改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子对大鼠皮肤生长促进作用的比较

目的　比较改构型和野生型酸性成纤维细胞生长因子 ( a FGF)促进大鼠皮肤生长的作用。方法　将 2 mm× 2 mm的新生大鼠皮肤分别接种在含有 1、10和 10 0 μg/ L 3种不同浓度的改构型 a FGF和野生型 a FGF与体积分数为 10 %小牛血清的 Dulbecco改良 Eagle培养基中培养 4 d,然后测定生长后皮肤的面积。结果　空白对照组的皮肤面积为 ( 2 .96± 1.12 ) mm2 ,浓度为 1、10和 10 0 μg/ L 改构型 a FGF组的皮肤面积分别是空白对照组的 1.4、1.5和 1.3倍 ,而 3种不同浓度的野生型 a FGF组的皮肤面积分别是空白对照组的 1.5、3.2和 1.6倍。与其他组相比 ,只有浓度为 10μg/ L野生型 a FGF组的皮肤面积显著升高 ( P<0 .0 5 )。结论　改构型 a FGF对皮肤生长无显著刺激 ,其作用效果明显低于野生型 a FGF。     

正常皮肤和瘢痕组织表皮干细胞定位与增殖分化特征的比较性研究

目的采研究少儿与成年人大面积重度烧伤后瘢痕组织表皮干细胞分布与表达β1整合素和角蛋白19,14,10(K19,K14,K10)的特征与规律。方法分别取4～12岁少儿及35～53岁成年人2组健康皮肤及大面积深度烧伤后瘢痕组织。采用免疫组织化学SP法检测表皮干细胞、短暂扩充细胞特异表达的β1整合素和K19以及分化表皮细胞表达的K14和K10。结果瘢痕组织表皮基底层表达β1整合素与K19的阳性细胞数较健康皮肤明显减少,阳性强度降低。瘢痕组织表皮中表达K14的阳性细胞仅位于表皮底部二三层,明显少于健康皮肤,而K10表达阳性细胞则较健康皮肤分布广泛。结论瘢痕组织表皮的增殖能力下降,细胞的分化行为紊乱,这可能是瘢痕组织表皮结构与功能改变、愈合能力下降的原因之一。     

防疤烧伤膏与京万红促进烫伤创面愈合作用的比较研究

目的 比较防疤烧伤膏和京万红对烫伤创面愈合的作用。方法 于小型猪背部制备小面积深Ⅱ&#176;烫伤创面，并将创面分为防疤烧伤膏治疗、京万红治疗和空白对照3组。以创面面积及创面组织学检查评价各组治疗效果。结果 伤后11d防疤烽伤膏和京万红治疗组创面面积分别缩小到（0．06&#177;0．10）cm^2,(0.03&#177;0.03)cm^2，两组间差异无显著性意义（P＞0．05），都明显优于空白对照组（0．71&#177;0．23）cm^2，（P＜0．01）；伤后11d组织学检查见京万红治疗组创面均已被新生表皮覆盖，表皮生长略好于防疤烧伤膏组，而空白对照组仍残留部分创面。结论 防疤烧伤膏和京万红对烫伤创面愈合均有促进作用，且两者的效果相近。     

碱性成纤维细胞生长因子对缺血再灌注损伤后肠道细胞信号转导途径的影响

目的：观察给予外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)后大鼠肠道细胞信号转导途径细胞外信号调节激酶（p42/p44MAPK)活性的变化,并探讨外源性bFGF对大鼠肠缺血-再灌注（I-R）损伤保护作用的分子机制。方法：以大鼠肠系膜上动脉（SMA）夹闭造成肠道缺血-再灌注模型,并将动物随机分为假手术组,生理盐水对照组,bFGF抗体预处理组及bFGF治疗组,各组分别于缺血45分钟及再灌注后2、6、24和48小时活杀动物,取血及小肠组织标本,检测血浆中二胺氧化酶（DAO）含量及组织中磷酸化p42/p44MAPK的活性。结果：缺血-再灌注损伤可激活p42/p44MAPK信号转导途径,磷酸化p42/p44MAPK在小肠的绒毛及隐窝部的上皮细胞及绒毛的基质细胞中均有表达,与生理盐水对照组及bFGF抗体预处理组相比,bFGF治疗组磷酸化p42/p44MAPK的表达被快速激活,于再灌注后2小时即达高峰,而其它2组在6小时达峰值,血浆DAO变化及HE染色显示,再灌注后6小时肠屏障功能损伤最严重,而bFGF治疗组损伤在伤后48小时较其它2组有所减轻。结论：I-R损伤可激活p42/p44MAPK信号转导途径,而外源性bFGF可使p42/p44MAPK表达的峰值提前,提示bFGF对肠道缺血-再灌注损伤后屏障功能的保护作用可能与信号转导途径p42/p44MAPK的早期激活有关。     

采用数字控温烫伤仪制备大鼠小面积烫伤模型

动物烫伤模型的制备方法有不少报道，但普遍存在重复性差、深度不易控制、面积不易恒定等问题。我们采用数字控温烫伤仪制备不同深度烫伤模型，方法简单、方便，组织学检查显示模型稳定，重复性好。现将方法介绍如下。     

