白细胞蛋白酶抑制因子在真皮多能干细胞中的表达

目的研究白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI)在真皮多能干细胞中的表达以及同伤口液刺激的关系。方法采用前期建立的技术分离、纯化并扩增真皮多能干细胞,收集伤后1d伤口液,比较伤口液刺激前后真皮多能干细胞和创伤前后大鼠皮肤组织中SLPI mRNA表达的变化。通过Western blot了解伤口液刺激前后真皮多能干细胞中SLPI蛋白表达的变化。结果分离、纯化的真皮多能干细胞形态较为均一,增殖能力强,RT-PCR和Western blot提示,SLPI在真皮多能干细胞中表达,伤口液刺激后表达增强。同时检测到SLPI在创伤后1d大鼠皮肤组织中表达升高。结论SLPI高表达可能是真皮多能干细胞参与创伤修复的重要途径之一。     

内皮差异表达基因消减文库的构建及在创伤修复中的应用

目的：建立人脐静脉内皮细胞内毒素刺激后差异表达基因的消减cDNA文库。方法：提取培养人脐静脉内皮细胞内毒素刺激6h后mRNAs，反转录合成cDNA，与对照组间进行抑制消减杂交富集差异表达基因，亚克隆入T／A质粒并转化感受态大肠杆菌。结果：成功构建了人脐静脉内皮细胞内毒素刺激后上调和下调差异表达基因两个消减cDNA文库，为进一步筛选新的内皮细胞活化相关基因打下基础。结论：经抑制消减杂交建立的消减cDNA文库富集并均一化了内毒素刺激后不同丰度的差异表达基因，对深入理解内皮细胞活化机制及参与组织修复的过程具有重要意义。     

内皮差异表达基因消减文库的构建及在创伤修复中的应用

目的建立人脐静脉内皮细胞内毒素刺激后差异表达基因的消减cDNA文库.方法提取培养人脐静脉内皮细胞内毒素刺激6 h后mRNAs,反转录合成cDNA,与对照组间进行抑制消减杂交富集差异表达基因,亚克隆入T/A质粒并转化感受态大肠杆菌.结果成功构建了人脐静脉内皮细胞内毒素刺激后上调和下调差异表达基因两个消减cDNA文库,为进一步筛选新的内皮细胞活化相关基因打下基础.结论经抑制消减杂交建立的消减cDNA文库富集并均一化了内毒素刺激后不同丰度的差异表达基因,对深入理解内皮细胞活化机制及参与组织修复的过程具有重要意义.     

瘢痕疙瘩抑制消减cDNA文库构建和质量分析对筛选和克隆瘢痕疙瘩相关基因的意义

目的:构建瘢痕疙瘩抑制消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆瘢痕疙瘩特异表达的基因奠定基础。方法:实验于2003-09/2004-08在南方医科大学基因工程研究所完成。从同一标本的瘢痕疙瘩和正常皮肤组织分离poly(A)+RNA,经反转录后,利用抑制消减杂交方法,通过两轮杂交和两次抑制聚合酶链反应构建了两种组织间差异表达基因的cDNA消减文库。结果:挑取了84个克隆进行聚合酶链反应扩增检测是否有插入片段,结果显示71个克隆有插入片段,其中45个克隆片段大小范围为200～750bp,符合预期的文库构建要求。结论:应用消减杂交的方法,在去除相同遗传背景的条件下,可以建立较特异的瘢痕疙瘩cDNA消减文库,该文库为进一步批量筛选瘢痕疙瘩发生相关基因群和克隆瘢痕疙瘩特异表达基因奠定了基础,为创伤临床康复治疗提供理论依据。     

瘢痕疙瘩抑制消减cDNA文库构建和质量分析对筛选和克隆瘢痕疙瘩相关基因的意义

目的:构建瘢痕疙瘩抑制消减cDNA库,为进一步筛选、克隆瘢痕疙瘩特异表达的基因奠定基础.方法:实验于2003-09/2004-08在南方医科大学基因工程研究所完成.从同一标本的瘢痕疙瘩和正常皮肤组织分离poly(A) RNA,经反转录后,利用抑制消减杂交方法,通过两轮杂交和两次抑制聚合酶链反应构建了两种组织间差异表达基因的cDNA消减库.结果:挑取了84个克隆进行聚合酶链反应扩增检测是否有插入片段,结果显示71个克隆有插入片段,其中45个克隆片段大小范围为200～750 bp,符合预期的库构建要求.结论:应用消减杂交的方法,在去除相同遗传背景的条件下,可以建立较特异的瘢痕疙瘩cDNA消减库,该库为进一步批量筛选瘢痕疙瘩发生相关基因群和克隆瘢痕疙瘩特异表达基因奠定了基础,为创伤临床康复治疗提供理论依据.     

