Bcl-2在成釉细胞分化、分泌过程中的表达研究

目的:检测凋亡调控抑制蛋白Bcl-2在成釉细胞分化、分泌过程中的表达,观察细胞超微结构的变化,探讨Bcl-2和细胞凋亡在该过程的可能作用。方法:制备出生后2、5、7、9、14 d不同发育阶段的BALB/C小鼠下颌第一磨牙牙胚标本,采用原位末端标记法(TUNEL法)和PV免疫组织化学技术观察成釉细胞分化、分泌和釉质发育完成各阶段细胞凋亡以及Bcl-2的表达情况;透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:出生后第2～5天,小鼠下颌第一磨牙成釉细胞处于分化期,超微结构可见胞浆内有高尔基复合体和线粒体,并有细胞增生的核分裂;免疫组化结果显示Bcl-2阳性表达,TUNEL检测结果发现部分细胞胞核阳性表达,提示细胞凋亡的存在;出生后第7天,成釉细胞已开始分泌,可见新形成的釉质,胞核远基底排列,胞核附近可见大量线粒体,胞质内可见大量高尔基复合体和粗面内质网,胞浆呈Bcl-2强阳性表达,TUNEL检测结果发现少量细胞胞核阳性表达;出生后14 d,釉质发育完成,成釉细胞变短,间隙变大,细胞器数量减少,核膜逐渐不清,核糖体脱颗粒水肿,呈现凋亡征象,胞浆未见Bcl-2阳性表达。结论:细胞凋亡在釉质发育的各期皆有表达,Bcl-2作为凋亡抑制基因可能参与了成釉细胞的分化、分泌的调控。     

DCN与BGN在发育期小鼠牙髓牙本质复合体形成中的作用研究

目的:研究富含亮氨酸的蛋白多糖类物质:核心蛋白聚糖(DCN)及双糖蛋白聚糖(BGN)在小鼠牙髓牙本质复合体不同发育时期的分布特点,探讨其在牙髓牙本质复合体形成过程中的作用.方法:取出生后第5 d、10 d、15 d、25 d的BALB/℃小鼠36只,引颈处死,解剖分离含下颌第一磨牙区的下颌骨,新鲜配制4%多聚甲醛固定24 h,甲酸-甲酸钠复合脱钙液脱钙1～3周,石蜡包埋,近远中向5μm连续切片.免疫组化PV两步法,观察各发育时期第一磨牙牙本质、成牙本质细胞及牙髓细胞中DCN、BGN的组织学分布特点.结果:牙本质形成初期,BGN在前期牙本质与成牙本质细胞强阳性表达.随后,前期牙本质与成牙本质细胞染色开始减弱,而牙髓细胞阳性表达呈逐渐增强趋势.第5 d,DCN在前期牙本质中强阳性表达,而在牙本质、成牙本质细胞中一直为阴性;第13 d,牙髓细胞开始呈弱阳性表达,随着牙齿发育而逐渐增强.在观察期间,两者在前期牙本质中持续阳性表达,并且随着牙本质的发育成熟,其染色逐渐减低.结论:DCN与BGN在牙体组织和牙发育过程中特定阶段聚集在特定的部位,二者可能在细胞与细胞、细胞与基质相互作用中发挥特异作用并参与牙本质的矿化过程.     

