慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒基因分型的临床意义

目的：探讨不同乙型肝炎病毒（HBV）基因型与相关生化指标和HBV‐DNA定量水平的相关性。方法采用DNA芯片技术,对216例HBV感染患者进行HBV基因型分型检测,同时检测血清HBV‐DNA和肝功能指标。结果216例患者中,HBV‐B型138例（占63．89％,138/216）,HBV‐C型68例（占31．48％,68/216）,HBV‐B＋HBV‐C型混合感染8例（占3．70％,8/216）,HBV‐D型2例（占0．93％,2/216）。各基因型HBV感染者之间比较,HBV‐DNA水平和肝功能指标差异均无统计学意义（P＞0．05）。结论该院患者HBV感染以HBV‐B型为主,HBV‐C型次之。     

乙型肝炎病毒基因分型的研究进展

乙型肝炎病毒（HBV）是嗜肝DNA病毒，HBV感染可引起严重肝脏疾病，HBV感染后细胞毒性T淋巴细胞介导的细胞免疫反应导致受感染的肝细胞破坏，由于宿主免疫应答不同，因而临床上表现为不同的疾病谱。我国是HBV感染的高发区，慢性乙型肝炎是我国肝硬化、肝功能衰竭和原发性肝癌的主要危险因素。近来，人们逐渐认识到慢性乙型肝炎与病毒本身核酸序列密切相关。随着HBV全基因序列克隆成功，不同HBV基因结构必然影响病毒蛋白的表达，不同HBV基因亚型有不同的流行特征及致病性。因此，对HBV进行基因分型有利于对HBV感染的流行病学、病因学和临床诊治进行更加深入的研究。     

乙型肝炎病毒基因型与基本核心启动子及前C区变异对疾病进展的影响

目的 应用测序列的方法，探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因型在南京地区的流行病学状况和HBV基因型与基本核心启动子（BCP）及前C区变异对疾病进展的影响。方法 选用南京地区94例HBV感染患者血清，其中慢性乙型肝炎（CHB）44例、慢性重型乙型肝炎（CSH）、肝硬化（LC）和肝细胞癌（HCC）50例，应用测序列的方法测定HBV的S基因序列以确定其基因型，测定C基因序列以确定其变异状况。结果 南京地区94例HBV感染患者的HBV基因型以B型和C型为主，分别为40例（42．6％）和54例（57．4％），未发现其他型和混合型，CHB组与HCC、CSH和LC组病毒基因型分布差异有统计学意义（P〈0．01），对于不同病情的HBV感染患者，基本核心启动子变异区（T1762／A1764双变异）变异差异有统计学意义（P〈0．05）；而不同基因型的患者基本核心启动子变异差异有统计学意义（P〈0．05）。前C区变异（A1896变异）在不同病情和不同基因型的患者中，差异均无统计学意义。结论 南京地区流行的HBV主要基因型是B和C，C型感染可以引起较重的肝病，尤其是BCP发生双变异者；HBV基因型是影响临床表现的重要因素之一。     

乙型肝炎病毒基因分型的研究进展

自从1988年Okamoto等首次根据组间全基因序列差异≥8%对HBV进行基因分型以来,对HBV基因分型方法学上的改进、和其所存在的地域性、民族特异性、以及它的临床意义都展开了大量研究,这对从分子水平阐明不同基因型的流行势态,和对其病因学的研究,加强对HBV的防治有重要意义.基因型反映了HBV自然感染史发生的变异特点,是病毒变异进化的结果,对其分型标准的依据是全基因序列同源性≥92%或S基因序列同源性≥96%.大量HBV序列分析工作提示S基因序列稳定,不同基因型各开放读框中S基因异质性最大,而同一基因型中的各毒株S基因异质性最小,因而S基因适于基因型分型.目前HBV基因型分型方法学有4种,可将其分为A、B、C、D、E、F、G等7种.其分型方法包括1、全基因或S基因测序法,该方法是鉴定基因型的金标准,但工作量大.2、Lindh等创立的S基因的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法,可鉴定89%的基因型,国内文献[1]报道对PCR-RFLP方法进行了改进,可鉴定95%以上的标本,但PCR-PFLP分型法所需时间较长、步骤较多,且遇到混合感染或酶切不完全,就会出现复杂带型,因此目前建立的PCR-PFLP分型方法都不能鉴定100%的标本.3、多引物PCR分型方法[2],它是在对114例HBV全序列进行充分比较分析的基础上,找出每种基因型相对于其他各种基因型的独特序列,并根据这些独特序列设计出6对分别针对性A-F型的诊断引物,利用其仅需一次PCR可得出分型结果,理论上能鉴定100%的标本.4、单克隆抗体酶联免疫吸附法,该方法虽然简便,但要建立一套单克隆抗体则较为困难,且难以从基因水平上对HBV进行分型.HBV的基因型分布在不同地理区域有不同的特点.     

