白藜芦醇对D-半乳糖诱导的WI-38衰老细胞的保护作用

目的探讨白藜芦醇对D-半乳糖诱导的WI-38衰老细胞的保护作用以及对MORF4基因表达的影响。方法D-半乳糖诱导WI-38细胞构建衰老模型;不同浓度白藜芦醇(25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L)对衰老模型作用24h,并与对照组比较:MTT法检测细胞增殖活力,SA-β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老程度,比色法检测SOD活性;反转录半定量PCR检测MORF4基因的表达。结果与衰老模型组相比,白藜芦醇组(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)细胞存活率升高(F=81.95,P0.05),SA-β-半乳糖苷酶染色率下降(P0.05),白藜芦醇各组总SOD活力均高于衰老模型组(P0.05)及对照组(P0.05),以100μmol/L白藜芦醇浓度最明显。100μmol/L白藜芦醇能明显上调MORF4基因的表达(P0.05)。结论白藜芦醇对衰老WI-38细胞有保护作用,以100μmol/L白藜芦醇的保护作用最强,可以明显上调衰老细胞MORF4基因的表达。     

p,p'-DDE和β-BHC联合染毒对大鼠离体支持细胞脂质过氧化的影响

目的 研究p,p‘-DDE和β-BHC联合染毒对大鼠离体支持细胞脂质过氧化的影响.方法 通过离体培养SD大鼠支持细胞的四甲基偶氮唑盐(MTT)实验,确定后续实验的染毒剂量,p,p‘-DDE和β-BHC的染毒浓度均为10、30、50μmol/L,p,p‘-DDE β-BHC联合染毒浓度为10μmol/L p,p‘-DDE 10μmol/L β-BHC,30μmol/L p,p‘-DDE 30μmol/L β-BHC,50μmol/Lp,p‘-DDE 50μmol/L β-BHC,检测染毒后支持细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率、总超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量的变化.结果 50μmol/L的p,p‘-DDE、β-BHC均可使支持细胞的吸光度(A)值显著下降(P＜0.05).睾丸支持细胞LDH的漏出率随染毒浓度的增加而明显增加(P＜0.05),二者以不同浓度联合染毒时支持细胞LDH的漏出率均显著高于对应浓度的单独染毒(P＜0.05).不同浓度的p,p‘DDE、β-BHC及二者联合染毒均可使细胞内总SOD活力显著降低(P＜0.05)、MDA的含量增加(P＜0.05),且联合染毒时MDA的含量与二者单独染毒时相比均有显著增加(P＜0.05).结论 p,p‘-DDE、β-BHC单独和联合作用均可以引发睾丸支持细胞脂质过氧化,p,p‘-DDE和β-BHC对支持细胞的联合毒性作用具有一定的协同效应.     

抑制野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1提高肺腺癌细胞对砷剂的敏感性

目的研究抑制野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1(wild-type p53-induced phosphatase 1,WIP1)提高肺腺癌细胞对砷剂的敏感性及其分子机制。方法设计并合成WIP1编码基因的靶向siRNA,以Lipofectimient 2000转染入肺腺癌A549细胞,从而抑制WIP1蛋白的表达。运用Western-blot检测抑制WIP1对三氧化二砷(As_2O_3)诱导的P53磷酸化蛋白及其下游效应因子的影响;采用流式细胞术检测抑制WIP1后细胞凋亡情况;以噻唑蓝(MTT)法检测抑制WIP1后细胞的存活率。结果以siRNA技术成功将A549细胞中WIP1 mRNA和蛋白表达水平均抑制70%左右。相同浓度As_2O_3(5~40μmol/L)处理后,WIP1表达抑制组细胞中P53 ser15表达低于对照组,而P53 ser46表达显著高于对照组。此外,相同浓度As_2O_3(10~40μmol/L)处理后,WIP1表达抑制组中P53 ser15下游效应因子——P53上调凋亡诱导蛋白(P53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)的表达水平显著低于对照组,而P53ser46下游效应因子——细胞周期调节蛋白P21的表达显著高于对照组。与之对应的是,相同剂量As_2O_3(5~40μmol/L)作用下,WIP1表达抑制组细胞的凋亡率和细胞死亡率均显著高于对照组。结论抑制肺腺癌细胞中WIP1的表达可通过促进P53磷酸化进程提高砷引发肺腺癌细胞凋亡的效率。     

