低氧诱导下Tca8113细胞HIF-1α与VEGF的表达及血管生成相关性研究

目的:研究在体外缺氧培养条件下舌鳞癌细胞系Tca8113中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1alpha,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,探讨HIF-1α、VEGF在缺氧条件下对舌鳞癌血管生成的作用机制及相互联系。方法:CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境,MTT法检测细胞生长能力。荧光定量PCR,Western blot法分别检测不同缺氧状态下HIF-1α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达并进行相关性研究。结果:MTT发现CoCl2诱导的缺氧对细胞的生长起抑制作用。低氧条件下,Tca8113细胞HIF-1αmRNA水平稳定,蛋白表达显著升高,而VEGF mRNA和蛋白的表达均显著升高。结论:CoCl2诱导的缺氧使Tca8113细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高,并通过转录激活VEGF的表达,调控舌鳞癌的血管生成。     

白细胞介素1β增强口腔鳞状细胞癌细胞体外侵袭能力及其机制研究

目的探讨白细胞介素1β(IL-1β)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞体外侵袭能力的影响及相关机制。方法以OSCC系SCC-9为研究对象,用IL-1β与其体外共培养。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α、VEGF、CXCR1的mRNA的表达情况。结果 IL-1β刺激对SCC-9细胞的增殖能力无影响;IL-1β与SCC-9细胞共培养8h可显著增强其细胞侵袭能力(P<0.05);IL-1β可以显著地提高CXCR1和HIF-1α的转录水平(P<0.05);SCC-9细胞经600ng/ml的IL-1β刺激后,VEGF的mRNA表达出现上调(P<0.05)。结论 IL-1β可以增强SCC-9细胞的体外侵袭能力,并可能与HIF-1α、VEGF、CXCR1等基因的上调有关。     

体外沉默法尼基转移酶对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的 通过RNA干扰沉默法尼基转移酶（FTase）,探讨沉默FTase对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响及其相关机制。方法 针对FTase设计并构建3条小干扰RNA（siRNA）,转染人舌鳞状细胞癌CAL27和SCC-4细胞（实验组）,同时设置阴性对照组（转染NC-siRNA）和空白对照组（不转染siRNA）。应用实时荧光定量PCR检测各组细胞FTase、HRAS的mRNA表达,根据FTase mRNA的表达量,选取沉默效率最高的FTase-siRNA转染组作为进一步研究的实验组。蛋白质免疫印迹法检测各组细胞FTase、HRAS、p65、p-p65(S536)、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测各组细胞的侵袭和迁移能力。结果 与阴性对照组和空白对照组相比,实验组FTase的mRNA和蛋白表达下降（P<0.05）,HRAS的mRNA和蛋白表达无明显变化（P>0.05）,p-p65(S536)、MMP-9、HIF-1α、VEGF蛋白表达下降（P<0.05）,p65蛋白表达无明显变化（P>0.05）;实验组的细胞侵袭和迁移能力降低（P<0.05）。结论 体外沉默舌鳞状细胞癌细胞FTase,可以抑制细胞体外迁移和侵袭能力,为FTase可能作为舌癌治疗的分子靶点提供了一定的理论和实验依据。     

低氧诱导因子-1α在舌鳞状细胞癌中的表达及其与临床预后的关系

目的:探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在舌鳞状细胞癌(tongue squamous cellcarcinoma,TSCC)中的表达及其对临床预后的影响。方法:收集舌鳞状细胞癌组织标本49例以及相应癌旁组织标本15例。免疫组织化学法检测其中HIF-1α的表达。临床随访所选病例患者情况,将随访结果与HIF-1α表达情况进行统计分析。Kaplan-Meier方法分析无病生存期(DFS)和总生存期(OS)生存曲线,Log-Rank分析临床病理学参数与HIF-1α表达之间的意义。多变量Cox回归分析临床参数和HIF-1α表达之间的相关性。结果:在49例舌鳞状细胞癌标本中有43例表达HIF-1α,表达率为87.76%;而在癌旁组织中的表达率为33.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α过表达与T分级(P=0.01)、组织分化(P<0.001)和淋巴结转移(P=0.05)密切相关。同时,HIF-1α过表达、组织分化和淋巴转移均与患者5年生存率(P<0.001,P=0.008,P<0.001)和无病生存率(P=0.01,P=0.020,P<0.001)密切相关。Cox比例风险回归模型表明,HIF-1α的过表达以及淋巴转移是影响舌鳞状细胞癌的预后独立因素。结论:舌鳞状细胞癌中存在HIF-1α的表达,HIF-1α的过表达预示舌鳞癌患者的预后较差。在舌鳞癌的检测与治疗中,它可能作为一个新的靶点发挥作用。     

热休克蛋白在人舌癌细胞株和癌前病变细胞株的差异表达

目的 检测热休克蛋白(HSPs)27、70、90α在舌癌细胞株及癌前细胞株的表达情况.方法 体外培养人舌癌细胞株SCC-15,SCC-6和癌前细胞株DOK.采用RT-PCR测定人舌癌细胞株SCC-15、SCC-6及癌前细胞株DOK中HSP27、HSP70、HSP90α的mRNA表达情况,并作对比分析.采用Western...     