HBsAg阴性、HBV DNA阳性献血者病毒感染特征研究

目的了解上海地区献血人群中血清HBsAg阴性、HBV DNA阳性感染的流行率、病毒血清学和分子生物学特点。方法选取HBsAg阴性、核酸筛查确认为HBV DNA阳性的献血者血清标本,采用酶联免疫法（ELISA）检测病毒血清标志物抗-HBc和抗-HBs;PCR扩增HBV S区基因片段,对扩增后的产物进行测序分析后,将产物序列与Genbank中HBV序列进行Blast比对,获得标本HBV毒株的基因型;采用DNAMAN软件进行蛋白表达分析,确定标本毒株的血清型,并与Genbank中野生型HBV序列进行比较,获得S区基因编码蛋白突变情况。结果上海地区HBsAg阴性献血人群HBV DNA阳性感染率约为0.045%。18例HBsAg阴性、HBV DNA阳性标本血清病毒载量均低于200IU/ml,且大部分低于20IU/ml;其中14例（77.8%）病毒血清标志物为抗-HBc和/或抗-HBs阳性。18例样本全部为B和C基因型,主要为adw和adr血清型。14例血清抗-HBc和/或抗-HBs阳性样本中,13例样本发生了S蛋白氨基酸突变,其中8例B基因型较多发生Q101K/H、M103T/I、F134L、D144A突变,5例C基因型较多发生S114T/A、T118K/R、K141T、S143T突变;4例血清阴性样本中,均未发生S区蛋白位点突变。结论上海地区献血者存在HBsAg阴性、HBV DNA阳性感染者,其血清病毒载量低,感染病毒全部为B和C基因型,主要为adw和adr血清型;其中大部分为隐匿性HBV感染,少数可能为窗口期感染;隐匿性HBV感染病毒多发生S蛋白氨基酸位点突变。     

慢性乙型肝炎患者基因型以及其病毒载量前C区突变的研究

乙型肝炎病毒是引起慢性病毒性肝炎的重要病原之一，并可导致肝硬化和肝癌发生，严重危害人类健康。根据HBV基因组DNA序列差异〉8％为判断标准，HBV被分为A-G八个基因型，而且其分布有地域性差异。基因型是影响病毒复制，抗病毒治疗疗效以及病毒变异的重要因素，基因型且与疾病的预后、治疗药物的选择等均有一定关系。作通过实时荧光定量PCT、多引物对巢式PCR技术和DNA序列分析，分别测定142例慢性乙肝患血清中HBV DNA的病毒载量、乙肝病毒的基因型以及其前C区（G1896A）突变，旨在探讨浙江部分地区的HBV基因型的分布情况以及各基因型之间的病毒及前C区的突变的差异。为以后选择抗病毒药物治疗打下理论基础；现报告如下。     

乙型肝炎病毒基因分型的研究现状

乙型肝炎病毒（HBV）属嗜肝DNA病毒科嗜肝病毒素，它是已知的引起人类疾病的最小DNA病毒。HBV感染呈世界性分布，有血清学证据表明全世界约有20亿人曾经或持续感染乙肝病毒。1988年Okamoto首先提出了乙肝病毒基因分型法，近年来，随着分子生物技术的发展，人们对乙肝病毒基因型进行了大量研究。本文对乙型肝炎病毒基因型及临床方面研究进展综述如下：     

