凋亡,介导TTX心脏停搏液对缺血心肌的保护作用.     

JAK2/STAT3通过上调HSP70蛋白介导TTX心肌保护作用

目的研究JAK2/STAT3信号通路在河豚毒素（tetrodotoxin,TTX）心脏停搏液心肌保护中的作用。方法 24只Wistar大鼠随机均分为对照组、TTX组和TTX＋AG 490组,每组8只。对照组：开胸取左心室肌作为缺血前对照。TTX组：建立离体心脏Langendorff-Neely灌注模型,预灌注K-H缓冲液30min后,灌注4℃TTX心脏停搏液,停搏心脏并低温维持60min,复灌K-H缓冲液60min后,取左心室肌备用。TTX＋AG490组：操作同TTX组,但预灌和复灌时均在K-H缓冲液中加入JAK2抑制剂AG490（5μmol/L）。采用免疫组化法测定心肌组织中p-STAT3（磷酸化STAT3）和HSP 70表达量（protein expression index,PEI）,TUNEL检测心肌细胞凋亡指数（apoptosis index,AI）,比较组间的变化。结果与对照组相比,TTX组和TTX＋AG490组心肌组织中p-STAT3和HSP 70的表达量均明显增加（P〈0.05）;予以AG490处理后,p-STAT3和HSP 70的表达量较TTX组明显下降（P〈0.05）。HSP 70蛋白表达与p-STAT3蛋白表达呈正相关（r=0.826,P〈0.05）。经历缺血再灌注后,TTX组和TTX＋AG490组心肌细胞AI明显高于对照组（P〈0.05）;与TTX组相比,TTX＋AG490组AI显著增加（P〈0.05）。结论 JAK2/STAT3信号通路通过上调HSP 70的表达,调动心脏内源性保护机制,介导TTX心脏停搏液对缺血心肌的保护作用。     

河豚鱼干中毒的动物实验研究及在法医鉴定中的应用

目的:研究河豚鱼干中的毒性成分对小白鼠肝、肾等脏器的损害。方法:应用乙酸浸泡法提取涉案河豚鱼干中的含毒浸出液,在1h、2h、3h、4h和6h共5个不同时间段,对小白鼠采用灌胃和腹腔注射方法,制造实验中毒模型。结果:实验3h、4h组损伤最明显,死亡率达100%;河豚鱼毒素(Tetrodotoxin,TTX)导致实验小白鼠的肝、肾组织细胞中毒坏死,所有实验动物均出现呼吸急促、步态不稳和口尾紫绀等TTX中毒症状。结论:实验证实检案确系河豚鱼干中毒。     

河豚毒素停搏液减轻大鼠心肌细胞内钙超载作用的实验研究

目的观察Na 通道阻滞剂河豚毒素(TTX)停搏液对离体大鼠心肌细胞内游离Ca2 浓度的影响.方法成年Wistar大鼠心脏,用酶解法分离成具有搏动性的心室肌细胞悬液,随机分成基础组、STH2组和TTX组,STH2组和TTX组分别应用STH2停搏液和TTX停搏液处理,建立模拟缺血/再灌注损伤的停搏/复搏细胞模型,激光扫描共聚焦显微镜测定各组细胞不同时期的[Ca2 ]i.用倒置显微镜观察细胞搏动情况和形态学变化.结果 TTX组和STH2组细胞复搏后[Ca2 ]i均明显高于基础组(P＜0.01),但TTX组[Ca2 ]i明显低于STH2组(P＜0.01);在停搏期间,TTX组细胞[Ca2 ]i上升速度和幅度明显低于STH2组;STH2组和TTX组细胞复搏后搏动频率无明显差别(P＞0.05);形态学观察,TTX组复搏后具有正常活力的杆形心肌细胞比例高于STH2组(P＜0.01).结论河豚毒素停搏液能减轻心肌细胞内Ca2 超载和防止缺血再灌注损伤.     