低氧对大鼠髁突软骨细胞HIF-1α和VEGF表达的影响

目的:探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-lα,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)的表达变化在髁突软骨生长发育中的意义。方法:选用3周龄SD大鼠的髁突软骨进行原代细胞培养,建立二氯化钴(CoCl2)化学低氧的细胞培养模型,RT-PCR检测常氧状态下与低氧后12、24、48 h内大鼠髁突软骨细胞HIF-1α和VEGF的mRNA表达。结果:髁突软骨细胞低氧培养后12、24 h、48 h时间点HIF-1α和VEGF的mRNA表达均明显升高(P<0.05);并且VEGF、HIF-1α表达12 h与24 h、12 h与48 h、24 h与48 h比较差异均有统计学意义;HIF-1α表达逐次升高,而VEGF在12 h达到最高点后逐次下降,但是均高于常氧状态下。结论:低氧早期可上调髁突软骨细胞HIF-1α、VEGF mRNA表达,可能在髁突软骨血管形成及生长发育发挥重要作用。     

抑癌基因Lkb1超表达载体构建及其在人舌鳞癌细胞SCC-15中的生物活性分析

目的:了解抑癌基因LKB1对人舌鳞癌细胞的影响,初步探讨其相关通路机制。方法:构建LKB1真核表达载体,通过脂质体转染人舌鳞癌细胞系(SCC-15),利用RT-PCR、Western blot 和流式细胞术来检测SCC-15中基因表达和细胞周期凋亡的变化。结果:LKB1在SCC-15细胞中mRNA水平上成功过表达约300倍,蛋白表达水平也显著上调;同时发现LKB1超表达对细胞周期起阻滞作用,并可上调p53、PTEN和TGF-β,同时下调VEGF的表达,差异均有统计学意义。结论:成功构建了LKB1真核表达载体,该基因在SCC-15细胞中超表达对细胞周期起阻滞作用,调控p53、PTEN、TGF-β和VEGF基因表达,可能参与调控p53和TGF-β等多种信号通路,为进一步研究 LKB1 基因在恶性舌鳞癌发病的机制和临床治疗的作用提供了重要实验依据。     

乏氧对人牙周膜细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的:检测人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)在乏氧环境下乏氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelia1 growth factor,VEGF)的表达情况.方法:组织块法培养人牙周膜细胞,第3代细胞用于实验,分2组分别在20%O2,5%CO2,75%N2(对照组)和1%O2,5%CO2、94%N2(乏氧组)的37℃培养箱中培养24h和48h.采用RT-PCR技术和免疫组化技术检测HIF-1α和VEGF的表达情况.应用SPSS13.0软件包进行t检验、单因素方差分析及LSD检验.结果:乏氧组HIF-1αmRNA的表达与对照组相比,差别无统计学意义.乏氧24h与48h VEGF mRNA的表达显著高于对照组(P＜0.05).免疫细胞化学细胞爬片结果显示,乏氧组HIF-1α染色阳性,大量HIF-1α蛋白在胞核积聚,且表达量随乏氧时间增加而增加,而常氧组未观察到HIF-1α的表达;VEGF的表达呈时间依赖性增加,乏氧组VEGF的表达明显强于对照组.常氧48h后,VEGF呈微弱阳性表达.结论:乏氧可以改变人牙周膜细胞的代谢途径,上调HIF-1α及相关因子的表达.     

