2型猪链球菌cps2D基因敲除株的构建及其基本生物学特性的研究北大核心CSCD

目的构建2型猪链球菌荚膜多糖基因簇中cps2D基因敲除株(Δcps2D),比较野毒株05ZYH33与敲除株Δcps2D基本生物学特性的差异。方法设计合成引物L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2,分别扩增cps2D基因上、下游同源臂L片段、R片段及Spc^(R)抗性基因S片段,将3个片段连接至pUC19线性载体上,构建敲除质粒pUC19::cps2D。将敲除质粒电转导入05ZYH33感受态细胞后,利用Spc^(R)抗性平板筛选敲除株,并通过组合PCR和RT-PCR进一步验证。比较野毒株05ZYH33和敲除株Δcps2D细菌生长特性、溶血活性、革兰染色、细菌链长、荚膜形态等方面的异同。结果L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2三组引物分别扩增出L(1030 bp)、R(1030 bp)以及S(1130 bp)基因片段;通过无缝克隆的方法成功构建出敲除质粒pUC19::cps2D;电转入感受态细胞后获得69个克隆,筛选出26个疑似敲除株;组合PCR以及RT-PCR筛选后获得cps2D基因敲除株Δcps2D;与野毒株05ZYH33相比,Δcps2D对数期生长变缓,链长显著变短,荚膜稀疏变薄。结论成功构建cps2D基因敲除株,为后续进一步研究其调控荚膜合成的作用机制奠定基础。     

肝癌及癌旁组织中P~(53)基因第七外显子转录水平的表达差异及临床意义

目的 :研究启东区肝癌中 P53基因第七外显子转录水平的表达及其与患者临床病理特征间的关系。方法 :通过 RT- PCR确定 P53基因第七外显子在 47对肝癌标本中的表达 ,并分析其与肝癌患者临床病理特征间的关系。结果 :P53基因第七外显子在肝癌及其癌旁组织中均显示差异表达 ,其中 1 7例为上调表达 ,30例为下调表达 ,上下调表达之间差异显著 ;女性、年龄≥ 45岁、AFP( + )、HBs Ag( + )、癌栓 ( + )、肝硬化、病理 Edmondson's 级的病例中 P53基因第七外显子均呈显著下调表达 ;Edmondson's I级病例肝癌组织中 P53基因的 EI显著高于 Edmondson's 级病例。结论 :启东肝癌中 P53基因第七外显子转录水平上存在表达差异 ,且其异常表达与肝癌的临床病理特征有关     

CDKN2/p16基因在四种原发恶性肿瘤中存在状态的研究

目的 :研究CDKN2 /p16基因缺失和蛋白丢失在非小细胞肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌 4种原发恶性肿瘤中的作用。方法 :采用免疫组织化学法和多重PCR技术对 68例 (非小细胞肺癌 3 1例 ,食管癌 15例 ,胃癌 13例 ,乳腺癌 9例 )原发肿瘤组织标本进行CDKN2 /p16基因第一、第二外显子纯合缺失和p16蛋白表达丢失分析研究。结果 :第一或 (和 )第二外显子总缺失率为 13 .2 % ( 9/68) ,蛋白丢失率为 44% ( 3 0 /68) ,不同肿瘤组织标本的p16基因缺失率和蛋白丢失率差别很大。结论 :CDKN2 /p16基因是重要的多肿瘤抑制基因 ,在不同肿瘤组织中其失活方式不完全相同。     

核干细胞因子基因在人肝癌组织及细胞中转录特征及临床意义

目的 研究核干细胞因子(nucleostemin,NS)基因在肝癌组织和细胞中的表达特性,探讨其在肝癌发生中的意义.方法 用PCR方法从人肝癌cDNA中分别进行NS片段和全长基因的扩增,并将扩增产物连接到pMD18-T载体进行测序验证;在40例肝癌和癌旁组织,以及3种肝癌细胞系cDNA中进行NS片段的PCR扩增及分析.结果 分别从肝癌cDNA克隆到了NS基因的部分片段(450 bp)及全长(1 650 bp);发现在肝癌组织中NS的表达高于癌旁组织,临床病例分析表明3期和4期病例NS基因上调表达显著高于下调表达;肝癌细胞株分析结果提示,NS基因随肝癌细胞转移能力的增加表达量增加.结论 NS基因参与肝癌细胞的增殖过程,对肝癌的发生起促进作用.     

