冰片促灯盏乙素透体外血-视网膜内屏障的作用研究＊

目的 观察不同比例冰片对灯盏乙素在体外血-视网膜内屏障的促透作用。方法 完成高效液相色谱-串联质谱联用（HPLC-MS/MS）检测灯盏乙素药物浓度的方法学开发和验证；体外培养大鼠视网膜血管内皮细胞，并用Transwell建立视网膜内皮细胞屏障模型；在体外血-视网膜内屏障模型的上室中给予含有不同比例冰片的灯盏溶液，分时段提取透屏障后的HBSS液，采用HPLC-MS/MS检测透屏障的下室HBSS液中灯盏乙素浓度。结果 ①自建HPLC-MS/MS检测灯盏乙素的方法特异性好，准确度、灵敏度高，各项方法学验证均符合2015版《中国药典》第四部中《9012生物样品定量分析方法验证指导原则》的要求。②建立体外血-视网膜内屏障模型成功，在体外内皮细胞屏障模型中，上室灯盏乙素浓度为100 μg·mL^-1，在2 h后，上室中未添加冰片的下室灯盏乙素药物透过浓度为8.82 μg·mL^-1，上室添加冰片分别为60 μg·mL^-1、120 μg·mL^-1、240 μg·mL^-1、480 μg·mL^-1的下室中的灯盏乙素药物浓度分别为9.50 μg·mL^-1、9.57 μg·mL^-1、11.30 μg·mL^-1、12 μg·mL^-1。在冰片浓度为480 μg·mL^-1时，下室中灯盏乙素的能达到最大浓度为12 μg·mL^-1。结论 ①灯盏乙素在HBSS中的含量检测方法学验证成功；②冰片可能具备促进灯盏乙素透体外血-视网膜内屏障模型的作用；③在上室的冰片药物浓度达到480 μg·mL^-1时，本研究灯盏乙素透过体外血-视网膜内屏障模型达到最大药物浓度。     

灯盏乙素苷元衍生物合成及对H2O2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的: 研究灯盏乙素苷元4'-N,N-双取代氨甲基苯甲酸醚类衍生物的合成方法及其对PC12细胞的保护作用。 方法: 以灯盏乙素苷元为原料,通过缩合反应、酰氯反应等,经乙酰氯/甲醇体系脱去保护基后获得灯盏乙素苷元4'-N,N-双取代氨甲基苯甲酸醚类衍生物(8a~8f);采用MTT及LDH漏出率法研究化合物对PC12细胞的保护作用。 结果: 合成的化合物能较强抑制PC12细胞所受的氧化损伤,其中化合物8e, 8f对PC12细胞的保护作用显著优于阳性对照药维生素E[8e, 8f分别为(40.87±1.12),(41.73±0.61),VE为(45.61±0.82),P<0.05], 结论: 合成方法方便可行,灯盏乙素苷元4'-N,N-双取代氨甲基苯甲酸醚类衍生物有较好的体外活性,具有进一步开发前景。     

灯盏细辛有效组分对体外培养大鼠大脑皮层神经细胞的影响

目的：研究灯盏细辛有效组分对体外培养鼠大脑皮层神经细胞存活的影响。方法：取出生1d内的乳鼠大脑皮层制成细胞悬液,接种于经多聚赖氨酸包被的96孔板中。于培养6d后,分别加入培养液及不同浓度的灯盏细辛提取物和灯盏乙素继续培养1d,采用MTT比色法测量其存活细胞的吸收值,同时行NSE检查。结果：NSE检查结果表明,培养6 d的存活细胞大部分均为神经元。与空白对照组比较,提取物浓度在0.1~1.6mg/ml,灯盏乙素高浓度时,存活细胞数均明显增加,且有一定的量效关系。结论：灯盏细辛两组分均能促进体外培养的大脑皮层神经细胞存活,且提取物活性较强。     