BK8644对河豚毒素引起的大鼠海马锥体神经元AMPA受体介导的微小兴奋性突触后电流频率和幅度的影响

目的观察L-型钙通道(LTC)开通剂BK8644对河豚毒素(TTX)引起的大鼠海马锥体神经元α-氨基-羟基-5-甲基-4-异唑-丙酸(AMPA)受体介导的微小兴奋性突触后电流(mEPSCAMPA)的影响,探讨LTC是否作为神经环路兴奋性的感受器在调节突触稳态中发挥作用。方法建立培养海马神经元的稳态可塑性离体模型,并采用膜片钳全细胞模式记录突触内自发的mEPSC。结果TTX组mEPSCAMPA的频率显著高于对照组(P<0.05),而mEPSCAMPA电流幅度无显著差异(P>0.05);BK8644组和TTX+BK8644组与对照组比较,mEPSCAMPA的频率和幅度均无显著差异(P>0.05);TTX+BK8644组与TTX组比较,mEPSCAMPA频率降低(P<0.05),电流幅度无显著差异(P>0.05)。结论BK8644可对抗TTX引起的mEPSCAMPA频率升高,提示L-型钙通道可能参与稳态突触可塑性的调节。     

河豚毒素对局麻药的局麻作用和毒性的影响

利多卡因和普鲁卡因与河琢毒素(TTX)EC_5合用于小鼠坐骨神经麻醉,其EC_(50)均比它们单用为低(P<0.05,P< 0.01),且麻醉持续时间明显延长;在家兔硬膜外麻醉中,合用与单用的EC_(50)未见显著差异,但均延长麻醉持续时间;在家兔角膜麻醉中,利多卡因与TTX合用,其EC_(50)比单用利多卡因低(P<0.05),而普鲁卡因与TTX合用的EC_(50)与单用普鲁卡因无显著性差异。两药与TTX(EC_5)合用的LD_(50)(小鼠)均与单用无显著差异,但可提高它们的治疗指数。     

不同静脉麻醉药对大鼠结肠纵形肌收缩活动的影响

目的研究咪达唑仑、丙泊酚、依托咪酯和氯胺酮对大鼠离体结肠远端纵形肌肌条收缩活动的影响及其可能的影响机制。方法制备大鼠离体结肠纵形肌肌条,随机分为对照组、非TTX组和TTX组,对照组加入二甲亚砜(DMSO)5μL;非TTX组直接加入不同累积浓度的咪达唑仑、丙泊酚、依托咪酯或氯胺酮;TTX组加入电压门控Na+通道阻滞剂河豚毒(TTX)10μmol/L阻断结肠内神经元动作电位的产生和传导后,再分别加入不同累积浓度的静脉麻醉药,加药方式同非TTX组。以平均肌张力变化为指标,记录三组肌条收缩活动的变化。结果对照组:DMSO对结肠肌条收缩张力无明显影响。非TTX组:咪达唑仑、丙泊酚、依托咪酯和氯胺酮分别在药物累积浓度达到1×10-5、1×10-5、1×10-6和3×10-6mol/L时降低结肠远端纵形肌收缩幅度(P<0.05～0.01),肌条张力降低幅度随药物浓度升高而加大。依托咪酯虽然在低浓度(1×10-6mol/L)时即可降低肌条自主收缩幅度,但当浓度累积至1×10-4mol/L时,与等浓度的咪达唑仑和丙泊酚相比,其降低幅度却较小(P<0.05)。TTX组:用电压门控Na+通道阻滞剂TTX预处理后,咪达唑仑、丙泊酚和依托咪酯仍降低大鼠结肠远端纵形肌肌条收缩张力,且与非TTX组相比,降低幅度明显增大(P<0.05～0.01);而氯胺酮非但不降低肌条收缩张力,反而增高收缩张力。结论咪达唑仑、丙泊酚、依托咪酯和氯胺酮均抑制大鼠结肠远端纵形肌自主收缩,其机制可能与肠道平滑肌细胞收缩和肠神经系统活动有关。     

极化心脏停搏液对成熟心肌细胞保护作用的研究

目的观察Na＋通道阻滞剂河豚毒素（TTX）极化心脏停搏液对离体成熟大鼠心肌细胞[Na＋]i、[Ca2＋]i的影响,探讨其对成熟心肌细胞的保护作用。方法成年Wistar大鼠心脏,用酶解法分离成具有搏动性的单个成熟心室肌细胞悬液,随机分成基础组、STH2组（对照组）和TTX组（实验组）,STH2组和TTX组分别应用St.Thomas II号停搏液和TTX停搏液处理,建立模拟缺血/再灌注损伤的停搏/复搏细胞模型,激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）测定各组细胞不同时期的[Na＋]i和[Ca2＋]i。结果 TTX组和STH2组成熟心肌细胞复搏后[Na＋]i、[Ca2＋]i均明显高于基础组（P〈0.01）,但TTX组明显低于STH2组（P〈0.01）。结论极化心脏停搏液较去极化心脏停搏液能减轻成熟心肌细胞Na＋、Ca2＋超载,对成熟心肌细胞有较好的保护作用。     

