乌贼墨肽聚糖的制备工艺与体外抗前列腺癌研究

目的研究乌贼墨肽聚糖的提取和分离纯化工艺,探讨其基本的结构组成,并研究它的抗前列腺癌活性。方法用Tris-HCl缓冲液提取、丙酮脱脂和Sevag试剂除蛋白方法提取出粗肽聚糖。将提取物用超滤、DEAE-52离子交换柱、G-75凝胶柱进行分离纯化,高效液相色谱和SDS-PAGE凝胶电泳进行纯度检测,经红外扫描,确定该组分具有肽聚糖的一般吸收特征,以及检测它的氨基酸组成。最后采用MTT法检测纯化后得到的肽聚糖对DU-145和PC-3细胞的增殖的影响。结果最终水提得到的肽聚糖的纯化物对DU-145和PC-3细胞均有较明显的增殖抑制效应,且抑制作用具有明显量效依赖关系。结论该法提取的乌贼墨肽聚糖具有明显的抗前列腺癌作用。     

缢蛏多肽诱导前列腺癌DU-145和PC-3细胞的早期凋亡的研究

目的 研究缢蛏抗肿瘤生物活性肽的制备工艺及其体外抗前列腺癌的活性功能.方法 选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶等4种蛋白酶分别对缢蛏进行酶解,通过对DU-145细胞的增殖抑制作用来检测各酶解物的抗肿瘤活性,经G-25、反相高效液相色谱C18分离制备缢蛏酶解多肽.MTT检测缢蛏酶解多肽对DU-145和PC-3细胞的早期凋亡诱导作用;采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测缢蛏酶解多肽对DU-145和PC-3细胞的早期凋亡情况.结果 木瓜蛋白酶酶解获得的缢蛏多肽对DU-145细胞的诱导早期凋亡作用最强.MTT法结果显示,不同浓度的缢蛏酶解多肽对DU-145和PC-3细胞均有增殖抑制作用,呈剂量和时间依赖性.Annexin V-FITC/ PI双染流式细胞术检测后发现,DU-145和PC-3细胞经缢蛏酶解多肽作用后,早期凋亡细胞随着作用时间和药物浓度的增加而增加.结论 缢蛏酶解多肽在体外有显著的抗肿瘤作用.     

菲律宾蛤仔寡肽体外抗氧化、抗肿瘤活性研究

目的:研究菲律宾蛤仔酶解寡肽的体外抗氧化、抗肿瘤活性.方法:采用分光光度法测定寡肽对2,2′-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、超氧阴离子(O2-·),羟自由基(·OH)的清除能力和寡肽的金属离子螯合能力,及四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测寡肽对肿瘤细胞DU-145的增殖抑制效应.结果:菲律宾蛤仔酶解寡肽有较显著的ABTS自由基[半数有效浓度(EC50)0.204 g·L-1]、羟自由基(EC500.815 g·L-1)和超氧阴离子自由基(EC500.066 g·L-1)清除能力和金属离子螯合能力(EC501.554 g·L-1)及有效的DU-145细胞增殖抑制活性(半数抑制浓度(IC50)5.202 g·L-1).结论:菲律宾蛤仔酶解寡肽具有较好的抗氧化及抗肿瘤活性,可能与其低相对分子质量及蛋白酶酶解构成寡肽的结构相关.     

菲律宾蛤仔酶解寡肽的分离及体外抗氧化作用研究

目的:研究菲律宾蛤仔酶解寡肽的制备方法及其抗氧化活性。方法:选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶等4种蛋白酶分别对菲律宾蛤仔进行酶解,通过对羟自由基的清除作用来考查各酶解物的抗氧化活性;经超滤、DEAE-SepharoseFF阴离子交换、反相高效液相色谱C18分离制备寡肽,并测定其羟自由基清除率和氧化还原力。结果:胰蛋白酶酶解寡肽清除羟自由基能力最强;经超滤后,3KDa以下的组分羟自由基清除率最高;将该组分纯化后,最终得到1个寡肽,该肽的分子量为607.6KDa,氨基酸序列为:Asp-Trp-Pro-His。在2.5mg/mL时的羟自由基清除率、DPPH自由基清除率和还原力均高于Vit C。结论:菲律宾蛤仔酶解寡肽具有抗氧化活性,经超滤、阴离子交换和反相高效液相色谱可以对该肽进行纯化。     