灯盏花素对谷氨酸体外诱导大鼠皮质神经元损伤的保护作用

目的 探讨灯盏花素对谷氨酸(Glu)体外诱导原代培养大鼠皮质神经元损伤的作用及机制.方法 通过MTT法观察灯盏花素对Glu诱导神经元损伤的细胞存活率的影响,并结合超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)生化测试及细胞钙影像方法探讨相关作用机制.结果 灯盏花素呈质量浓度依赖性提高Glu诱导神经元损伤细胞的存活率,并拮抗由Glu诱导的[Ca2 ];升高、MDA生成,提高SOD活性.结论 灯盏花素对Glu体外诱导大鼠皮质神经细胞损伤具有保护作用,可能与减轻胞内Ca2 超载、提高神经细胞抗氧化能力有关.     

灯盏乙素-胡椒碱共无定型复合物的制备及其体外释放度评价

目的制备灯盏乙素-胡椒碱共无定型复合物,以期达到增加药物溶出度的目的。方法采用溶剂法制备灯盏乙素-胡椒碱共无定型复合物,运用差示扫描量热法(DSC)、扫描电镜法(SEM)、X射线粉末衍射法(XRD)和红外光谱(IR)等分析方法对其微观结构进行表征和分析,并对其体外溶出行为进行考察,研究灯盏乙素和胡椒碱的共无定型复合物的形成情况。结果 DSC和XRD结果显示灯盏乙素与胡椒碱均以无定型形式存在,IR谱图提示二者之间有分子间作用。体外溶出结果表明,相较于灯盏乙素和胡椒碱,复合物中二者在水中的累积溶出率均得到较大提高。结论所制备的灯盏乙素-胡椒碱共无定型复合物能显著改善灯盏乙素和胡椒碱的溶出度,所形成的药物-药物共无定型药物系统,为提高难溶性药物的溶出速率和溶解度提供了一定的参考。     

灯盏乙素乙酯对大鼠大脑中动脉结扎所致局灶性脑缺血的保护作用及机制研究

观察灯盏乙素乙酯对大鼠大脑中动脉结扎所致局灶性脑缺血的保护作用,并探讨其作用机制。该实验选用SPF级雄性SD大鼠84只,随机分为7组:假手术组、模型组、阳性药组(尼莫地平组12 mg·kg~(-1))、灯盏花素片组(48 mg·kg~(-1))、灯盏乙素乙酯高、中、低剂量组(100,50,25 mg·kg~(-1))。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉结扎(MCAO)模型,观察大鼠MCAO时神经功能状态,TTC染色法测脑梗死面积,半自动生化分析仪测定血清中MDA,SOD,NO的变化。分别采用200 mg·L~(-1)OxLDL和100μg·L~(-1)TNF-α作用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24 h,建立Ox-LDL和TNF-α细胞损伤模型,测定细胞上清液中MDA,SOD,NO,ET,6-keto-PGF_(1α),TXB_2,IL~(-1),IL-6,IL-8,ICAM-1和PECAM-1水平。结果显示,灯盏乙素乙酯能有效改善MCAO大鼠神经功能,明显减小脑梗死面积。与模型组比较,血清中SOD和NO活性提高,MDA含量降低;细胞上清液中SOD,6-keto-PGF_(1α)和NO活性提高,IL~(-1),IL-6,IL-8,ICAM-1,PECAM-1,TXB_2,ET和MDA含量降低。结果表明,灯盏乙素乙酯对大鼠大脑中动脉结扎所致局灶性脑缺血具有一定的保护作用,其作用机制可能与抗氧化应激,改善血管内皮细胞功能及减轻炎性反应有密切关系。     

