西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435和MCF-7细胞增殖的影响

研究西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞MDA-MB-435和MCF-7细胞增殖以及Bcl-2,Bax,TP53 mRNA及蛋白表达的影响,以期探讨西黄丸抗乳腺癌的作用特点和机制。大鼠灌胃给药制备西黄丸含药血清,实验设置大鼠空白血清组(Control)和西黄丸含药血清组(XH),以含药血清干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-435和MCF-7,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR法检测Bcl-2,Bax,TP53 mRNA的表达,免疫荧光法检测Bax蛋白的表达。结果显示,西黄丸大鼠含药血清可抑制MDA-MB-435细胞增殖(P0.05),西黄丸大鼠含药血清可以提高MDA-MB-435细胞中TP53和Bax mRNA以及Bax蛋白的表达(P0.05),降低Bcl-2/Bax的比值(P0.05)。同时西黄丸含药血清可以上调MCF-7细胞中Bax mRNA,并降低Bcl-2/Bax的比值(P0.05),而西黄丸含药血清干预MCF-7细胞后TP53 mRNA和Bax蛋白表达无显著性差异。结果表明,西黄丸含药血清可诱导雌激素受体阴性乳腺癌细胞凋亡,机制有可能是通过上调TP53 mRNA表达,从而诱导凋亡蛋白Bax表达,促进Bax向线粒体转移,最终发挥诱导细胞凋亡作用。     

温下方逆转MCF-7/ADM细胞耐药及诱导凋亡作用

目的:研究自拟温下方逆转MCF-7/ADM细胞耐药、诱导凋亡作用.方法:MTT法研究温下方含药血清对MCF-7/ADM耐药逆转作用,流式细胞术测定细胞内药物浓度及耐药相关蛋白P-gp、凋亡调控蛋白p53、bcl-2的表达,激光共聚焦显微镜技术检测细胞内钙浓度及线粒体膜电位.结果:温下方含药血清可提高MCF-7/ADM对化疗药的敏感性,增加胞内化疗药物浓度,使P-gp表达下降,p53表达增高,胞内钙浓度及线粒体膜电位均降低.结论:温下方可部分逆转MCF-7/ADM耐药,其逆转机制可能与诱导耐药细胞凋亡密切相关.     

益气活血解毒方对肺癌A549/DDP耐药细胞株JAK2-STAT3信号通路的干预作用研究

目的观察益气活血解毒方对A549/DDP耐药细胞JAK2-STAT3信号通路分子JAK2、STAT3表达的影响。方法培养A549细胞、A549/DDP细胞,分别用高、中、低剂量益气活血解毒方含药血清进行干预,MTT法筛选最佳浓度的含药血清,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot技术检测各组细胞中JAK2、STAT3蛋白表达变化,RT PCR技术检测各组细胞中JAK2、STAT3 mRNA表达变化。结果益气活血解毒方含药血清作用48h能明显抑制A549/DDP细胞增殖,且最佳浓度为中剂量;与对照血清组比较,益气活血解毒方最佳含药血清组A549/DDP细胞凋亡率明显提高(P0.05);与A549细胞组比较,A549/DDP细胞组JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达明显降低(P0.05),与对照血清组比较,益气活血解毒方最佳含药血清组A549/DDP细胞JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达明显升高(P0.05)。结论益气活血解毒方干预肺癌化疗耐药的作用可能是通过调节JAK2-STAT3信号通路,促进细胞凋亡实现的。     

四君子汤含药血清对SGC-7901细胞株凋亡及其相关蛋白表达的影响

目的:研究四君子汤含药血清对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。方法:应用体外培养方法和流式细胞技术,检测四君子汤含药血清对人胃癌SGC-7901细胞的细胞凋亡率及其凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的阳性标记率。结果:用药后应用流式细胞仪检测胃癌SGC-7901的细胞凋亡,发现6 h2、4 h4、8 h后四君子汤含药血清高、中剂量组与两对照组相比较细胞调亡率显著增加,其中48 h高、中剂量组凋亡率增加最为显著(P<0.01)。并且随着时间的延长凋亡率增高,呈时间剂量依赖性,48 h高剂量组与中低剂量组比较,有明显增加(P<0.05)。48 h后细胞周期分布,随着四君子汤含药血清剂量的增加,G0/G1期细胞增多,而S期及G2/M期细胞则相应减少。细胞培养48 h后,高、中剂量四君子汤含药血清可促进凋亡诱导Bax表达和下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,呈现量效关系。结论:四君子汤含药血清可影响Bax基因及Bcl-2基因的表达而诱导胃癌细胞凋亡。     