心肌病大鼠骨髓间充质干细胞移植后差异表达基因cDNA文库的构建

目的：构建心肌病大鼠移植骨髓间充质干细胞后心肌差异表达基因的cDNA文库，为后续的基因测序和信息学分析打下基础。方法：实验于2003—07／2005—03在重庆医科大学儿童医院儿科研究所和解放军第三军医大学野战外科研究所四室完成。实验材料：雌性Wistar大鼠54只，体质量（200＋20）g，由解放军第三军医大学大坪医院实验动物中心提供。实验方法：采用贴壁筛选法分离、扩增、纯化Wistar大鼠骨髓间充质干细胞，选用第三、四代的骨髓间充质于细胞用于移植实验。采用2．5mg／kg阿霉素腹腔注射法建立大鼠心肌病心力衰竭模型。并分为实验组与对照组：实验组于左心室前壁靠心尖处注射骨髓间充质干细胞，对照组注射培养基。采用抑制性消减杂交技术构建骨髓间充质干细胞移植1周后大鼠心肌组织的差减文库。结果：①对照组和实验组移植前左室射血分数与左室缩短分数相比无差异，实验组左室射血分数与左室缩短分数在移植2周时明显高于对照组（P〉0．05，P〉0．01）。②以正向消减产物为模板，在第33个循环才出现明显的G3PGH条带，而在非消减的对照中，第18个循环就能看见明显的条带，二者相差约15个PCR循环，同样在反向消减中二者相差也是15个PCR循环。按抑制性消减杂交方法的要求，只要二者之间相差5个循环以上就表明消减效率很高，可以用于下一步文库构建和筛选。③筛选出骨髓间充质干细胞移植后表达增高的cDNA克隆123个；表达降低的cDNA克隆28个。结论：运用抑制性消减杂交方法成功构建了骨髓间充质干细胞移植后心肌病大鼠的cDNA文库，为下一步研究打下基础。     

烧伤血清对大鼠骨髓间充质干细胞基因表达的动态影响

目的：观察烧伤大鼠血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞基因表达的影响。 方法：实验于2003-06／2004-4在解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室完成。①断头法处死Wistar大鼠，取股骨并暴露骨髓腔，用培养基冲洗骨髓腔，将骨髓细胞悬液用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞并接种于培养瓶，贴壁法培养骨髓间充质干细胞。②用沸水烫伤的方法制作15％TBSAⅢ度烧伤模型。③烧伤3d后经腹主动脉取烧伤大鼠血液，分离血清备用。④同样取正常大鼠血液，分离血清备用。⑤骨髓间充质干细胞传代后分别用含有体积分数为0．1的正常大鼠血清（正常血清组）和烧伤后3d大鼠血清（烧伤血清组）的F-12培养基培养24h及72h。⑥从处理过的间充质干细胞内提取RNA，反转录为eDNA并以cy3-dUTP和cy5-dUT进行标记为荧光探针。⑦以含有5705种基因的寡核苷酸微阵列检测两组细胞基因表达的差异。 结果：①烧伤血清处理不同时间后，两组间充质干细胞对比，均有不同数量的基因表达存在明显差异。②烧伤血清处理24h后，两组相比较有4条基因表达存在明显差异。③烧伤血清处理72h后，两组相比较有11条基因表达存在明显差异。④两个时间点差异表达的基因无相同基因。 结论：烧伤后大鼠血清刺激间充质干细胞，使其基因表达发生了改变，且随着烧伤血清处理时间的不同，差异表达的基因也发生动态变化。这种改变可能与间充质干细胞受到刺激后参与创面修复有关。     

工频磁场对骨髓间充质干细胞基因表达谱的影响

目的：用基因芯片技术筛选经工频磁场刺激后骨髓间充质干细胞（MSCs）的差异表达基因，并初步探讨磁场定向分化骨髓MSCs的机制。方法体外培养SD大鼠MSCs，取第三代细胞用磁场刺激，提取暴磁组和未暴磁对照组（对照组）细胞总RNA，反转录制备杂交探针并运用大鼠Oligo基因芯片进行杂交，扫描信号并分析结果；选取感兴趣基因进行半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）验证。结果：与对照组细胞相比，在暴磁组细胞中发现表达差异显著的基因有153个，其中74个基因表达上调，79个基因表达下调，这些差异表达基因主要涉及细胞增殖分化、代谢、转录调控、应激及信号转导等多个方面。RT-PCR结果显示，与对照组相比，暴磁组的MSCsDuspl、RablmRNA表达水平上调，与芯片结果一致。结论：在50Hz、1．2mT的磁场作用下MSCs的基因表达发生了变化，这些基因主要是细胞增殖分化调控基因、转录调控基因、代谢相关基因及应激基因等，为进一步研究磁场对MSCs的分化机制奠定了基础。     

