基于生物信息学和网络药理学研究独活寄生汤治疗绝经后骨质疏松症的分子机制

目的基于生物信息学和网络药理学筛查独活寄生汤治疗绝经后骨质疏松症(PMOP)分子机制。方法利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)筛选独活寄生汤的有效活性成分和基因靶点,并利用GEO数据库分析得到骨质疏松症相关靶基因。利用R语言对独活寄生汤与骨质疏松症相关靶基因取交集,筛选出独活寄生汤活性化合物治疗骨质疏松症的基因靶点,通过Cytoscape软件绘制基因网络,并采用String数据库构建独活寄生汤-骨质疏松症相关蛋白互助图,筛选出核心靶基因,最后采用R语言对筛选基因靶点进行GO及KEGG通路分析。在体动物实验验证独活寄生汤对绝经后大鼠骨质疏松症的机制。结果独活寄生汤包含24味中药,涉及334个有效化合物,潜在基因靶点313个。独活寄生汤治疗PMOP涉及靶点19个,GO和KEGG富集分析涉及25条信号通路,主要涉及细胞凋亡p53信号通路等。与假手术组比较,模型组骨密度、刚度和最大载荷均降低(P0.01),caspase-3、p53、p21表达均上调(P0.01),Bcl-2表达下调(P0.01);与模型组比较,独活寄生汤组能增加骨密度、刚度和最大载荷(P0.05,P0.01),caspase-3、p53、p21表达均下调(P0.05,P0.01),Bcl-2表达上调(P0.05)。结论独活寄生汤治疗PMOP具有多组分-多靶点特点,可通过p53信号通路抑制细胞衰老和凋亡并最终改善骨质疏松症状。     

基于网络药理学的银杏叶提取物防治老年性聋的作用机制研究＊

目的 基于网络药理学研究银杏叶提取物防治老年性聋的的潜在作用机制，并通过动物实验进行初步验证。方法 运用中药系统药理学分析平台（TCMSP）筛选银杏叶的有效成分，GeneCards数据库获得老年性聋相关靶点基因，微生信对基因本体论（GO）、基因组百科全书（KEGG）进行功能富集，Cytoscape3.8.2构建疾病-靶点-通路网络图。采用D-半乳糖诱导SD大鼠制备老年性聋的动物模型，腹腔注射低、中、高剂量（10、20、30 mg·kg^-1）的银杏叶提取物，运用免疫荧光染色耳蜗基底膜铺片观察毛细胞形态变化；透射电子显微镜观察螺旋神经节细胞及线粒体超微结构变化；酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清谷胱甘肽S转移酶（GST）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、丙二醛（MDA）含量；免疫印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白表达及Bcl-2/Bax比值变化。结果 GO富集主要涉及细胞衰老、过氧化物酶成分、氧化还原酶的活性等；KEGG富集相关性较高的通路包括细胞凋亡通路和氧化应激相关的谷胱甘肽代谢通路，与凋亡相关的靶点基因包括：Bcl-2、Bax、AKT1、TNF等；与谷胱甘肽代谢相关靶点基因涉及到：GSTP1、GSTM1等。动物实验证实银杏叶提取物可减轻毛细胞丢失，降低螺旋神经节细胞及线粒体损伤，提高GST、T-SOD含量，降低MDA含量，上调Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值，下调Bax表达。结论 银杏叶提取物可能通过Bcl-2/Bax通路减轻耳蜗螺旋神经节细胞和毛细胞的氧化应激和细胞凋亡来延缓老年性聋的进程。     

