高糖环境下肾小球细胞间相互作用对TGF-β1表达的影响及茶多酚的干预作用

目的探讨在高糖环境下人肾小球系膜细胞与内皮细胞间相互作用对TGF-β1mRNA表达的影响和茶多酚的干预作用.方法建立系膜细胞和内皮细胞共培养模型,分空白对照组、高糖组、茶多酚干预组和茶多酚对照组,培养0、12、36 h后,应用RT-PCR法检测模型中两种细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况.结果高糖可上调共培养模型中系膜细胞和内皮细胞TGF-β1mRNA表达,其作用显著强于单独培养的系膜细胞和内皮细胞,茶多酚可降低共培养模型中细胞TGF-β1mRNA表达,且效果优于单独培养.结论(1)高糖环境下系膜细胞和内皮细胞间存在相互作用,这种作用能促进两种细胞TGF-β1mRNA高表达.(2)茶多酚通过对TGF-β1mRNA表达的抑制影响细胞间相互作用.     

高糖环境下肾小球细胞间相互作用对TGF-β1表达的影响及茶多酚的干预作用

目的：探讨在高糖环境下人肾小球系膜细胞与内皮细胞间相互作用对TGF-β1mRNA表达的影响和茶多酚的干预作用。方法：建立系膜细胞和内皮细胞共培养模型，分空白对照组、高糖组、茶多酚干预组和茶多酚对照组,培养0、12、36h后，应用RT-PCR法检测模型中两种细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果：高糖可上调共培养模型中系膜细胞和内皮细胞TGF-β1 mRNA表达，其作用显著强于单独培养的系膜细胞和内皮细胞，茶多酚可降低共培养模型中细胞TGF--β1 mRNA表达，且效果优于单独培养。结论：(1)高糖环境下系膜细胞和内皮细胞问存在相互作用，这种作用能促进两种细胞TGF-β1 mRNA高表达。(2)茶多酚通过对TGF-β1 mRNA表达的抑制影响细胞间相互作用。     

茶多酚对高糖所致人肾系膜细胞活性氧、Ⅳ型胶原合成的影响

目的：探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧、Ⅳ型胶原合成的影响及其茶多酚的干预作用。方法：系膜细胞在高糖(35mmoL／L D-糖)条件下加入或不加入茶多酚(20μg／ml)培养至36h．运用化学比色法，放射免疫法检测高糖作用后培养系膜细胞上清液中活性氧(SOD和MDA)、Ⅳ型胶原的含量以及加入茶多酚后其含量的改变：应用免疫细胞化学法检测高糖作用后系膜细胞内Ⅳ型胶原的表达以及加入茶多酚后其表达的改变。结果：高糖使系膜细胞上清液中SOD含量减少．MDA含量增加，使培养的系膜细胞上清液中及细胞内Ⅳ型胶原含量增加；茶多酚可提高上清液中SOD活性．降低MDA含量．抑制系膜细胞合成和分泌Ⅳ型胶原。结论：高糖致人肾小球系膜细胞活性氧产生增加．促进Ⅳ型胶原合成和分泌．茶多酚可有效干预高糖的作用．     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞活性氧产生的影响

目的：探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧产生的影响以及茶多酚对其的干预作用。方法：应用比色法检测高糖作用后培养系膜细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—PX)的活力和丙二醛(MDA)、超氧阴离子自由基(O2^-)的水平，以及加入茶多酚后各指标的改变。结果：高糖可降低系膜细胞培养上清液中SOD和GSH-PC的活力，增加MDA和O2^-的含量；茶多酚可提高上清液中SOD和GSH—PX的活力，降低MDA和O2^-的含量。结论：高糖可导致人肾小球系膜细胞活性氧产生增多，而茶多酚可进行有效干预。     

