人膜联蛋白Ⅴ在乙肝病毒感染胎盘中的作用研究

目的 检测人膜联蛋白Ⅴ在乙肝病毒感染胎盘中的表达,探讨其在乙肝宫内感染中的意义.方法 用SP法检测30例HBsAg阳性孕妇足月分娩胎盘和20例乙型肝炎病毒血清标志物阴性的正常足月胎盘人膜联蛋白Ⅴ的表达、分布,并进行定量分析.结果 实验组和对照组标本的绒毛滋养层细胞、绒毛间质细胞、毛细血管内皮细胞均可见棕黄色人膜联蛋白Ⅴ表达的阳性信号;乙型肝炎病毒感染胎盘中人膜联蛋白Ⅴ的表达由母面绒毛滋养层细胞、绒毛间质细胞至胎儿面绒毛毛细血管内皮细胞逐层递减;乙型肝炎病毒感染组和正常组人膜联蛋白Ⅴ比较,前者的平均灰度比后者明显增高,具有显著性差异(t=-2.558,P<0.05).结论 乙型肝炎病毒感染的胎盘组织人膜联蛋白Ⅴ的表达上调,人膜联蛋白Ⅴ可能作为受体介导了乙型肝炎病毒与胎盘组织细胞的内吞和摄入等过程,从而导致了乙型肝炎病毒对胎盘的感染.     

Toll样受体4和Toll样受体7在乙型肝炎病毒感染孕妇胎盘组织中的表达及意义

目的探讨Toll样受体4(TLR4)和Toll样受体7(TLR7)在乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)携带孕妇分娩后胎盘组织中的表达情况及临床意义。方法选取2014年2月-2016年2月在深圳市第三人民医院住院分娩的76例HBsAg携带孕妇分娩后的胎盘组织,采用免疫组化法检测胎盘组织中的HBsAg、TLR4和TLR7表达情况以及原位杂交法检测HBV-DNA感染情况,并同时记录孕妇分娩前血清HBV-DNA水平及乙肝标志物检查情况,以探讨胎盘组织中TLR4和TLR7表达情况与乙肝宫内感染的相关性。结果 HBsAg阳性孕妇分娩后胎盘感染HBV阳性率为36.8%,TLR4和TLR7在感染HBV胎盘组织中的表达明显低于未感染HBV的胎盘组织,并与孕妇血清HBV-DNA水平及HBeAg阳性密切相关。结论 TLR4和TLR7在胎盘上的表达与乙肝病毒胎盘感染机制相关。     

被动免疫阻断乙型肝炎宫内感染与胎盘感染

目的 探讨乙型肝炎(简称乙肝)孕妇经被动免疫阻断乙肝病毒(HBV)宫内感染的疗效及胎盘感染与新生儿感染的关系. 方法 100例乙肝表面抗原(HBsAg)阳性的孕妇于妊娠28、32、36周各注射乙肝免疫球蛋白200 IU者,为免疫组,42例HBsAg阳性的孕妇因各种原因妊娠期未注射乙肝免疫球蛋白者,为非免疫组.对所有分娩的新生儿用荧光定量(PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血中HBV-DNA含量及乙肝两对半HBsAg、乙肝病毒表面抗体(HBsAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAs)、-乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒核心抗体(HBcAb),同时对胎盘采用免疫组化法测定乙肝感染标志物HBsAg和HBcAg. 结果 免疫组新生儿HBV的感染率为5.0%(5/100),非免疫组的感染率为16.7%(7/42),2组比较,差异有统计学意义(P<0.05);被动免疫组胎盘HBV感染率为35.0%(35/100),非免疫组为59.5%(25/42),2组比较,差异有统计学意义(X2=7.29,P<0.01)结论 被动免疫可以降低HBV官内感染的发生率,HBV官内感染与胎盘感染相关.     