灯盏乙素及其衍生物灯盏乙素乙酯在大鼠体内的药代动力学的比较

该文建立了测定大鼠血浆中灯盏乙素及灯盏乙素乙酯的反高效液相色谱方法,比较灯盏乙素及其衍生物在大鼠体内的药代动力学特点.大鼠分别灌胃给予104 mg·kg^-1灯盏乙素和114.5 mg·kg^-1灯盏乙素乙酯,颈静脉采血,HPLC测定血浆中灯盏乙素及灯盏乙素乙酯的浓度,经Winnonlin软件拟合房室模型,计算药代动力学参数.结果表明,灯盏乙素和灯盏乙素乙酯口服后在体内均呈非房室模型,药时曲线有双峰现象.主要药代动力学参数:灯盏乙素的T_max为(6±1.26) h,C_max为(321.55±48.31) μg·L^-1,AUC_0-t为(2 974±753) h·μg·L^-1;灯盏乙素乙酯的T_max为0.5 h,C_max为(1 550.82±219.75) μg·L^-1,AUC_0-t为(6 407±399) h·μg·L^-1.灯盏乙素乙酯比灯盏乙素入血速度快,且生物利用度是灯盏乙素的2倍以上.     

灯盏细辛注射液对大鼠大脑皮层神经元细胞存活率的影响

目的:探讨灯盏细辛注射液外对大脑皮层神经细胞存活率的影响。方法:利用细胞培养技术,MTT法检测灯盏细辛注射液对细胞生长的影响。结果:与空白对照组比较,灯盏细辛含量在75~37.5mg/ml时,其吸收值均明显增加,且有一定的量效关系。结论:灯盏细辛注射液体外能够促进大脑皮层神经元细胞存活。     

灯盏花素脂质体体外释放及在酸和胆盐中稳定性研究

 目的 制备灯盏花素脂质体,并对其体外释放特性以及在酸性和胆盐环境下的稳定性进行研究。方法 利用不同的数学模型拟合,考察灯盏花素普通脂质体和阳离子脂质体的体外释放行为;以包封药物量为指标,采用微柱离心法研究灯盏花素脂质体的不同处方在模拟胃肠道环境中的稳定性。结果 体外释放实验中,灯盏花素溶液8 h释放完全,普通脂质体8 h累计释放（44.2±2.38）%,阳离子脂质体8 h累计释放（8.23±3.21）%;灯盏花素普通脂质体和阳离子脂质体的释放过程均符合Weibull模型,拟合方程为lnln[1/(1-Q)]=0.779 7lnt-2.318 7、 lnln[1/(1-Q)]=0.355 3lnt-3.197。脂质体处方中加入胆固醇对于提高脂质体在酸和胆盐中的稳定性有很大影响,十八胺(SA)能显著提高脂质体的包封率,但对实验中样品的稳定性没有影响。结论 体外释放实验模拟了灯盏花素脂质体的体外释放规律,通过研究可能找到进一步提高脂质体在胃肠道中稳定性的途径。     

灯盏乙素对β-淀粉样蛋白诱导的SH-SY5Y细胞中组蛋白H2A、H2B、H3表达的影响

目的:观察灯盏乙素对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞中组蛋白H2A、H2B、H3表达的影响,探讨其针对阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)发挥表观遗传方面治疗作用的可能性。方法:将SH-SY5Y细胞分为对照组、灯盏乙素处理组、Aβ处理组和Aβ+灯盏乙素不同剂量处理组,用CCK-8法检测细胞存活率;用流式细胞术测定各组细胞凋亡率;用蛋白质印迹法和实时定量聚合酶链法检测各组细胞H2A、H2B、H3蛋白和mRNA的表达。结果:与对照组比较,Aβ处理组细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高,H2A、H2B、H3蛋白和mRNA表达显著升高,灯盏乙素干预可显著提高Aβ作用下细胞的存活率,显著降低H2A、H2B、H3 mRNA及蛋白表达。结论:灯盏乙素能调节Aβ毒性所致神经元中组蛋白H2A、H2B、H3的表达,可能通过改变AD表观遗传的信息异常来发挥预防和治疗作用。     

