Rho激酶抑制剂对大鼠脑缺血/再灌注后海马神经元损伤的保护作用

目的探讨Rho激酶抑制剂（盐酸法舒地尔）对大鼠脑缺血/再灌注（I/R）后海马CA1区神经元存活的影响。方法采用Pulsinelli-Brierley四血管阻塞全脑缺血模型,缺血前30 min腹腔注射盐酸法舒地尔15mg/kg,缺血15 min后再灌注5天,断头取脑,石蜡切片,焦油紫染色,图像分析测定单位面积内焦油紫染色细胞总和,并与I/R组、生理盐水组及假手术组比较,进行形态学分析。结果盐酸法舒地尔明显减少了脑I/R所致的海马CA1区神经元损伤,与I/R组比较存活细胞数明显增多（P〈0.05）。结论盐酸法舒地尔对脑缺血/再灌注所致海马CA1区神经元损伤具有明显的保护作用。     

腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经细胞的保护作用

目的 探讨脑缺血再灌注后腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段对大鼠海马CAl区神经元的保护作用及其分子机制.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注对照组、表达病毒处理组、非表达病毒处理组及溶剂组.采用焦油紫染色、免疫印迹检测大鼠缺血再灌注后海马神经元损伤和脑组织Akt的磷酸化情况.结果 表达病毒处理组与缺血再灌注对照组、非表达病毒处理组及溶剂组相比海马CA1区神经元损伤明显减轻,脑组织Akt磷酸化升高(P<0.05).结论 腺病毒表达谷氨酸受体羧基肽段可能通过升高脑组织中Akt的磷酸化程度对海马CA1区神经元起保护作用.     

外源性NO供体对脑缺血/再灌注神经元的保护作用

目的观察外源性一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）和亚硝基谷胱甘肽（GSNO）对脑缺血/再灌注过程中c-jun N末端激酶3（JNK3）磷酸化的影响,及其对再灌注海马CA1区锥体神经元的作用。方法采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型。SNP（5 mg/kg）溶于生理盐水,间隔1.5 h分别腹腔注射3次,第1次注射时间在全脑缺血前30 min。GSNO（100μg/kg）溶于生理盐水,缺血前20 min于侧脑室注射给药。大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、缺血/再灌注溶剂对照组、缺血/再灌注给予SNP组和缺血/再灌注给予GSNO组,缺血15 min后分别灌注1天或5天。利用免疫印迹、免疫沉淀和焦油紫染色法检测相关蛋白的表达、磷酸化水平及神经元细胞的存活。结果给予SNP组和GSNO组与生理盐水对照组相比,能够显著抑制脑缺血/再灌注过程中JNK3的磷酸化,并且能显著提高再灌注过程中海马CA1区锥体神经元的存活。结论外源性NO供体能够抑制脑缺血/再灌注过程中JNK3的磷酸化,进一步对海马CA1区锥体神经元发挥了保护作用。本研究为外源性NO对脑卒中的有效治疗提供了参考价值。     

蛋白激酶B激活对脑缺血再灌注海马CA3区神经元的保护作用

目的 探讨丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶B（Protein kinase B,Akt）对脑缺血再灌注损伤后海马CA3区神经元的保护作用.方法 采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,再灌注0 min、30 min、3h、6h、12h、1d和3d各时间点,运用免疫印迹技术检测海马CA3区Akt1的磷酸化水平,采用免疫组化和焦油紫染色分别检测LY294002（PI3K/Akt特异性抑制剂）对缺血再灌注后磷酸化Akt1（p-Akt1）的表达及神经元存活的影响.结果 缺血再灌注后30 min,与假手术（sham）组相比,海马CA3区p-Akt1的表达显著升高（P＜0.05）,再灌后3h至峰值,一直持续至3d仍维持在较高水平（P＜0.05）;与相应的再灌注组相比,给予LY294002后,p-Akt1的蛋白表达明显降低[R6 h组和LY294002＋ R6 h组的阳性细胞数（个/mm^2）分别为（134.6±7.8）和（54.8±5.1）],海马CA3区的神经元大量死亡[R5 d组和LY294002 ＋R5 d组神经元数量（个/mm^2）分别为（152.0±17.4）和（62.7±5.1）]（P＜0.05）.结论 脑缺血再灌注后蛋白激酶Akt的持续激活,是海马CA3区神经元存活的重要因素.     