温下方抑制肺癌A549细胞增殖及对PCNA Rb CyclinD1表达的影响

目的:研究温下方对肺癌A549细胞增殖的抑制作用及对PCNA、Rb、CyclinD1表达的影响。方法:正常血清及不同浓度的温下方含药血清作用于A549细胞,MTT法检测含药血清对A549细胞的抑制作用,激光共聚焦显微镜观察PCNA、Rb、CyclinD1的表达。结果:温下方大、小剂量含药血清组作用24h抑制率为29.85%、25.90%,作用36h抑制率为42.02%、35.10%;PCNA表达降低至3.08±0.97、3.15±0.88,CyclinD1表达降低至2.65±0.83、2.70±0.79。结论:温下方可明显抑制肺腺癌细胞的增殖,明显降低PCNA、CyclinD1表达。     

温下方抑制肺癌A549细胞增殖及对PCNA Rb CyclinDl表达的影响

目的：研究温下方对肺癌A549细胞增殖的抑制作用及对PCNA、Rb、CyclinD1表达的影响。方法：正常血清及不同浓度的温下方含药血清作用于A549细胞,MTT法检测含药血清对A549细胞的抑制作用,激光共聚焦显微镜观察PCNA、Rb、CyclinD1的表达。结果：温下方大、小剂量含药血清组作用24h抑制率为29.85%、25.90%,作用36h抑制率为42.02%、35.10%;PCNA表达降低至3.08±0.97、3.15±0.88,CyclinD1表达降低至2.65±0.83、2.70±0.79。结论：温下方可明显抑制肺腺癌细胞的增殖,明显降低PCNA、CyclinD1表达。     

姜黄煎对大鼠血管损伤后Bcl-2与Bax和p53的表达影响意义

目的:探讨姜黄煎对大鼠血管损伤后血清中Bcl-2与Bax和p53的表达影响意义。方法:模拟PCI术,采用ELISA法检测144只大鼠血清中Bcl-2与Bax和p53含量。其中姜黄煎干预组36只,生理盐水干预组36只,并与36只假手术组和36只正常组作为对照。结果:姜黄煎组,生理盐水组,假手术组,血清Bcl-2与Bax和p53含量与正常对照组比较差异明显(P0.05);假手术组血清Bcl-2水平含量接近于正常对照组,差异不明显(P0.05);姜黄煎组血清Bcl-2与Bax含量和p53含量与生理盐水干预组,假手术组比较有明显差异(P0.05);与正常对照组比较差异不明显(P0.05)。结论:姜黄煎可上调大鼠Bcl-2蛋白表达,使Bax的蛋白表达明显下降,说明Bc1-2过量表达,Bax/Bc1-2的比值增大,能抑制内皮细胞过度凋亡。二者的比例是决定细胞是否发生凋亡的重要调控因素。同时姜黄煎能够阻滞细胞周期降低P53蛋白的表达,迅速恢复内皮功能,保持完整血管内皮结构。因此,Bcl-2与Bax和p53参与了再狭窄的病理生理变化。检测患者血清Bcl-2与Bax和p53含量的异常变化,可能有助于评估血管损伤后凋亡因子对血管内皮功能和结构的影响。     