氯沙坦对高糖培养的人系膜细胞血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的:探讨氯沙坦对高糖培养的系膜细胞产生活性氧和血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法:体外培养人系膜细胞,用高糖、氯沙坦干预不同时间后,应用比色法检测培养细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活力,丙二醛(MDA)的水平。用RT鄄PCR法测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。结果:与正常对照组相比,高糖组SOD、CAT的活力明显降低,而MDA含量明显升高,VEGFmRNA表达升高。与高糖组相比,高糖加氯沙坦组的SOD、CAT的活力升高,MDA水平下降,VEGFmRNA表达上调。结论:氯沙坦能抑制高糖所致细胞活性氧的产生和VEGF的表达,从而抑制细胞通透性升高,降低蛋白尿,发挥其肾保护作用。     

胰高血糖素样肽-1对高糖培养肾小球系膜细胞氧化应激的影响

目的探讨胰高血糖素样肽-1(glucagon like peptide-1,GLP-1)对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞氧化应激的影响。方法肾小球系膜细胞按下列分组培养:正常对照组(5.5mmol/L),高糖组(25mmol/L),高糖+GLP-1(3nmol/L)组,高糖+GLP-1(10nmol/L)组,高糖+GLP-1(30nmol/L)组,高糖+GLP-1(100nmol/L)组,分别培养24h后,采用CCK8试剂盒检测细胞增殖率,流式细胞仪法检测细胞活性氧(ROS),酶标仪法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量及还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果高糖培养组肾小球系膜细胞增殖,ROS生成增多,SOD及GSH活性下降,MDA含量升高,GLP-1(3nmol/L)干预对上述改变无影响,10、30、100nmol/L GLP-1干预均可拮抗高糖培养时系膜细胞的上述改变,其中100nmol/L GLP-1干预效果最为显著。结论 GLP-1对高糖所致肾小球系膜细胞的氧化应激反应呈现浓度依赖性的抑制作用。     

茶多酚对高糖时人肾小球系膜细胞细胞间黏附分子1表达的影响

目的:探讨高糖对人肾小球系膜细胞细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响及茶多酚对其干预作用.方法:将培养的系膜细胞分为正常对照组、高糖组、茶多酚干预组和茶多酚对照组,分别在0、12、36 h采用RT-PCR法和免疫细胞化学法检测茶多酚对高糖条件下系膜细胞内ICAM-1 mRNA及蛋白表达的影响.结果:高糖组系膜细胞ICAM-1 mRNA和蛋白的表达比正常对照组均增加(P＜0.05);茶多酚干预组比高糖组有明显下降(P＜0.05).结论:高糖可导致人肾小球系膜细胞ICAM-1表达的增加,而茶多酚可有效干预此效应.     

细胞相互作用和阿托伐他汀对内皮细胞与系膜细胞PAF及其受体基因表达的影响

目的探讨高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞相互作用对血小板活化因子（PAF）产生、系膜细胞血小板活化因子受体（PAF-R）基因表达的影响及阿托伐他汀的干预作用。方法内皮细胞与系膜细胞共培养和系膜细胞单独培养,分为对照组、甘露醇组、高糖＋高溶血卵磷脂组、阿托伐他汀干预组,采用实时荧光定量检测系膜细胞PAF-R mRNA表达、酶联免疫吸附法检测PAF含量。结果共培养组和单培养组在高糖高溶血卵磷脂条件下,PAF和系膜细胞PAF-R mRNA表达均升高（P〈0.05）,单培养PAF均较共培养下降（P〈0.05）;阿托伐他汀可抑制高糖高溶血卵磷脂引起的PAF和系膜细胞PAF-R mRNA表达上调（P〈0.05）。结论系膜细胞和内皮细胞在高糖高溶血卵磷脂培养下,存在相互作用,并促进PAF产生和系膜细胞PAF-R基因表达。阿托伐他汀可影响高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞之间的相互作用,减少PAF的产生及下调系膜细胞PAF-R基因表达。     