乙肝血清标记物阳性孕妇的胎盘组织和PBMC的HBVDNA检测及意义

为探讨乙型肝炎病毒（HBV）宫内感染的机理,本文采用原位分子杂交技术,测定了20份外周血HBsAg/HBeAg双阳孕妇胎盘组织和24份HBsAg阳性孕妇外周血单核细胞（PBMC）的HBV DNA,结果发现,胎盘组织HBV DNA均阳性;HBV DNA主要分布于胎盘蜕膜,而绒毛滋养层细胞未见阳性,提示HBV已侵袭胎盘蜕膜,且可能在蜕膜细胞中有复制,但未累及绒毛,PBM HBV DNA测定结果表明,HBV DNA阳性率为58．3％（14／24）,阳性的孕妇中,有2例其婴儿发生了宫内感染。     

实时荧光定量PCR检测HBV阳性孕妇胎盘组织TLR3的表达

[目的]了解toll样受体3(TLR3)与孕妇乙肝病毒(HBV)感染的关系.[方法]提取组织总RNA,逆转录成mRNA,采用qRTPCR (real-time quantitative, RT-PCR实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应相对定量的方法)分别检测正常孕妇和HBsAg阳性孕妇胎盘组织中TLR3 mRNA,从基因水平比较TLR3在两组表达的差异.[结果]实时荧光定量PCR技术结果显示,病例组TLR3 mRNA的含量低于对照组.病例组Ct比值(TLR3/β-actin)为1.7029±0.20306,对照组为1.3882±0.19125,两组比较差异有统计学意义(t=-4.698,P=0.000<0.05).[结论]胎盘组织中TLR3表达与孕妇HBV感染有一定关系.TLR3高表达可能是孕妇HBV感染的保护因素.     

正常和HBsAg阳性孕妇胎盘中TLR3检测分析

目的了解Toll样受体（TLR3）在正常和HBsAg阳性孕妇胎盘各层细胞中的分布，探索TLR3在胎盘HBV感染中的作用。方法免疫组织化学（SABC）法检测19例正常孕妇胎盘和102例HBsAg阳性孕妇胎盘组织中TLR3和HBsAg。结果TLR3在正常孕妇胎盘阳性率100．00％（19／19），HBsAg阳性孕妇胎盘阳性率74．51％（76／102）；102例HBsAg阳性孕妇胎盘发生乙型肝炎病毒（HBV）感染为33例；TLR3在正常孕妇胎盘和HBsAg阳性孕妇胎盘上的分布差异有统计学意义（X^2=6．17，P=0．012）；TLR3与胎盘HBV感染的关系差异有统计学意义（X^2=13．581，P=0．0001）。结论TLR3可能是HBsAg阳性孕妇胎盘发生HBV感染的一个保护因素（OR=0．180．95％CI=0．069-0．469）。     

HBsAg阳性孕妇胎盘HBV感染状况及危险因素

目的　探讨HBsAg阳性孕妇胎盘乙型肝炎病毒 (HBV)感染状况及其危险因素。 方法　采用ELISA检测孕妇血清HBeAg ;巢式PCR检测孕妇及新生儿血清HBVDNA ;免疫组化ABC法检测胎盘中的HBsAg ;非条件Lo gistic回归模型分析胎盘HBV感染的危险因素。 结果　受检的 2 0 5例胎盘中有 4 1例存在不同程度的HBV感染 ,并且蜕膜细胞 (DC)、滋养层细胞 (TC)、绒毛间质细胞 (VMC)和绒毛毛细血管内皮细胞 (VCEC)阳性率呈逐层下降趋势(趋势 χ2 =9 38,P <0 0 0 5 ) ,阳性率分别为 2 0 0 0 %(41 / 2 0 5 ) ,1 8 0 5 %(37/ 2 0 5 ) ,1 4 1 5 %(2 9/ 2 0 5 )和 1 0 2 4 %(2 1 /2 0 5 ) ;胎盘HBV感染的危险因素为产前注射高效价免疫球蛋白 (HBIG) 3次以上和母亲血清HBVDNA阳性 ,OR值分别为 0 2 1和 4 77。结论　HBV可感染胎盘各层细胞 ;HBV经胎盘及胎儿的主要途径是经血和 (或 )细胞传递方式实现 ;胎盘屏障在一定程度上对胎儿有保护作用 ;母亲血清HBVDNA阳性是胎盘感染的危险因素 ,产前注射HBIG可预防HBV胎盘感染 ,从而降低宫内感染的隐患。     