骨髓间充质干细胞中大鼠白细胞介素10复制缺陷型重组腺病毒的表达

背景:研究显示,白细胞介素10在脓毒症等炎性疾病发挥了抑制炎症反应、促进疾病转归的重要作用。目的:构建大鼠白细胞介素10重组腺病毒,并以骨髓间充质干细胞为基因载体,观察外源基因在细胞中的表达情况。方法:采用反转录-聚合酶链反应方法从SD大鼠新鲜脾脏组织中提取出的总RNA中克隆大鼠白细胞介素10基因,通过AdEasy系统成功包装、扩增并纯化出含目的基因的重组腺病毒颗粒。取大鼠骨髓细胞,利用密度梯度离心法和贴壁法分离并扩增骨髓间充质干细胞,并使用流式细胞仪进行表型鉴定。以不同感染倍数的Ad.rIL-10/Ad.GFP感染骨髓间充质干细胞,在荧光显微镜下观察感染效率,并用反转录-聚合酶链反应和Weaternblot方法检测目的基因在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达。结果与结论:成功构建了重组腺病毒Ad.rIL-10,计算病毒滴度为6.0×1010pfu/mL。重组腺病毒Ad.rIL-10对骨髓间充质干细胞有较高的转染效率,当感染复数=200时为70%。提示含外源基因大鼠白细胞介素10的骨髓间充质干细胞持续高效地表达目的基因,是基因治疗的良好细胞载体。     

人端粒酶反转录酶转染的骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠糖尿病

背景:人端粒酶反转录酶是调控增殖及定向分化的首选生长因子之一,具有多重生物学效应。目的:观察人端粒酶反转录酶表达的骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠糖尿病的效果。方法:体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,经反转录病毒PLXSN为载体介导人端粒酶反转录酶基因转染骨髓间充质干细胞,在转染前后用RT-PCR检测骨髓间充质干细胞人端粒酶反转录酶基因的表达。60只雌性SD大鼠中随机取15只作为正常对照组,一次性注射生理盐水,余45只按45 mg/kg的剂量注射链脲霉素建立糖尿病模型后,随机分为3组,分别通过大鼠尾静脉注射移植人端粒酶反转录酶基因转染的骨髓间充质干细胞0.2 mL、骨髓间充质干细胞0.2 mL、生理盐水0.2 mL。结果与结论:转染48 h后发现,骨髓间充质干细胞有人端粒酶反转录酶mR NA的表达,且重点集中于胞核内。移植后14 d,糖尿病组大鼠空腹血糖维持在较高水平,且高于正常对照组(P<0.05);与糖尿病组相比,各移植组大鼠空腹血糖水平显著下降(P<0.05);与骨髓间充质干细胞移植组相比,人端粒酶反转录酶基因转染的骨髓间充质干细胞移植组大鼠空腹血糖水平显著下降(P<0.05),接近正常对照组水平(P>0.05)。结果提示人端粒酶反转录酶表达的骨髓间充质干细胞移植能有效治疗大鼠糖尿病。     

临床护士心理压力源与工作满意度调查分析

目的了解临床护士面临的主要心理压力源,为护理管理者有效地帮助护士减轻和消除心理压力提供依据。方法采用自评式问卷调查的方法 ,对内江市2所三级乙等医院287名从事临床护理工作的护士进行问卷调查。结果临床护士的心理压力源依次来源于工作强度、职业需求、工作环境、人际关系、家庭经济收入等方面。其中来源于工作强度、人际关系及家庭方面的压力源,不同年龄组护理人员在其压力程度上差异有统计学意义(P0.05)。结论从事临床护理工作的护士存在着多种心理压力源,这些压力源是导致护士工作不满意的主要原因,也是护理的安全隐患之一,护理管理者应予以足够的重视,并定期针对不同的人群进行心理健康知识培训,建立有效的支持系统,及时帮助他们调整心理状态,减轻和消除压力,从而提高护士对本职工作的满意度和患者对护理服务的满意度。     