浅谈高糖高脂环境下肾小球内皮细胞与系膜细胞间相互作用对细胞外基质产生的影响

目的:探讨高糖高脂条件下肾小球内皮细胞与系膜细胞间相互作用对细胞外基质(ECM)产生的影响。方法:建立内皮细胞与系膜细胞共培养模型,实验分为正常对照组、甘露醇组、高糖组、高脂组、高糖高脂组及阻断剂干预组,分别培养12,24,48h后,ELISA法测定细胞上清液Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤维连接蛋白(Fn)含量。结果:(1)高糖高脂培养条件下,共培养组细胞上清液ColⅣ、Fn的含量较单培养组明显增高(P<0.05);(2)氯沙坦可抑制高糖高脂引起的Fn和ColⅣ升高(P<0.05);结论:(1)高糖高脂环境下,内皮细胞和系膜细胞间存在相互作用,这种作用能促进ECM-ColⅣ、Fn的产生;(2)氯沙坦能通过抑制ECM的产生影响细胞间的相互作用。     

普伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响

目的:探讨普伐他汀对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组和普伐他汀组,采用CCK-8细胞计数法测定系膜细胞增殖,比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量的变化.结果:与对照组比较,高糖组出现系膜细胞增殖增加,上清液中SOD活性、GSH含量下降,MDA含量增加;与高糖组相比,普伐他汀组系膜细胞增殖减少,GSH含量、SOD活性上调,MDA含量下降.结论:普伐他汀能抑制高糖环境下的系膜细胞增殖,并显著减少高糖诱导的氧化应激水平.     

单宁酸对高糖和糖化终末产物培养条件下肾小球系膜细胞氧化应激及微炎症状态的改善作用

目的：探讨单宁酸对肾小球系膜细胞（GMC）的作用,从氧化应激及微炎症角度阐明单宁酸改善糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法：体外培养GMC,分别用高浓度葡萄糖（30 mmol/L）及糖化终末产物(AGEs)牛血清白蛋白（BSA,250 mg/L）处理,正常糖培养及不含糖的BSA处理的细胞作为相应对照组,在高糖或AGEs处理的同时采用不同浓度单宁酸（10、20、40和80 μmol/L）进行干预,培养48 h后检测细胞培养上清中丙二醛（MDA）水平及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性,ELISA法检测细胞培养上清中8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）水平,免疫组织化学法检测GMC中细胞间黏附分子1（ICAM-1）蛋白表达,RT-PCR法检测GMC中单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和ICAM-1 mRNA的表达水平。结果：与高糖组和AGEs组比较,单宁酸处理组MDA水平明显降低（P<0.05）,GSH-Px、SOD及CAT活性明显升高（P<0.05或P<0.01）,GMC培养上清中8-OHdG水平明显降低（P<0.05）。与高糖组和AGEs组比较,40 和80 μmol/L单宁酸组ICAM-1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与高糖组比较,单宁酸组MCP-1和ICAM-1 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）。结论：单宁酸可保护GMC免受氧化及炎症介质的损伤,从而延缓和改善DN的肾小球病变。     

氢气饱和生理盐水对高糖所致内皮细胞内活性氧生成和凋亡的影响

目的探讨氢气(H2)饱和生理盐水对高糖所致内皮细胞内活性氧(ROS)生成和凋亡的影响。方法细胞分为对照组、高糖组、高糖+H2饱和生理盐水组(H2组)3组,流式细胞仪检测细胞内ROS,Realtime PCP检测氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)mRNA,细胞凋亡ELISA试剂盒检测细胞凋亡。结果 H2组内皮细胞内ROS较高糖组明显减少(2.75±0.37vs 6.35±1.29,P<0.01),而SOD和GSH-Px mRNA水平明显增高(SOD:0.74±0.06vs 0.26±0.03,P<0.01;GSH-Px:0.68±0.05vs 0.31±0.04,P<0.01),细胞凋亡水平明显降低(0.38±0.02vs 0.89±0.05,P<0.01)。结论 H2饱和生理盐水可减少高糖诱导的内皮细胞内ROS增多和抗氧化酶的消耗,并减少高糖诱导的细胞凋亡。     