阿卡宁下调Trx/Akt通路诱导急性髓系白血病细胞凋亡的作用研究

目的 探讨新疆紫草Lithospermum erythrorhizon代表成分阿卡宁对急性髓系白血病细胞HL-60的抑制作用及机制。方法 取对数生长期HL-60细胞，采用台盼蓝法检测阿卡宁、紫草素处理后的细胞增殖抑制率；Hoechst 33258染色观察细胞形态；流式细胞仪检测细胞凋亡率；通过系统药理学方法筛选出阿卡宁以及急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）的共同靶点并分析得到关键靶点。通过邻苯二甲醛（o-phthalaldehyde,OPA）荧光探针法、差示扫描荧光分析实验在体外分子水平验证化合物与靶点的结合能力。通过Western blotting检测凋亡通路标志分子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteinasparate protease-3,Caspase-3)、cleaved Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2associated X protein,Bax）蛋白表达。结果 阿卡宁呈剂量相关性抑制HL-60细胞增殖。Hoechst染色后荧光显微镜下可见阿卡...     

基于网络药理学和实验验证探讨小柴胡汤治疗阿尔茨海默病的作用机制

目的 运用网络药理学结合生物信息学探讨小柴胡汤治疗阿尔茨海默病（AD）的潜在作用机制。方法 利用中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）筛选小柴胡汤的可能活性化合物及其潜在治疗靶标，从基因表达综合数据库（GEO）中获取与AD相关的差异表达基因，取交集筛选出小柴胡汤可能的靶点；对交集靶点基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析；构建化合物—靶点网络、蛋白互作（PPI）网络，进行KEGG和GO富集分析。采用β淀粉样蛋白_1-40（Aβ_1-40）诱导PC12细胞制备AD细胞模型，以小柴胡汤干预处理后，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞活率，4''，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色观察细胞形态、细胞膜电位检测、流式细胞术检测细胞凋亡、细胞荧光免疫检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）/Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达，初步验证网络药理学预测结果。结果 小柴胡汤共收集到190个化学成分和41个AD相关靶点，包括丁子香萜，槲皮素，小檗碱，原卟啉，24-Ethylcholest-4-en-3-one，β-D-呋喃核糖苷等关键化合物及Sigma非阿片类细胞内受体1（SIGMAR1），细胞周期检测点激酶1（CHEK1），非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶6（PTPN6），蛋白激酶C（PRKCH），核转录因子κB激酶亚单位β抑制蛋白（IKBKB），组织蛋白酶D（CTSD），半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3），Bax，Bcl-2样蛋白1（Bcl-2L1）等核心靶点。GO富集分析获得302个条目（P<0.05），主要与调控神经元细胞凋亡相关；KEGG通路富集获得相关通路73条（P<0.05），涉及的主要通路和生物过程包括细胞凋亡通路、脂质和动脉粥样硬化相关通路、癌症相关通路等。细胞实验表明，与空白组比较，模型组细胞活率降低（P<0.05），凋亡率升高（P<0.05）、线粒体膜电位降低，Bcl-2/Bax下调；与模型组比较，小柴胡汤组细胞活率升高（P<0.05），细胞凋亡率降低（P<0.05）、线粒体膜电位升高，Bcl-2/Bax上调，验证了预测结果的可靠性。结论 本研究揭示了小柴胡汤治疗AD多成分、多靶点、多途径的作用特点，为进一步阐释其物质基础和机制奠定了一定基础。     

桃仁膝康丸治疗骨性关节炎机制的网络药理学分析与验证

目的：以网络药理学方法探讨桃仁膝康丸治疗骨性关节炎的可能作用机制。方法：通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）搜索和筛选出桃仁膝康丸活性成分及作用靶点,检索GeneCards、OMIM和CTD数据库获得与骨性关节炎相关的非重复靶点,取交集获取中药抗骨性关节炎相关的药物活性成分靶点,使用String软件构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,利用Cytoscape 3.8.2软件构建蛋白质-蛋白质相互作用网络图,筛选核心靶点和构建药物-活性成分-骨性关节炎相关靶点网络;借助DAVID数据库进行基因本体论（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析;将活性成分与预测疾病核心靶点进行分子对接验证;免疫印迹法（Western Blot）验证对细胞凋亡效应蛋白半胱氨酸蛋白酶（Caspase,CASP）3靶点的干预。结果：从桃仁膝康丸中筛选出53个活性成分,主要作用于骨性关节炎相关55个的靶点,靶标作用主要涉及细胞凋亡、炎症、细胞自噬、细胞老化、活性氧代谢、免疫生物过程和通路;分子对接结果发现活性成分与核心靶标结合性能良好;Western Blot结果显示,桃仁膝康丸能显著...     

