刚地弓形虫硫氧还蛋白基因的克隆 表达及鉴定

目的 目的 克隆刚地弓形虫硫氧还蛋白 （Thioredoxin,Trx） 基因, 构建原核表达载体, 通过诱导表达和纯化蛋白, 免 疫家兔制备多克隆抗体。方法 方法 采用PCR技术扩增刚地弓形虫Trx基因, 克隆至原核表达载体pET?28a （+） 中, 转化大肠 埃希菌 （E. coli） Rosetta, 用IPTG诱导目的蛋白表达, 采用镍亲和层析法获得纯化蛋白并免疫家兔制备多克隆抗体。利用 Western blotting技术鉴定多克隆抗体的特异性。结果 结果 成功从刚地弓形虫 cDNA 中扩增出 Trx 目的基因, 构建了 Trx/pET?28a （+） 重组质粒, 获得抗Trx重组蛋白的多克隆抗体。Western blotting技术检测出弓形虫Trx蛋白的特异性条 带。结论 结论 用制备的兔抗Trx多克隆抗体能检测弓形虫Trx在速殖子内的表达, 为进一步深入研究刚地弓形虫Trx功能 奠定了基础。     

寨卡病毒E蛋白及第三结构域的原核表达和多克隆抗体制备

目的 在大肠杆菌中克隆表达和纯化寨卡病毒(Zika Virus,ZIKV)包膜糖蛋白(Envelope Protein,E)及第三结构域(Envelope DomainⅢ,EDⅢ),并制备两种免疫原的鼠多克隆抗体。方法 通过Vero-E6细胞培养扩增ZIKV,提取病毒总RNA并反转录为cDNA,利用E和EDⅢ基因的cDNA序列构建原核表达载体pET32a/E和pET28a/EDⅢ,转入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni⁺柱亲和层析法纯化蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,采集抗血清,间接ELISA法测定效价,Western Blot检测特异性。结果 成功表达并纯化重组蛋白E和EDⅢ,获得的多克隆抗体效价均达到1:409 600,Western Blot检测多克隆抗体可特异性识别重组E蛋白和EDⅢ以及天然E蛋白。结论 成功制备出特异性抗寨卡病毒E蛋白和EDⅢ的鼠源多克隆抗体,为深入探索寨卡病毒致病机制、检测方法和免疫策略奠定了研究基础。     

2型猪链球菌细胞分裂蛋白GpsB的原核表达及其鉴定

目的 利用原核表达系统诱导表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,S.suis 2)分裂相关因子GpsB重组蛋白,为后续研究奠定基础。方法 以S. suis 2菌株05ZYH33全基因组DNA为模板,经PCR扩增得到目的基因片段。目的基因经双酶切后连接至表达载体pET32a,转化大肠杆菌(Escherichia coli, E. coli)DH5α感受态细胞。重组质粒经测序鉴定正确后转化E. coli BL21感受态细胞。获得的重组表达菌经IPTG诱导表达目的蛋白。利用Ni离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot 鉴定。利用重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果 成功构建出重组表达载体pET32a^gpsB,并经IPTG诱导表达出目的蛋白。重组蛋白主要存在于表达菌裂解液上清中,分子质量约30 kD,与预期大小一致。Western blot 检测发现,该蛋白能被His-Tag 单克隆抗体特异性识别。制备的多克隆抗体能特异性识别重组GpsB蛋白(rGpsB)。结论 成功表达和纯化了rGpsB并获得了该蛋白的多克隆抗体,为进一步研究该蛋白在S.suis 2 分裂过程中的作用鉴定了基础。     

登革2型病毒贵州分离株NS1部分基因原核表达蛋白及其多克隆抗体制备

目的原核表达、纯化DENV-2贵州分离株NS1部分序列表达蛋白,并制备其多克隆抗体以研究其功能。方法合成DENV-2M株NS1部分基因序列,克隆到原核表达载体pET28(a),转化大肠埃希菌BL21(DE3);用IPTG诱导表达,Ni柱亲和层析纯化、回收融合蛋白;用纯化融合蛋白免疫BALB/c鼠,制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体效价。结果原核表达了NS1部分序列融合蛋白,并获得了其多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1∶800。Western blot检测该蛋白能被His标签抗体识别。结论 DENV-2M株NS1部分序列表达蛋白可诱导小鼠产生较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究DENV-2M株NS1部分序列表达蛋白的免疫原性奠定了基础。     