四川部分地区乙型肝炎病毒基因分型分析

目的了解四川部分地区乙肝病毒（HBV）基因型分布情况。方法选择390例经荧光PCR法定量HBV—DNA含量〉104copies／ml的感染者血清，采用聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验（PCR-ELISA）法检测HBV基因型。结果390例患者中B型186例（47．7％），C型142例（36．4％），BC混合型54例（13．8％），A型3例（0．7％），5例测序待定。C型HBV—DNA水平和HBeAg阳性率分别为（7．59±1．18）log值和75．58％，明显高于B型的（5．36±1．10）log值和45．90ck（P〈0．01）；C型ALT、AST、TBIL的水平均高于B型（P〈0．05）。结论四川部分地区乙肝病毒基因型以B、C型为主，B型占优势，C型次之。     

常州地区乙型肝炎病毒基因分型及外膜大蛋白定量检测的临床研究

目的 了解常州地区乙型肝炎病毒基因型的分布,探讨检测外膜大蛋白与不同基因型肝病之间的临床意义.方法 乙型肝炎病毒基因分型采用巢式聚合酶链反应,扩增乙型肝炎病毒S基因区,用末端标记方法对PCR产物标记并直接测序,测序结果和基因库中登录的标准基因型序列进行比较;乙型肝炎病毒外膜大蛋白(LHBs)应用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行定量检测.结果 对该地区147例不同HBV感染者血清HBV DNA进行了基因分型,其中B型63例(42.9%),C型80例(54.4%),B、C混合型1例(0.7%),B、D混合型3例(2.0%).69例慢性乙型肝炎患者中B型为33例、C型为34例;63例肝癌患者中B型15例、C型46例.二组比较,肝癌组中C型明显高于慢性乙肝组(x2=8.28,P<0.005).肝癌患者组B型、C型HBV LHBs含量分别为(61.2±59.2)υg/L和(36.9士31.7)υg/L,两组间存在统计学差异(t=2.11,P<0.05);慢性乙型肝炎患者组HBV LHBs含量则分别为(131.2土85.7)gg/L和(132.5士80.5)υg/L,两组间不存在统计学差异(t=0.064,P>0.05).结论常州地区HBV DNA基因型主要为B型和C型;C基因型与肝癌关系密切;肝癌患者组B型HBV LHBs含量明显高于C型;B、C基因型HBV感染在肝癌的发生中可能存在不同的机制.     

拉米夫定对前C区变异乙肝的治疗与乙肝病毒基因分型的研究

目的：探讨前C区变异的乙型肝炎患者基因型与拉米夫定疗效的关系。方法：随机选择80例HbeAg阴性、血清丙氨酸氨基转氨酶异常的慢性乙型病毒性肝炎患者，检测其HBV基因分型，并给予拉米夫定治疗。于治疗后第1，3，6，9，12个月分别检测患者肝功能及乙肝病毒定量变化，治疗9个月后再次检测乙肝病毒基因分型。结果：前C区变异乙型肝炎患者HBV基因分型：B型6．25％，C型26．25％，D型52．5％，E型8．75％，CD混合型5％，F型1．25％。HbeAg阴性乙型肝炎患者口服拉米夫定HBVYMDD突变株（YIDD／YVDD）多发生于HBV基因型D型、C型。前C区变异多发生于HBV基因型D型。结论：前C区变异多发生于HBV基因型D型，C型、D型对拉米夫定疗效依次降低。     

乙肝五项指标检出模式与HBV-PreS1检测的对比观察及临床应用

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染人体后引起的疾病。HBV基因组是一个环状、部分双链的DNA分子,分为S、C、P和X基因区,编码相应的前S1、前S2和S蛋白。这三种蛋白均为HBsAg的组成成份。前S1蛋白位于病毒颗粒表面,具有高免疫原     

