人表皮角质形成细胞中PAI-3/PCI的表达及作用

目的探讨人表皮角质形成细胞(KERATINOCYTE,KC)中,PAI-3/PCI的表达及作用。方法利用免疫细胞化学、RT-PCR方法,检测高CA2 浓度作用下,培养的人分化表皮KC及KC提取物角质壳中PAI-3的表达变化。结果高CA2 浓度下培养24H后,分化标记物K10弱阳性表达,PAI-3呈阳性表达;培养48H后,K10强阳性表达,而PAI-3的阳性表达明显增加,72H后,表达开始降低,在低CA2 浓度下阳性染色主要位于细胞核膜周围而高CA2 浓度下主要位于细胞质,同时,PAI-3存在终末分化KCS角质壳中。结论人表皮KC分化过程中,PAI-3的表达随着分化的增加而增加,PAI-3存在终末分化KCS角质壳蛋白中,表明PAI-3参与KC分化的作用。     

Ca2+调节人表皮角质形成细胞中PAI-3的表达

目的探讨Ca2 对人表皮角质形成细胞(keratinocyte, KC)中PAI-3表达的调节作用.方法利用免疫细胞化学、RT-PCR方法,检测高低Ca2 浓度作用下,培养的人表皮KC中PAI-3的表达变化.结果 PAI-3 mRNA及蛋白质在高低Ca2 浓度下培养的人表皮KC中均有表达,并且高Ca2 浓度培养条件下较低Ca2 浓度下明显增强.PAI-3阳性染色在低Ca2 浓度培养下主要位于核膜周围,而在高Ca2 浓度培养条件下主要位于细胞质.结论 Ca2 调节人表皮KC中PAI-3的表达,PAI-3可能具有调节KC分化的作用.     

表皮角质形成细胞分化中tPA分泌的研究

目的探讨表皮角质形成细胞中,tPA分泌的变化及其对细胞分化的影响.方法利用免疫细胞化学、酶联免疫吸附测定等方法,检测高浓度Ca2 作用下,培养的小鼠分化表皮角质形成细胞表面及培养上清中tPA表达的变化.结果高Ca2 浓度下,KC分化标记物K10在培养24h即有较强的表达,与此同时,在培养上清中检测到大量分泌tPA;培养24h以后,随着培养时间的延长,KC培养上清中分泌tPA的含量呈现出降低趋势,KC表面tPA量则呈现出增加趋势,当有L-精氨酸存在时,上述两种趋势均明显减弱.结论小鼠表皮KC分化过程中存在tPA的分泌,分泌tPA能通过其赖氨酸位点进一步吸附于KC表面,进而促进KC的分化.     

PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性

目的 研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异，探讨PAl-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响。方法 分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒。转染Hela细胞，RT-PCR鉴定，筛选出能稳定表达PAI-2D和PAI-2M的阳性细胞株。用MTT法检测PAI-2的这两个突变体抗凋亡的活性，并利用计算机同源模建，比较PAI-2的这两个突变体空间构象的变化。结果 突变体PAI-2M能抑制TNF-αa诱导的Hela细胞凋亡，而PAI-2D则不能。PAI-2M较好地保持了野生型PAI-2的空间构象，而PAI-2DCD螺旋间区的空间构象则发生了较大的变化。结论 PAI-2抑制TNF-α诱导的细胞凋亡依赖于其CD螺旋间区空间构象的完整性，而与PENF结构域(PENF73～76)无关。     

组织型纤溶酶原激活剂在人胚胎表皮角质形成细胞分化中的作用

目的 探讨组织型纤溶酶原激活剂（tPA)参与人表皮角质形成细胞（KC）分化调控的作用。方法 采用免疫细胞化学（ICC）及原位杂交（ISH）技术定性、定量检测早、中、晚期人胚胎表皮KC中tPA蛋白及mRNA的表达。结果 （1）tPA在人胚胎期表皮KC中表达量明显高于出生后期。胚胎期的表达高峰在胚胎中期。胚胎晚期其蛋白水平开始降低。而tPAmRNA表达则维持在相对较高水平。（2）tPA在人胚胎期主要存在于分化程度高的表皮浅层KC内。（3）tPA聚集于KC胞膜下方。结论 tPA参与表皮KC分化的调控。     