菲律宾蛤仔酶解寡肽的制备及抗前列腺癌PC-3细胞的实验研究

目的 研究菲律宾蛤仔酶解寡肽(RPO)的制备及体外抗前列腺癌PC-3细胞的活性.方法 选用胰蛋白酶对菲律宾蛤仔进行酶解,经截取分子量为3 KDa的超滤膜、DEAE SepharoseFF阴离子交换、反相高效液相色谱C18分离制备菲律宾蛤仔酶解寡肽,并应用MTT法、AO/EB染色及Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测其体外抗PC-3细胞增殖活性.结果 菲律宾蛤仔酶解多肽3 KDa以下的组分经阴离子交换,得到的峰1由液相色谱纯化后,获到分子量为607.6 kDa寡肽样品;MTT法结果显示,该寡肽能抑制PC-3细胞增殖,呈剂量和时间依赖;AO/EB染色PC-3出现凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测PC-3细胞早期凋亡率、坏死率随寡肽浓度增加而增多,明显高于对照组.结论 胰蛋白酶酶解菲律宾蛤仔得到的寡肽能抑制PC-3细胞增殖,诱导凋亡.     

肿节风对人前列腺癌DU-145细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨中药肿节风溶液对人前列腺癌DU-145细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用细胞培养的方法,用不同浓度的肿节风溶液作用于DU-145细胞48h,用MTT法检测用药后细胞的增殖情况,用流式细胞技术检测细胞的周期和凋亡状况。结果:肿节风溶液作用48h后,DU-145细胞表现形态和数量改变,出现数量减少,形态不规则,不同程度的细胞皱缩,边缘毛糙,染色质凝集或细胞核固缩碎裂;细胞增殖受到抑制,细胞周期阻滞于G2/M期,细胞凋亡率明显增加并呈一定的量效关系。结论:肿节风溶液促使人前列腺癌DU-145细胞形态改变,增殖抑制,细胞周期阻滞和加速细胞凋亡。     

水蛭不同工艺提取物抗凝与纤溶活性比较及酶解物组成分析

目的:比较水蛭不同提取工艺的抗凝溶栓作用;初步确定水蛭酶解产物的化学成分组成。方法:通过活化部分凝血活酶时间(APTT)试验及纤维蛋白平板试验,比较水蛭胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解、醇提、水煎提取物的体外抗凝与纤溶活性差异。采用Sephadex G-100凝胶柱色谱法对优选提取物进行进一步分离纯化,并采用MALDI-TOF-质谱法对其组成进行分析。结果:与生理盐水组比较,在相同的剂量下,水蛭胃蛋白酶酶解物可明显延长大鼠APTT,并具有较强的纤溶作用,其余几种提取物的作用不明显。胃蛋白酶酶解物经Sephadex G-100凝胶柱色谱分离纯化的活性部位经MALDI-TOF-质谱法检测为分子量在700～3 200之间的一组寡肽。结论:胃蛋白酶酶解是水蛭较为理想的提取方法,其有效部位的组成为寡肽。     

土鳖虫胰酶酶解物抗凝活性部位分离纯化及组成分析

目的:采用溶剂萃取和凝胶柱色谱法对土鳖虫胰酶酶解物进行分离纯化,初步确定其抗凝活性部位及化学成分组成。方法:应用胰酶酶解法制备土鳖虫胰酶酶解物,以APTT(活化部分凝血酶时间)为指标,采用溶剂萃取法,获得抗凝活性部位IV,经凝胶柱色谱法对其进行分离纯化获得胰酶酶解纯化物;采用考马斯亮蓝法对纯化物进行定量分析,通过MALDI-TOF-MS检测分离部分的分子量分布范围。结果:土鳖虫胰酶酶解物部位IV有较强的抗凝活性,其抗凝活性强度与酶解物质量浓度相关;部位IV经Sephadex G-25纯化后,通过考马斯亮蓝法测得其蛋白质量分数5.5%;进一步经Sephadex G-10脱盐的纯化物,采用MALDI-TOF-MS检测,确定为相对分子质量在850～910 Da的3组多肽混合物。结论:采用凝胶柱色谱法分离纯化土鳖虫胰酶酶解物是可行的,抗凝活性组分是<1 000 Da的小分子肽类。     