基于网络药理学和实验验证探讨补肾活血汤治疗中枢性老年性聋的机制

目的 结合网络药理学与实验研究探究补肾活血汤（Bushen Huoxue Decoction,BSHXD）治疗中枢性老年性聋的潜在分子机制。方法 通过TCMSP、ETCM、BATMAN-TCM数据库检索和筛选BSHXD的活性成分及作用靶点;通过Genecards、DisGeNET数据库检索老年性聋相关靶点;通过在线工具Venny 2.1获得BSHXD与老年性聋的共同靶点;通过Cytoscape软件构建BSHXD治疗中枢性老年性聋的“药物-成分-靶点-疾病”网络;使用DAVID数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析;STRING数据库进行蛋白互作分析。采用自然衰老的C57BL/6J小鼠构建中枢性老年性聋的动物模型,以BSHXD进行灌胃干预。HE染色观察各组听皮层的病理改变;免疫印迹法检测听皮层组织PI3K、AKT、mTOR、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、Bax和Caspase-3的蛋白表达;免疫荧光染色观察听皮层Caspase-3的表达;TUNEL染色观察听皮层细胞的凋亡。结果 通过网络药理学预测得BSHXD活性成分219种,BSHXD与老年性聋共同靶点1 118个。GO与K...     

基于PI3K/Akt信号通路的骨松益骨方对去势大鼠的骨保护作用

目的 基于网络药理学和动物实验探究骨松益骨方（黄芪、党参、当归等组成）治疗绝经后骨质疏松症（postmenopausal osteoporosis,PMOP）的机制。方法 通过TCMSP分析平台收集骨松益骨方活性成分、对应靶点;GeneCards、TTD等数据库收集疾病靶点;运用R语言将共同靶点取交集,绘制韦恩图;STRING数据库构建蛋白质互作网络;最后对所得共同靶点进行GO功能富集、KEGG通路富集。动物实验采用去卵巢SD大鼠动物模型,骨松益骨方灌胃12周,HE染色观察骨组织形态变化,分别采用qRT-PCR和Western Blot法检测胫骨近端骨组织中PI3K和Akt mRNA和蛋白质的表达。结果 获得骨松益骨方治疗绝经后骨质疏松症的91个活性成分、70个药物与疾病共有靶点;GO富集分析主要包含DNA结合转录激活剂活性、RNA聚合酶Ⅱ特异性,泛素蛋白连接酶结合等生物功能;KEGG通路主要包括PI3K/Akt信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、细胞凋亡等相关通路。动物实验表明骨松益骨方组骨组织形态明显改善,PI3K、Akt mRNA及蛋白的表达水平均明显升高（P<0.01）。结论...     

基于网络药理学和分子对接研究三仁汤治疗肺癌的分子机制

目的：采用网络药理学方法筛选三仁汤君药药对（SRJMP）的活性成分及核心靶点,探讨三仁汤君药药对治疗肺癌的作用机制。方法：依托中药系统药理学分析平台（TCMSP）,检索三仁汤 3 味中药相关的所有化学成分及预测作用靶点,采用STRING 数据库与 Cytoscape 软件构建“药物-活性成分-靶点”网络和蛋白互作网络,通过 ClusterProfiler、ClueGO、DAVID 数据库对核心靶点进行基因本体（GO）分析及京都基因和基因组百科全书（KEGG）通路富集。把候选作用靶点映射在 KEGG 通路图上分析结果,最后应用 AutoDock 软件进行分子对接。结果：共筛选出 40 个活性成分和 222 个相应蛋白靶点。首要分析核心靶点47 个,GO 分析共包含 117 条富集结果,KEGG 通路富集筛选出 30 条通路。结论：通过网络药理学验证了 SRJMP 多成分、多靶点、多通路的特点,其可能是通过调控免疫细胞分化,肿瘤相关信号通路以及干预细胞代谢过程,达到抗肿瘤作用。     