25-羟维生素D_3-1α-羟化酶质粒转染对角质形成细胞增殖分化和凋亡的影响

目的:研究25-羟维生素D3-1α-羟化酶(1α-羟化酶)质粒转染对角质形成细胞增殖、分化和凋亡的影响.方法:体外培养小鼠角质形成细胞(KC)转染1α-羟化酶后,观察细胞在形态上的变化对分化进行研究;利用Giemsa染色法和Tunel荧光素原位末端标记法对凋亡诱导作用进行观察.利用小鼠阴道上皮有丝分裂模型和小鼠尾部鳞片表皮模型对1α-羟化酶质粒转染对KC增殖和分化的影响进行研究.结果:携带1α-羟化酶的质粒转染KC可以非常显著的促进其分化,剂量与效应呈正相关;10-6mol/L的维生素D3和0.015 μg/μL 1α-羟化酶质粒转染联合应用即可诱导KC细胞凋亡.1α-羟化酶质粒转染可以非常显著的抑制小鼠阴道上皮有丝分裂(P<0.01),显著促进小鼠尾部鳞片表皮模型中颗粒层的形成(P<0.05).结论:1α-羟化酶质粒转染角质形成细胞可以明显抑制其增殖,促进其分化,诱导其凋亡.1α-羟化酶质粒转染为以增殖过渡分化不全为特征的皮肤病比如银屑病以及某些肿瘤的基因治疗提供了新思路.     

PAI-3在正常成人皮肤中的表达及作用的初步研究

目的探讨PAI-3在成人皮肤中的表达,为进一步研究PAI-3在皮肤表皮增殖、分化中的作用及机制提供基础.方法采用免疫组织化学技术和RT-PCR检测PAI-3和uPA在成人皮肤中的表达.结果检测到PAI-3 mRNA及uPA mRNA的表达,PAI-3在正常成人皮肤组织中主要位于表皮的基底层、颗粒层和棘层,在分化程度较高的表皮角质形成细胞(keratinocyte,KC)中,其表达增强,而uPA主要位于皮肤表皮的基底层.结论PAI-3在正常成人皮肤中有表达并与表皮KC的分化有关.     

初级纤毛及Hedgehog信号通路在银屑病角质形成细胞增殖过程中的作用

目的:探讨初级纤毛相关基因及Hedgehog(Hh)信号通路在角质形成细胞(KC)增殖过程中的作用,寻找治疗银屑病的特异性靶向治疗途径。方法:体外培养HaCaT细胞(人永生化表皮细胞系),并通过肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HaCaT细胞过度增殖,从而在体外模拟银屑病KC的增殖状态。构建纤毛生成必需基因Ift88特异性siRNA表达载体,体外转染TNF-α诱导的过度增殖HaCaT细胞,24 h后扫描电镜观察KC表面的纤毛生长情况,检测纤毛相关基因和Hh通路中Ptch-1和Gli-1的蛋白表达水平,并观察细胞的增殖情况。结果:TNF-α诱导的过度增殖的HaCaT细胞表达的初级纤毛较多,纤毛相关基因和Hh通路中Ptch-1和Gli-1均高表达。抑制Ift88基因表达能够有效减少具有初级纤毛的细胞比例,并且下调Ptch-1和Gli-1的表达,HaCaT细胞的增殖也受到明显抑制。结论:抑制纤毛的形成能够阻断Hh信号通路,从而抑制KC的过度增殖;初级纤毛可能参与了银屑病的发生,通过激活Hh信号通路促进银屑病的发生和发展。     