HBV感染不同时期基因分型和P基因区点突变及其意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因型及耐药位点变异在不同类型HBV感染患者中的分布及意义。方法收集40例急性乙型肝炎(AHB)患者、53例慢性乙型肝炎(CHB)患者、44例乙型肝炎肝硬化(LC)患者和32例肝细胞肝癌(HCC)患者血清标本,用PCR扩增及基因测序技术进行基因分型,并对各组患者的HBV DNA载量及血清标志物进行测定。结果不同临床类型(AHB、CHB、LC、HCC)患者拉米夫定(LAM)耐药率及阿德福韦酯(ADV)耐药率分布为11.25%(19/169)、4.73%(8/169);HBV感染者基因型为B型和C型,未见其他基因型;C型年龄分布高于B型(t=2.48,P<0.05);AHB、CHB、LC、HCC患者HBV基因型分布差异有统计学意义(χ2=37.86,P<0.05)。结论苏州地区HBV感染者基因型为B型和C型,且HBV C型更易导致严重肝病的发生。     

乙型肝炎病毒C基因启动子区异质性检测初步研究

目的 以乙型肝炎病毒（HBV）C基因启动子（CP）变异来探讨HBV准种的存在意义。方法 设计特异性多聚酶链反应（PCR）引物，自9例慢性HBV感染患者外周血血清中扩增HBVCP序列，克隆入pGEMTeasy质粒，随机挑战37个克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度。结果 测序发现HBVCP序列是变异的高发区，在直接重复序列（DR）I上游存有一缺失突变高发（48．7％，18／37）区，缺失突变与替换突变在TATA样盒TA2、TA3区发生率较高，而TA4极为保守。结论 CP区内有一缺失高变区，TA2、TA3的变异影响前C蛋白的表达，但该区的变异不影响前基因组RNA的转录。结果提示，HBV长期携带者体内有HBV准种共存。     

乙型肝炎病毒Pre-S1、Pre-S2抗原和抗体的检测临床意义

乙型肝炎是由于感染了乙型肝炎病毒(hepatitis B virusHBV)所致。HBV是噬肝DNA病毒族。其基因组由一个不完全的双链DNA组成，共有4个开放读码框等即P区、C区、S区及X区，为病毒蛋白编码区。其中第三个读码框架为HBsAg编码区S区，有前S1(Pre-S1)、前S2(Pre-S2)和S基因组成，分别编码3种蛋白，即小分子蛋白(S蛋白)是引发保护性抗体的主要蛋白；     

东莞地区乙型肝炎患者HBV基因分型研究

目的检测分析东莞地区乙型肝炎(下称乙肝)患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布及其与性别、HBV血清标志物和HBV DNA定量值的关系。方法用聚合酶链反应(PCR)-微板核酸杂交-酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测6种HBV基因型,ELISA法检测血清HBV标志物(两对半),荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测血清HBV DNA定量值,并对结果进行分析。结果东莞地区206例乙肝患者HBV基因型分布:C型为主69.42%(143/206)、B型11.17%(23/206)、D型7.28%(15/206)、B+C混合型5.83%(12/206)、C+D混合型5.34%(11/206)、B+D混合型0.97%(2/206)。基因型男、女性别检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。基因型C与其它各基因型检出率比较差异有统计学意义(P<0.01)。各基因型阳性组血清平均HBV DNA定量值大于1×106(copy/ml),各基因型阳性组与基因型阴性组血清平均HBV DNA定量值比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论东莞地区乙肝患者HBV基因型分布以C型为主。基因型阳性检出率从高到低依次为C、B、D、混合型(B+C型、C+D型、B+D型)。HBV基因型检出率与性别关系不明显,与HBV血清标志物和HBV DNA定量值有一定关系。东莞地区HBV基因型分布状况可能与本地区外来人群相关。     