UPLC-Q-TOF-MS联合网络药理学和实验验证分析桃红四物汤治疗软组织损伤的作用机制

基于UPLC-Q-TOF-MS技术、网络药理学和实验验证方法探讨桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction, THSWD)治疗软组织损伤(soft tissue injury, STI)的作用机制。采用UPLC-Q-TOF-MS技术鉴定THSWD化学成分;通过TCMSP数据库筛选THSWD活性成分及靶蛋白;Cytoscape软件构建“活性成分-靶点-通路”网络,STRING数据库进行蛋白互作分析;GeneCards和CTD数据库筛选STI相关靶点;DAVID数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析;构建软组织损伤大鼠模型,通过蛋白免疫印迹法探讨THSWD对大鼠软组织损伤相关通路关键靶点的影响。筛选得到THSWD活性成分40种,潜在作用靶点141个,与STI相关靶点交集20个。活性成分作用靶点富集分析得到128条KEGG通路,主要富集在氨基酸合成与代谢、疾病信号通路、细胞凋亡、炎症等相关的通路。对“活性成分-靶点-通路”网络进行可视化分析,得到THSWD作用于STI的5种关键活性成分和6个关键蛋白。蛋白免疫印迹法实验结果表明,THSWD可以显著降低大鼠STI样本中细胞凋亡蛋白酶-3(CASP3)和B细胞κ轻肽基因增强子核因子1(NFKB1)的蛋白表达及磷酸化水平,降低前列腺素G/H合酶2(PTGS2)蛋白表达,增强细胞肿瘤抗原p53(TP53)蛋白表达。UPLC-Q-TOF-MS、网络药理学和实验验证结果表明,THSWD中活性成分可能通过调控NF-κB信号通路及细胞凋亡通路中的关键蛋白,发挥抗炎、抗氧化应激的作用,从而发挥治疗STI的作用。     

参麦注射液对乳鼠心肌细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨参麦注射液对心肌细胞凋亡通路的影响。方法:原代培养心肌细胞,AngⅡ诱导凋亡。MTT法检测线粒体活性,流式细胞仪检测凋亡率及线粒体膜电位,免疫组化染色检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果:参麦注射液明显降低细胞凋亡率,增高线粒体活性和膜电位,升高Bcl-2蛋白表达,降低Bax、Caspase-3蛋白表达。结论:参麦注射液可抑制心肌细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡通路密切相关。     

《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》虚劳病精气神调治原则与方法

从中医精气神辨识角度认识虚劳病,总结虚劳病病因病机。通过观察面容、形态、神色、五官、舌象、脉象等辨识精气神状态,确立虚劳病精气神调治原则。在精气神辨识理论指导下,对《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治》相关条文、方药进行解析,总结虚劳病相关治则治法。根据精气神调养原则,为虚劳病临床应用提供指导。     

五脏补血法理论及临床应用探讨

血液的生成与五脏关系密切,据此确立五脏补血法:养心补血法、健脾补血法、润肺补血法、滋肝补血法、益肾补血法。     

丹栀逍遥散及其提取物镇静催眠作用研究

目的探讨丹栀逍遥散原方及提取物镇静催眠作用。方法将小鼠分为14组,正常对照组、原方组及各组分低中高剂量组,通过测定小鼠自主活动次数,采用戊巴比妥钠延长睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量镇静催眠协同作用实验观察丹栀逍遥散原方及各提取物镇静催眠作用。结果丹栀逍遥散原方及提取物均无改变小鼠自主活动的功能,表明均无中枢兴奋性作用;丹栀逍遥散石油醚提取液高、中剂量具有显著延长戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的作用(P<0.01或P<0.05),石油醚提取液高剂量能明显增加阈下剂量戊巴比妥钠睡眠小鼠个数(P<0.01)。结论丹栀逍遥散石油醚提取部位可能为丹栀逍遥散的中枢抑制作用的有效部位。     