Fas、Bcl-2与胎盘细胞凋亡的关系及在子痫前期发病中的作用

目的 探讨凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在胎盘滋养叶细胞中的表达及其意义,滋养叶细胞凋亡与Fas、Bcl-2两种蛋白的关系,从而于细胞凋亡的角度探讨子痫前期的发病机制.方法 用免疫组织化学SP法检测重度子痫前期患者20例,轻度子痫前期20例(试验组),同时选择同期正常晚孕妇女20例(对照组)做胎盘组织中Fas、Bcl-2蛋白的表达及滋养叶细胞凋亡检测.结果 细胞凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在子痫前期及正常孕妇胎盘组织中均有表达.Fas蛋白的表达在试验组明显高于对照组(P＜0.05),Bcl-2蛋白的表达在试验组低于对照组(P＜0.05);在试验组及对照组均可观察到细胞凋亡现象,在滋养层细胞(合体细胞滋养层及细胞滋养层)、间质细胞、血管内皮细胞胞浆及细胞核内均有表达,尤以合体细胞最多见.试验组细胞凋亡较对照组明显增多(P＜0.05).子痫前期时,Bcl-2与Fas蛋白的表达呈负性相关;Bcl-2蛋白表达与胎盘细胞凋亡呈负性相关,而Fas蛋白的表达与胎盘细胞凋亡呈正性相关(P＜0.01).结论 子痫前期的发病原因可能与胎盘滋养叶细胞凋亡及Bcl-2、Fas基因异常表达有关.     

胎盘人膜联蛋白Ⅴ和β2糖蛋白Ⅰ在乙型肝炎病毒宫内感染胎盘组织中的表达及意义

目的研究孕妇足月胎盘上人膜联蛋白Ⅴ(HAV)及β2糖蛋白Ⅰ(β2GPI)的表达变化,并探讨其在新生儿乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染胎盘组织中的意义,从细胞分子水平角度探讨HBV宫内感染发生的机制。方法选取2013年7月-2014年1月在南昌大学第二附属医院妇产科分娩的血清乙肝表面抗原(HBsA g)阳性且肝功能正常、无其他任何妊娠并发症与合并症的40例单胎足月孕妇为研究对象,采用Elivision Plus/HRP免疫组化方法检测孕妇胎盘HAV、β2GPI蛋白,另选取20例HBV正常孕妇胎盘为对照组。结果血HBsA g阳性孕妇足月胎盘组织中HAV及β2GPI蛋白的表达明显高于对照组(P0.05),且HAV及β2GPI蛋白在HBV DNA阳性组胎盘中的表达明显高于HBV DNA阴性组胎盘中的表达(P0.05)。HAV与β2GPI蛋白在外周血HBsA g阳性孕妇足月胎盘组织中的表达呈正相关(r=0.538,P0.05)。结论 HAV、β2GPI蛋白在HBsA g阳性胎盘组织中的表达明显上调,且两者呈正相关,两种蛋白在HBV宫内感染的发生、发展中起协同作用。     

HBV宫内感染及其频率的研究

采用血清学(ELISA、RIA)、免疫组织化学(ABC法)和核酸分子杂交方法研究35例HBsAg阳性孕妇引产胎儿,并以10例HBsAg阴性孕妇引产胎儿为对照。结果从胎心血中检测到HBsAg和抗-HBcIgM,从胎肝组织査出HBcAg和HBVDNA证实胎儿在宫内感染了HBV。血清学、免疫组化和分子杂交检测,HBV宫内感染的检出率分别为20.0%(7/35)、5.9%(1/17)和44.4%(12/27),表明HBV宫内感染是HBV感染的重要途径。     