猪皮胶原肽的分离纯化及结构鉴定

目的:分离纯化猪皮胶原肽并鉴定其活性成分的相对分子质量分布及结构。方法:采用胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解猪皮,酶解液超滤,电渗析除盐,冻干得猪皮胶原肽,利用Sephadex-G25凝胶柱色谱对酶解产物进行分离纯化,分析各部位对L929细胞增值作用的影响,运用ESI-Q-TOF2质谱仪对活性部位进行肽序列分析。结果:分离纯化得到2个活性部位(部位Ⅰ,Ⅱ),二者对L929细胞的增殖率分别为162%,179%。活性部位Ⅱ相对分子质量主要分布于800~2 000 Da,首次发现GLGAGGGRGSDGNPG,PAGAHGPAGL共2个序列。结论:猪皮胶原肽具有显著的细胞增殖作用,符合G-X-Y胶原排列组合,具有一定专属性。     

基于肽键热振荡理论对僵蚕炮制前后体外抗帕金森活性的研究

目的:筛选僵蚕抗帕金森病作用活性组分,对比僵蚕传统热炮制加工前后活性,研究僵蚕天然寡肽与酶解寡肽抗帕金森病作用活性,并对比炮制前后天然与酶解寡肽收率,为僵蚕合理开发应用提供依据。方法:将僵蚕应用石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水分别提取,得到僵蚕不同极性溶媒提取物,应用6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞损伤模型对其全成分进行系统研究;进而将僵蚕水提取物经过超滤离心,分别得到10 kDa、3～10 kDa、1～3 kDa、1 kDa组分,再应用乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制率及对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用进行活性组分筛选;基于肽键热振荡理论对炮制前后僵蚕不同组分活性进行对比研究;酶解僵蚕10 kDa组分,对天然及酶解1 kDa组分进行活性对比研究。结果:僵蚕水提取物较其他极性溶媒提取物活性强,水提取物中1 kDa组分的活性最佳,因此确定僵蚕1 kDa组分为活性组分;炒僵蚕1 kDa组分寡肽含量高于生品;酶解1 kDa组分的活性略低于天然寡肽,但酶解1 kDa组分寡肽收率高于天然1 kDa组分。结论:本文确定了1 kDa组分为僵蚕体外抗帕金森的药效物质;基于肽键热振荡理论阐明了僵蚕经麸炒后,由于肽键的断裂,生成了更多的小分子寡肽类成分;由酶解得到收率更高的活性寡肽,解决了天然寡肽收率较低难于产业化的问题,为僵蚕开发应用提供了可靠的依据。     

海螵蛸的化学成分研究

目的对海螵蛸的化学成分进行研究。方法采用电感耦合等离子发射光谱法(ICP)、X-ray衍射分析法、热分析等方法对海螵蛸成分进行研究。结果海螵蛸中钙含量为26.7%,此外,还含有丰富的微量元素;其主要成分为碳酸钙,结构型为文石。结论分析结果对海螵蛸的进一步开发研究提供了实验依据。     

香连止泻颗粒治疗腹泻型肠易激综合征的药效学研究

目的:观察香连止泻颗粒治疗肠易激综合征的作用。方法:通过观察小鼠小肠墨汁推进率、对番泻叶致泻引起的黑便发生潜伏期、对小鼠腹腔毛细血管的通透性、小鼠的扭体试验,研究香连止泻颗粒对肠功能的影响。结果:香连止泻颗粒能明显减少番泻叶致泻引起的大便次数增多;缩短墨汁推进距离,减慢小肠蠕动速度;降低毛细血管通透性;延长小鼠的扭体发生潜伏期,减少扭体发生次数。结论:香连止泻颗粒有止泻、抗炎和镇痛的作用。     

防风解热合剂对胃液分泌、胃排空及肠蠕动影响的实验研究

目的探讨防风解热合剂健胃消食的药理作用,为扩大该药临床应用提供实验依据。方法采用胃液离心常规方法测定大鼠胃液量;采用滴定法测定大鼠胃液游离酸、总酸度;采用胃蛋白酶试剂盒测定大鼠胃液上清中胃蛋白酶活性;测定墨汁推进率以观察小鼠肠蠕动能力;采用比色法测定甲基橙残留率以观察小鼠胃排空能力。结果与对照组比较,防风解热合剂高剂量组可显著升高大鼠胃中总酸水平、胃蛋白酶活性(P<0.01),对胃液量、游离酸的作用不明显(P>0.05);显著增加小鼠墨汁推进率(P<0.01);显著降低小鼠胃甲基橙残留率(P<0.01)。防风解热合剂中、低剂量组可显著升高小鼠墨汁推进率(P<0.05),对大鼠胃液量、游离酸、总酸、胃蛋白酶活性及小鼠胃甲基橙残留率的作用均不明显(P>0.05)。结论防风解热合剂能够促进消化和胃排空,具有一定的健胃消食的作用,为临床防治支气管炎并发消化不良症提供实验依据。     