NOD1在舌鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的　探索NOD1在舌鳞状细胞癌组织中的表达及意义。方法　采用免疫组织化学、RT-qPCR检测舌鳞状细胞癌组织和正常舌黏膜对照组中NOD1的表达,并分析其临床意义。应用SPSS13.0软件包,对各组m RNA的表达进行t检验。结果　NOD1蛋白表达于细胞质,舌鳞状细胞癌组织中NOD1 蛋白表达率为60 .0％（15/25）,显著低于正常舌黏膜对照组表达率80.0％(20/25,P<0.05)。舌鳞状细胞癌组织NOD1 mRNA表达量为正常舌黏膜对照组（0.437±0.103）倍（P＜0.05）。结论　舌鳞状细胞癌组织中NOD1 mRNA和蛋白表达显著低于正常舌黏膜对照组,但需要在更大样本中验证这一结果,并开展功能学研究以揭示其潜在的生物学机制。     

DNA甲基化和组蛋白乙酰化对人口腔鳞癌细胞中KLF4基因的调控研究

目的：探讨人口腔鳞癌中DNA甲基化和组蛋白乙酰化对KLF4基因的调控作用。方法体外培养人口腔鳞癌细胞系SCC-6,分别用DNA甲基化抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(DAC)、组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A( TSA)处理SCC-6细胞,并据此将SCC-6分为4组,阴性对照组(不做处理)、DAC处理组、TSA处理组、DAC+TSA联合处理组,采用荧光定量PCR方法检测SCC-6细胞经DAC或/和TSA处理前后KLF4 RNA水平的变化；用免疫细胞化学方法检测SCC-6细胞经DAC或/和TSA处理前后KLF4蛋白的变化。结果 SCC-6细胞DAC处理组、TSA处理组、DAC+TSA 组的KLF4 RNA水平与阴性对照组相比均有显著升高(P<0.01)。另外,DAC处理组KLF4 RNA水平均高于其他3组(P<0.01)。 SCC-6细胞DAC处理组中KLF4蛋白表达明显升高,均高于其他3组(P<0.01)。 TSA处理组与DAC+TSA联合组KLF4蛋白表达也都高于阴性对照组(P<0.01)；TSA处理组与DAC+TSA处理组间无显著差异(P>0.05)。结论在口腔鳞状细胞癌SCC-6细胞中导致KLF4基因沉默的主要原因可能为DNA甲基化,此外组蛋白乙酰化可能也参与了KLF4表达的调控,但组蛋白乙酰化在提高KLF4表达方面与去甲基化无明显协同作用。     

口腔鳞状细胞癌组织中HIF—1α，VEGF-C的表达及与淋巴管生成的关系

目的：研究口腔鳞状细胞癌（Orals quamous cell carcinoma,OSCC）组织中乏氧诱导因子-1α（Hypoxiainducible factor-1α,HIF—1α）,血管内皮生长因子-C（vascular endothelial growth factor,VEGF-C）表达水平及微淋巴管密度（LVD）,探讨其临床病理意义及在口腔鳞状细胞癌中的相互关系。方法：应用免疫组织化学SP法检测65例口腔鳞状细胞癌中HIF-1α,VEGF—C,淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1（Lymphatic vessel endothelial hyaluronic acid receptor--1,LYVE—1）的表达并计数LVD。结果：65例OSCC中有43例HIF-1α呈（66．2％）高表达,VEGF--C有34例（52．3％）高表达。HIF-1α和VEGF—C高表达的病例中都出现高淋巴管密度。HIF-1a高表达分别与VEGF--C高表达显著相关（P〈0．05,χ2检验）,与高淋巴管密度显著相关（P〈0．01,Mann—Whitneyu—test）,与区域淋巴结转移显著相关（P〈0.01,χ2检验）而且也同UICCTNM分期相关（P〈0．05,χ2检验）。结论：OSCC中HIF-1α可能通过上调VEGF—C的表达来诱导淋巴管生成并最终导致肿瘤细胞发生区域淋巴结转移。     

HIF-1α基因修饰的牙髓干细胞成血管的体外研究

目的 探讨低氧诱导因子1α( hypoxia inducible factor 1α, HIF-1α )基因对体外诱导牙髓干细胞(dental pulp stem cells, DPSCs)成血管分化方法并进行鉴定。方法 取拔除的健康、完整的前磨牙标本20例,提取DPSCs细胞,采用Strol-1、CD146分子进行鉴定。根据DPSCs是否转染HIF-1α基因分为实验组和对照组,RT-PCR法测定HIF-1α mRNA表达,Western 印迹检测培养1、4、7、14 d不同时间段HIF-1α及成血管相关因子VEGF、SDF-1、Ang-2及PDGF的表达情况。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果 倒置相差显微镜观察,DPSCs多数细胞呈圆形、椭圆形类,免疫荧光观察到Strol-1、CD146均呈绿色荧光。实验组HIF-1α蛋白、mRNA随着时间的延长,表达水平越来越高,差异显著(P＜0.05)。实验组转染后1、4、7、14 d后与对照组相比,HIF-1α蛋白、mRNA显著增高(P<0.05)。对照组血管相关因子VEGF、SDF-1、Ang-2和PDGF随时间的延长,其表达水平无显著差异(P>0.05)。实验组VEGF、SDF-1、Ang-2和PDGF随培养时间延长,其表达水平逐渐升高,不同时间点间差异显著(P<0.05)。与对照组相比,转染后1、4、7、14 d差异显著(P<0.05) 。结论 HIF-1α基因修饰DPSCs能够成功体外诱导其血管分化作用,为进一步血管形成研究奠定了基础。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对舌癌细胞株SCC-4细胞RECK基因甲基化水平及侵袭的影响