乙苯对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52e氧化损伤及凋亡的影响

目的 探讨乙苯对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52e的氧化损伤及凋亡的影响.方法 体外培养的NRK-52e细胞暴露于30、60、90、120μmol/L的乙苯24 h后,观察NRK-52e细胞形态和存活情况,用MTT法测定NRK-52e细胞的存活率,检测NRK-52e细胞内丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的酶活力变化,并应用PI荧光活性染色检测乙苯致NRK-52e细胞的凋亡率.结果 30 μmol/L染毒剂量组与对照组相比,其形态学改变无明显差异,60 μmol/L及90 μmol/L染毒剂量组细胞轮廓逐渐清晰,细胞折光度增强,细胞逐渐变小变圆,皱缩成球形,部分细胞破裂;120μmol/L染毒剂量组细胞大量死亡,悬浮细胞明显增多.与对照组相比,60μmol/L、90 μmol/L及120μmol/L剂量组细胞存活率及SOD活力、GSH含量、CAT活力均显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);90 μmol/L及120 μmol/L剂量组细胞内MDA含量及GSH-Px活力均显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 乙苯可能通过降低NRK-52e细胞内CAT、GSH-Px和SOD的酶活力及GSH含量引起细胞的氧化损伤.     

硒对体外心肌细胞过氧化损伤保护和骨架蛋白actin表达的影响

目的探讨硒对H2O2损伤心肌细胞的保护作用以及α-actin和β-actin表达的影响。方法培养乳鼠心肌细胞随机分为对照组,H2O2组,Se 0.05、0.5、1.0和5.0μmol/L组,采用透射电镜观察实验心肌细胞的超微结构,比色法检测心肌细胞培养介质中LDH和MDA含量,Western Blot检测α-actin和β-actin蛋白的表达。结果 Se 0.5μmol/L可减轻心肌细胞超微结构损伤;各加硒组LDH和MDA水平较H2O2组显著降低(P<0.05),较对照组显著升高(P<0.05),其中Se 0.5μmol/L组LDH和MDA含量在各加硒组中最低;Se 0.5μmol/L组α-actin表达水平较H2O2组升高并高于正常对照组;Se 0.5μmol/L组β-actin表达水平较损伤组升高,低于正常对照组。结论 0.5μmol/L硒对H2O2损伤心肌细胞具有较好的保护作用,可维持和保护α-actin和β-actin的表达,参与细胞骨架蛋白重构。     

检测肿瘤凋亡和p53再生化合物对不同p53状态人脑胶质瘤细胞的生长抑制作用

目的探讨p53靶向小分子RITA对不同p53状态人脑胶质瘤细胞的生长抑制作用。方法基因测序确定实验所用U251和U87细胞中p53基因状态;MTS法检测0μmol/L、1μmol/L、4μmol/L、10μmol/L RITA作用于U251和U87细胞0 h、24 h、72 h、120 h、168 h的增殖情况;qRT-PCR法和Western blot法分别检测抑癌基因p53、p21的mRNA和蛋白质表达水平;计算抑制率和IC50。结果基因测序结果表明实验所用U251细胞表达突变型p53基因而U87表达野生型;RITA对2种细胞的增殖均有显著抑制作用,且对U251的抑制作用更强;5μmol/L RITA作用下,U251中p53、p21表达均显著增加,U87中p21表达增加,p53 mRNA表达变化不明显,但p53蛋白累积显著增加;RITA作用于U251、U87细胞24 h和120 h的IC50分别为123.870μmol/L、776.682μmol/L和2.817μmol/L、7.147μmol/L。结论RITA能有效促进人脑胶质瘤细胞U251和U87中p53和p21基因表达,发挥高效生长抑制作用,且含突变型p53的U251比含野生型p53的U87效果显著。     