HBsAg无症状携带者乙型肝炎病毒基因分型研究

[目的]选择健康体检人员为研究对象，探索乙肝病毒基因分型方法及其特点。[方法]以健康体检人员为目标人群，选取HBsAg阳性者，对HBVDNA载量大于500拷贝／ml者，采用实时定量PCR解链曲线分析法进行HBV基因分型，探讨了HBV不同感染模式、HBVDNA定量对HBV分型的影响，重点分析了出生地与HBV分型的关系。[结果]调查期间目标人群中共检出HBsAg阳性者433例，符合HBV基因分型的标本190例，分型检测率为43．88％，在性别和年龄别组间分布一致，分型样本的代表性良好。分型结果表明，B型、C型和B、C混合型分别占64．2％、27．4％和8．4％，未检出其它型别。HBV基因型别在性别和年龄组间的差异均无统计学意义，但出生地为广东、湖北、湖南、江西和四川5省者，B型所占比例（66．6％～78．3％）均高于C型（14．3％～24．4％）。HBVDNA载量较高组、HBsAg，HBeAg，抗-HBc同时阳性组中，C型所占的比例均较高；C型感染者的HBVDNA载量的均数大于B型。[结论]HBsAg无症状携带者中约半数可进行HBV基因分型，基因型别与出生地和HBV感染状况有关。     

乙型肝炎病毒B、C基因型全基因组序列的克隆

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)B、C基因型全基因组序列克隆。方法从HBV无症状慢性携带者中筛选B、C基因型,提取病毒核酸,设计引物,应用高保真酶对3 200bp的HBV DNA进行全序列扩增,通过克隆技术构建pGEM-HBV重组质粒,测序后进行序列分析。结果获得HBV B基因型和HBV C基因型重组质粒各1株。结论成功构建HBV B基因型和HBV C基因型的全基因组序列克隆,可为进一步研究HBV分子流行病学和基础研究提供工具。     

乙型肝炎病毒S基因分型方法的建立

目的 建立乙型肝炎病毒(HBV)S基因分型方法。方法 利用PCR扩增乙型肝炎病毒S基因,对上海地区无症状携带者、慢性乙型肝炎、重型肝炎的HBV DNA进行分型。结果 2例无症状携带者为C型;85例慢性乙型肝炎19例B型(22．3％),53例C型(62.3％)、13例BC混合型(15．3％);16例重型肝炎,B型3例(18．7％)、C型4例(25．0％)、BC混合型9例(56．3％)。结论 新的基因分型方法,简化了传统的序列分型法,结果可靠,操作简便。     

乙肝病毒感染者前S1蛋白和HBV—DNA相关性分析

目的探讨乙型病毒感染者前S1蛋白和HBV—DNA检测的相关性及临床价值。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测748例乙肝患者HBV—M和前S1蛋白,并与HBV—DNA做对比分析。结果在HBsAg／HBeAg／HBcAb均阳性的高复制组中,前S1蛋白阳性占86．9％,HBV—DNA阳性占98．2％;HBsAg／HBeAb／ABeAb均阳性的低复制组中,前S1蛋白阳性占31．1％,HBV—DNA阳性占416;HBsAb／HBeAh／HBcAb均阳性的康复组中,前S1蛋白和HBV—DNA均为阴性。前S1能够敏感地反映乙型肝炎病毒的复制情况,尤其可以反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者是否有病毒复制。结论前S1能够敏感地反映乙型肝炎病毒的复制情况,尤其可以反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者是否有病毒复制。     

INNO-LiPA乙型肝炎病毒基因分型方法的评价

目的　评价INNO LiPA乙型肝炎病毒基因分型的方法 ,并探讨了基因型与临床疾病的关系。方法　随机选取 113例慢性HBV感染者外周血采用INNO LiPA和S基因序列分析两种方法测定HBV基因型。结果　 1 INNO LiPA基因分型法与S基因序列分析法测定的基因型结果比较 ,符合率 82 3% (93/ 113) ,误判率 3 5 % (4/ 113) ,B/C型混合感染检出率 5 3% (6 / 113)。 2 LC组和HCC组C基因型比率高于AsC组 ,差异有显著性 (分别为 92 9%比 5 2 8% ,X2 =7 0 3,P <0 0 1和 88 9%比 5 2 8% ,X2 =3 91,P <0 0 5 ) ;LC组C基因型比率高于CHB组 ,差异有显著性 (92 9%比 6 1 1% ,X2 =5 12 ,P <0 0 5 )。结论　 1 INNO LiPA法是一种较灵敏的快速检测HBV基因型的实验方法 ,尤其检测混合基因型感染灵敏度高。 2 C基因型HBV感染与较重肝病有关。