全蝎配伍蜂房之祛风攻毒作用探析

通过梳理古本草文献中全蝎、蜂房的有关记载和现代临床对该药对的配伍应用,探讨并阐释该药对祛风攻毒增效的作用机制,认为全蝎配蜂房,药力迅捷,内走脏腑,外达肢节,透骨搜风,既可祛风通络止痛,又可攻毒散结消痈.尤其适宜于治疗风湿顽痹、痈疽恶疮、癌肿等.     

谈人参在《伤寒论》中的应用

人参为五加科植物人参的根。最早见于《神农本草经》,列为上品,书云:“人参味甘微寒,主补五脏,安精神,定魂魄,止惊悸,除邪,明目,开心,益智。”其味甘、微苦,性微温。归脾(胃)、肺、心经。具有大补元气,补脾益肺,益气生津,宁心安神之功效。在《伤寒论》中,仲景应用人参共40次,入     

阴阳升降理论探析与启迪

通过梳理《内经》及相关医家关于阴阳升降的论述,探讨阴阳升降的内容及阴阳升降的不同内涵。从阐述人体生理变化和脏腑特点、阐述疾病的病机、解释治则治法和方药配伍应用等方面分析阴阳升降对临床的启迪作用。     

小青龙汤因机证治浅析

小青龙汤为温阳宣肺、蠲痰涤饮之剂,凡见哮喘、咳嗽、痰、饱胀、喘息和四肢水肿等因"外感风寒,内有寒饮"所致者,均可辨证应用小青龙汤。临证应用时注意:①寒邪不必拘泥外感;②"三水"的变化要审清;③但见寒饮,有无表证均可用此方;④注意痰饮在临床上的变化;⑤临床见喘未必治喘,要临证辨别。用此方,要抓住以下临床指征:①面色:"三水"之面色--黧黑之色;②脉象:弦脉或浮紧;③舌象:舌苔多水滑;④痰涎:咳痰较爽,痰涎清稀,泡沫状。以上"但见一证便是,不必悉俱",有效之后,应中病即止。     

非酒精性脂肪肝诊治的问题及对策

目的探讨非酒精性脂肪肝临床治疗中有效对策。方法结合近代非酒精性脂肪肝治疗研究现状部分问题,运用中医辨证和辨病论治结合现代药理学研究进展方法,防治非酒精性脂肪肝。结果中西医结合防治此病有效。结论中西医结合辨证和辨病结合论治防治此病为有效对策。     

苦参碱和氧化苦参碱的分离纯化以及山豆根药材的薄层色谱鉴别

 目的 从山豆根中精制苦参碱和氧化苦参碱,并以此为化学对照品对山豆根药材进行薄层色谱鉴别。方法 利用硅胶柱色谱和重结晶的方法分离纯化苦参碱和氧化苦参碱,经理化数据和光谱解析等方法鉴定结构,采用TLC和高效液相色谱的方法检查其纯度,并利用TLC的方法对不同来源的山豆根商品药材进行鉴别研究。结果 从山豆根中分离纯化得到纯度98％以上的苦参碱和氧化苦参碱对照品各1.7 g和2.0 g,并以此为对照品有效地鉴别了正品山豆根药材及其混淆品。结论以苦参碱和氧化苦参碱作为山豆根的定性指标是合理的,采用TLC方法鉴别山豆根是可行的。     

亚健康状态的评估、诊断现状与对策

从量表或问卷评估法、症状组合法、记叙法等方面阐述亚健康状态评估与诊断的现状,归纳总结存在的难点;认为开展亚健康评估、诊断研究,可从健康测量角度出发,运用量表问卷和数据挖掘技术,结合多种手段控制临床质量,构建包括宏观和微观指标在内的综合评价体系。