补体C3c及免疫复合物在HBV宫内传播中作用

目的探讨补体C3c及HBsAg-抗-HBs-补体C3c免疫复合物在乙型肝炎病毒（HBV）宫内传播机制中的作用。方法运用直接免疫荧光标记方法和免疫荧光双标记法分别检测母血乙肝表面抗原阳性胎盘组织中C3。及HBsAg-抗-HBs-补体C3c复合物的分布，在激光共聚焦显微镜下进行观察。结果在感染HBV的胎盘组织中，存在补体C3c和HBsAg-抗HBs-补体C3c复合物，位于胎盘滋养层细胞。结论HBV感染胎盘组织时，可能首先通过HBsAg-抗HBs-补体C3c复合物沉积在滋养层细胞表面与相应的IgG-Fc受体或补体成分C3结合，这对HBV病毒颗粒最终感染胎盘组织有着重要的意义。     

血清及胎盘上血管内皮细胞生长因子表达与子痫前期的相关性

目的:研究子痫前期患者血清和胎盘组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达情况。方法:血清VEGF测定采用ELISA法,采用SP免疫组化法检测VEGF石蜡包埋的胎盘组织,切片,HE染色,光镜观察。将制好切片置显微镜下观察。结果判定:每张切片至少观察10个高倍视野,观测胎盘绒毛滋养细胞及间质细胞VEGF的表达。结果:子痫前期患者血清和胎盘组织中VEGF的表达均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且与疾病的严重程度相一致。结论:VEGF可能通过直接或者间接途径影响滋养细胞的侵袭能力,参与子痫前期的发生发展,研究VEGF可能为子痫前期的早期诊断和治疗提供新的方法。     

Cytotrophoblast cells from human first-trimester placental villi: isolation,characterization, cultivation and research applications

INTRODUCTION: Successful implantation and placentation are essential for the normal intrauterine development of the fetus. Trophoblast cell proliferation, differentiation, invasive behaviour and interaction with the maternal immune system are known to have an impact on these processes. Trophoblast cells do not only physically anchor the developing fetus to the uterus, but they give rise to the syncytiotrophoblast. This is the principal endocrine component of the placenta, and participates in essential metabolic processes and in the defence against transplacentally transmitted infections. Therefore, placental trophoblasts play an important role in the establishment and maintenance of pregnancy. AIM OF THE STUDY: The authors summarize their experience with the isolation, characterization and culture of cytotrophoblast cells from first-trimester human placentae. MATERIALS AND METHODS: The simultaneous preparation of highly enriched human placental trophoblast populations from first-trimester placental villi (6-12 weeks of gestation) by sequential trypsinization, Percoll gradient centrifugation, and negative selection with anti-CD45 or HLA-ABC and HLA-DP, DQ, DR immunomagnetic separation is described. Characterization of freshly isolated and cultured cytotrophoblast cells has been performed by immunohistochemistry, immunofluorescent staining, measurement of hCG production and analysis of matrix metalloproteinase production by substrate gel zymography. RESULTS AND CONCLUSION: On the basis of immunohistochemical and functional data the isolated cells proved to be cytotrophoblasts. This method of isolation and cultivation should facilitate in vitro studies of trophoblast differentiation, invasion, endocrine function, virus interaction, and immunology.     