基于AMPK-mTOR信号通路探讨甲亢宁胶囊干预Graves病的影响

目的?观察甲亢宁胶囊对人甲状腺正常细胞Nthy-ori-3-1凋亡的影响，基于磷酸腺甙活化蛋白激酶（AMPK）-雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路探讨甲亢宁胶囊干预Graves病（GD）的影响。方法?M22诱导人甲状腺滤泡上皮细胞株（Nthy-ori-3-1）建立GD细胞模型，设对照组、模型组、空白血清组、甲亢宁含药血清低剂量组、甲亢宁含药血清中剂量组和甲亢宁含药血清高剂量组。CCK8检测甲亢宁含药血清高、中、低浓度干预Nthy-ori-3-1增殖的抑制率；ELISA检测各组细胞上清液中cAMP释放量；流式细胞术检测各组Nthy-ori-3-1细胞凋亡情况；qRT-PCR检测各组B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2-相关X 蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（Caspase-3）mRNA表达；Western Blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、AMPK、mTOR、p-AMPK、p-mTOR蛋白表达。结果?甲亢宁含药血清各剂量组Nthy-ori-3-1细胞凋亡率较模型组增高（P<0.05），且随着药物浓度升高，细胞凋亡率越高（P<0.05）。与对照组比较，模型组的cAMP释放量升高，Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达量及蛋白表达升高，p-AMPK、p-mTOR蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，甲亢宁含药血清低、中、高剂量组cAMP 释放量减低，Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达升高， Bcl-2 mRNA及蛋白表达、p-mTOR蛋白表达降低（P<0.01）；同时，甲亢宁含药血清中、高剂量组p-AMPK蛋白表达升高（P<0.01）。结论?甲亢宁含药血清促进细胞凋亡，对GD细胞凋亡的调控作用可能与通过激活AMPK-mTOR信号通路有关。     

芪玉三龙汤药物血清对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的观察芪玉三龙汤药物血清对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法制备芪玉三龙汤药物血清,体外培养A549细胞。将A549细胞分为正常血清组、5%药物血清组、10%药物血清组和20%药物血清组。CCK-8法和集落形成实验检测A549细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase-3、Bcl-2表达。结果与正常血清组比较,不同浓度芪玉三龙汤药物血清组A549细胞活力明显降低(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.001),10%药物血清组和20%药物血清组A549细胞Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.001)。结论芪玉三龙汤可能通过上调A549细胞Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,进而诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

黄连素诱导体外培养的肺腺癌A549细胞凋亡

目的 研究黄连素对体外培养的A549增殖和凋亡作用.方法 利用MTT法观察黄连素对A549的增殖影响;荧光显微镜观察细胞形态的改变;琼脂糖凝胶电泳检测DNA的损伤;半定量RT-PCR法分析Bcl-2,Bax,p53mRNA的表达情况;流式细胞仪测定细胞周期的阻滞情况;血清药理学观察大鼠含药血清对A549的作用.结果 黄连素能显著抑制A549增殖,并呈一定的量效和时效关系;细胞的形态发生明显改变,出现凋亡小体;DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型的梯状条带;黄连素能够上调Bax、p53,下调Bcl-2的mRNA的表达;大鼠含药血清能显著抑制细胞生长.结论 黄连素能够抑制A549细胞生长 ,诱导凋亡.     

草苁蓉苯丙素苷对肺癌细胞周期分布和凋亡的影响

目的:探讨草苁蓉苯丙素苷(PGBR)对肺癌细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法:采用MTT法观察PGBR对A549肺癌细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测对A549细胞周期分布和细胞凋亡的影响,采用TUNEL染色法检测对A549细胞凋亡的影响,免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白p53,Fas,Bax,Bc1-2蛋白的表达。结果:PGBR可时间和浓度依赖性地抑制肺癌细胞增殖,200 mg.L-1 PGBR作用于A549细胞12,24,48 h时,抑制率分别为(20.4±2.1)%,(27.1±2.0)%,(30.7±2.2)%。PGBR改变肺癌细胞周期分布,使G0/G1期细胞由(45.3±4.1)%增至(57.4±4.0)%,表现出G0/G1期阻滞;同时诱导肺癌细胞凋亡,凋亡率由(2.4±0.90)%增至(7.8±1.2)%。PGBR明显增加p53和Fas表达,增加Bax表达和降低Bc1-2表达。结论:PGBR可通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡而发挥抗肺癌作用。     