槲皮素抑制HSP70表达的体外研究

目的探讨不同浓度槲皮素抑制正常细胞和肿瘤细胞热休克蛋白70(HSP70)的表达规律,寻找槲皮素抑制HSP70表达的最佳浓度,为研究HSP70的功能提供一种可行的方法。方法加入槲皮素至终浓度为50,100,150,200μmol/L,继续37℃培养6 h后,置42℃水浴受热1 h,于37℃恢复培养2 h,收获细胞。设立37℃培养组(正常对照)、42℃培养组(阳性对照)和0.1%DMSO组(溶剂对照)。分别处理肿瘤细胞株A549细胞和正常细胞株2BS细胞,用Western-blot检测细胞HSP70的表达水平。结果在A549细胞和2BS细胞中,随着槲皮素浓度的增加,HSP70表达逐渐降低。与正常对照组相比,阳性对照组和溶剂对照组的HSP70水平表达增高,差异有统计学意义(P<0.01)。在A549细胞中,当槲皮素浓度达到50μmol/L时,HSP70表达开始下调,但与阳性对照组相比,差异没有统计学意义(P>0.05);当槲皮素浓度达到100μmol/L时,与阳性对照组相比,HSP70表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);当槲皮素浓度达到150,200μmol/L时,与阳性对照组相比,A549细胞HSP70表达降低更加明显(P<0.01);150μmol/L组和200μmol/L组相比,HSP70水平差异无统计学意义(P>0.05)。在2BS细胞中,当槲皮素浓度达到50μmol/L时,HSP70表达开始下调,与阳性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);当槲皮素浓度达到100,150,200μmol/L时,与阳性对照组相比,HSP70水平也有显著性降低(P<0.01);150μmol/L组和200μmol/L组相比,HSP70水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论槲皮素可以抑制肿瘤细胞和正常细胞HSP70的表达,150μmol/L的槲皮素处理A549和2BS细胞,抑制HSP70表达的效果最佳。     

二氯乙腈对HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对Hep G2细胞凋亡的影响及相关调控机制。方法二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(Hep G2细胞)为对照组,分别以50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L DCAN染毒Hep G2细胞为处理组,培养24 h后通过Annexin V/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡情况,用荧光测定法观察Caspase 3酶活性,蛋白质印迹法(Western blotting)技术检测Hep G2细胞pro-caspase 3和P53蛋白的表达情况。结果与对照组相比,400μmol/L DCAN处理组可诱导Hep G2细胞凋亡(P<0.05),各处理组细胞内Caspase 3酶活性随着染毒剂量的增加而显著升高(P<0.05)。DCAN作用于Hep G2细胞后pro-Caspase 3和P53蛋白含量呈下降趋势,当染毒浓度达到200μmol/L以上时,pro-Caspase 3和P53蛋白表达明显低于对照组(P<0.05)。结论高浓度的DCAN可通过激活Caspase 3诱导Hep G2细胞凋亡。     

维生素C对神经元细胞生长的时间剂量效应

目的研究不同处理时间和不同剂量的维生素C(VC)对神经元细胞生长的影响。方法体外原代培养的新生SD乳鼠大脑皮层神经元细胞,在细胞生活的不同时间(D1、D4、D7、D14)加入不同浓度的VC(0～800μmol/L)共培养,用MTT法检测细胞存活率,并选取D7加入VC共培养的细胞作后续研究,观察VC对神经元细胞的突起数目、长度、胞体面积和长轴长度的影响。结果MTT结果显示:D1加入VC,800μmol/L处理组使细胞存活率降低;D4或D14加入VC,400μmol/L处理组使细胞存活率提高,而800μmol/L处理组使细胞存活率降低;D7加入VC,200、400μmol/L组的MTT值明显高于对照组,800μmol/L组的MTT值低于对照组。进一步观察发现,在D7加入VC,无论浓度如何,对细胞突起的数目无明显影响;而200、400、800μmol/L处理组能使突起长度、细胞胞体面积和长轴长度较对照组显著增高,作两两比较,400μmol/L组高于其他组。结论在细胞生长的D7加入400μmol/L的VC,其对神经元细胞的生长有明显的促进作用。     