乙型肝炎病毒宫内传播机制的分子流行病学研究

为了解乙型肝炎病毒 ( HBV)宫内传播的危险因素与机制 ,笔者进行了病例对照研究与胎盘组织的免疫组化。收集陕西省妇幼保健院 2 4 2例 HBs Ag阳性的孕妇及其新生儿作为研究对象。结果显示 ,母亲 HBe Ag阳性 ( OR=32 .63)和先兆早产史 ( OR=2 2 .80 )是主要的危险因素。在 32例足月孕妇的免疫组化 HBs Ag阳性的胎盘组织中 ,HBs Ag阳性率在脱膜细胞层为 10 0 % ,滋养层细胞为 59.38% ,绒毛间质细胞为 65.50 % ,绒毛毛细血管内皮细胞为 39.38% ,表明 HBV感染从母面到胎儿血管呈逐渐下降趋势 ( P<0 .0 1)。而且绒毛毛细血管 HBs Ag阳性与婴儿宫内感染有关( OR=2 0 .86,P<0 .0 1)。根据上述结果 ,我们提出假设 :HBV宫内传播可能有两条途径 :经先兆早产等引起的胎盘血管渗漏的“血源传播”和 HBV经胎盘各层细胞“转移”至胎儿血循环的“细胞转移传播”。     

Gestational tissue phospholipase A2 messenger RNA content and the onset of spontaneous labour in the human

Considerable evidence supports a central role for prostaglandins in the genesis of uterine activity and cervical dilatation at the time of human labour. The first step in prostaglandin synthesis is the liberation of arachidonic acid from glycerophospholipids by phospholipase A2. In this study, we examined the periparturitional gene expression of PLA2 in human placentae and fetal membranes, using a cDNA clone for non-pancreatic PLA2. PLA2 gene expression was found to be significantly increased (P less than 0.05) in placentae obtained after spontaneous-onset labour and normal vaginal delivery as compared with placentae from elective Caesarean section. In both of these groups, PLA2 expression in amnion and chorion was significantly less than that in placenta. The results of this study suggest that placental PLA2 gene expression increases in association with spontaneous-onset of labour in the human. This conclusion is consistent with the finding of increased levels of prostaglandins in gestational tissues, amniotic fluid and blood plasma at the time of labour.     

凋亡抑制蛋白Survivin在人正常胎盘滋养细胞中的表达及其与Bcl-2、Bax的关系

目的探讨凋亡抑制蛋白Survivin在人正常各期胎盘滋养细胞中的表达，及其与Bcl-2、Bax表达的关系。方法将30例孕妇分为早孕组（10例），中孕组（10例）和足月组（10例），取正常妊娠8-9周、18-23周、37-40周胎盘组织固定，石蜡包埋，采用免疫组织化学方法检测各期胎盘滋养细胞中Survivin、Bcl-2及Bax的表达情况。结果Survivin在3组胎盘滋养层的表达随孕期的增长逐渐减弱（Pu值分别为：11.74±0.8，9.95±0.43，8.83±0.67，P〈0.01）；相反，Bcl-2和Bax均随孕期的增长逐渐增加（Bcl-2的Pu值分别为：4.33±0.60，5.00±0.75，6.87±0.45。P〈0.01；Bax的PU值分别为：9．82±1．12，16．00±1．05，27．48±2．10，P〈0．01）；Bcl-2、Bax与Survivin均呈无相关（P〉0．05）。结论Survivin可能通过抑制滋养细胞凋亡的途径参与了正常妊娠胎盘的发育。Survivin的表达与Bcl-2、Bax表达无相关，提示抑制细胞凋亡的过程中，它们是通过不同的途径发挥各自的生物学作用。     