目的 探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷5-aza-2-deoxycytidine (5-aza-Dc) 对舌癌细胞株SCC-4中抑癌基因RECK基因甲基化水平及侵袭能力的影响。方法 用不同浓度的5-aza-Dc处理舌癌细胞株SCC-4,72 h后,以甲基化特异性PCR（MSP）检测SCC-4细胞RECK基因的甲基化状态,实时定量 PCR技术检测SCC-4细胞RECK基因mRNA的表达,Western 印迹检测蛋白质表达,Transwell体外侵袭实验检测侵袭能力。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果 MSP检测未处理组细胞RECK基因呈高甲基化状态,经5-aza-dC处理后甲基化得到逆转。实时定量 PCR检测显示,不同浓度5-aza-dC处理SCC-4细胞72 h后, 相对mRNA表达随着药物浓度增加而增加(P<0.05)。Western 印记分析结果显示,不同浓度5-aza-dC组的RECK蛋白表达相对水平随药物浓度增加而增加,SCC-4细胞的侵袭力随药物浓度增加而降低。结论 5-aza-dC可逆转舌癌SCC-4细胞中RECK基因的高甲基化状态,并恢复RECK基因mRNA及蛋白的表达,降低其体外侵袭能力。     

牵张力作用下人牙髓细胞HIF-1α和VEGF的表达

目的:研究牵张力作用下人牙髓细胞HIF-1α和VEGF基因的表达变化,探讨 HIF-1α和VEGF与正畸牙髓组织维持内环境稳定的关系.方法:通过细胞牵张应力加载系统,对细胞施加频率为1.0 Hz、大小为15％形变率的牵张应力,分别加力6h、12h、24h、48 h和72 h实时定量PCR检测不同时间点HIF-1α和VEGF mRNA的表达变化采用SPSS 12.0软件包对数据进行统计学分析 结果:未加力前,HIF-1 αmRNA表达极其微弱;加力6 h时,表达开始升高(P＜0.05);持续增加至24 h时,表达最显著(P＜0.05);加力48 h时,表达缓慢下降(P＜0.01);至加力72 h时,表达下降至未加力前(P＞ 0.05).未加力前,VEGFmRNA表达微弱,加力6h表达开始升高,但无显著差异(P＞0.05);加力12 h 时,VEGF mRNA表达开始明显增强(P＜0.05),持续增加至72 h加力结束时(P＜0.05).结论:牵张力可诱导人牙髓细胞HIF-1α和VEGF mRNA的表达变化,两者可能在维持正畸受力后牙髓内环境稳定中发挥重要作用.     

曲古抑菌素A对舌鳞癌SCC-6细胞生物学行为的影响

目的:观察曲古抑菌素A(TSA)对舌鳞癌细胞生物学行为的影响,探讨其体外抗癌活性。方法:不同浓度、时间梯度TSA处理人舌鳞癌SCC-6细胞后,MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪定量检测细胞周期和凋亡变化;Transwell法测定细胞体外侵袭性改变。结果:①TSA对SCC-6细胞的增殖有明显抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;②随着TSA浓度的增加,SCC-6细胞G1期的细胞数目逐渐减少,而S期和G2/M期的细胞数目增加,提示TSA将细胞周期抑制在S期和G2/M期,同时随着TSA浓度的增加,SCC-6细胞的凋亡率与对照组相比明显增加(P<0.05),提示TSA能促进SCC-6细胞的凋亡;③经不同浓度TSA处理24 h后,SCC-6细胞穿透人工基质膜的细胞数随着TSA浓度上升而逐渐减小,提示TSA能显著抑制SCC-6细胞的侵袭性。结论:体外条件下,TSA能明显抑制SCC-6细胞的增殖和侵袭能力,诱导其凋亡。而其所介导的细胞凋亡很可能与S期和G2/M期细胞周期的阻滞有关。     