刚地弓形虫peroxiredoxin基因的克隆表达与免疫原性分析

目的对刚地弓形虫peroxiredoxin(TgPrx)基因进行克隆、表达和免疫原性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取总RNA;设计合成引物并引入EcoRI和XhoI酶切位点,RT-PCR扩增编码TgPrx的基因片段克隆到原核质粒pET30a(+)中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE进行鉴定,重组蛋白用Western blotting分析其免疫原性。结果从弓形虫RH株cDNA中扩增出591bp的TgPrx基因片段,并成功构建重组质粒pET30a(+)/TgPrx;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌BL21/DE3中高效表达。重组蛋白的相对分子量约32kDa,Western blotting显示其能被兔抗弓形虫免疫血清识别。结论RH株刚地弓形虫peroxiredoxin可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有免疫原性,有望作为弓形虫疫苗的候选抗原。     

弓形虫表面抗原SAG1基因自杀性DNA疫苗的构建及免疫原性检测

目的 构建表达弓形虫表面抗原SAG1的自杀性DNA疫苗pDREP-SAG1并检测其免疫原性。方法 以弓形虫RH株基因组DNA为模板,PCR扩增SAG1基因(GenBank No.HM776940.1),克隆至甲病毒复制子载体pDREP-eGFP中替换原有的eGFP基因,菌液PCR、双酶切及测序鉴定重组质粒。重组的自杀性DNA疫苗pDREP-SAG1经股四头肌注射并联合瞬时电穿孔免疫BALB/c小鼠,同时以原质粒pDREP-eGFP作为对照组,间隔3周后以相同条件再免疫1次,收集小鼠血清,以弓形虫裂解抗原Western blotting检测其诱导产生的特异性抗体。结果 从弓形虫基因组中PCR扩增得到1 011 bp长度的SAG1基因,成功构建重组质粒pDREP-SAG1。Western blotting结果显示,重组质粒免疫的小鼠血清能特异性地识别虫体抗原中的SAG1抗原。结论 成功构建了弓形虫自杀性DNA疫苗pDREP-SAG1,能诱导小鼠产生特异性的抗体,具有免疫原性。     

淡色库蚊视蛋白主要抗原域的原核表达及多克隆抗体制备

目的为进一步研究蚊视蛋白参与杀虫剂抗性的相关分子机制和将其作为现场抗性检测靶标提供多克隆抗体。方法以前期制备的重组质粒pGEM-T Easy/opsin为模板,通过基因工程手段克隆视蛋白基因胞外区片段,构建原核载体,IPTG诱导表达蛋白,并利用His亲和层析以及肠激酶酶切片段获得纯度较高的蛋白,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,Western blot鉴定抗体特异性。结果成功构建淡色库蚊视蛋白主要抗原域的原核表达载体,经IPTG 1mmol/L诱导3h后高效表达可溶性重组蛋白,经His亲和层析及肠激酶酶切后获得纯度较高的蛋白,制备的多克隆抗体经Western blot证实能特异性地识别蚊视蛋白而不与非特异性蛋白结合。结论成功构建了淡色库蚊视蛋白主要抗原域的原核表达载体,制备的抗重组蛋白多克隆抗体特异性好,效价较高,为进一步研究视蛋白参与杀虫剂抗性的分子机制和将其作为现场抗性检测靶标提供了基础。     

弓形虫表面抗原IMP1的克隆 原核表达及免疫学鉴定

目的 目的 克隆刚地弓形虫强毒RH株的表面抗原免疫作图蛋白1 （Immune mapped protein?1, IMP1）, 并对其进行原 核表达纯化、 鉴定。方法 方法 采用逆转录法合成刚地弓形虫RH株的第一链cDNA, 以此为模板, 用PCR法扩增野生型IMP1 基因的最大开放阅读框 （ORF） 序列, TA克隆测序鉴定后, 插入原核表达载体pET28b中, 构建重组表达载体pET28b? IMP1, 经双酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌E.coli BL21 （DE3）, 经异丙基硫代?β?D?半乳糖苷 （IPTG） 诱导表达携带6 × 组 氨酸标签的IMP1融合蛋白, 改变温度、 诱导时间和IPTG浓度以优化诱导表达条件并测定蛋白可溶性, 通过镍离子螯合 （Ni 2+ ?NTA） 亲和层析纯化IMP1融合蛋白, 经Western blotting验证重组蛋白的特异性。结果 结果 在弓形虫RH株速殖子cD? NA中成功调取了IMP1基因的ORF序列, 并通过TA克隆和测序鉴定了IMP1基因的正确性, 在此基础上构建了原核表达 重组质粒pET28b?IMP1, 经双酶切和测序验证了重组载体的正确性, 并通过条件筛选确定了IMP1的最佳表达条件为 20 ℃下0.3 mmol/L IPTG诱导9 h。经镍柱亲和层析纯化后, IMP1全蛋白表达量和可溶性均较好, 与镍柱填料有较高的亲 和力, 能实现高效纯化。经SDS?PAGE及 Western blotting鉴定, IMP1具有良好的免疫活性。结论 结论 新型强毒弓形虫RH 株的表面抗原IMP1可在大肠杆菌原核表达系统中高效表达, 全长蛋白可溶, 性状稳定。本研究为进一步制备IMP1多克 隆抗体, 进行后续的体内表达研究以及抗弓形虫感染亚单位疫苗的构建和IMP1晶体结构研究奠定了基础。     