Fasl在重度子痫前期胎盘滋养细胞表达的研究

目的:通过比较正常孕妇与重度子痫前期患者胎盘滋养细胞表面Fasl(Pas配体)表达,进一步从分子免疫学角度探讨重度子痫前期的免疫病理机制。方法:用特异性的Fasl抗体对重度子痫前期患者胎盘滋养细胞表面Fasl进行免疫组化染色,并通过高清晰彩色病理免疫组化测量系统对其定量分析,与同孕周的正常孕妇进行比较。结果:Fasl主要表达于胎盘绒毛合体滋养细胞及细胞滋养细胞的胞浆及胞膜内。重度子痫前期组胎盘滋养细胞表面Fasl表达强度明显低于正常对照组,两者间差异有非常显著意义(P<0.01)。Fasl在重度子痫前期组胎盘的表达与新生儿出生体重、胎盘均有明显相关性。结论:胎盘滋养细胞表面Fasl表达减少,导致母胎间的免疫耐受的破坏,引起异常的免疫反应可能是妊高征发病的重要机制。诱导Fasl的产生或调节母胎间的免疫耐受,将为临床治疗重度子痫前期提供新的方向。     

The human materno-foetal relationship in malaria: I. Identification of pigment and parasites in the placenta

To facilitate investigations of the consequences of malarial infection during human pregnancy, several methods for the recognition of pigment and parasites in the placenta were evaluated. Pigment was visualized in infected blood smears and placental tissue using both white light and modified fluorescence microscopy. However, the characteristic pigment dots observed with fluorescent light were also apparent in unstained cryostat and deparaffinized placental sections, and following reaction with immunohistological reagents. Intact parasites were recognized immunohistologically in placental sections and blood smears using rabbit antisera to Plasmodium falciparum and P. berghei. Using these procedures, numerous erythrocytes containing parasites associated with small pigment dots were seen in intervillous spaces in heavily infected placentae. In these organs, larger irregular pigment aggregates were present within maternal cells which were shown to be monocytes by esterase staining. Pigment was also observed in the cytoplasm of the trophoblast and not infrequently in the mesenchymal stroma, but no intact parasites were observed within chorionic villi. These simple and sensitive methods thus confirm placental localization of parasites and pigment. Furthermore, the finding of pigment in all Gambian placentae examined, of which seven were thought initially to be uninfected, indicates that malaria may complicate pregnancy more frequently than hiterto anticipated.     

胶体金探针对HBV全基因转染滋养细胞中HBsAg的示踪研究

目的通过胶体金探针标记乙肝病毒（HBV）全基因转染的人胎盘滋养细胞（HPT-8-HBV）,示踪乙肝表面抗原（HBsAg）在HPT-8-HBV细胞中的分布。方法通过脂质体介导的方法将HBV全基因转染HPT-8细胞,G418筛选,通过ELISA、免疫组化对转染细胞进行检测;采用胶体金标记的HBsAg单克隆抗体作为探针（简称胶体金探针）对转染细胞中的HBsAg进行标记示踪。结果成功将质粒pcDNA3—3HBV转染到HPT-8,转染后第1、2代培养上清ELISA检测显示HBsAg阳性,免疫组化检测第2代转染细胞中HBsAg阳性;通过胶体金探针标记发现HBsAg存在于转染滋养细胞中的粗面内质网、分泌泡、空泡和溶酶体内,以及细胞膜和绒毛上。结论可以从重组质粒pcDNA3—3HBV转染的滋养细胞的树脂切片中获得HBsAg的超微结构定位。     

HIF-1α及caspase-3在特发性胎儿生长受限胎盘组织中的表达及意义

目的:探讨特发性胎儿生长受限(IFGR)患者胎盘组织中HIF-1α及caspase-3的表达及在发病机制的作用。方法:选取郑州大学第三附属医院2010年7月～2011年3月剖宫产分娩的IFGR孕妇30例作为实验组,同期因社会因素剖宫产分娩的正常足月孕妇30例作为对照组。采用免疫组化SP法检测两组胎盘组织中HIF-1α、caspase-3的表达。结果:①实验组及对照组的胎盘组织中均有HIF-1α、caspase-3蛋白不同程度的阳性表达。②HIF-1α、caspase-3在胎盘合体滋养细胞上的表达,实验组高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:①胎盘组织中HIF-1α、caspase-3表达增加可能是IFGR发病机制中的关键环节之一。②本结果为临床上应用干预手段预防或治疗IFGR提供依据。