雷公藤甲素上调PRDX2抑制2型糖尿病肾病的氧化应激状态

目的:通过观察雷公藤甲素对2型糖尿病肾病小鼠肾脏和人肾小球系膜细胞氧化应激的影响,探讨雷公藤甲素改善2型糖尿病肾病的分子机制。方法:体内实验分3组:C57小鼠对照组、KK-Ay小鼠模型组和KK-Ay小鼠加用雷公藤甲素干预组。雷公藤甲素200 μg/（kg·d）灌胃12周后取肾脏组织进行HE染色;体外实验采用人肾小球系膜细胞为研究对象,分为正常糖组、高糖刺激模型组和雷公藤甲素干预组3组。分别用含有5.5 mmol/L（培养基组成）的D-葡萄糖、30 mmol/L的D-葡萄糖、及30 mmol/L的D-葡萄糖加10 μg/L的雷公藤甲素培养24 h。采用ELISA法检测小鼠肾脏和人肾小球系膜细胞中SOD活性和MDA含量。Western blot方法检测各组小鼠肾脏和人肾小球系膜细胞中PRDX2的蛋白表达量。结果:体内外实验结果均显示,与相应对照组相比,2型糖尿病肾病小鼠模型组肾脏和人肾小球系膜细胞高糖刺激模型组细胞中SOD活性明显下降,MDA含量明显增加,PRDX2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;雷公藤甲素干预组较模型组SOD活性明显升高,MDA含量明显减少,同时PRDX2蛋白表达水平明显增加（P<0.05）。结论:雷公藤甲素可以通过上调PRDX2抑制2型糖尿病肾病肾脏氧化应激状态。     

2型糖尿病肾病患者血清脂联素、血管内皮生长因子水平与氧化应激的相关性

目的:探讨2型糖尿病肾病(DN)不同阶段血清脂联素(APN)、血管内皮生长因子(VEGF)变化及其与氧化应激的关系.方法:将符合1999年WHO诊断标准的2型糖尿病患者根据24 h尿蛋白排泄率分为3组,即正常白蛋白尿组(SDM)、微量白蛋白尿组(NA)、大量蛋白尿组(MA).另设正常对照组(NC).采用双抗夹心ELISA法检测DN患者血清APN、VEGF水平,采用比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量.结果:①DN患者血清APN水平低于正常对照组;DN患者各组间比较,大量蛋白尿组的血清APN水平最低,差异有统计学意义(P＜0.05);血清VEGF水平在NA、MA组明显高于SDM组和NC组,差异有统计学意义(P＜0.05).②与NC组比较,SOD活性及GSH-Px水平在糖尿病各组明显下降(P＜0.01),MDA水平在NA组、MA组明显升高(P＜0.01).③糖尿病患者血清APN与UAER、MDA、VEGF浓度呈负相关(P＜0.05),与SOD、GSH-Px呈显著正相关(P＜0.01);血清VEGF浓度与病程、HbAlc、UAER、MDA的升高呈正相关(P＜0.05),与SOD、GSH-Px呈显著负相关(P＜0.01).结论:DN患者血清APN、VEGF水平与氧化应激密切相关,低APN血症是2型糖尿病及DN发生的危险因素,VEGF升高可能是DN的危险因素.     

两种不同状态系膜细胞的培养及其功能研究

OBJECTIVE: To make a comparision of cell function between the mesangial cells from rats with diabetic mellitus (DMC) and the mesangial cells stimulated by high glucose (HMC) and to explore the feasibility and advantage of culturing mesangial cells (MC) from diabetic rats in studies on the pathogenesis of diabetic nephropathy. METHODS: DMC were obtained from rats with streptozotocin-induced diabetes and were cultivated in normal medium. The MC from normal rats were divided into HMC high glucose and NMC cultured in normal medium as control. The cellular proliferation was assessed using 3H-thymidine incorporation. Production of fibronectin (FN) was analysed by ELISA. And with the use of laser scanning confocal microscopy, the calcium concentration ([Ca2+]i) and the response of [Ca2+]i to Angiotensin II (Ang II) were measured. RESULTS: The 3H-TdR incorporation efficiency of DMC was significantly higher than that of CMC; the 3H-TdR incorporation efficiency of HMC was lower than that of CMC (P < 0.05). The secretion of FN in DMC and HMC was higher than that in CMC (P < 0.01 and P < 0.05 respectively). The response of [Ca2+]i to Ang II in DMC and HMC was decreased (P < 0.05), and the decrease was more significant in DMC than in HMC. CONCLUSIONS: The function and biologic character of mesangial cells cultured from diabetic rats are more similar to those of mesangial cells from diabetic in vivo. The result suggest that establishing a diabetes model first and starting the culture of MC next is probably a good method for investigating the mesangial cells in diabetic nephropathy.     

