慢性肝病患者乙型肝炎病毒核心基因启动子变异与临床类型的相关性研究

目的:研究慢性肝病患者乙型肝炎病毒核心基因启动子(HBV BCP)变异与临床类型的相关关系.方法:采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对176例HBV慢性感染患者的血清进行HBV BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764G→A联合突变检测.根据病情的严重程度将患者分为6组不同临床类型:①慢性乙型肝炎轻度;②慢性乙型肝炎中度;③慢性乙型肝炎重度;④肝炎肝硬化;⑤慢性重型肝炎;⑥原发性肝癌.并与HBV BCP变异的阳性或阴性进行等级相关分析.结果:HBV BCP双变异在慢性乙型肝炎轻、中、重度组,肝炎肝硬化组,慢性重症肝炎组和原发性肝癌组的阳性率分别为28.0%、31.4%、34.2%、39.4%、60.0%和70.0%(rs=0.259,P=0.001).结论:HBV BCP变异与HBV慢性感染的由轻至重的临床类型呈正相关,随着病情的加重,BCP变异的阳性率亦随之增高.     

应用熔点曲线分析输血传播病毒的基因变异

目的研究输血传播病毒(TTV)的基因变异及其临床意义。方法采用巢式荧光实时多聚酶链式反应(PCR)扩增TTVDNA,收集TTVDNA阳性病例142例。其中献血员4例;非甲-非庚型慢性肝炎患者16例;乙型肝炎病毒携带者(ASC)7例;慢性乙型肝炎患者(CHB)39例;慢性重型乙型肝炎患者(CSHB)76例。采用熔点曲线方法进行TTV基因变异检测。结果非甲-非庚型肝炎患者熔点曲线波峰数量显著多于献血员(P<0.05);重型与重度肝炎患者组中熔点曲线波峰数量显著多于中度患者(P<0.05),重度肝炎患者熔点曲线波峰数量与重型患者比较差异无显著(P>0.05)。乙型肝炎病毒感染者中CHB和CSHB组中熔点曲线波峰数量显著多于献血员及ASC组(P<0.05),CSHB和CHB重度熔点曲线波峰数量显著多于CHB中度患者(P<0.05)。但CHB重度患者TTVDNA熔点曲线波峰数量与CSHB相比较差异无显著(P>0.05)。结论TTV存在基因变异;TTV基因变异株的复杂性或称准种感染的复杂性可能是TTV与HBV感染者重叠感染使病情加重的因素之一;熔点曲线可以用于基因变异分析。     

鲁南地区HBV基因型和HBV核心启动子双点突变与肝硬化、肝癌的关系

目的 研究鲁南地区肝细胞癌(HCC)、肝硬化(LC)患者与乙型肝炎病毒(HBV)基因型及基本C区启动子(BCP)基因区A1762T/G1764A双位点变异之间的关系,探讨其相关性.方法 按慢性HBV感染者111例的不同临床分型,对其中HCC、LC和慢性乙型肝炎(CHB)患者各37例,采用实时荧光定量PCR法及PCR微板核酸杂交ELLSA技术进行HBV基因定量、分型检测;采用HBV基因多态性芯片检测BCP区A1762T/G1764A双位点变异;对不同性别、年龄、病毒基因型分布、临床分型患者进行HBV基因分型、BCP区双突变,以及不同HBV基因型BCP双突变的比较.结果 在CHB、LC、HCC患者中,HBeAg阴性者分别为24.3％、75.7％和83.8％;HCC患者HBeAg阴性率较CHB患者明显升高(P＜0.05).男、女性别HBV均以C基因型占优势,分别为57.3％和54.5％,性别间无统计学差异(P＞0.05);年龄＜30岁组HBV以B基因型(40.3％)、C基因型(51.7％)占优势,≥30岁组以C基因型(67.2％)占优势,＜30岁组B基因型构成比高于≥30岁组(29.6％,P＜0.05);HCC、LC患者中HBV以C基因型为主,分别占73.0％和75.6％.BCP双突变率在HCC、LC分别为64.9％和56.8％;HBV C基因型多发生BCP双突变,占63.6％ (42/66).结论 鲁南地区HBV基因型以C型和B型为主,其中LC、HCC患者基因型以C型占优势,HCC患者BCP双突变率显著高于CHB患者,在慢性HBV感染者中HBV C基因型多发生BCP双突变.     