两种心脏停搏液对缺血心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察St.Thomas和河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)两种心脏停搏液对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响.方法:Wistax大鼠24只,建立Langendorff-Neely离体心脏灌注模型,分为3组(n=8):对照组、STH-2组、TTX组.用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(Apoptosis index,AI),免疫组化测定凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53的表达,Western blot检测Bcl-2蛋白表达.结果:STH-2组AI(11.20±0.79)%高于TTX组(6.92±1.10)%和对照组(1.34±0.23)%(P＜0.01).TTX组Bcl-2的PEI为(22.63±1.10)%高于STH-2组(13.51±0.67)%和对照组(2.52±0.58)%(P＜0.01);STH-2组Bax的PEI为(8.04±0.57)%高于TTX组(6.05±0.46)%和对照组(2.14±0.57)%(P＜0.01).TTX组Bcl-2/Bax为3.78±0.41高于STH-2组1.75±0.15(P＜0.01).TTX组Bcl-2的相对蛋白含量为(86.1±0.98)%高于STH-2组(53.2±1.76)%和对照组(23.7±2.61)%(P＜0.0).p53蛋白在各组均未见明显阳性表达.结论:与STH-2比较,TTX能减少缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡数,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2表达,下调Bax表达,提高Bcl-2/Bax比值有关.     

Na^＋通道阻滞极化停搏液在离体大鼠心脏保存中的保护作用

目的研究含Na^＋通道阻滞剂河豚毒素（TTX）极化停搏液在离体大鼠心脏保存中的心肌保护作用.方法20只Wistar大鼠随机均分入StThomas去极化停搏组（对照组,Ⅰ组）和TTX极化停搏组（Ⅱ组）.建立离体心脏灌注模型,灌注10 min后,分别用St.Thomas和TTX极化停搏液2 ml经主动脉插管注入,使心脏停搏.随后将鼠心置于相应配伍的停搏液中,10℃保存7 h后重新灌注心脏30 min.观察两组心脏保存前后在左心室收缩末压力和压力变化速率恢复率、心肌酶漏出、ATP含量和心肌超微结构等方面的改变.结果再灌注后,TTX极化停搏组血流动力学各项指标恢复率明显高于Ⅰ组（P＜0.01）,肌酸磷酸激酶和乳酸脱氢酶漏出量低于Ⅰ组（P＜0.05）,ATP含量维持在较高水平（P＜0.01）,心肌超微结构得到较好保护.结论在离体大鼠心脏低温保存过程中TTX极化停搏液心肌保护作用优于STH液.     

河豚毒素停搏液对心肌粘合连接的影响

目的:研究Na 通道阻滞剂河豚毒素(TTX)停搏液对离体大鼠心肌粘合连接的影响.方法: Wistar大鼠20只随机均分为TTX组和STH-2(St.Thomas-2)组,建立离体心脏Langendorff和Neely灌注模型,待搏动稳定,灌注30 min后停搏60 min,再灌注60 min,观察各组心脏停搏前后心率(HR)、冠状动脉流量(CAF)、左心室收缩末期压力(LVESP)以及压力变化速率(±dp/dt)的恢复率.采用免疫组化和WesternBlot检测大鼠心肌α肌动蛋白(α-actin)的分布和量的变化;免疫组化检测N型钙粘蛋白(N-cadherin)的分布及量的变化.结果: TTX组和STH-2组的停搏时间分别为(8.55α0.68)s和(9.49±0.49)s;复搏时间分别为(10.12±0.66)s和(10.88±0.61)s,与STH-2组比较,ITX组的停搏时间和复搏时间均明显缩短(P<0.01或P<0.05).复搏后,TTX组和STH-2组的HR,CAF,LVESP, dp/dt及-dp/dt的恢复率分别为(85.65±1.98)%,(91.81±2.29)%,(85.03±0.91)%,(93.59±2.22)%,(92.87±2.59)%和(77.66±1.56)%,(88.28±1.81)%,(82.24±0.82)%,(90.25±3.31)%,(88.36±4.65)%,TTX组的各项血流动力学参数恢复率均优于STH-2组(P<0.01,P<0.05).免疫组化显示TTX组和STH-2组的N型钙粘蛋白和α肌动蛋白的表达量分别为0.06765±0.00027,0.07375±0.00049和0.02426±0.00025,0.03047±0.00017.Western Blot显示TTX组和STH-2组的α肌动蛋白的表达量分别为864.8±6.5,347.0±7.5.与TTX组比较,STH-2组分布紊乱,量明显减少(P<0.01).结论: 以TTX阻断Na 通道为特点的心脏停搏液对大鼠心肌缺血-再灌注损伤时的粘合连接及心功能的保护作用优于STH-2心脏停搏液.     