不同吸烟程度对牙龈上皮凋亡抑制蛋白表达的影响

目的观察不同程度吸烟患者的凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达情况。方法选择37名行牙龈切除、拔除智齿及牙冠延长术的患者,年龄21～65岁,男34例,女3例。按照吸烟史分为Ⅰ组(吸烟史<6年,日均支数<11支)17例,Ⅱ组(吸烟史≥6年,日均支数≥11支)20例。选7例健康牙龈作为对照组。牙龈标本制作石蜡切片,行组织学观察。采用SP免疫组化法对凋亡抑制基因Bcl-2的表达进行组织定位。石蜡切片脱蜡、水化至水,按照SP免疫组化说明书步骤操作,常规脱水封片后行组织学观察。Bcl-2的阳性表达呈棕黄色,阴性为蓝色。PBS作阴性对照。结果 Bcl-2阳性表达主要分布在颗粒层和棘层,胞质呈棕黄或褐色,越接近基底层表达越强。吸烟组Bcl-2的在颗粒层和棘层的阳性表达细胞数较对照组减少且着色变浅,基底层细胞则都为阴性表达。凋亡阳性表达的细胞胞核呈棕黄褐色。对照组较吸烟组阳性表达弱,胞核着色轻。对照棘层和基底层的细胞凋亡阳性表达率分别为0.431和0.672,低于各吸烟组的平均水平。吸烟组牙龈上皮基底层及棘层细胞的阳性表达与对照组间具有显著性差异(P<0.05);吸烟Ⅰ组与吸烟Ⅱ组也存在显著性差异(P<0.05)。结论吸烟可导致牙龈Bcl-2基因的表达降低。     

乏氧诱导因子-1α在人牙周膜细胞的表达

目的：本研究在缺氧的环境下培养人牙周膜细胞,模拟类似牙周组织局部缺血的病理模型,探讨体外牙周膜细胞在缺氧环境中HIF-1α的表达情况。方法：常规培养人牙周膜细胞,20％和1％的氧浓度下培养牙周膜细胞24h,利用RT—PCR及westernblot技术检测HIF-1αmRNA及蛋白的表达情况。结果：在常氧及缺氧环境下,都可检测到HIF-1αmRNA的表达,且两者的表达量差异无统计学意义,但在缺氧环境中牙周膜细胞的HIF-1α蛋白呈强阳性表达,与对照组比较,差异有统计学意义。结论：缺氧使牙周膜细胞HIF-1α蛋白表达增加,提示牙周炎和正畸导致的缺氧微环境对人牙周膜细胞的活性与功能有一定影响。     

小鼠釉质发育过程中成釉器中间层细胞增殖、凋亡以及组织非特异性碱性磷酸酶的表达

目的:观察小鼠釉质发育过程中成釉器中间层细胞的增殖、凋亡和其组织非特异性碱性磷酸酶(tissue nonspecific alkaline phosphatase,TNSALP)的表达,探讨中间层在釉质形成过程中的可能作用.方法:取出生后1、3、5、7、9、11、15d的BALB/c小鼠56只,解剖分离含下颌第一磨牙区的下颌骨,脱钙,制片,HE染色进行牙釉质发育情况的组织学观察,分别采用原位末端标记法(TUNEL法)、SP免疫组织化学技术、PV二步法观察中间层细胞的凋亡及检测Bcl-2、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),并对TNSALP进行组织学定位.通过Image-pro plus 6.0图像分析软件.对图像进行半定量分析.采用SPSS13.0软件包进行t检验、单因素方差分析及SNK-q检验.结果:出生后1d.中间层细胞增殖细胞核抗原由比成釉细胞表达高的强阳性表达逐渐降低;至7d时,其表达为阴性,而且中间层细胞随釉质的发育逐渐凋亡.中间层细胞先于成釉细胞表达TNSALP,出生后5d时即呈现强阳性染色,而后其表达又逐步减弱;成釉细胞7d时开始出现阳性,且呈逐渐增强趋势.结论:中间层细胞的增殖和凋亡及其TNSALP的表达与成釉细胞具有相关性,提示中间层细胞有可能参与成釉细胞的分化及釉质形成.     