cdk5、p35和p53基因在砷诱导的神经细胞凋亡中的改变

目的 研究cdk5、p35和p53基因表达量在As2O3诱导的神经细胞凋亡中的改变,为探讨As2O3神经毒性的机制提供基础资料.方法 将原代培养的大鼠神经元分为未处理对照组,DMSO溶剂对照组,1、5、10 μmol/L As2O3染毒组,分别用1、5、10 μmol/L As2O3溶液染毒,未处理对照组只加入培养液.染毒8h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测神经细胞活力,用流式细胞仪检测神经细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测cdk5、p35、p53基因的表达.结果 1、5、10 μmol/L As2O3染毒组神经细胞活力抑制率分别为16.77％、19.72％、27.81％.与未处理对照组和溶剂对照组相比,5和10μmol/L As2O3染毒组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).各染毒组cdk5、p35、p53基因的表达量随着染毒剂量的增加而升高,各组间p35基因表达量的差异无统计学意义(P＞0.05);cdk5和p53基因表达量的组间差异有统计学意义(P＜0.05),5和10 μmol/L As2O3染毒组cdk5基因表达量明显高于未处理对照组和溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);1、5和10 μmol/L As2O3染毒组p53表达量明显高于未处理对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);其中10 μmol/L As2O3染毒组p53基因表达量明显高于DMSO溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 cdk5、p35和p53可能参与了As2O3诱导的神经细胞凋亡过程.     

实验教学对药学专业学生综合成绩影响的调查分析

[目的]分析实验教学因素对药学专业学生综合成绩的影响,为指导实验教学、提高授课质量提供理论依据.[方法]运用自行设计的问卷对药学专业本科学生进行调查,用结构方程模型方法估计各因子间的相互关系.[结果]学习兴趣因子对学生综合成绩有显著影响,其他因子与综合成绩相关性均不显著.[结论]内在学习动机是影响学生综合成绩的关键因素,外部学习环境对其成绩影响不显著.     

紫菜粉对小鼠肠道排便功能的影响

目的研究不同紫菜粉含量的饲料的润肠通便、抑制肠道有害菌以及对粪便挥发性成分的影响。方法以小鼠为实验对象,随机分为空白组、低、高剂量3组,给予含不同紫菜粉的配合饲料30d,测小鼠体重、粪便持水量、粒数、重量、排首黑便时间、pH、大肠杆菌含量以及挥发性成分。结果在连续喂食30d后,紫菜组小鼠粪便持水量、排便粒数、重量都显著增加(P<0.05),首黑便时间缩短,其中以5%的喂食量效果较好。另外,粪便pH值随紫菜添加量的增加而升高,大肠杆菌的含量也呈浓度趋势减少,包括醇类、酚类、烃类、酮类等的挥发性臭气化合物含量下降,同样以5%的功效较好。结论动物实验表明紫菜粉中的膳食纤维具有通便、改善肠道功能和减少粪便臭味的作用。     

丙硫氧嘧啶干扰甲状腺功能的亚急性毒性研究

[目的]研究丙硫氧嘧啶(Propylthiouracil, PTU)干扰甲状腺功能的亚急性毒性状况,为PTU致甲状腺肿的组织发生学研究提供实验室基础数据.[方法]SD大鼠150只,随机分为15组,包括3、6、9、12、15、18、21d的试验组和同期对照组,对照组用玉米油灌胃,试验组用PTU的玉米油溶液灌胃,于每个实验期结束的d2麻醉后股动脉放血处死动物,取甲状腺、肝、肾、脾、胸腺,称重后进行组织病理学观察.[结果]试验组血清风TT、TT4浓度先降低再进入平缓期,TSH浓度是先升高再进入平缓期,甲状腺绝对重量和脏器系数均持续升高,和对照组相比.6d时差异有统计学意义(P<0.05).[结论]PTU 5mg/(kg. day)的剂量染毒大鼠21d,除干扰甲状腺功能,未见其他毒性反应,甲状腺在持续增生,功能尚未代偿.因此用该方法研究甲状腺的组织发生学是可行的.     