HPK1在缺血性脑损伤中的作用

目的观察HPK1对sD大鼠全脑缺血／再灌注后海马CA1区锥体细胞的作用。方法采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,缺血15min后分别灌注30min、3h、6h、24h、3天和5天。大鼠随机分为假手术组、缺血／再灌注组、缺血／再灌注给药组和缺血／再灌注溶剂对照组。缺血／再灌注给药组再分为2组,分别脑室注射100g／L的HPK1 AS—ODNs、HPK1 MS—ODNs,每24h注射1次,连续3天,在最后一次注射24h后行四动脉结扎全脑缺血。使用免疫沉淀和焦油紫染色法等技术检测相关信号蛋白的表达、活化水平及神经元细胞的死亡。结果在大鼠海马神经元中有HPK1的表达,脑室注射AS—ODNs大鼠海马CA1区存活锥体细胞明显增多。结论HPK1反义寡核苷酸对缺血／再灌注引起的海马神经元凋亡具有保护作用。     

预缺血抑制脑缺血诱导GluR6巯基亚硝基化机制的研究

目的 观察预缺血对SD雄性大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区锥体细胞的保护作用,并探讨其可能的机制.方法 采用四动脉结扎法构建大鼠预缺血模型和全脑缺血模型,缺血6 min后分别灌注6 h或5天.大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、预缺血/再灌注组、预缺血/再灌注溶剂对照组和预缺血/再灌注给药组.预缺血/再灌注给药组腹腔注射5 mg/kg MK801.主要运用SDS-PAGE、免疫印迹和焦油紫染色法等技术检测相关信号蛋白的表达、活化水平及神经元细胞的死亡情况.结果 大鼠缺血/再灌注6 h,预缺血/再灌注组和预缺血/再灌注溶剂对照组的GluR6的巯基亚硝基化水平较缺血/再灌注组明显降低,而预缺血/再灌注给药组较缺血/再灌注组没有明显变化;各组间GluR6的蛋白表达量并没有明显变化.大鼠缺血/再灌注5天后,预缺血/再灌注组和预缺血/再灌注溶剂对照组海马CA1区细胞的存活数量较缺血/再灌注组明显增加,而预缺血/再灌注给药组较缺血/再灌注组没有明显变化.结论 预缺血通过NMDA受体下调大鼠全脑缺血/再灌注诱导的KA受体亚基GluR6的巯基亚硝基化,从而发挥拮抗缺血性脑损伤的作用.     

硝酸甘油对缺血性脑卒中神经元的保护及对JNK信号通路的影响

目的：探讨硝酸甘油（NG）对大鼠缺血性脑卒中JNK和Bad（ser128）磷酸化的影响。方法：36只健康SD（Sprague-Dawley）大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组（对照组）和硝酸甘油组。以大鼠四动脉结扎脑缺血模型为基础,应用焦油紫染色法检测海马CA1区神经元凋亡,采用免疫印迹检测JNK和Bad（ser128）的磷酸化。结果：硝酸甘油组脑海马CA1区神经元凋亡显著少于对照组（P〈0.05）;硝酸甘油组JNK、Bad（ser128）的磷酸化显著低于对照组（P〈0.05）。结论：硝酸甘油能显著减轻脑缺血再灌注后脑海马CA1区神经元凋亡,明显抑制JNK、Bad（ser128）的磷酸化水平,对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

美金刚保护缺血神经元分子机制的研究

目的 探讨N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体非竞争性抑制剂美金刚（memantine）对脑缺血再灌注（I/R）损伤的影响及其分子机制.方法 制备四动脉结扎（4-VO）大鼠全脑缺血模型.实验分为4组（n=6）：假手术组（sham组）,缺血/再灌注组（I/R组）,美金刚处理组和生理盐水组.在缺血后立刻腹腔注射美金刚或生理盐水.焦油紫染色观察海马CA1区神经元的存活情况,免疫印迹检测大鼠海马中p-ERK1/2的表达.结果 与sham组相比,I/R组神经元死亡增加,p-ERK1/2表达下调;与I/R组相比,美金刚处理组显著降低了神经元的死亡率,同时也明显升高了p-ERK1/2的表达.结论 美金刚抑制了I/R引起的神经元死亡.其机制可能与美金刚抑制突触外NMDA受体的过度激活进而激活ERK通路有关.     