肿瘤坏死因子-α与脂肪肝

肿瘤坏死因子是一种有多种生物学功能的细胞因子，根据其来源和结构不同，可分为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子-β(TNF-β)，其中TNF-α在脂肪肝的发病中起着重要的作用。TNF-α的细胞来源极为广泛，包括各种免疫细胞、内皮细胞、成纤维细胞、表皮细胞、角质细胞等等，近年来的研究发现在脂肪、肌肉组织细胞中亦有TNF-α mRNA的表达。     

PAI-2在细胞内的定位影响其抗凋亡的活性

目的 为了进一步了解纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在细胞内的定位对其抗凋亡活性的影响。方法 构建绿色荧光蛋白质(EGFP)与PAI-2入核突变体融合蛋白质的表达质粒；转染HeLa细胞，荧光显微镜下比较野生型PAI-2与PAI-2的入核突变体在HeLa细胞内分布的差异；用MTT法检测．PAI-2入核突变体抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导细胞凋亡的活性。结果 在核定位序列的引导下，几乎所有的PAI-2都进入了细胞核，而野生型PAI-2则弥散分布于HeLa细胞内。MTT法检测发现，当PAI-2被定位于细胞核内时，丧失其抗凋亡的功能。结论 PAI-2在细胞内的定位能影响其抗凋亡的活性，并且当用TNF-α诱导HeLa细胞凋亡时，野生型PAI-2在细胞内的分布没有发生明显的改变。     

三氧化二砷及干扰素联用对K562及K562/ADM耐药细胞系的作用

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对K562及其耐药细胞K562／ADM细胞株几种耐药机制的作用，以及干扰素(IFNα-2b)与之联用的效应。方法 采用免疫细胞化学染色及TUNEL原位末端标记检测不同浓度As2O3作用不同时间或与IFNα-2b联用，对K562及K562／ADM细胞相关耐药基因蛋白(P-gp、GST-x、Bcl-2)表达的影响及凋亡诱导作用。结果 K562、K562／ADM细胞表面P-gp蛋白表达无明显改变；As2O3(5，10，20μmol／mL)作用72h可降低K562、K562／ADM细胞GST-π的表达，与对照组比较P＜0．05；As2O3抑制K562、K562／ADM细胞Bcl-2蛋白的表达，诱导细胞凋亡，并有计量时间效应；IFNα-2b与As2O3联用可增强对K562细胞的作用，对K562／ADM细胞未见明显增强效应。结论 As2O3具有抑制K562、K562／ADM细胞GST-π、Bcl-2蛋白的表达及诱导细胞凋亡作用；对P-gp蛋白表达无明显影响；IFNα-2b可增强其对K562细胞的这种作用。     

马拉色菌对角质形成细胞表达TLR-2和分泌sICAM-1、IL-8的影响

[摘要] 目的 探讨马拉色菌在直接免疫应答中诱导角质形成细胞表达TLR-2的作用及对sICAM-1和IL-8分泌和表达的影响。方法 马拉色菌和角质形成细胞体外共培养,通过免疫细胞化学方法检测角质形成细胞TLR-2蛋白的表达状况,并运用ELISA方法检测马拉色菌对角质形成细胞sICAM-1和IL-8表达和分泌的调节作用。结果 体外实验发现,在二者共同培养时,马拉色菌能增强角质形成细胞TLR-2的表达,且角质形成细胞的sICAM-1的和IL-8表达和分泌也增加。结论 马拉色菌可诱导TLR-2的增强表达,并能促进sICAM-1和IL-8的表达和分泌,这一机制可能在痤疮等相关的炎症反应中起重要作用。     

α干扰素对TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及NF-κB表达的研究

目的:探讨应用α干扰素与宫颈癌细胞核因子κB(NF-κB)表达的关系以及对肿瘤细胞凋亡的影响.方法:采用TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot分析方法检测NF-κB表达.结果:100 U/ml的α干扰素与10 ng/ml肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合作用24 h后,细胞凋亡率达到92%;与15 ng/ml TNF-α联合作用12 h后,凋亡率上升至92.6%.α干扰素不影响NF-κB的表达,TNF-α可显著增加NF-κB的表达(P＜0.01),α干扰素预先作用后加用TNF-α可以显著抑制NF-κB的表达(P＜0.01).结论:α干扰素能够显著抑制TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞NF-κB的表达,增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用.     