乙肝病毒基因型及病毒变异对慢性肝病进展的影响

目的 进一步研究HBV基因型及病毒变异与慢性肝病进展的关系.方法 用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)以及部分PCR产物测序的方法对401例慢性HBV感染者.包括112例HCC患者(HCC组),129例无症状携带者(ASC组),70例肝硬化患者(LC组)和90例慢性肝炎患者(CH组)进行HBV基因分型以及BCP和PC变异检测.结果 401例慢性HBV感染者中181例发生B基因型感染,220例发生C型感染.HCC组中C型分布高于其他3个疾病组;C基因型感染者BCP变异多于B基因型;B基因型感染者PC变异多于C基因型;同时BCP变异发生率随着病程进展而递增:在ASC组、CH组、LC组和HCC组里的BCP变异阳性率分别为22.4%、35.0%、50.0%、74.1%.C1与C2亚型相比,C1有较高BCP变异阳性率,而C2有较高PC变异发生率.结论 BCP变异与肝病进程存在依从关系,因此BCP变异的检测对慢性HBV感染的疾病进展和临床结局的评估有重要意义.     

鲁南地区乙肝病毒基因变异和基因型与肝癌的相关性

目的 研究鲁南地区肝细胞癌(HCC)患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型与基本C区启动子(BCP)基因区A1762T/G1764A双位点变异之间的关系,探讨其相关性.方法 选择37例HCC患者作为研究组,37例慢性乙型肝炎(CHB)患者作为对照组,采用实时荧光定量PCR法及PCR微板核酸杂交ELLSA技术进行HBV基因定量、分型检测,采用HBV基因多态性芯片检测BCP区A1762T/G1764A双位点变异.结果 37例HCC患者中,HBeAg阳性的患者仅6例, HBeAg阴性者共31例;CHB患者中,HBeAg阳性的患者28例, HBeAg阴性者共9例. HCC中, HBV以C基因型为主,占70.2%,而CHB以B基因型为主,占67.6%.BCP双突变率在HCC为64.9%,在CHB中为27.0%.其中HCC中发生BCP双突变HBV多见于 C基因型占87.5%, 而CHB中发生BCP双突变HBV C基因型占40.0%.结论 鲁南地区肝细胞癌的发生与HBV DNA BCP区A1762T/G1764A双位点变异有关,并且HBV C基因型可能是HBV相关肝癌的主要基因型.     

芯片检测HBV DNA多态性的临床意义

目的：DNA芯片检测乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)基因前C／C区、C基因区启动子(BCP)和P区等多个位点多态性。方法：将多条寡核苷酸探针固定于芯片的特定位置，与PCR扩增的HBV基因相应区段杂交，酶呈色，根据特定位置上的杂交信号判定基因突变的类型。结果：HBeAg( )和抗HBe抗体( )两组患者中前C／C区变异的不同频率分别为慢性乙型肝炎患者(Chronic hepatitis B，CHB)25％和61％，HBV无症状携带者(Asymptomatic carrier，ASC)12％和55％，重症乙型肝炎(Severe hepatitis B，SHB)50％和58％；BCP区变异的不同频率分别为CHB20％和48％，ASC11％和45%，SH75％和75％。3例服用lamivudine的患者半年后有2例发生P区变异(YMDD→YIDD)。结论：DNA芯片检测HBV基因多态性具有较好的灵敏度和重复性，操作简便，易于临床推广应用；前C／C区和BCP区变异可能是HBeAg(—)患者HBV感染的两大主要原因，且与肝炎慢性化、重症化有密切关系。     

反向点杂交法检测湘潭地区乙型肝炎病毒基因型及其临床意义的研究

目的了解湘潭地区乙型肝炎病毒（HBV）基因型流行情况及其临床意义,并对HBV基因分型试剂盒进行评价。方法用HBV基因分型试剂对湘潭地区95例HBV感染者的样本进行检测,并对PCR产物进行测序分析。结果HBV基因分型试剂盒检测结果与测序的符合率为100％,湘潭地区HBV各种基因型分布比例：B型占74．74％。C型占11．58％,B、C型混合感染占13．68％。无症状携带者组与慢性重型肝炎组,慢性乙型肝炎组与慢性重型肝炎组及肝硬化组之间HBVB型和C型感染率存在显著性差异。其中慢性重型肝炎组及肝硬化组C型感染率要明显高于其他组。结论HBV基因分型检测试剂盒检测结果是准确、简便的,具有临床推广和应用价值。湘潭地区流行的HBV基因型主要为B型和C型,其中B型为优势基因型,具有其自身的特点。     