口腔鳞癌组织中doc1基因mRNA表达的意义

目的:doc1基因的转录产物p12蛋白与肿瘤的发生、发展密切相关.本研究旨在检测doc1基因mRNA在不同分化的口腔鳞状细胞癌中的表达,探讨其在口腔鳞状细胞癌组织中表达的意义.方法:用半定量RT-PCR方法检测30例口腔鳞状细胞癌和20例正常口腔黏膜中doc1基因mRNA的表达,并分析doc1基因mRNA表达量与临床病理特征的关系.结果:doc1基因mRNA在高、中、低分化口腔鳞状细胞癌中的灰度平均值为:1.35±0.04,1.20±0.05,1.08±0.03;正常口腔黏膜上皮doc1 mRNA的灰度平均值为:1.58±0.15,表达高于口腔鳞状细胞癌组织,两者之间的差异具有显著性意义,高中低分化的口腔鳞状细胞癌两两比较,均有统计学差异.结论:doc1基因可能在口腔鳞状细胞癌早期具有重要作用,doc1 mRNA低表达可能是口腔鳞状细胞癌中的早期事件.     

VEGF-C和受体Flt-4mRNA在舌鳞癌中的表达及临床意义

目的　研究舌鳞状细胞癌组织中血管内皮生长因子C(vascularendothelialgrowthfactorC ,VEGF C)及其受体VEGFR 3(flt 4 )的表达情况 ,分析其在淋巴转移中的作用。方法　采用RT PCR法分析 2 2例新鲜标本VEGF C/flt 4mRNA的表达情况 ,并统计分析其与各临床病理特点之间的关系。结果　 2 2例中 1 6例VEGF CmRNA表达阳性 ,其中 1 2例flt 4mRNA阳性 ,VEGF C和flt 4mRNA的表达高度一致 (P <0 .0 1 )。舌鳞癌VEGF C明显高于正常组织和良性病变 ;和肿瘤病理分级、肿瘤颈淋巴结转移显著相关 ,和肿瘤发病年龄、性别以及肿瘤T分期无相关性。结论　VEGF C/flt4在舌癌表达高于正常组织和良性病变 ;与肿瘤的预后密切相关。在肿瘤淋巴转移中起重要作用     

短发卡RNA介导的表皮生长因子受体基因沉默对舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)介导的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因沉默对舌鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响,为治疗舌鳞状细胞癌提供依据.方法 构建靶向人EGFR的shRNA真核表达载体并瞬时转染人舌鳞状细胞癌细胞株Tca8113细胞,用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法检测转染前后EGFR的mRNA和蛋白的变化,用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖活性,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 转染后Tca8113细胞的EGFR mRNA和蛋白的表达(0.217±0.047)和(0.324±0.059)均明显下调(P＜0.05),细胞增殖活性(0.340±0.009)明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率(39.4±7.7)%显著增高(P＜0.05).结论 shRNA介导的EGFR基因沉默可抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖并诱导其凋亡.     

沉默RohA基因对舌鳞状细胞癌细胞增殖的影响

目的 通过RNA干扰技术沉默RhoA基因从而探讨RhoA对舌癌细胞增殖和生长的影响及其作用机制。方法体外培养舌鳞状细胞癌SCC-4细胞,以小分子干扰RNA转染沉默RhoA基因的表达。实验分为3组：实验组（又分为实验1组和实验2组,脂质体分别转染对应序列1的RhoA-siRNA和序列2的RhoA-siRNA）、阴性对照组（脂质体转染NC-siRNA）和空白对照组（不转染siRNA）。采用实时定量聚合酶链反应技术检测SCC-4细胞转染后RhoA mRNA的表达,Western blot检测RhoA、Cyclin D1、p21和p27蛋白的表达,四唑盐比色法检测舌癌细胞生长水平和倍增时间。结果 与阴性对照组和空白对照组相比,实验组舌癌细胞的RhoA基因及蛋白表达降低,p21、p27蛋白表达升高,Cyclin D1蛋白表达降低,细胞倍增时间延长,增殖能力降低（P<0.05）。结论 沉默RhoA基因可以抑制舌癌细胞的增殖和生长,RhoA基因通过调控细胞周期信号转导途径影响舌癌细胞的增殖,RhoA基因可以成为舌癌基因治疗的靶点。     

血管内皮生长因子-C在不同浸润方式的舌鳞状细胞癌中的表达

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)-C在不同浸润方式的舌鳞状细胞癌中的表达差异.方法 参照Anneroth等描述的肿瘤浸润方式对39例舌鳞状细胞癌进行分型,免疫组织化学染色观察VEGF-C的表达情况.结果 在不同浸润方式的舌鳞状细胞痛,VEGF-C的表达不同.在Ⅲ、Ⅳ型的舌鳞状细胞癌,VEGF-C的表达明显高于Ⅰ、...