Urocortin ameliorates diabetic nephropathy in obese db /db mice

Background and purpose: Hyperglycaemia induces overproduction of mitochondrial reactive oxygen species (ROS) in endothelial cells, which is believed to be a major molecular mechanism underlying complications of diabetes, including diabetic nephropathy. Impairment of endothelium-dependent vasodilatation is found in type 2 diabetes. Urocortin is a 40 amino-acid peptide related to the corticotrophin-releasing factor (CRF) family, which suppresses production of ROS in endothelial cells and sustains endothelium-dependent relaxations of rat coronary artery. However, it is not clear if urocortin has any effect on diabetic nephropathy. Experimental approach: Possible mechanisms underlying the effects of urocortin on diabetic nephropathy were investigated in db/db mice and cultured rat mesangial cells. Key results: Urocortin decreased body weight, plasma levels of advanced glycation end-prod ucts, blood urea nitrogen and creatinine levels. However, food intake, plasma insulin and glucose levels remained unaffected. Superoxide dismutase activity was increased markedly, whereas malonaldehyde levels in kidney homogenate and sorbitol concentrations in red blood cells were decreased significantly in urocortin-treated mice. Urocortin significantly decreased glomerular extracellular matrix expansion and accumulation in kidney. Moreover, urocortin inhibited the overexpression of transforming growth factor-beta 1 and connective tissue growth factor in rat mesangial cells induced by 25 mM glucose. All the effects of urocortin, except sorbitol accumulation, were abolished by the non-selective CRF receptor blocker, astressin. Conclusion and implications: Urocortin could significantly ameliorate diabetic nephropathy and this effect was mediated via the     

茶多酚对大鼠心肌缺血再灌注诱导内皮细胞损伤的保护作用

目的　研究茶多酚对大鼠心肌缺血再灌注损伤内皮细胞的保护作用。方法　在大鼠左冠状动脉前降支结扎致心肌缺血再灌注损伤模型的基础上 ,观察茶多酚药物干预对损伤大鼠血浆中血管性血友病因子 (vWF)活性及脂质过氧化终产物丙二醛 (MDA)、一氧化氮 (NO)含量的影响。结果　茶多酚能明显降低血浆MDA含量、vWF活性及提高NO含量。结论　茶多酚对心肌缺血再灌注损伤内皮细胞有明显保护作用 ,可能与其通过清除氧自由基的膜脂质过氧化作用和提高NO含量有关     

胞外调节蛋白激酶在糖尿病肾病系膜细胞中的信号传递作用

目的：研究胞外调节蛋白激酶（ERK）在糖尿病大鼠肾脏中的表达及意义,并探讨其激活的机制。方法：将大鼠肾脏系膜细胞进行体外培养,用激光共聚焦显微镜研究高糖、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对系膜细胞ERK活性的影响。用链脲佐菌素（STZ）复制糖尿病模型,于2周处死大鼠,取肾进行ERK免疫组化染色,检测其在肾脏中的表达。结果：体外培养的正常细胞中,ERK定位于胞浆,当AngⅡ和高糖作用于系膜细胞后,可使ERK从胞浆转移于胞核。糖尿病大鼠肾小球ERK表达较正常大鼠明显增强（P＜0．05）。结论：高糖和AngⅡ可激活系膜细胞ERK,ERK参与了糖尿病肾病的发生。