熔点曲线法研究慢性乙型肝炎患者中TTV准种与其临床分型的关系

目的研究慢性乙型肝炎患者中输血传播病毒(transfusion transmitted virus,TTV)准种及其与患者不同临床分型的关系。方法收集TTV DNA阳性的慢性乙型肝炎病例126例,其中乙型肝炎病毒携带者(ASC)4例;慢性乙型肝炎患者(chronic hepatitis B,CHB)46例,其中轻度、中度、重度分别为7例、14例、25例;慢性重型乙型肝炎患者(chronic severity hepatitis B,CSHB)76例。采用巢式荧光实时多聚酶链式反应(PCR)扩增TTV DNA,用熔点曲线方法进行TTV准种检测。结果乙型肝炎病毒感染者中CHB中度、重度和CSHB组中熔点曲线波峰数量显著多于ASC和CHB轻度组(P<0.05),CSHB和CHB重度熔点曲线波峰数量显著多于CHB中度患者(P<0.05)。但CHB重度患者TTV DNA熔点曲线波峰数量与CSHB相比较差异无显著性(P>0.05)。结论TTV存在病毒准种,TTV准种感染的复杂性可能是TTV与HBV感染者重叠感染使病情加重的因素之一。     

HBV基因型对慢性乙型肝炎临床的影响

目的了解HBV基因型对乙型肝炎病毒慢性感染者临床影响。方法采用限制性片段长度多态性(RFLP)及序列测定法检测广东地区27例HBV携带者和173例慢性乙肝患者的HBV基因型。结果B基因型105例(52.5%),C型94例(47%),D型1例,未发现其它基因型。B型中乙型肝炎表面抗原携带者(ASC)所占比例(18.1%)显著高于C型中ASC所占比例(8.5%)。C型中肝硬化所占比例(23.4%)显著高于B型中肝硬化所占比例(7.6%)。C型在ASC、慢性乙肝轻度、中度、重度及重型肝炎、肝硬化的比例依次增高。C型较B型年龄大,但二者间性别差异无统计学意义。结论广州地区HBV基因型由B、C、D型构成,以B型为主。C型较B型年龄大。C型与较重肝病有关。B、C型间性别差异无统计学意义。     

慢性重型肝炎患者乙肝病毒C基因变异的初步研究

目的探讨乙肝病毒C基因变异与乙型肝炎患者病情的关系.方法用聚合酶链反应(PCR)对2份慢性重型乙型肝炎患者血清及1份乙肝病毒无症状携带者血清进行C基因扩增和克隆,经核苷酸序列分析,与我国HBV克隆株pADR1比较.结果乙肝病毒无症状携带者的C基因与pADR-1的基因相似;而慢重肝患者C基因变异率较高,各有19和14个核苷酸变异.结论乙肝病毒C基因的变异可能与重型肝炎的发生密切相关.     

乙肝病毒DNA和前S1抗原及其标记物三者相关性分析

目的探讨乙肝病毒前S1抗原(PreS1)与乙肝病毒DNA(HBV DNA)、乙肝病毒标志物(HBVM)之间的相关性,为拉米夫定(Lamivudine)治疗提供新的监测指标。方法收集慢性乙型病毒性肝炎患者500例,其中HBV DNA阳性400例(拷贝数>500/ml),按HBV-DNA含量由低到高分8组;其余为HBVDNA阴性对照100例。同步以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测PreS1;以电化学免疫发光法检测乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒表面抗原(HBsAg);以荧光定量PCR法检测HBV DNA(以HBV DNA拷贝数>500/ml为阳性)。结果(1)在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,PreS1的阳性率比HBeAg高(P<0.05);在HBV DNA拷贝数1×106/ml以上,二者阳性率无显著性差异(P>0.05);(2)PreS1的灵敏度为90%(360/400),高于HBeAg的68.5%(274/400)(P<0.05);PreS1的阴性预示值为55.6%(50/90),高于HBeAg的43.2%(96/222)(P<0.05);PreS1的检测有效率为82.0%(410/500),高于HBeAg的64.8%(324/500)(P<0.05)。(3)在HBVDNA拷贝数500~1×104/ml之间,HBsAg的阳性率比PreS1高(P<0.05),在HBVDNA拷贝数1×104/ml以上,HBsAg的阳性率与PreS1的阳性率无显著性差异(P>0.05)。在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,HBeAb有较高的阳性率。结论PreS1与HBVDNA具有较好的相关性,其检测灵敏度和阴性预示值、检测有效率都优于HBeAg检测。PreS1可作为拉米夫定等抗病毒药物疗效观察指标之一。HBeAg阴性、HBeAb阳性不是传染性消失的可靠指标。     