钒对作业工人情感状态影响调查

[目的]探讨钒接触对作业工人情感状态的影响及表现特征.[方法]采用WHO推荐的神经行为测试组合中的POMS情感测试问卷对钒接触人群和对照人群做测试,采用t检验及协方差分析,对符合标准的392例研究对象进行统计分析.[结果]①反映积极情绪的有力-好动得分,接钒组低于对照组,反映消极情绪的疲惫-惰性得分,接钒组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);②按接钒工龄分组分析发现,积极情绪的得分表现出随接钒工龄增加而降低的趋势,面消极情绪得分以接钒工龄10～20年的工人最高.[结论]长期接触五氧化二钒可对工人情感状态产生影响,主要表现在消极情绪增加,积极情绪降低.     

双岐杆菌活菌液对肠道菌群调节效果的研究

[目的]研究双岐杆菌活菌液调节肠道菌群的效果.[方法]通过动物实验和人体试验检测肠道菌群.[结果]双岐杆菌活菌液能增殖人体内双歧杆菌数量;在高剂量时,双歧杆菌活菌液能使动物体内的乳杆菌增殖,在中、高剂量时,能使动物体内的双歧杆菌增殖.采用双歧杆菌和肠杆菌的比值(B/E)作为指标进行分析发现,该制品可提高人体肠道微生物的定植抗力(P<0.01).[结论]所检双岐杆菌活菌液对肠道菌群有较好的调节效果.     

跳伞对空降兵脂质过氧化系统影响的初步研究

为探讨跳伞对空降兵脂质过氧化水平的影响和可能的生物学意义，测定了跳伞与否空降兵血浆中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽硫转移酶的活性和丙二醛浓度，并与正常人群的值作了比较分析。结果显示，与正常人群相比，未跳伞空降兵血浆中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽硫转移酶的活性和丙二醛浓度增高，但无显著性差异（Ｐ〉０．０５）；与未跳僮空军兵相比，跳伞后空降兵血浆三种酶活性略为增高，但无显     

核黄素阻抑致畸作用的效果观察

为研究核黄素的新功能,进行了核黄素阻抑动物致畸作用的实验。大鼠分为三个剂量组,各组动物分别以每日每头一次剂量50μg,250μg,和1000μg的核黄素灌胃一周,妊娠后各组包括对照组一律按0.75mg/kg体重的农药“敌枯双”每天灌胃染毒一次,并继续按上述方法给予核黄素。研究结果表明,核黄素对“敌枯双”染毒后孕鼠的影响,在250μg和1000μg组其吸收胎率和活胎率与对照组相比有非常显著的差异(P<0.01);50μg和1000μg组的着床率与脑畸形率也明显低于对照组。各剂量组的外观畸形率和内脏畸形率虽低于对照组,但经统计分析没有显著差异。核黄素对染毒后孕鼠的其他各项观察指标与对照组相比,差别也无统计学意义。     

微量元素锌影响老年小鼠免疫功能的实验研究

[目的]观察微量元素锌对老年小鼠免疫功能的影响,判定微量元素锌对老年小鼠的免疫作用.[方法]测定老年小鼠脾悬液中淋巴细胞转化率和腹腔液中巨噬细胞吞噬率.[结果]锌(8～10mg/kg)可显著提高老年小鼠淋巴细胞增殖反应、巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数(P<0.01).[结论]适量的锌可增强老年小鼠细胞免疫功能,提高机体巨噬细胞吞噬功能.