基于ICP-MS法的桂枝茯苓胶囊中无机元素分析

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立桂枝茯苓胶囊(GFC)中29种无机元素(Li、Be、B、Na、Mg、Al、Ca、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Ga、As、Se、Sr、Mo、Cd、Sn、Sb、Ba、Hg、Tl、Pb、Bi)的测定方法。方法 GFC样品以浓硝酸为消解试剂经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法测定其中29种无机元素含量。结果待检测的29种无机元素在各的自线性范围内线性关系良好,r≥0.999 4;各元素的检出限在0.012~4.105μg/L,定量限在0.045~14.500μg/L,平均加样回收率在79.88%~105.76%,RSD≤4.55%。测定的12批样品中Ca、Na、Mg含量较高,均超过300μg/g;Fe、Mn、Sr含量也相对较高,而有害元素Be、As、Cd、Sb、Hg、Tl、Bi含量相对较低,均在0.030μg/g以下。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于GFC中无机元素的测定。     

10 Jahre Akupunktur mit Stoßwellen

In 2002, an already available shock wave device was modified according to my suggestions to enable its use for the stimulation of acupuncture points. Since then, the device has been used in the treatment of more than 1 000 patients.     

基于ICP-MS法的麝香保心丸中26种无机元素分析

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立麝香保心丸中26种无机元素(Li、Na、Mg、Al、Ca、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Ga、As、Se、Sr、Mo、Cd、Sb、Ba、Hg、Tl、Pb、Bi)的测定方法。方法麝香保心丸样品以浓硝酸为消解试剂经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法测定其中26种无机元素的量。结果待检测的26种元素线性关系良好,相关系数r≥0.999 4,各元素的检出限在0.010~2.987μg/L,定量限在0.035~10.000μg/L,回收率在79.88%~105.76%,RSD≤4.55%。测定的12批样品中Ca、Mg、Na、Fe量较高,均超过1.000 mg/g;Mn、Cu、Zn、Al、Ga量也相对较高,而Sb、Hg、Tl、Bi量相对较低,均在0.050μg/g以下。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于麝香保心丸中无机元素的测定。     

基于ICP-MS法分析九味熄风颗粒中25种重金属及微量元素

目的采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法建立九味熄风颗粒中25种重金属及微量元素(Li、Mg、Cd、Sn、Al、Mn、Fe、Ti、V、Co、Zn、Ga、Cr、Ni、Tl、Pb、Cu、As、Be、B、Sb、Ba、Sr、Hg、Bi)的测定方法。方法九味熄风颗粒样品经微波消解后,以Ge、In元素为内标,以灌木枝叶标准物质作为质控标准物质,采用ICP-MS法进行测定。结果检测的25种元素线性关系良好,相关系数R2≥0.999 2,各元素的检出限在0.009~16.051μg/L,回收率在70.75%~107.66%,RSD≤6.44%。测定的6批样品中Cr、Sn、Hg、Pb均未检出,Tl、Cd、As、Cu的量均较低或未检出,Cd≤0.011μg/g,Cu≤0.373μg/g,Tl≤0.021μg/g,As≤0.571μg/g。结论该方法操作简便,分析速度快,灵敏度高,适用于九味熄风颗粒中重金属及微量元素的测定。     

蜂蜜炼制前后黄酮类成分种类和含量变化分析

目的研究中药辅料蜂蜜炼制前后黄酮类成分变化。方法参考《中药药剂学》,对不同来源的6种蜂蜜进行炼制。供试品经固相萃取法富集黄酮类成分。采用高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(HPLC-TQ-MS)法测定,Thermo Accucore RP-MS色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min,柱温30℃。质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),正离子检测模式,多反应监测模式(MRM)扫描分析。结果蜂蜜中共检测到12种黄酮类成分,包括黄酮苷元、二氢黄酮苷元和异黄酮苷元。黄酮苷元有8种:槲皮素、桑黄素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、汉黄芩素、高良姜素和白杨素;二氢黄酮苷元有3种:短叶松素、柚皮素和乔松素;异黄酮苷元染料木素。不同蜜源蜂蜜所含黄酮类成分种类和含量存在明显差异。6个蜂蜜样品炼制后,都发现了蜂蜜中没有报道过的芦丁和芸香柚皮苷,12种检测到的蜂蜜黄酮类成分在炼制后其量都有不同程度的变化,椴树蜜的槲皮素、桑黄素、木犀草素、山柰酚、芹菜素、汉黄芩素、乔松素和白杨素量均有增加,短叶松素、柚皮素和高良姜素量没增加反而还有下降的;洋槐蜜中除芹菜素量增加不明显外,其余均有所增加,尤其是槲皮素和桑黄素增加的较为明显;百花蜜和枣花蜜12种黄酮类成分量均显著增加。结论炼制可造成蜂蜜中黄酮类成分的种类和含量发生改变。     