乙肝病毒不同血清标志物ALT中与HBVDNA载量临床意义

目的分析乙肝病毒（HBV）不同血清标志物（HBVM）中丙酸氨基转移酶（ALT）异常率与乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBVDNA）载量的关系,探讨乙肝病毒感染时肝损伤的主要原因及检测HBVM与HBVDNA载量及ALT的临床意义。方法对345份乙肝患者的血清标本分别用ELISA、荧光定量PCR、速率法检测HBVM、HBVDNA载量及ALT。结果①HBeAg（＋）与HBeAg（-）两组HBVDNA阳性率、HBVDNA载量〉10^5的百分率比较均有显著差异（P〈0．01）。②ALT异常率在HBeAg（＋）组的不同HBVDNA载量级中无差异（P〉0．05）,在HBeAg（-）组中随HB—VDNA载量级增大而增大（P〈0．01）。结论在HBeAg（＋）时,肝损伤与HBVDNA载量无关;HBeAg（-）时,大多病毒复制减弱,但有少数HBVDNA载量为高拷贝,其肝损伤程度与HBVDNA载量呈正相关。     

HBV M和HBV DNA的关系探讨

目的:研究乙肝病毒血清学标志物(HBV M)与乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)之间的关系。方法:对497例患者同时检测HBV M和HBV DNA,HBV M检测用ELISA法,HBV DAN检测用PCR法。结果:HBV M的检测结果分为6组,每组HBV M组合都有一定的HBV DNA检出率。结论:说明HBV M只能作为乙肝病毒有无感染的一般性检测,而HBV DNA能检出复制病毒,但难以表达非复制状态的感染,所以两者关系值得进一步探讨。     

乙型肝炎病毒载量与血清免疫标志物及ALT的关系

目的探讨不同乙肝病毒（HBV）载量与其血清标志物模式及ALT的关系。方法采用荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）和速率法分别检测患者血清HBV-DNA载量、血清学标志及谷氨酸丙氨酸转移酶（ALT）活性。结果在605例患者样本中共检测出9种血清模式,HBeAg阳性模式,即HBsAg（＋）,HBeAg（＋）,抗HBc（＋）模式与HBsAg（＋）,HBeAg（＋）模式,其HBV-DNA阳性率分别为96.2%和100.0%,病毒平均含量106.53copies/mL,明显高于HBeAg阴性模式（P〈0.01）。HBV-DNA水平与ALT异常存在相关。结论 HBeAg阳性模式HBV载量显著高于HBeAg阴性模式,HBV载量越高,ALT异常的比例越大。     

PCR检测HBV DNA对乙肝疫苗应答反应的研究

儿童全程接种乙肝疫苗后的应答反应率高（为９６％）［１］；而成人接种乙肝疫苗后免疫应答比较低（为６５．１２％）。本文对成人组接种乙肝疫苗无应答反应１５例（３４．８８％），进一步探索了乙肝疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１５例正常成人经乙肝疫苗接种后无应答反应者和３例乙型肝炎患者的血清，结果发现１５例不产生抗－ＨＢｓ者，经ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ均为阴性；仅３例为阳性。本文作者在ＰＣＲ检测指导下，对１５例成人采用乙型肝炎免疫球蛋白（ＨＢＩＧ）和３０微克乙肝疫苗联合应用１０５天后，有１２例产生抗－ＨＢｓ。提示对于接种乙肝疫苗的正常人群，凡经ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ阴性者，经过重复大剂量注射乙肝疫苗后可使绝大多数得到可靠的保护。     

新疆331例HBV感染患者基因型及临床特征分析

目的探讨新疆慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者基因型分布情况和临床特征。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法,分析2007年在新疆医科大学第一附属医院就诊的331例慢性HBV感染者基因型与临床特点。结果 331例慢性HBV感染者中,HBV B基因型占14.8%（49/331）,C基因型占72.8%（241/331）,C/D重组体占9.7%（32/331）,D基因型占2.7%（9/331）。4种基因型中,C基因型所占比例明显高于B基因型、C/D重组体和D基因型。C基因型在乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性、慢性乙型肝炎（CH）、乙肝肝硬化（LC）、乙肝肝癌（HCC）患者中所占比例明显高于B基因型、C/D重组体、D基因型,差异均有统计学意义（P〈0.05）。4种基因型在性别、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、血清白蛋白（ALB）等方面比较,差异无统计学意义（P均〉0.05）。结论新疆地区HBV感染者,HBV基因型以C基因型为主,慢性乙型肝炎C基因型病情重,预后差。     