瘢痕组织中神经丝蛋白的表达特征及生物学意义

目的：观察瘢痕组织与成人正常皮肤中神经丝蛋白(NFP)及其表皮细胞生长因子受体(EGFR)表达变化，阐明神经再支配对增生性瘢痕形成的影响。方法：标本取自烧伤瘢痕愈合后11～26个月来我院进行修复手术的患者，正常对照选自同一患者的供皮区。利用单克隆抗体免疫组织化学染色技术，光镜下观察瘢痕组织及正常皮肤上皮中NFP的表达和EGFR在表皮基底层细胞的标记情况。结果：随着瘢痕的形成，瘢痕组织与正常皮肤上皮中神经纤维的数量表现为早期明显增多，随着瘢痕的成熟，神经纤维的数量逐渐减少。EGFR的表达与NFP的动态变化呈现一致性，瘢痕早期表皮细胞生长因子受体的表达较强，瘢痕后期表达减弱。结论：增生性瘢痕与正常的皮肤中NFP的变化和EGFR活性与创面愈合的结局密切相关。神经调节在瘢痕形成的过程中可能充当了重要的角色。     

猪骨髓间质干细胞的分离培养及分化潜能的鉴定

目的：建立猪骨髓间质干细胞(MSCs)的体外分离培养和鉴定的方法，探讨体外培养的间充质干细胞的一些生物学特点，为利用猪的实验研究提供实验基础。方法：猪的髂嵴穿刺吸取骨髓，经密度梯度离心得到骨髓单个核细胞，接种后形成单层贴壁的成纤维样的细胞。检测细胞周期，多向诱导分化鉴定分离的细胞。结果：体外培养的原代MSCs12～14d达到融合，传代后仍具有分化成骨的能力，细胞周期显示有80％的细胞处于GO／G1期。结论：体外培养猪的MSCs具有分化成骨的潜能，生长稳定，传代后仍保持未分化状态．猪骨髓间充质干细胞分离培养体系的建立为基础研究和组织工程提供了一个有价值的动物模型。     

皮肤损害过程中肉芽组织形成与微血管结构的关系

目的:皮肤创伤处理不当可引发以上皮和肉芽组织过度增生为特征的假性上皮瘤样增生(PEH)病变。探讨微血管密度及其基底膜相关成分缺乏机制与PEH病变形成的关系。方法:将11例来自创(烧)伤后继发PEH病变(n=11)及其边缘正常皮肤(PEH-N,n=6)标本,采用免疫组织化学双染色方法观察微血管内皮细胞(micovascularordothelialcell,MEC)CD34、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原、基质金属蛋白酶-2(MMP-2),MMP-3和MMP-9蛋白的表达水平和特征,并结合组织病理学和透射电镜观察MEC组织形态学改变。结果:与PEH-N相比,PEH组织中CD34,LN和Ⅳ型胶原阳性微血管分布密集,但浅层组织MEC的MMP-2,-3,-9蛋白水平升高,尤以MMP-9升高明显,且基底膜LN和Ⅳ型胶原信号显著减弱甚至消失,血管外炎症细胞密集浸润。超微结构显示,浅层肉芽组织中MEC分裂旺盛,缺乏完整的基底膜结构。结论:MEC过度表达MMPs是导致基底膜和间质相关成分缺失、炎症细胞浸润和上皮组织假性瘤样增生等连锁反应的重要环节。     

胰岛素样生长因子及其受体在难愈性溃疡组织中的表达特征

目的探讨IGF-Ⅰ与其受体两亚基(α,β)在正常皮肤和溃疡中的分布和表达特征。方法溃疡8例和正常皮肤8例用免疫组化方法确定3种蛋白定位和表达量。结果在溃疡组织中,与正常皮肤相比IGF-Ⅰ表达虽有所升高,但增加不显著(P>0.05),蛋白定位差异无显著性意义。含有IGF-ⅠRα和IGF-Ⅰβ蛋白的阳性细胞主要为部分表皮细胞、单核细胞和巨噬细胞,两种蛋白的阳性表达率分别降至正常皮肤的43.9%和50.0%(P<0.05)。结论在IGF-Ⅰ因子高浓度环境中,溃疡创面难愈性修复可能与IGF-Rα和IGF-Ⅰβ蛋白表达下降,引起因子与受体结合发生障碍相关。     

烧伤血清对大鼠骨髓间充质干细胞基因表达的动态影响

目的:观察烧伤大鼠血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞基因表达的影响。方法:实验于2003-06/2004-4在解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室完成。①断头法处死Wistar大鼠,取股骨并暴露骨髓腔,用培养基冲洗骨髓腔,将骨髓细胞悬液用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞并接种于培养瓶,贴壁法培养骨髓间充质干细胞。②用沸水烫伤的方法制作15%TBSAⅢ度烧伤模型。③烧伤3d后经腹主动脉取烧伤大鼠血液,分离血清备用。④同样取正常大鼠血液,分离血清备用。⑤骨髓间充质干细胞传代后分别用含有体积分数为0.1的正常大鼠血清(正常血清组)和烧伤后3d大鼠血清(烧伤血清组)的F-12培养基培养24h及72h。⑥从处理过的间充质干细胞内提取RNA,反转录为cDNA并以cy3-dUTP和cy5-dUT进行标记为荧光探针。⑦以含有5705种基因的寡核苷酸微阵列检测两组细胞基因表达的差异。结果:①烧伤血清处理不同时间后,两组间充质干细胞对比,均有不同数量的基因表达存在明显差异。②烧伤血清处理24h后,两组相比较有4条基因表达存在明显差异。③烧伤血清处理72h后,两组相比较有11条基因表达存在明显差异。④两个时间点差异表达的基因无相同基因。结论:烧伤后大鼠血清刺激间充质干细胞,使其基因表达发生了改变,且随着烧伤血清处理时间的不同,差异表达的基因也发生动态变化。这种改变可能与间充质干细胞受到刺激后参与创面修复有关。