Na+通道阻滞极化停搏液在离体大鼠心脏保存中的保护作用

目的 研究含Na⁺通道阻滞剂河豚毒素(TTX)极化停搏液在离体大鼠心脏保存中的心肌保护作用。方法 20只Wistar大鼠随机均分入St.Thomas去极化停搏组(对照组,Ⅰ组)和TTX极化停搏组(Ⅱ组)。建立离体心脏灌注模型,灌注10min后,分别用St.Thomas和TTX极化停搏液2ml经主动脉插管注入,使心脏停搏。随后将鼠心置于相应配伍的停搏液中,10℃保存7h后重新灌注心脏30min。观察两组心脏保存前后在左心室收缩末压力和压力变化速率恢复率、心肌酶漏出、ATP含量和心肌超微结构等方面的改变。结果 再灌注后,TTX极化停搏组血流动力学各项指标恢复率明显高于Ⅰ组(P<0.01),肌酸磷酸激酶和乳酸脱氢酶漏出量低于Ⅰ组(P<0.05),ATP含量维持在较高水平(P<0.01),心肌超微结构得到较好保护。结论 在离体大鼠心脏低温保存过程中TTX极化停搏液心肌保护作用优于STH液。     

电压门控钠通道亚型Nav1.5在乳腺癌细胞中的表达及与细胞体外转移的关系

目的 观察电压门控钠通道(voltage-gated sodium channels,VGSCs)亚型在乳腺癌细胞中的表达及其与细胞体外转移的关系.方法 通过RT-PCR,Western blot,MTT及Transwell小室迁移和侵袭实验,检测乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中VGSCs的表达及VGSCS特异性阻断剂河豚毒素(TTX)对细胞的毒性、迁移和侵袭特性的影响.结果 在MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞中同时存在NaV1.1,NaV1.4和NaV1.8的高表达;而在MDA-MB-231细胞中发现NaV1.3和NaV1.5、NaV1.6的表达量较MCF-7细胞中明显升高,尤其是NaV1.5的表达具有功能性意义.体外应用1μmol/L和30μmol/L TTX处理细胞后,与对照组相比,MDA-MB-231细胞的体外侵袭性分别下降了(12.50±0.19)%和(53.58±1.03)%.而MCF-7细胞的体外侵袭性却没有发生明显变化.结论 乳腺癌细胞MDA-MB-231中存在高表达的NaV1.5,TTX阻断VGSCs后显著抑制其体外侵袭力.     

TTX停搏液对心肌α肌动蛋白的影响及机制研究

目的:研究Na 通道阻滞剂河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)停搏液对离体大鼠心肌α肌动蛋白(α-actin)的影响及其机制.方法:20只Wistar大鼠随机均分入St.Thomas-2停博组(STH-2组),TTX)(停博组(TTX组),建立离体心脏Langendorff和Neely灌注模型,搏动稳定后,灌注30min后停搏60min,冉灌注60min,观察各组心脏停搏前后的心率(HR)、冠状动脉流量(CAF)、左心室收缩未期压力(LVESP)和压力变化速率(±dp/dt)的恢复率,采用免疫组化检测钙蛋白酶(Calpain),免疫组化和Western blot检测α-actin的分布及量的变化.结果:恢复灌注后,TTX)(停搏组的各项心功能恢复率明显优于STH-2组(P＜0.01,P＜0.05),STH-2组的calpain分布紊乱,表达量明显增多(P＜0.01);α-actin分布紊乱,表达量明显减少(P＜0.01).结论:以TTX阻断Na 通道为特点的心脏停搏液对大鼠心肌缺血-再灌注损伤(Myocardial ischemia/reperfusion injury,MIRI)时的α-actin 及心功能的保护作用优于STH-2停搏液,其机制町能足直接或者间接的减少激活calpain引起的.     