氧化苦参碱对乙型肝炎病毒转基因小鼠乙肝抗原表达的影响

目的：研究氧化苦参碱抗乙型肝炎病毒的作用,并初步探讨其作用机制。方法：以乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠ＩＣＲ－ＴｇＮ（ＨＢＶａｄｒ１．２）ＳＭＭＵ 为动物模型,运用ＥＬＩＳＡ和免疫组化的方法检测小鼠肝脏内乙肝抗原含量。结果：分别予氧化苦参碱１００, ２００, ３００ ｍ ｇ／ｋｇ 腹腔注射,１次／ｄ,３０ ｄ 后,乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量较空白对照组（予等体积生理盐水腹腔注射）均有明显的下降,且对两者作用一致;进一步的研究表明氧化苦参碱２００ ｍ ｇ／ｋｇ 作用１０ ｄ,２０ ｄ 时小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量较治疗前有明显的下降。结论：氧化苦参碱能降低乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏内ＨＢｓＡｇ 和ＨＢｃＡｇ 的含量,有抗乙型肝炎病毒作用。     

HBV感染者血清标志物模式与HBVDNA的水平

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清标志物模式与HBVDNA水平的关系。方法：采用时间分辨荧光免疫定量分析法（TRFIA）和荧光定量PCR技术（FQ—PCR）分别检测542例乙型肝炎感染者血清HBVM和HBVDNA。结果：542例乙型肝炎感染者血清标本HBVM模式有10种,HBVDNA检出总阳性率83．39％（452／542）,各种模式HBVDNA的阳性率存在显著差异性,高拷贝数的HBVDNA主要存在于HBeAg阳性的各种模式中,与其它模式比较有显著差异（P〈0．05）。结论：动态监测HBVM和HBVDNA含量有利于对乙肝患者的诊断及疗效提供客观依据。     

HBV宫内感染的危险因素及与HBV DNA的关系

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）宫内感染的危险因素及HBV DNA含量对HBV宫内感染的影响。方法 分别用酶联免疫吸附法及荧光定量PCR法检测230例HBsAg阳性孕妇及其新生儿外周血HBV血清标志物和HBV DNA含量,发生宫内感染的为病例组,余为对照组,运用非条件Logistic回归模型对宫内感染的危险因素进行分析。结果 （1）230例HBsAg阳性孕妇分娩的新生儿中,有22例发生宫内感染。其中HBsAg阳性7例,HBV DNA阳性18例,HBsAg和HBV DNA均阳性的3例,总的HBV宫内感染率为9．6％（22／230）。（2）非条件Logistic多元回归分析表明,仅HBV DNA浓度分级有统计学意义,OR为1．57（1．12．2．21）。（3）230例HBsAg阳性孕妇中HBV DNA阳性者119例,发生宫内感染18例,感染率为15．1％（18／119）,并且当孕妇血清HBV DNA浓度≥10^7copies／ml时,HBV宫内感染率显著增加,（χ^2=-7．92,P〈0．05）。结论 孕妇血清HBV DNA浓度分级是HBV宫内感染的危险因素,并且当HBV DNA浓度≥10^7copies／ml时,其宫内感染率显著增加。     

乙肝病毒在转染细胞（z7－4）中复制的探讨

用ＨＢＶ　ＤＮＡ二聚体转染高度分化的人肝癌细胞株（ＨｅｐＧ２），筛选出具有分泌病毒抗原、核酸以及释放４２ｎｍ　Ｄａｎｅ颗粒能力的ｚ７－４细胞株。本实验结果支持３．５ＫｂｍＲＮＡ是前病毒基因，以它作模板可逆转录成１．６Ｋｂ（－）ｓｓＤＮＡ，再合成（＋）ｓｓＤＮＡ，最后装配成４．０Ｋｂ和３．２ＫｂｄｓＤＮＡ。在ＤＮＡ印迹法中位于４．０Ｋｂ（Ｄ１）和３．２Ｋｂ（Ｄ２）处是病毒的松驰环状双股ＤＮＡ（ＲＣＤＮＡ），而１．６Ｋｂ和１．２Ｋｂ处的２条ＤＮＡ带（Ｓ１和Ｓ２）均为单股ＤＮＡ，这些不同位置的ＤＮＡ带与病毒复制过程中ＤＮＡ的构型和片断大小不同有关。本实验未能发现２．０ＫｂｃｃｃＤＮＡ，但提示了负股ＤＮＡ５’端连接有蛋白质引物。