弓形虫腺苷激酶基因的克隆、表达及多抗血清的制备

目的克隆弓形虫RH株腺苷激酶(AK)基因,构建原核表达载体pET28a/AK,表达AK重组蛋白,利用此重组蛋白免疫新西兰白兔制备多抗血清。方法收集、纯化弓形虫RH株速殖子,提取总RNA。设计合成的引物并引入BamHI和XhoI酶切位点,应用RT-PCR扩增弓形虫AK基因片段,目的基因插入克隆载体pGEM-T,提取重组质粒,BamHI和XhoI双酶切获得目的基因,插入原核表达质粒pET28a中,重组子双酶切、PCR和测序鉴定,转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3)并以IPTG诱导表达。亲和层析法纯化重组蛋白抗原,SDS-PAGE和Western blotting验证表达量和免疫活性,免疫新西兰白兔,收集多抗血清,ELISA测定多抗滴度,Western blotting鉴定免疫活性。结果从弓形虫RH株cDNA中扩增出1 092bp的AK目标基因片段,并构建原核表达载体,诱导含pET28a/AK的宿主菌获得了高浓度、与预期分子量大小相符的表达产物,经Ni2+亲和层析法纯化获得了高纯度的rAK蛋白,Western blotting显示rAK能够被TORCH试剂盒中的Tox-IgG阳性控制血清识别,获得了纯化的重组蛋白。rAK蛋白免疫新西兰白兔,获得滴度为1∶106多价抗血清。结论成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了AK基因,构建了pET28a/AK重组质粒,并获得了高效表达,免疫新西兰白兔获得了高效价多克隆抗体,为弓形虫iRNA及弓形虫病的免疫诊断奠定了基础。     

重组刚地弓形虫MIC8 CTD蛋白及其多克隆抗体的制备

目的制备弓形虫微线体蛋白8羧基端胞质尾(MIC8 CTD)重组蛋白及其多克隆抗体。方法以弓形虫基因组为模板,PCR扩增MIC8 CTD基因片段,构建MIC8 CTD/pGEX-4T-1原核表达系统;IPTG诱导表达GST-MIC8CTD融合蛋白;用纯化的融合蛋白加免疫佐剂免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,亲和层析纯化并分析抗体的特异性及效价。结果构建了MIC8 CTD原核表达系统,表达并纯化了GST-MIC8 CTD融合蛋白;获得了抗该蛋白的兔源性抗血清,纯化后的多克隆抗体能特异识别MIC8 CTD,ELISA测定抗体效价为1∶8 000。结论制备的GST-MIC8 CTD融合蛋白具有免疫原性,用该抗原免疫动物可获得高效价的多克隆抗体。     

重组人神经肽Y融合蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备与鉴定

目的：构建人神经肽Y（NPY）基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备兔抗人NPY抗血清。方法：取已构建好且经测序确认无误的再组质粒pET28a—NPY转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS—PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化,以纯化后的融合蛋白pET28a—NPY为抗原免疫家兔,获得抗血清,Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清。结果经IPTG诱导含有pET28a—NPY重组质粒的DE3菌,表达出重组人NPY融合蛋白。重组蛋白经Ni^2＋-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白,用纯化的融合蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体,Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论：成功表达了人NPY蛋白并获得了其多克隆抗体,为进一步研究人NPY蛋白的功能奠定了基础。     