用于膜片钳研究的大鼠背根神经节细胞急性分离技术的改良

目的通过技术改良,进一步摸索适于膜片钳实验的成年大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)细胞的急性分离方法。方法应用显微外科技术获取成年大鼠DRG,采用改良的双酶顺序消化(先胶原酶,后胰蛋白酶)及双血清(胎牛血清+马血清)共同培养法,急性分离培养DRG。倒置显微镜下观察神经元的形态,选取已贴壁的细胞,用全细胞膜片钳技术记录其基本膜电生理特性。加入河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)后再次记录DRG神经元的钠离子电流变化。结果本实验可获得形态良好、结构完整的单个DRG神经元,表面光亮,胞膜完整清晰,呈圆形或椭圆形。其静息膜电位为(55.22±4.39)mV,加入TTX后可记录到缓慢失活的河豚毒素不敏感(tetrodotoxin-resistant,TTX-r)的钠离子电流。其中,中等直径DRG神经元高阻封接成功率为73.2%,高于小直径和大直径DRG神经元的封接成功率(P<0.05)。结论经改良的DRG急性分离方法分离效率高、可操作性强。分离得到的中等直径DRG神经元状态良好,更适合膜片钳实验。     

一氧化氮介导人食管下括约肌舒张的作用机制

目的 探讨一氧化氮在人食管下括约肌（LES）舒张中的作用,比较其对钩状纤维和套索纤维的不同作用。方法 选用32例高位食管癌切除术LES标本,分离钩状纤维和套索纤维,在离体条件下行电场刺激（EFS）。并比较一氧化氮合酶（NOS）抑制剂N^G-硝基-L-精氨酸（L-NNA）、NOS底物L-精氨酸、神经毒河豚毒素（TTX）、阿托品的不同影响。做硝普钠对两肌条的浓度效应曲线。结果 EFS能诱导钩状纤维和部分套索纤维产生频率依赖性舒张。L-NNA能抑制此作用,并可被L-精氨酸部分逆转。钩状纤维和套索纤维的最大舒张频率分别为512Hz和16Hz。EFS也能诱导部分套索纤维和钩状纤维引起撤收缩反应。EFS能诱导另一部分套索纤维收缩反应,可被阿托品抑制,其最大收缩频率为128Hz。TTX可完全消除EFS诱导的反应,硝普钠能引起与EFS相似的反应。结论在LES离体实验状态下,EFS诱导钩状纤维和套索纤维的舒张与L-NNA、TTX及硝普钠有关,可能是由一氧化氮介导的。但两束肌纤维对EFS反应不同,高频刺激时套索纤维舒张幅度较大,低频刺激时钩状纤维舒张幅度大。EFS还诱导部分套索纤维产生收缩反应。     

河豚毒素诱发小鼠骨髓细胞染色体畸变、小鼠骨髓细胞微核及小鼠精子畸变的研究

目的 :探讨河豚毒素 ( TTX)的药用价值 ,检测其是否有潜在的致突变作用。方法 :采用小鼠精子畸变试验、小鼠骨髓细胞微核试验和染色体畸变试验进行观察。结果 :河豚毒素未引起小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率、小鼠精子畸变率和小鼠骨髓细胞染色体畸变率增加 ,与阴性对照组比较无显著性差异 ( P>0 .0 5) ,但 3项试验的阳性对照组与阴性对照组比较 ,则有高度显著性差异 ( P<0 .0 1 )。 结论 :提示 TTX无致突变性。     

河豚毒素停搏液对大鼠离体缺血再灌注损伤心肌功能及其桥粒蛋白表达的影响

目的:观察Na 通道阻滞剂河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)停搏液对离体大鼠缺血再灌注损伤心肌桥粒蛋白(desmoplakin)表达及心功能的影响,探讨其对缺血再灌注损伤心肌的可能保护机制.方法:20只Wistar大鼠随机分为St.Thomas-2停搏液灌注组(STH-2组,n=10)和TTX停搏液灌注组(TTX组,n=10),分别应用相应的停搏液停搏,建立大鼠离体心脏Langendorff-Neely灌注模型;待搏动稳定,灌注30 min后停搏60 min,再灌注60 min,观察各组心脏停搏前后的心率(HR)、冠状动脉流量(CAF)、左心室收缩末期压力(LVESP)和压力变化速率(±dp/dt)的恢复率,采用免疫组化和Western印迹法检测心肌桥粒蛋白的分布及量的变化.结果:恢复灌注后,与TTX组比较,STH-2组心肌桥粒蛋白分布紊乱,表达明显减少(P<0.01),心功能指标(HR、CAF、LVESP和±dp/dt)的恢复率也明显降低(P<0.01或P<0.05).结论:河豚毒素停搏液有利于缺血再灌注损伤心肌功能的恢复,效果优于经典的STH-2停搏液,其保护作用可能与其保护心肌桥粒蛋白表达有关.