土鳖虫胰酶酶解物抗凝活性部位分离纯化及组成分析

目的:采用溶剂萃取和凝胶柱色谱法对土鳖虫胰酶酶解物进行分离纯化,初步确定其抗凝活性部位及化学成分组成。方法:应用胰酶酶解法制备土鳖虫胰酶酶解物,以APTT(活化部分凝血酶时间)为指标,采用溶剂萃取法,获得抗凝活性部位IV,经凝胶柱色谱法对其进行分离纯化获得胰酶酶解纯化物;采用考马斯亮蓝法对纯化物进行定量分析,通过MALDI-TOF-MS检测分离部分的分子量分布范围。结果:土鳖虫胰酶酶解物部位IV有较强的抗凝活性,其抗凝活性强度与酶解物质量浓度相关;部位IV经Sephadex G-25纯化后,通过考马斯亮蓝法测得其蛋白质量分数5.5%;进一步经Sephadex G-10脱盐的纯化物,采用MALDI-TOF-MS检测,确定为相对分子质量在850～910 Da的3组多肽混合物。结论:采用凝胶柱色谱法分离纯化土鳖虫胰酶酶解物是可行的,抗凝活性组分是<1 000 Da的小分子肽类。     

水蛭不同工艺提取物抗凝与纤溶活性比较及酶解物组成分析

目的:比较水蛭不同提取工艺的抗凝溶栓作用;初步确定水蛭酶解产物的化学成分组成。方法:通过活化部分凝血活酶时间(APTT)试验及纤维蛋白平板试验,比较水蛭胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解、醇提、水煎提取物的体外抗凝与纤溶活性差异。采用Sephadex G-100凝胶柱色谱法对优选提取物进行进一步分离纯化,并采用MALDI-TOF-质谱法对其组成进行分析。结果:与生理盐水组比较,在相同的剂量下,水蛭胃蛋白酶酶解物可明显延长大鼠APTT,并具有较强的纤溶作用,其余几种提取物的作用不明显。胃蛋白酶酶解物经Sephadex G-100凝胶柱色谱分离纯化的活性部位经MALDI-TOF-质谱法检测为分子量在700～3 200之间的一组寡肽。结论:胃蛋白酶酶解是水蛭较为理想的提取方法,其有效部位的组成为寡肽。     

土鳖虫多肽的分离纯化及溶栓活性

目的:对土鳖虫多肽进行分离纯化,并对其溶栓活性进行研究.方法:采用仿生酶解工艺制备土鳖虫复合多肽,以溶栓活性为指标,采用Sephadex G-25,SP Sephadex C-25凝胶柱和RP-HPLC C18半制备色谱柱对复合多肽进行分离纯化,并测定目标多肽组分(Peak b)的溶栓活性、肽含量和相对分子质量.结果:目标多肽组分的溶栓活性为814 430 U·mg-1,肽含量为95.7％,相对分子质量分布在3 211～3 547.结论:利用仿生酶解制备的土鳖虫多肽,经分离纯化后,可得到具有较强溶栓活性的多肽组分.     

土鳖虫多肽的分离纯化及溶栓活性研究

目的 对土鳖虫多肽进行分离纯化,并对其溶栓活性进行研究.方法 采用仿生酶解工艺制备土鳖虫复合多肽,以溶栓活性为指标,采用Sephadex G-25、SP Sephadex C-25凝胶柱和RP-HPLC C18半制备色谱柱对复合多肽进行分离纯化,并测定目标多肽组分(Peak b)的溶栓活性、肽含量和分子量.结果 目标多肽组分的溶栓活性为814 430 U·mg-1,肽含量为95.7％,分子量分布在3 211 ～3 547.结论 利用仿生酶解制备的土鳖虫多肽,经分离纯化后,得到一具有较强溶栓活性的多肽组分.     