2型猪链球菌FtsZ重组蛋白的制备及其酶活性测定

目的制备2型猪链球菌丝状温度敏感蛋白(Filamentous temperature-sensitive protein Z,FtsZ)重组蛋白并测定其水解三磷酸鸟苷(GTP)的酶活性。方法从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组中PCR扩增目的基因ftsz,构建重组表达质粒pET28a-ftsz,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,Ni 2+亲和层析柱纯化重组蛋白,Western blot分析。重组蛋白免疫新西兰兔后收集多抗血清,间接ELISA法检测抗体效价,用孔雀绿-磷酸检测法测定FtsZ重组蛋白的GTP酶活性。结果成功构建pET28a-ftsz重组表达质粒;纯化获得大量纯度较高的FtsZ重组蛋白;ELISA检测兔多抗血清效价达1∶13 107 200;Western blot显示FtsZ重组蛋白能够与His-Tag单抗和兔多抗血清发生反应;以GTP为底物检测重组蛋白具有GTP酶活性。结论成功制备了具有GTP酶活性的2型猪链球菌FtsZ重组蛋白并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究2型猪链球菌FtsZ在细胞分裂调控过程中的作用奠定基础。     

猪链球菌2型中国强毒株CovR重组蛋白及其抗体的制备

目的通过构建pET32a-covR原核表达质粒,表达并提纯CovR重组蛋白,制备其多克隆抗体。方法采用PCR法,从四川资阳病人分离株05ZYH33基因组扩增CovR的编码基因covR,构建重组表达质粒pET32a-covR,转化E.coliBL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE鉴定后,His亲和层析柱纯化CovR重组蛋白;免疫新西兰兔制备特异性抗体,Western blot检测兔多抗血清的特异性,间接ELISA检测其滴度。结果covR基因在原核细胞中得到高效表达,重组蛋白免疫新西兰兔后血清效价高达1∶204800,且重组蛋白能够与之发生特异性的反应。结论成功构建了表达载体pET32a-covR,可在E.coliBL21中高效表达,制备了特异性抗体,为进一步研究CovR的调控机理奠定了基础。     

日本血吸虫表膜蛋白Tetraspanin 2-A基因的克隆、 表达与鉴定

目的 扩增并表达日本血吸虫表膜蛋白(SjTsp2-A)基因 SjTsp2。 方法 根据与曼氏血吸虫表膜蛋白 SmT-sp2 基因同源的SjTsp2 序列(编号为AY810722)设计引物, 体外扩增目的蛋白基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a, 转化至大肠埃希菌 (E. coli) BL21株, 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达, 用纯化的重组蛋白免疫小鼠, ELISA检测其血清抗体效价, 蛋白质印迹 (Western blotting)分析鉴定其免疫反应性。 结果 PCR扩增获得SjTsp2基因大环核苷酸序列为 228 bp, 与曼氏血吸虫表膜蛋白(SmTsp2)的氨基酸序列同源性为 52%。 SjTsp2基因亚克隆入pET28a并可溶性表达, 免疫小鼠可产生高滴度(最高1 ∶ 32 000)特异性抗体。Western blotting分析结果表明, 纯化的SjTsp2-A蛋白能被疫区居民血吸虫抗体阳性者血清、急性及慢性血吸虫病患者血清识别,与健康人血清无反应。 结论 日本血吸虫表膜蛋白基因SjTsp2在体外获得表达, 其表达蛋白具有一定的抗原性。     

刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2基因片段克隆、表达及抗原性分析

目的克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)磷酸甘油酸变位酶2(TgPGAM2)基因片段,并分析其抗原性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA。PCR扩增TgPGAM2基因。扩增产物经双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序。将测序正确的重组质粒pET30a(+)-TgPGAM2转化至E.coli BL21并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。以兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白的抗原性。结果PCR扩增产物约为750 bp。菌落PCR、双酶切和测序结果显示,重组质粒pET30a(+)-TgPGAM2构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约30 000的可溶性重组蛋白。Western blotting分析证实其能被兔抗弓形虫血清识别。结论刚地弓形虫RH株TgPGAM2基因片段可在原核表达系统中表达,且该可溶性重组蛋白具有抗原性。     

弓形虫棒状体蛋白18的原核表达及免疫分析

目的 克隆刚地弓形虫ROP18基因,进行原核表达及重组蛋白的免疫分析。方法 提取弓形虫RH株基因组DNA,经PCR获得ROP18基因片段,经双酶切分别连入原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+),构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。IPTG诱导表达后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳及Western-blot检测。结果 PCR得到约1 665 bp目的基因片段,单、双酶切及PCR鉴定结果显示成功构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18;经IPTG诱导后,ROP18基因在大肠杆菌中高效表达;SDS-PAGE电泳及Western-blot分析显示,pET28a-ROP18在相对分子质量约60 kD的位置出现目的蛋白条带,pET32a-ROP18在相对分子质量约83 kD的位置出现目的蛋白条带,均与理论值相符;Western-blot结果显示重组蛋白与弓形虫慢性感染小鼠血清具有特异免疫反应性。结论 成功克隆和表达了ROP18基因,所表达的重组蛋白具有免疫效应,为其功能研究奠定基础。     