微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定脉络宁注射液中25种矿物质元素

目的建立微波消解-电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)直接稀释测定脉络宁注射液中25种矿物质元素(Mg、Ca、Fe、Cu、Zn、Mn、Al、B、Ba、Co、Cr、K、Li、Mo、Na、Ni、P、Pb、Sr、Th、Ti、V、As、Cd和Hg)的方法。方法分别对微波消解条件和测试条件进行考察;样品经微波消解后,采用电感耦合质谱仪测定25种矿物质元素,并对测定方法学进行考察。结果确定最佳消解条件为3步缓慢升温:400 W 80℃升温10 min,保留5 min;600 W 120℃升温10 min,保留5 min;900 W 200℃升温20 min,保留20 min;25种矿物质元素在各自的线性范围内线性关系良好,r≥0.999 6,精密度、稳定性和重复性试验的RSD均符合定量分析要求;加标回收率为94.7%~106.1%,RSD在0.34%~2.79%。脉络宁注射液中检测出Mg、Ca、Fe、Cu、Zn、Mn、Al、B、Ba、Co、Cr、K、Li、Mo、Na、Ni、P、Pb、Sr、Th、Ti、V,未检出As、Cd和Hg。结论该方法简便、迅速、准确,适用于脉络宁注射液中25种矿物质元素的同时测定。     

基于ICP-MS法分析银杏叶系列品种中25种无机元素

目的建立银杏叶制剂中25种无机元素的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)分析方法,并对不同剂型银杏叶制剂中无机元素量进行比较分析。方法样品经微波消解后,采用ICP-MS法测定25种无机元素量,绘制无机元素指纹谱图,并进行方法学考察。结果 25种无机元素在各自的线性范围内线性关系良好,r≥0.950 0,精密度、稳定性和重复性试验的RSD值均符合定量分析要求;加样回收率为91.35%～108.86%,RSD在0.05%～4.45%。银杏叶制剂中检测了25种无机元素量,并绘制无机元素指纹图谱,发现其谱图具有一定的特征性;银杏叶片中元素Hg、Al、Cr的量较高,有害无机元素的量超标应引起关注。结论通过无机元素在银杏叶制剂中的组成分布及其量的变化规律研究,为银杏叶制剂的质量控制及安全性评价提供依据,同时为临床使用提供一定参考。     

5th Asia Pacific ISSX Meeting Held on May 9-12, 2014, in Tianjin,China

正The 5th Asia Pacific ISSX Meeting was organized by International Society for Study of Xenobiotics(ISSX)and Chinese Society for Study of Xenobiotics(CSSX)and co-organized by Tianjin Institute of Pharmaceutical Research and Committee of Pharmaceutical Engineering of Chinese Pharmaceutical Association(CPECPA).Professor Changxiao Liu was a co-Chair of     

State Key Laboratory of Quality Research in Chinese Medicine(Macau University of Science and Technology)

正The State Key Laboratory of Quality Research in Chinese Medicine(Macau University of Science and Technology)was fbrmally established on January 25,2011 upon approval from the Ministry of Science and Technology of China.It is so far the only State Key Laboratory(SKL)specifically ill the field of TteditiMial Chinese Medicine(TCM)over the country.It is It also is also thejoined-laboratory the joined-labo]partner of the State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs at the Peking