虫草素通过抑制NF-κB途径增强A549细胞对顺铂的敏感性

 目的 通过研究虫草素和顺铂单用或联用对肺癌细胞A549的抗肿瘤效应,探讨其可能的作用机制,为临床肿瘤治疗提供新思路。方法 四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度的虫草素与顺铂单用或虫草素与顺铂(3 μg·mL^-1)联用对A549的增殖抑制作用,并计算IC₅₀;采用Hoechst 33258染色法及流式细胞术检测虫草素与顺铂单用或联用诱导A549细胞凋亡情况;Western blot法检测不同处理组的细胞核内NF-κBp65及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平。结果 虫草素与顺铂联用对A549细胞的抑制作用显著增加,增强了顺铂对A549的敏感性; Hoechst 33258染色及流式细胞术显示,与虫草素和顺铂单独用药相比,联合用药能够明显增加顺铂诱导的细胞凋亡;Western blot结果显示,与对照组相比顺铂能够增加细胞核内NF-κBp65的活性,然而虫草素却能抑制NF-κBp65的活性,联合用药后NF-κBp65的活性明显下调;与顺铂单独用药相比,联合用药组能够使促凋亡蛋白Bax表达显著增高,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达则降低。结论 虫草素能够增强顺铂对肺癌细胞A549的敏感性,其作用机制是通过抑制NF-κB途径,调节下游信号分子 Bax和Bcl-2的表达而实现。     

傣百解提取物对人肺癌A549裸鼠移植瘤的影响

目的:探讨傣百解乙酸乙酯提取物(ethyl acetate fraction,EFA)诱导人肺癌A549裸鼠移植瘤生长的抑制作用及作用机制。方法:建立人肺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组,EFA高、中、低剂量(200,100,50 mg·kg-1)组,环磷酰胺组和消癌平组,每组6只。给药3周后剥离瘤组织,比较各组肿瘤质量,计算抑制率;末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测各组移植瘤组织中的细胞凋亡情况;免疫组化法(immunhistochemical staining,IHC)检测瘤组织中p53,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果:与模型组比较,EFA高、中、低剂量组对肿瘤组织具有明显的抑制作用(P0.05,P0.01)。TUNEL法检测结果显示EFA给药处理后,与模型组比较,肿瘤细胞凋亡明显增多。免疫组化结果显示,与模型组比较,各给药组移植瘤p53和Bax蛋白表达明显升高,而Bcl-2表达降低。结论:EFA对人肺癌A549裸鼠移植瘤具有明显的抑制作用,其机制可能与上调p53和Bax蛋白的表达,降低Bcl-2蛋白的表达,诱导肺癌细胞凋亡相关。     

透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨透骨消痛胶囊含药血清影响软骨细胞线粒体凋亡通路的作用机制。方法:SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,Ⅱ型胶原原位杂交鉴定。第3代软骨细胞培养72h,SNP诱导软骨细胞凋亡,采用含药血清干预凋亡软骨细胞,Hocehst 33342染色检测软骨细胞的凋亡率,Real time RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达。结果:干预24h,软骨细胞的OD值,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bcl-2mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bax、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显低于空白组(P<0.05)。结论:透骨消痛胶囊含药血清能下调软骨细胞促凋亡基因Bax、Caspase-9、Caspase-3表达,上调抗凋亡基因Bcl-2表达,抑制软骨细胞线粒体凋亡通路的信号转导。     

薯蓣皂苷含药血清抗氧化损伤致心肌细胞凋亡的研究

 目的 采用血清药理学方法探讨薯蓣皂苷含药血清对氧化损伤心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法 以血清药理学方法采集含药血清。培养原代乳鼠心肌细胞,建立氧化损伤模型,以含药血清进行干预, MTT法检测细胞存活率。Hoechst33258荧光染色法观察药物作用后心肌细胞形态学变化。caspase-3活性测定方法探讨薯蓣皂苷抗凋亡途径。Western blot方法测定薯蓣皂苷对Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。结果 MTT法作用结果显示,将原始收集血清稀释为相当于灌胃0.4、 0.8、1.2 g（生药）·kg^-1浓度时,相对于H₂O₂单纯损伤组和空白血清组心肌细胞有较高的存活率（P     

益气温阳活血利水方对AngⅡ诱导H9c2心肌细胞线粒体凋亡途径的影响

目的观察益气温阳活血利水方含药血清对AngII诱导H9c2心肌细胞线粒体凋亡途径相关Bax、Bcl-2、Caspase-9基因及蛋白的表达变化,探讨益气温阳活血利水方对AngII诱导H9c2心肌细胞凋亡的保护作用的机制。方法AngII诱导H9c2心肌细胞凋亡模型,采用血清药理学方法制备益气温阳活血利水方含药血清并进行干预,使用qRT-PCR、Western Blot、免疫组化方法检测Caspase-9 mRNA和蛋白及Bax、Bcl-2蛋白表达变化。结果益气温阳活血利水方含药血清可提高Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,下调Caspase-9基因及蛋白的表达水平,且含药血清高剂量组改善作用最好。结论益气温阳活血利水方含药血清对AngII诱导H9c2心肌细胞凋亡的保护作用是通过调节线粒体凋亡途径相关Bcl-2、Bax基因蛋白的表达,从而抑制Caspase-9的表达实现的。     