铁皮枫斗晶对呼吸道功能的影响

目的观察铁皮枫斗晶对动物呼吸道排泌及咳嗽的影响.方法小鼠气管酚红排泌法、家鸽气管纤毛运动法、小鼠氨水引咳法.结果铁皮枫斗晶能明显促进小鼠气管酚红排泌和家鸽气管内墨汁运动速度,能抑制氨水引起的小鼠咳嗽.结论铁皮枫斗晶具有祛痰和镇咳作用.     

从脑肠互动的角度研究痛泻要方治疗肠易激综合征的作用机制

目的:从脑肠互动的角度研究痛泻要方治疗肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)的作用机制。方法:50只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、痛泻要方高剂量组、痛泻要方低剂量组、得舒特组。除正常组外,其余各组大鼠采用束缚制动加ig番泻叶的方法建立IBS大鼠模型,免疫组织化学法检测各组大鼠不同脑区核团c-fos蛋白表达,同时通过观察大鼠粪点数、玻璃小球排出时间及小肠墨汁推进率来检测大鼠结肠转运功能、小肠运动功能。结果:痛泻要方高剂量组与模型组相比,大鼠粪点数明显减少(P0.05),玻璃小球排出时间减慢,小肠墨汁推进率明显降低(P0.01),不同脑区核团c-fos阳性神经元灰度值明显增高(P0.05),c-fos蛋白表达显著降低。结论:痛泻要方对IBS大鼠的脑肠轴功能紊乱有调控作用。     

大黄不同工艺产物泻下活性比较研究

目的:研究大黄溶剂工艺、SFE-CO_2工艺与SFE-CO_2及药渣树脂精制工艺产物的泻下活性。方法:采用炭末推进法考察各工艺产物对小鼠小肠和大鼠大肠活动的影响,观察小肠容积的变化,同时以肠段称重法考察了各工艺产物对小鼠小肠与大肠水分吸收的影响。结果:各工艺产物泻下活性的强弱为:SFE-CO_2及药渣树脂精制工艺组>溶剂工艺组>SFE-CO_2组。结论:分极性提取效果较好。     

猪胆汁乙醇提取物对消化系统的影响

目的:观察猪胆汁乙醇提取物对消化功能的影响。方法:采用离体与在体两种方法观察猪胆汁乙醇提取物对消化功能的影响。结果:猪胆汁乙醇提取物能减弱家兔离体肠平滑肌收缩,抑制小鼠小肠碳墨推进率,缓解蓖麻油所致小鼠腹泻,且对大肠杆菌、痢疾杆菌等有明显抑制作用。结论:猪胆汁乙醇提取物对维持消化道正常功能有重要调节作用。     

乳猪胸腺肽对小鼠T淋巴细胞增殖和活化的影响

 目的：研究由乳猪胸腺制备的胸腺肽对T细胞增殖和活化的影响。方法：用³H-胸腺嘧啶核苷掺入法检测细胞增殖反应，并以生物素-链霉亲和素系统作免疫细胞化学法测定膜白介素2受体(mIL-2R)阳性细胞百分率。结果：胸腺肽组的细胞增殖反应(cpm值)和mIL-2R阳性细胞百分率均明显高于对照组(P<0.01)。结论：乳猪胸腺肽对小鼠T细胞增殖和mIL-2R的表达均有促进作用。     

猪胆汁乙醇提取物对消化系统的影响

目的 :观察猪胆汁乙醇提取物对消化功能的影响。方法 :采用离体与在体两种方法观察猪胆汁乙醇提取物对小鼠、家兔消化功能的影响。结果 :猪胆汁乙醇提取物能减弱家兔离体肠平滑肌收缩 ,抑制小鼠小肠碳墨推进率 ,缓解蓖麻油所致小鼠腹泻 (P<0 .0 1) ;且对大肠杆菌、痢疾杆菌等有明显抑制作用。结论 :猪胆汁乙醇提取物对维持消化道正常功能有重要调节作用 (人体用量为 1g/ kg) ,具有良好的新药开发应用前景