美金胺对缺血性脑损伤保护作用的研究

目的 观察美金胺对SD雄性大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区锥体细胞的保护作用,并研究其可能的机制.方法 采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型,缺血15 min后分别灌注6 h或5天.大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、缺血/再灌注给药组和缺血/再灌注溶剂对照组.缺血/再灌注给药组腹腔注射20mg/kg美金胺.使用免疫印迹、免疫沉淀和焦油紫染色法等技术检测相关信号蛋白的表达、活化水平及神经元细胞的死亡.结果 大鼠缺血/再灌注5天后,缺血/再灌注给药组海马CA1区细胞的存活数量较缺血/再灌注组和缺血/再灌注溶剂对照组明显增加;缺血/再灌注6 h,缺血/再灌注给药组N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚基2A(NR2A)、突触后密集区蛋白95(PSD-95)、非受体型蛋白酪氨酸激酶(Src)三者间免疫沉淀的蛋白量及NR2A的酪氨酸磷酸化水平较缺血/再灌注组和缺血/再灌注溶剂对照组明显降低,而三者的表达量没有明显变化.结论 美金胺通过抑制NR2A、PSD-95、Src三者结合及Src介导的NR2A的酪氨酸磷酸化抑制了缺血后NMDA受体功能的增强,从而对大鼠缺血性脑损伤有保护作用.     

GST-22对大鼠全脑缺血后海马CA1区细胞的保护作用

目的 观察中草药GST-22对脑缺血／再灌注后海马神经细胞存活的影响。方法采用四动脉阻塞（4-VO）大鼠全脑缺血模型，缺血前30min以及缺血后1h以30mg／kg腹腔给药（GST-22），复灌5天，灌注取脑，石蜡切片，以焦油紫染色，图像分析测定单位面积内焦油紫染色细胞面积总和，组间比较，并进行形态学分析。结果缺血前给药对脑缺血／再灌注后海马CA1区神经细胞有明显保护作用，约90％细胞存活；缺血后1h腹腔给药对脑缺血／再灌注后海马CA1区神经细胞亦有明显保护作用，约有50％细胞存活（P〈0．05）。结论中草药GST-22对脑缺血／再灌注后海马神经细胞有明显保护作用。     

脑缺血／再灌注介导大鼠海马CA1区nNOS巯基去亚硝基化作用的研究

目的：探讨大鼠全脑缺血/再灌注介导的大鼠海马CA1区神经型一氧化氮合酶（ nNOS）巯基去亚硝基化对神经元损伤的作用及机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组（ S组）、脑缺血/再灌注组（ I/R组）、给药组（ GSNO组、7-NI组、MK801组、NS102组、GYKI组）及溶剂对照组（生理盐水组、DMSO组）。采用四动脉结扎法构建大鼠全脑缺血/再灌注模型。运用生物素转化法检测蛋白质的巯基-亚硝基化,聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹方法、焦油紫染色方法对nNOS巯基去亚硝基化水平以及大鼠海马神经元细胞的损伤进行研究。结果与S组相比,I/R组nNOS巯基亚硝基化水平明显降低（P＜0．05）;与I/R组相比,GSNO组、7-NI组以及MK801组nNOS巯基亚硝基化水平显著增高（P＜0．05）,但GYKI组、NS102组、DMSO组以及生理盐水组与I/R组相比,差异无统计学意义。说明外源性一氧化氮（NO）供体GSNO、nNOS抑制剂7-NI、N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体抑制剂MK801能够抑制nNOS的去亚硝基化,对神经元起保护作用。结论大鼠全脑缺血/再灌注所致的大鼠海马CA1区nNOS巯基去亚硝基化在神经细胞损伤中有作用,其去亚硝基化是通过NMDA受体起作用;外源性NO供体GSNO、nNOS抑制剂7-NI也能够抑制nNOS的去亚硝基化从而对神经元起保护作用。     

亚低温减轻沙土鼠脑缺血／再灌注损伤与海马CAl区Bax表达变化的关系

目的研究亚低温（33℃,4h）减轻沙土鼠脑缺血／再灌注损伤与海马CA1区Bax表达变化的关系,探讨亚低温脑保护的可能机制。方法采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断5min前脑缺血／再灌注损伤模型,随机分为假手术组（SH）、常温再灌注组（IR）、低温假手术组（HSH）、低温再灌注组（HIR）,每组根据再灌注的不同时间点（2h、4h、1d、3d、5d）又分为5个对应的亚组（／Z=6）。在预定时间点行开阔法迷宫检查,TUNEL法检测海马CA1区的凋亡细胞,苏木精-伊红染色检测海马存活细胞,免疫组化检测Bax在海马CA1区的动态变化。结果4h亚低温可显著减少缺血沙土鼠1d、3d、5d的探索活动及CA1区的凋亡细胞,增加存活细胞,抑制脑缺血后海马CA1区Bax的早期表达（2h、4h、1d）。结论4h亚低温对沙土鼠5min前脑缺血有确切的保护作用,抑制海马CA1区缺血／再灌注早期Bax的表达可能是其减少海马细胞凋亡、产生脑保护作用的机制之一。     