黄芪注射液对H22荷瘤小鼠瘤组织Bax 及Bcl-2蛋白表达的影响

目的:研究黄芪注射液对H22荷瘤小鼠瘤组织Bax及Bcl-2蛋白表达的影响。方法:建立H22荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤试验,将50只荷瘤小鼠随机分为空白对照组(模型组)、环磷酰胺组(CTX组)、黄芪注射液(高、中、低剂量)组,连续ip给药10 d,观察肿瘤生长情况以及小鼠一般情况,绘制肿瘤生长曲线。10 d后处死小鼠,剥取瘤组织称重,计算抑瘤率;采用流式细胞术测定药物作用后肿瘤细胞凋亡率;免疫组化方法检测肿瘤组织Bax及Bcl-2的蛋白表达。结果:小鼠移植瘤H22试验结果显示,在128,,4 g.kg-1的剂量下黄芪注射液的抑瘤率分别为52.36%,33.68%,17.28%。流式细胞术及免疫组化结果表明黄芪注射液各剂量组均可明显增加肿瘤细胞凋亡率;增强Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达,且Bax/Bcl-2明显增高(P<0.05)。结论:黄芪注射液通过促进Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达来诱导H22肿瘤细胞凋亡,进而发挥抑瘤效应。     

加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响

目的:研究加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响,进一步探讨其具体抗肿瘤作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为加味四君子汤低、中、高剂量组(0.213,0.426,0.853 g·kg~(-1)),空白组,每组10只,空白组给予等体积的生理盐水灌胃,各组连续灌胃10 d,末次给药1.5 h后,水合氯醛腹腔麻醉,心脏采血,分离血清,56℃灭菌,0.22μm过滤,制备加味四君子汤高、中、低剂量组含药血清,各剂量组含药血清孵育胃癌细胞SGC-7901,运用流式细胞仪检测细胞早期和晚期凋亡情况,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术检测肿瘤抑制基因p53,c-核蛋白类基因(c-Myc),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关基因B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA的表达,运用细胞免疫荧光技术检测p53,c-Myc,Caspase-3,Bcl-2蛋白的相对表达量情况。结果:与空白组比较,加味四君子汤含药血清高剂量组细胞凋亡比率显著升高(P0.01),且可使胃癌细胞SGC-7901早期+晚期凋亡率达到22.58%(P0.01)。Real-time PCR结果显示加味四君子汤中剂量组能显著促进Caspase-3 mRNA表达(P0.01),加味四君子汤高剂量组能显著上调p53及c-Myc mRNA表达量(P0.01),加味四君子汤高剂量组显著抑制Bcl-2 mRNA表达(P0.01)。免疫荧光结果显示加味加味四君子汤高剂量组能使c-Myc,Caspase-3,p53蛋白表达水平显著升高(P0.01),而Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:加味四君子汤含药血清能抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进凋亡相关分子p53,c-Myc,Caspase-3的表达,发挥抗肿瘤作用。     

中药复方肠胃清含药血清对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响

目的观察中药复方肠胃清含药血清对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法将人胃癌SGC7901细胞分为6组：空白对照组及肠胃清药物血清低、中、高剂量组和5-氟尿嘧啶（5-FU）组、5-FU联合肠胃清中剂量组。用MTT法观察肠胃清药物血清对SGC7901细胞增殖活性的影响;用流式细胞术检测肠胃清药物血清对细胞凋亡的影响;用Western blot检测方法测定细胞P53、Bax与Bcl-2蛋白表达水平;RT-PCR方法检测肿瘤细胞P53、Bax及Bcl-2基因表达。结果肠胃清药物血清能抑制胃癌SGC7901细胞增殖,并诱导细胞凋亡,同时明显抑制Bcl-2蛋白和基因的表达（P〈0.05或P〈0.01）,增强P53、Bax蛋白和基因表达水平（P〈0.05或P〈0.01）。结论中药复方肠胃清能抑制胃癌SGC7901细胞增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与促进P53、Bax基因及抑制Bcl-2基因蛋白表达有关。