结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL的表达及鉴定

目的　表达结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL ,鉴定其生物学活性并制备其多克隆抗体。方法　采用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出icl基因片段 ,将其插入原核表达质粒pQE30 ,构建重组质粒 pQE30 icl。将pQE30 icl转化大肠杆菌 ,用IPTG诱导目的基因表达。Western blot免疫印迹法鉴定后纯化该表达产物 ,测定其酶活性并用此纯化蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果　序列分析发现PCR扩得的icl有两个核苷酸突变 ,但均为无义突变。在大肠杆菌中表达的目的产物经SDS PAGE分析约为 4 7kDa。免疫印迹分析证实目的蛋白与阳性结核病患者抗血清产生特异性反应。纯化的目的蛋白异柠檬酸裂解酶的酶活性为 16 .7u/mg。双向免疫扩散法测定目的蛋白免疫兔血清的抗体效价为 1 32。结论　研制出的结核分枝杆菌重组ICL具有异柠檬酸裂解酶活性和抗原性 ,重组ICL和抗ICL免疫血清的制备为抗结核分枝杆菌潜伏感染的研究奠定了必要的物质基础。     

旋毛虫新生幼虫期特异性T668 cDNA在大肠埃希菌中的表达及鉴定

目的对旋毛虫新生幼虫期特异性T668cDNA进行表达及鉴定,以获得基因工程抗原。方法应用PCR技术,从pBK CMV T668重组质粒中扩增到不含信号肽序列的T668cDNA片段,将目的基因克隆于原核表达载体pET28a(+),构建pETT668重组质粒,再将其转化到E.coli表达菌株DE3感受态细胞中,经IPTG诱导表达,以SDS PAGE鉴定表达产物。结果pETT668表达蛋白的分子质量单位为49ku,且随诱导时间的延长蛋白表达量逐渐增加,诱导5h时表达量达到高峰;薄层扫描结果显示,目的蛋白占菌体总蛋白的34.6%。Western blotting检测显示,表达蛋白可被感染旋毛虫家猪血清所识别。结论旋毛虫新生幼虫期特异性T668基因在大肠埃希菌中获得高效表达,且表达蛋白具有良好的抗原性。     

弓形虫膜表面抗原SAG1基因的原核表达及重组蛋白的免疫诊断价值

目的 探讨重组弓形虫膜表面抗原SAG1基因的表达产物-原核表达蛋白(rSAG1)用于弓形虫病的免疫诊断价值.方法 用异丙基-B-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导大肠埃希菌重组质粒pET28a-SAG1(pET28a-SAG1/BL21)表达,纯化重组pET28a-SAG1/BL21弓形虫膜表面抗原SAG1基因表达产物;用弓形虫缓殖子感染的鼠血清、正常鼠血清和10例弓形虫患者血清为一抗,基因表达产物rSAG1用免疫印迹法进行鉴定,比较rSAG1在弓形虫病免疫诊断中的价值.结果 纯化重组弓形虫膜表面抗原SAG1基因后获得了相对分子质量约38.5×103的表达产物rSAG1;表面抗原SAG1可被弓形虫缓殖子感染的鼠血清所识别;10例弓形虫患者血清在免疫印迹诊断中,有4例出现了弓形虫膜表面抗原SAG1基因表达产物rSAG1.结论 rSAG1具备一定的弓形虫病的免疫诊断价值.

Abstract：

Objective To investigate the diagnostic value of the recombinant surface antigen 1 (rSAG1) in immunodiagnosis of toxoplasmosis. Methods Isopropyl β-D- 1 -thio-galaetopyranoside (IPTG) was used to induce the expression of recombinant plasmid pET28a-SAG1 of Escherich coli(pET28a-SAG1/BL21 ). The expression products (rSAG1) of pET28a-SAG1/BL21 were identified by Western blotting. The serum of mice infected with Toxoplasma gondii tachyzoites, normal mouse serum and the serum from 10 toxoplasma gondii patients were used as primary anti-Toxoplasma gondii antibodies, and the rSAG1 gene products were identified by Western blotting, by which the diagnostic value of rSAG1 in Toxoplasmosis was compared. Results After induction and purification, rSAG1 protein was obtained and its relative molecular mass was 38.5 × 103. The fusion protein could be recognized by the serum of mouse infected with Toxoplasma gondii tachyzoites, rSAG1 of expression products of surface membrane antigen SAG1 gene from Toxoplasma Gondii could be detected in 4 cases from 10 patients by Westem blotting.Conclusion The rSAG1 has a potential value in the immunodiagnosis of Toxoplasmosis.