豆豉及其多糖对α-葡萄糖苷酶抑制作用的研究及豆豉中降糖有效成分的初步分析

目的:探讨豆豉(永川豆豉)及其多糖对α-葡萄糖苷酶活力的影响及豆豉中降糖有效成分的初步分析.方法:豆豉水提液通过浸提、离心制得;豆豉经热水提取、低温减压浓缩、三氯醋酸洗去蛋白、流水透析、Sephadex G-50柱层析分离纯化、制得豆豉多糖.酶活性用PNPG法测定.结果:豆豉及其多糖对α-葡萄糖苷酶有抑制作用.结论:豆豉及其多糖可能具有拜糖平样的降糖作用,豆豉中可能含有苯丙氨酸衍生物.     

乌贼墨酶解肽提取方法及其抗肿瘤活性(英文)

目的:用蛋白酶酶解乌贼墨,经纯化获得寡肽,并对其进行抗肿瘤活性研究。方法:通过胰蛋白酶酶解获得乌贼墨酶解物,将酶解液用超滤、G-25分子筛凝胶层析进行分离纯化,高效液相进行纯度检测。分离纯化得到的寡肽进行氨基酸序列检测,并用CCK-8检测寡肽对DU-145细胞增殖的影响和HE染色方法观察其对细胞形态的影响。结果:乌贼墨寡肽的N端氨基酸序列为:Gln-Pro-Lys,得率为1.82%。将寡肽进行抗肿瘤活性研究,发现寡肽对DU-145细胞有明显的增殖抑制效应,且有浓度依赖性。HE染色结果显示了寡肽使细胞形态发生不规则变化,失去原有的恶性表型。结论:用酶解方法制得的乌贼墨寡肽有明显的抗肿瘤活性。     

洋刀豆中伴刀豆球蛋白和脲酶的分离及伴刀豆球蛋白纯化

采用Sephadex G-50亲和层析技术对洋刀豆提取液中ConA和Urease进行分离并对ConA进行纯化。通过对提取液微滤预处理,料液的澄清度得到明显提高,但ConA和Urease的活性分别损失6.20％和9.50％,蛋白质损失为5.21％,预处理后提取液,经过Sephadex G-50亲和层析柱,可使提取液中ConA和 Urease得到完全分离。ConA经Sephadex G-50亲和层析后比活提高66.13倍,比活达6976.83 HU/mg,得率为80.68％。     

昆布多糖分离纯化及其抗肿瘤活性的研究

目的 纯化昆布多糖，并筛选其抗肿瘤活性。方法 DEAE-52纤维素及Sephadex G-200柱色谱分离纯化得到7种不同的昆布多糖组分，经抗肿瘤活性筛选出活性较好的昆布多糖Ⅱ，再经Sephadex G-200柱色谱及高效液相凝胶渗透色谱鉴定质量分数，并进行抗肿瘤活性筛选。结果 Sephadex G-200柱色谱及高效液相凝胶渗透色谱鉴定昆布多糖Ⅱ-B为单一成分，昆布多糖Ⅱ对人胃癌SGC-7901、肝癌HepG-2的IC₅₀分别为649.8、592.2 μg/mL。结论 昆布多糖Ⅱ-B具有明显的抗肿瘤活性。     

丙酮对溶栓酶活力的动力学初步探究

目的:研究丙酮对枯草芽孢杆菌溶栓酶活力的影响及抑制动力学.方法:用Sephadex G-100凝胶柱色谱分离纯化酶,以四肽底物法测定酶活,选择丙酮为效应物,测其对溶栓酶的影响.最后,用Lineweaver-Burk双倒数作图法,比较酶催化的动力学参数,确定抑制剂的类型,测定抑制常数.结果:当丙酮浓度增大时,溶栓酶的酶活力损失越严重.在含不同浓度丙酮的测活体系中,随着丙酮浓度的增大,直线的斜率降低.在双倒数图中,V_(max)值随着丙酮的增大而减小,而K_m值随着丙酮的增大而增大.测得丙酮对酶的抑制常数K_I,K_(IS)分别为1.25,3.17.结论:丙酮对溶栓酶有抑制作用.丙酮对酶的抑制作用是可逆过程,抑制类型为混合型抑制.     