护士长管理素质与护士工作压力相关性的调查与分析

目的 :探讨病房护士长的管理素质与护士工作压力的相关性。方法 :采用问卷调查法对 12 5名护士进行调查 ,调查结果用相关性分析进行统计学处理。结果 :护士长的管理素质与护士工作压力呈负相关。结论 :病房管理者只有努力提高自身的管理素质才能相应地减轻护士的工作压力     

血红蛋白分析对地中海贫血筛查的评估

目的:评估血红蛋白分析对地中海贫血(Thal)诊断能力。方法:用HLC-723G7自动血红蛋白分析仪对以临床表现流行病学资料和醋纤薄膜电泳等确定的115例Thal患者进行血红蛋白分析,结合分子诊断评估诊断价值。结果:以HbA2≥5.5%作为血红蛋白分析对β-Thal的诊断标准,则与DNA分析的符合率为81.5%;以HbA2≤2.5%为仪器对α-Thal的诊断标准,则与DNA分析的符合率为92.5%。结论:血红蛋白分析可提供α、βThal的诊断信息,若能结合更多的临床和DNA分析数据,可作为α、β地中海贫血的确诊手段。     

ICIQ-SF问卷在尿失禁诊断中的应用研究

目的：分析ICIQ-SF问卷对于诊断不同类型尿失禁（UI）的价值。方法：对2007年8月—2009年7月期间北京大学深圳医院泌尿外科就诊的118例UI女性患者进行研究。由患者自行填写ICIQ-SF问卷表,然后接受尿动力学检查。分别计算ICIQ-SF诊断不同类型UI的敏感性、特异性、阳性预测价值、阴性预测价值和似然比LR值。结果：根据ICIQ-SF问卷,46/118例（39%）患者表现为压力性UI,18/118例（15%）为急迫性UI,54/118例（46%）为混合性UI。ICIQ-SF诊断压力性UI、急迫性UI和混合性UI的敏感性分别为58%,52%和75%;特异性分别为74%,95%和63%。ICIQ-SF诊断压力性UI、急迫性UI和混合性UI阳性预测价值分别为61%,72%,38%;阴性预测价值分别为72%,88%,89%。结论：ICIQ-SF问卷对于诊断不同类型UI具有重要的临床意义。ICIQ-SF问卷在临床实践中具有良好的应用前景。     

床头抬高报警器对ICU护士床头抬高达标率的影响

目的探讨有效提高ICU护士对机械通气患者床头抬高达标率的方法。方法根据病房单元的布局,将连云港市第一人民医院综合ICU的15张病床分为试验组(1~7床)和对照组(8~13床和15床),将综合ICU的39名护士随机分入试验组(n=19)和对照组(n=20)。两组病床均用量角器标示床头抬高角度,试验组病床安装自制床头抬高报警器,对照组常规管理。每天检查床头抬高角度5次(08:00、12:00、14:00、18:00、01:00),比较两组护士床头抬高的达标率。结果试验组护士对床头抬高30°~45°的达标率为100%,对照组为46.8%;且试验组在各个时间点对床头抬高30°~45°的达标率均高于对照组,差异均有统计学意义(均P0.01)。结论使用床头安装床头抬高报警器能有效提高ICU护士对机械通气患者床头抬高30°~45°的达标率。     

Arthritis of the base of the thumb

The purpose of this article is to outline the pathophysiology and epidemiology of arthritis of the base of the thumb. The usual presentation and diagnosis will be discussed along with the current conservative treatment options. Surgical treatment options are determined by the stage of the arthritis as well as the demands of the patient. The current standard surgical treatment options will be reviewed along with their results in the literature.     

Sonographic measurement of the volume of the left lateral segment of the liver

PURPOSE: The aim of this study was to evaluate the accuracy of sonography for measuring the volume of the left lateral segment of the liver. METHODS: The volume of the left lateral segment of the liver was measured with sonography in 101 consecutive patients who were hospitalized between December 1998 and January 2000 for hepatic, biliary, or pancreatic disease or who were donors for a living related liver transplantation. The results were compared with those obtained using CT. RESULTS: The mean calculated volume of the left lateral segment of the liver +/- standard deviation was 261 +/- 118 cm(3) by sonography compared with 274 +/- 123 cm(3) by CT. The relationship between the results of both imaging modalities was linear and statistically significant (r = 0.93; p < 0.0001). CONCLUSIONS: Our study demonstrated that sonography has an acceptable level of accuracy and reliability for routine measurement of the volume of the left lateral segment of the liver.