过氧化物酶体增殖物激活受体β在肿瘤坏死因子α介导HaCaT角质细胞凋亡中的作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）导致HaCaT角质细胞凋亡中,TNF-α对过氧化物酶体增殖物激活受体β（peroxisome proliferator activated receptor-β,PPARβ）表达时空和转录活性的影响。方法：采用Hoechst 33258染色后观察凋亡细胞的形态学改变,并计算凋亡细胞百分率,Caspase活性定量检测试剂盒分析Caspase-3的活性变化,RT—PCR和Western印迹观察TNF-α致PPARβmRNA及蛋白的表达,应用凝胶迁移滞留实验及荧光素酶报道基因分析TNF-α介导PPARβ的DNA结合活性及转录活性的改变。结果：HaCaT角质细胞经5、10、20ns／ml TNF-α处理24h后,Hoechst 33258染色示随着TNF-α剂量的增加,凋亡细胞增多,凋亡细胞核百分率分别为12％±3％、32％±4％、57％±5％;HaCaT角质细胞经TNF-α（10、20ns／ml）处理不同时间后,Caspase-3的活性增强（P〈0．01）。继而Western印迹显示,HaCaT角质细胞经10as／ml TNF-α处理12、24h后PPARβ的蛋白表达显著增加,HaCaT角质细胞经不同浓度的TNF-α处理24h后PPARβ蛋白表达水平亦增加;RT-PCR检测示TNF-α（10、20ns／ml）处理3、6h后PPAR[3mRNA的表达增强,说明TNF-α可诱导PPARβ的表达。进而凝胶迁移滞留实验及荧光素酶报道基因分析表明TNF-α可以增强PPARβ的DNA的结合活性和转录活性。结论：在TNF-α介导HaCaT角质细胞凋亡中,TNF-α可增强PPARβmRNA、蛋白水平的表达以及DNA结合活性和转录活性。     

选择性抑制剂celecoxib诱导肝癌细胞凋亡及其相关分子机制的实验研究

研究环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂celecoxib抑制肝癌细胞增殖和诱导肝癌细胞凋亡过程中的作用及其可能的机制。方法：采用celecoxib作用于Bel．7402、SMMC-772l的2种肝癌细胞株，以四甲基偶氮唑蓝(MTY)法测定肿瘤细胞的增殖抑制率、TUNEL实验、流式细胞术检测细胞凋亡率、免疫细胞化学和Westernblot实验测定细胞凋亡及Akt信号转导途径相关蛋白的激活状态。结果：Mrrr法显示celecoxib可抑制上述两株肝癌细胞增殖；TUNEL实验及流式细胞术结果证实，celecoxib处理后的肿瘤细胞可发生细胞凋亡；免疫细胞化学及Westernblot实验显示，celecoxib诱导凋亡主要是通过抑制Akt的Thr308磷酸化，进而激活caspase-9、caspase-3进行的。结论：celecoxib明显抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡，其主要机制可能通过Akt信号转导途径、激活caspase通路实现的。     

bcl-2和p53在丹皮酚诱导人结直肠癌HT-29细胞凋亡中的作用及其机制

目的 探讨bcl-2和p53在丹皮酚（paeonol，Pae）诱导入结直肠癌HT-29细胞凋亡过程中的作用及可能的作用机制。方法 应用透射电镜技术和原位末端标记（TUNEL）法观察不同浓度的Pae对HT-29细胞凋亡的诱导作用，应用免疫细胞化学技术检测用药前、后凋亡相关基因bcl-2及p53表达的变化，并与对照组比较。结果 透射电镜观察到Pae作用后HT-29细胞出现典型的细胞凋亡形态；Pae在15．63mg／L、62．50mg／L、250．00mg／L3种浓度下作用48h均可诱导HT-29细胞凋亡，TUNEL法显示各组凋亡指数（AI）间差别有显著性意义（P〈0．05）；免疫细胞化学染色显示Pae作用后HT-29细胞bcl-2及p53蛋白表达显著降低。结论 Pae能抑制HT-29细胞增殖并诱导其凋亡，其作用可能与下调bcl-2及p53蛋白的表达有关。     