酶解法制备鹿茸胶原蛋白的工艺研究

目的:确定酶解法制备鹿茸胶原蛋白的最佳制备工艺。方法:用正交试验法考察胶原蛋白的提取工艺,用高效凝胶色谱法考察胶原蛋白的酶解条件,优选出鹿茸胶原蛋白提取的最佳工艺。结果:鹿茸胶原蛋白的制备工艺为:料液比(g:mL)1:3,水煮4h,提取5次,胰蛋白酶与底物(鲜鹿茸)的比是1:5 000,酶解时间为2h。结论:验证试验结果表明,鹿茸胶原蛋白收率为12.52%,蛋白含量为56.89%。本试验简便、稳定、可行。     

基于ICP-MS法的桂枝茯苓胶囊中无机元素分析

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立桂枝茯苓胶囊(GFC)中29种无机元素(Li、Be、B、Na、Mg、Al、Ca、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Ga、As、Se、Sr、Mo、Cd、Sn、Sb、Ba、Hg、Tl、Pb、Bi)的测定方法。方法 GFC样品以浓硝酸为消解试剂经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法测定其中29种无机元素含量。结果待检测的29种无机元素在各的自线性范围内线性关系良好,r≥0.999 4;各元素的检出限在0.012~4.105μg/L,定量限在0.045~14.500μg/L,平均加样回收率在79.88%~105.76%,RSD≤4.55%。测定的12批样品中Ca、Na、Mg含量较高,均超过300μg/g;Fe、Mn、Sr含量也相对较高,而有害元素Be、As、Cd、Sb、Hg、Tl、Bi含量相对较低,均在0.030μg/g以下。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于GFC中无机元素的测定。     

10 Jahre Akupunktur mit Stoßwellen

In 2002, an already available shock wave device was modified according to my suggestions to enable its use for the stimulation of acupuncture points. Since then, the device has been used in the treatment of more than 1 000 patients.     

微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定脉络宁注射液中25种矿物质元素

目的建立微波消解-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)直接稀释测定脉络宁注射液中25种矿物质元素(Mg、Ca、Fe、Cu、Zn、Mn、Al、B、Ba、Co、Cr、K、Li、Mo、Na、Ni、P、Pb、Sr、Th、Ti、V、As、Cd和Hg)的方法。方法分别对微波消解条件和测试条件进行考察;样品经微波消解后,采用电感耦合质谱仪测定25种矿物质元素,并对测定方法学进行考察。结果确定最佳消解条件为3步缓慢升温:400 W 80℃升温10 min,保留5 min;600 W 120℃升温10 min,保留5 min;900 W 200℃升温20 min,保留20 min;25种矿物质元素在各自的线性范围内线性关系良好,r≥0.999 6,精密度、稳定性和重复性试验的RSD均符合定量分析要求;加标回收率为94.7%~106.1%,RSD在0.34%~2.79%。脉络宁注射液中检测出Mg、Ca、Fe、Cu、Zn、Mn、Al、B、Ba、Co、Cr、K、Li、Mo、Na、Ni、P、Pb、Sr、Th、Ti、V,未检出As、Cd和Hg。结论该方法简便、迅速、准确,适用于脉络宁注射液中25种矿物质元素的同时测定。     

基于ICP-MS法的麝香保心丸中26种无机元素分析

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立麝香保心丸中26种无机元素(Li、Na、Mg、Al、Ca、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Ga、As、Se、Sr、Mo、Cd、Sb、Ba、Hg、Tl、Pb、Bi)的测定方法。方法麝香保心丸样品以浓硝酸为消解试剂经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法测定其中26种无机元素的量。结果待检测的26种元素线性关系良好,相关系数r≥0.999 4,各元素的检出限在0.010~2.987μg/L,定量限在0.035~10.000μg/L,回收率在79.88%~105.76%,RSD≤4.55%。测定的12批样品中Ca、Mg、Na、Fe量较高,均超过1.000 mg/g;Mn、Cu、Zn、Al、Ga量也相对较高,而Sb、Hg、Tl、Bi量相对较低,均在0.050μg/g以下。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于麝香保心丸中无机元素的测定。     