加强医院卫生经济管理的几点做法

为了加强医院卫生经济管理，提高医院的经济实力，促进医院建设和发展，我院从1995年开始，试行了以成本核算为基础的综合性卫生经济管理模式。对军队病人医疗经费的补贴和如何提高经济效益等方面作了一些有益的探讨和尝试，现报告如下。     

细胞生物学PBL教学法研究

PBL(problem-based learning)是以问题为基础的学习方法.细胞是生命活动基本单元,细胞生物学内容是人类不断应用当代科技解决细胞科学问题而积累形成的,它涉及所有生命活动.细胞的发现和细胞生物学的形成与发展依赖于前人敏锐的观察力、思考力以及现代物理学、化学、生物信息和系统论研究技术的应用.再现和模拟以问题为轴心的知识发现过程是开展PBL法教学的重要组成,有助于学生探究和学习能力的提高,体现新的教学理念.     

人类凋亡相关新基因APG的克隆表达及其与肝癌关系

研究和克隆新的肝癌凋亡相关基因，探索肝癌发生机制。采用同源筛选、RT—PCR等克隆肝癌凋亡相关基因APG，分析其在肝癌及癌旁组织中表达，测序比对，研究其与肝癌之间相关性。克隆了一个肝癌凋亡相关基因，cDNA全长为563bp。其在肝癌及癌旁组织中序列存在一定差异。50例肝癌中，16％(8／50)为上调表达，84％(42/50)为下调表达(P＜0．01)。APG表达与性别、AFP大小无关(P＞0．05)，但与肿瘤大小(P＜0．05)、HBsAg(P＜0．01)、分化程度(P＜0．01)、包膜侵犯(P＜0．01)、临床分期(P＜0．01)、血管癌栓(P＜0．01)、癌旁卫星灶(P＜0．01)、包膜侵犯(P＜0．01)、临床分期(P＜0．01)、血管癌栓(P＜0．01)、癌旁卫星灶(P＜0．01)、Ki—67蛋白表达(P＜0．01)、细胞凋亡(P＜0．05)、P53蛋白表达(P＜0．01)密切相关。APG是肝癌凋亡相关的下调基因，其表达与肝癌的某些临床病理特征有关。     

肺癌组织CDKN2/p16基因点突变的分析

目的 研究我国肺癌组织中CDKN2／p16基因点突变的发生情况。方法 采用聚合酶链反应－单链构象多态性和序列分析的方法，对89例肺癌组织中CDKN2／p16基因第2外显子的点突变进行了研究。结果 在未发生第2外显子缺失的69例肺癌组织中，发现CDKN2／p16基因第2外显子变异或可疑变异者16例；对该16例进行序列分析，共发现有9例存在不同类型的基因点突变。结论 点突变是CDKN2／p16基因失活的一种形式，但不是主要形式。由点突变引起的CDKN2／p16基因失活在肺癌的发生发展中起一定的作用。     

转染纤溶酶原激活剂抑制剂－2基因对纤维肉瘤细胞侵袭能力的影响

作者将转染纤溶酶原激活剂抑制剂－２（ＰＡＩ－２）基因的纤维肉瘤细胞克隆和对照细胞铺在同位素标记的３Ｈ－细胞外基质（ＥＣＭ）上，液体闪烁计数法测定释放到培养液中的同位素。并进行裸小鼠皮下接种肿瘤细胞和组织学研究，以了解ＰＡＩ－２在肿瘤细胞侵袭过程中的作用。结果表明ＰＡＩ－２可抑制肿瘤细胞降解３Ｈ－ＥＣＭ能力，抑制率达８６．５％。ＨＥ染色种植瘤切片，光镜观察显示，在实验组瘤组织的周围有加厚的包膜，而对照组瘤组织旁无明显的包膜。包膜是肿瘤细胞侵袭的障碍，因此，重组ＰＡＩ－２可抑制纤维肉瘤细胞的侵袭能力     

原发恶性肿瘤MTS1／p16基因缺失的研究

目的:研究MTS1/p16基因在人类恶性肿瘤组织中的变化.方法:采用Southern杂交和多重PCR技术,分析了68例原发肿瘤组织标本,包括非小细胞肺癌31例、食管癌15例、胃癌13例、乳腺癌9例.结果:PCR检测癌旁组织未见p16基因缺失,而不同肿瘤组织标本的p16基因缺失差别很大,总缺失率为13.2%(9/68).Southern杂交检测p16基因的缺失率为17.7%(12/68).结论:MTS1/P16基因缺失在人类恶性肿瘤发生发展中起重要作用,是重要的多肿瘤抑制基因.