扁平苔藓中早期生长反应因子-1和肿瘤坏死因子-α的表达及意义

目的：探讨早期生长反应因子-1（Egr-1）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在扁平苔藓发病中的作用。方法：采用TUNEL原位凋亡检测法检测30例扁平苔藓皮损及30例正常皮肤组织中细胞凋亡情况,并用免疫组织化学法检测该30例扁平苔藓和30例正常皮肤组织中Egr-1和TNF-α的表达情况。结果：扁平苔藓皮损处角质形成细胞和真皮浅层浸润的淋巴细胞中细胞凋亡水平明显高于对照组;在相同部位,Egr-1和TNF-α的表达水平高于正常皮肤组织,差异有统计学意义（P〈0.05）,且二者在扁平苔藓皮损处的表达呈正相关（r=0.896 7,P〈0.05）。结论 ：Egr-1和TNF-α的高表达可能参与了扁平苔藓的发病。     

银杏叶提取物抗肿瘤坏死因子-α诱导的人肾小管上皮细胞凋亡及机制

目的 研究银杏叶提取物(extract of ginkgo biloba,EGB)抵抗肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人肾小管上皮细胞凋亡及其作用机制.方法 将人肾小管上皮细胞分成4组:对照组,TNF-α组,EGB TNF-α组,EGB组,各组细胞培养至80%～90%汇合时加入相应药物干预. 采用MTT法检测TNF-α对细胞的毒性作用, 通过细胞形态学检测(AO/EB染色)和流式细胞仪计数测定细胞凋亡发生情况,Western blot法测定细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 TNF-α对人肾小管上皮细胞的毒性作用呈剂量和时间依赖性;TNF-α(10 μg/ml)可显著诱导人肾小管上皮细胞凋亡,而EGB(50 mg/ml)可明显抑制它的作用, 同时Western blot测定显示EGB可显著上调Bcl-2的表达而下调Bax的表达.结论 EGB可以显著抑制TNF-α诱导的人肾小管上皮细胞凋亡,此作用可能与其上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和下调促凋亡蛋白Bax的表达有关.     

马拉色菌对角质形成细胞表达TLR-2和分泌sICAM-1及IL-8的影响

目的探讨马拉色菌在直接免疫应答中诱导角质形成细胞表达TLR-2的作用及对sICAM-1和IL-8分泌和表达的影响。方法马拉色菌和角质形成细胞体外共培养,通过免疫细胞化学方法检测角质形成细胞TLR-2蛋白的表达状况,并运用ELISA方法检测马拉色菌对角质形成细胞sICAM-1和IL-8表达和分泌的调节作用。结果体外实验发现,在二者共同培养时,马拉色菌能增强角质形成细胞TLR-2的表达,且角质形成细胞sICAM-1和IL-8均表达和分泌也增加。结论马拉色菌可诱导TLR-2的增强表达,并能促进sICAM-1和IL-8的表达和分泌,这一机制可能在痤疮等相关的炎症反应中起重要作用。     

褪黑素对氧化诱导人淋巴细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 研究抗氧化剂褪黑素(MT)对H2O2诱导人淋巴细胞凋亡的作用。方法 用免疫细胞化学的方法检测凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达。结果 H2O2处理细胞后bcl-2基因表达轻度增高，加入MT后明显增高，而bax基因表达明显增加，MT干预后明显下降。结论 H2O2可诱导人淋巴细胞凋亡，MT可使H2O2诱导的细胞bcl-2基因的蛋白表达明显增高，并明显降低bax基因的蛋白表达，从而抑制淋巴细胞凋亡。