牙齿根面牙骨质生长线是否为可靠的牙齿年龄标记

光学显微镜下,根面牙骨质的横向切片上可见牙骨质呈现明暗相间带。这些相间带与树的年轮相似,目前,针对牙骨质中相间带数量与牙齿     

中间层在成釉细胞分泌期的矿化相关因子表达研究

目的 探讨牙胚中间层细胞在釉质分泌与矿化过程中的矿化相关因子的表达.方法 取出生后1、3、5、7、9、11、13、15 d的BALB/c小鼠,HE染色法进行中间层发育情况的组织学观察,选择出生后7 d和13 d标本免疫组化检测TNSALP、E-cad、OC、BSP、OPN、FM、BGN、DCN在中间层和成釉细胞的表达.结果 在釉质形成的阶段,TNSALP、E-cad、OC、BSP、OPN、DMP1和FM在中间层和成釉细胞中有阳性表达,TNSALP、E-cad在中间层的阳性表达先于成釉细胞,随分泌过程阳性表达由中间层转移到成釉细胞;BSP、OPN、DMP1和FM在中间层和成釉细胞阳性表达仅见于成釉细胞分泌的后期,分泌早期未见阳性表达.结论 中间层对成釉细胞的分泌功能发挥起支持或诱导作用,中间层细胞与成釉细胞的上皮间矿化相关分子的表达对成釉细胞的分泌具有重要的调控作用.     

釉基质衍生物促进牙周组织再生作用的研究进展

牙釉基质衍生物(enamel matrix derivatives,EMD,商品名Emdogain-Gel)有良好的促骨质和牙骨质再生能力,临床上也获得了较为理想的牙周再生效果,且优于传统的牙周翻瓣手术.EMD可以促进牙周韧带(periodontal ligament,PDL)细胞的迁移、黏附、增殖和细胞矿化小结的形成[1],同时还能刺激PDL细胞IGF-I、TGF-β1 mRNA水平的表达和其蛋白的分泌[2]并且减少和抑制成牙骨质细胞、牙囊细胞的矿化[3].EMD通过增加碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性提高骨钙素(osteocalcin,OCN)、Ⅰ型胶原mRNA的表达和OCN的分泌以促进成骨细胞的分化成熟[4];同时它可以刺激局部生长因子(包括纤维结合蛋白的细胞外基质分子)的表达使细胞外基质的沉积,初期创伤的愈合,矿物沉积.这种促进牙周组织再生的过程与早期牙骨质形成、牙根发育的级联过程相似.     

乏氧对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性表达的影响

目的: 探讨不同氧张力对牙周膜细胞的增殖碱性磷酸酶活性(alkaline phosphatase activity,ALP)影响.方法:采用组织块法体外培养人牙周膜细胞,取第5代培养细胞分别在210 mL/L(对照组)和10mL/LO2浓度(乏氧组)下培养1～3 d,复氧组在相同的乏氧环境下培养1 d和2 d后分别移到常氧条件下继续培养1～2 d后检测牙周膜细胞增殖能力与分泌碱性磷酸酶情况.结果:所有组别的细胞增殖率随培养时间呈依赖性的增高.乏氧组乏氧第2,3 d与对照组有统计学差异.所有组别细胞的ALP活性随时间而降低,但乏氧第1,2,3天和复氧1 d与对照组相比明显降低,差别具有统计学意义.结论:乏氧对牙周膜细胞的生物学有较大的影响,提示临床牙周炎及正畸所导致的缺氧环境对牙周膜细胞活性与功能有一定的影响.     

牙周组织发育期上皮剩余的组织学观察

目的：观察牙周组织形成过程中上皮剩余细胞的组织形态、细胞增殖凋亡。方法：TUNEL（TdT-mediated-dUTPnickendlabeling,TUNEL）法原位细胞凋亡检测牙周组织发育中上皮剩余细胞凋亡的情况。SP免疫组化法检测增殖核抗原（PCNA）和凋亡抑制基因Bcl-2、骨桥素（OPN）和骨涎蛋白（BSP）的表达。结果：牙周膜牙骨质侧可见上皮剩余（theepithelialrestofmalassez）沿牙骨质表面成簇分布,根分叉和牙颈部较多,细胞数量不等,可见不规则核,簇内细胞相互重叠、排列无规则,TUNEL结果示上皮剩余中可找到凋亡阳性表达细胞。免疫组化可见上皮剩余细胞阳性表达OPN,但PCNA和BSP在此期上皮剩余细胞中为阴性表达。结论：在牙周发育过程中,伴随牙槽骨的改建和牙周膜纤维束走向的调整,上皮剩余经历塑形过程,细胞凋亡在这一过程中发挥重要作用。上皮剩余细胞的OPN阳性表达提示其在此过程中可能参与牙骨质的发育。