基于ICP-MS法分析九味熄风颗粒中25种重金属及微量元素

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立九味熄风颗粒中25种重金属及微量元素(Li、Mg、Cd、Sn、Al、Mn、Fe、Ti、V、Co、Zn、Ga、Cr、Ni、Tl、Pb、Cu、As、Be、B、Sb、Ba、Sr、Hg、Bi)的测定方法。方法九味熄风颗粒样品经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法进行测定。结果检测的25种元素线性关系良好,相关系数R2≥0.999 2,各元素的检出限在0.009~16.051μg/L,回收率在70.75%~107.66%,RSD≤6.44%。测定的6批样品中Cr、Sn、Hg、Pb均未检出,Tl、Cd、As、Cu的量均较低或未检出,Cd≤0.011μg/g,Cu≤0.373μg/g,Tl≤0.021μg/g,As≤0.571μg/g。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于九味熄风颗粒中重金属及微量元素的测定。     

蜂蜜炼制前后黄酮类成分种类和含量变化分析

目的研究中药辅料蜂蜜炼制前后黄酮类成分变化。方法参考《中药药剂学》,对不同来源的6种蜂蜜进行炼制。供试品经固相萃取法富集黄酮类成分。采用高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(HPLC-TQ-MS)法测定,Thermo Accucore RP-MS色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min,柱温30℃。质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),正离子检测模式,多反应监测模式(MRM)扫描分析。结果蜂蜜中共检测到12种黄酮类成分,包括黄酮苷元、二氢黄酮苷元和异黄酮苷元。黄酮苷元有8种:槲皮素、桑黄素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、汉黄芩素、高良姜素和白杨素;二氢黄酮苷元有3种:短叶松素、柚皮素和乔松素;异黄酮苷元染料木素。不同蜜源蜂蜜所含黄酮类成分种类和含量存在明显差异。6个蜂蜜样品炼制后,都发现了蜂蜜中没有报道过的芦丁和芸香柚皮苷,12种检测到的蜂蜜黄酮类成分在炼制后其量都有不同程度的变化,椴树蜜的槲皮素、桑黄素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、汉黄芩素、乔松素和白杨素量均有增加,短叶松素、柚皮素和高良姜素量没增加反而还有下降的;洋槐蜜中除芹菜素量增加不明显外,其余均有所增加,尤其是槲皮素和桑黄素增加的较为明显;百花蜜和枣花蜜12种黄酮类成分量均显著增加。结论炼制可造成蜂蜜中黄酮类成分的种类和含量发生改变。     

Die Lateralität und Lateralitätsinstabilität in der Diagnostik und Therapie

The disturbance and instability of laterality are obstacles to diagnostics and therapy. Correction prior to starting therapy is required. They also predispose toward defined health problems and unspecific diseases. Numerous research activities provide evidence of the relevance of undisturbed laterality in diagnostics and therapy. Techniques of testing and therapeutic corrections will allow for optimized therapy success.     

基于ICP-MS法分析银杏叶系列品种中25种无机元素

目的建立银杏叶制剂中25种无机元素的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析方法,并对不同剂型银杏叶制剂中无机元素量进行比较分析。方法样品经微波消解后,采用ICP-MS法测定25种无机元素量,绘制无机元素指纹谱图,并进行方法学考察。结果 25种无机元素在各自的线性范围内线性关系良好,r≥0.950 0,精密度、稳定性和重复性试验的RSD值均符合定量分析要求;加样回收率为91.35%～108.86%,RSD在0.05%～4.45%。银杏叶制剂中检测了25种无机元素量,并绘制无机元素指纹图谱,发现其谱图具有一定的特征性;银杏叶片中元素Hg、Al、Cr的量较高,有害无机元素的量超标应引起关注。结论通过无机元素在银杏叶制剂中的组成分布及其量的变化规律研究,为银杏叶制剂的质量控制及安全性评价提供依据,同时为临床使用提供一定参考。     

5th Asia Pacific ISSX Meeting Held on May 9-12, 2014, in Tianjin,China

正The 5th Asia Pacific ISSX Meeting was organized by International Society for Study of Xenobiotics(ISSX)and Chinese Society for Study of Xenobiotics(CSSX)and co-organized by Tianjin Institute of Pharmaceutical Research and Committee of Pharmaceutical Engineering of Chinese Pharmaceutical Association(CPECPA).Professor Changxiao Liu was a co-Chair of