NR2A反义寡核苷酸对脑缺血/再灌注大鼠海马NR2A及其mRNA表达的影响

目的研究NMDA受体亚单位2A（NR2A）反义寡核苷酸对短暂性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区NR2A及其mRNA表达的影响,探讨其在脑缺血/再灌注诱导的大鼠海马神经元损伤中的可能作用机制。方法健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和缺血/再灌注组。经生理盐水、错义寡核苷酸和反义寡核苷酸预处理后,以四血管阻断法建立短暂性前脑缺血（15 m in）再灌注（24 h、48 h和72 h）动物模型。在确定的时间点进行灌注固定、取材、石蜡包埋和组织切片（片厚8μm）,然后行原位杂交和免疫组织化学染色。结果短暂性脑缺血/再灌注后,大鼠海马CA1区NR2A mRNA的表达显著增加,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;NR2A反义寡核苷酸能显著地抑制这种表达的增加（P〈0.05）。短暂性脑缺血/再灌注后,大鼠海马CA1区NR2A的蛋白表达显著降低,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;经NR2A反义寡核苷酸预处理后,能够进一步增强NR2A蛋白表达的降低,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论短暂性脑缺血/再灌注后,在大鼠海马CA1区存在转录增强而翻译抑制现象。NR2A反义寡核苷酸能特异性地抑制NR2A mRNA表达的增加,同时能够增强NR2A蛋白表达的降低。NR2A反义寡核苷酸的这种作用很可能与缺血后的翻译抑制以及海马CA1区选择性易损伤相关联。     

绞股蓝总苷对血管性痴呆小鼠海马组织神经元损伤及pCREB表达的影响

目的探讨绞股蓝总苷对血管性痴呆模型小鼠海马组织神经元损伤和pCREB表达的影响。方法反复夹闭两侧颈总动脉致缺血再灌注制作小鼠血管性痴呆模型。将雄性C57BL/6J小鼠80只随机分假手术（Sham）组、血管性痴呆模型（VD）组、绞股蓝总苷低、中、高剂量（100、200、400mg/kg）处理组。苏木精伊红染色法示小鼠海马组织CA1区神经元损伤的变化情况;Real-time PCR检测海马组织pCREBmRNA的表达量。结果绞股蓝总苷干预可显著减轻VD小鼠的海马神经元损伤;VD模型组海马pCREBmRNA的表达明显低于假手术组（P〈0.05）;绞股蓝总苷各剂量处理组海马pCREB mRNA的表达水平明显高于VD模型组（P〈0.05）。结论血管性痴呆小鼠海马神经元损伤可被绞股蓝总苷减轻,上调海马神经元pCREB的表达。     

异丙酚对缺血再灌注损伤神经细胞的保护作用

目的 研究异丙酚对缺血再灌注损伤神经细胞的保护作用.方法 取12h新生Wistar大鼠海马细胞进行体外培养,建立原代海马细胞缺糖缺氧再给氧模型(oxygen glucose deprivation,OGD).观察海马细胞形态,苔盼蓝染色计算细胞存活率.建立SD大鼠脑缺血再灌注损伤模型,分为模型组、异丙酚用药组、正常对照组.观测各组动物术后神经症状评分、TTC染色测定脑梗死体积大小及HE染色.结果 海马细胞缺糖缺氧再给氧显示异丙酚用药组海马细胞存活数量较多,胞体较大突起保持稠密的神经网.异丙酚100μmol/L组细胞存活率为(56.2±3.7)％,较模型组(细胞存活率38.6％±4.3％)明显增高(P＜0.05).大脑中动脉阻断(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型24h神经症状评分,异丙酚用药组评分为(0.8±0.5)较模型组(2.3±0.5)显著降低(P＜0.05).TTC染色脑梗死体积异丙酚用药组为(123.21±11.04)mm3,较模型组(214.95±16.79)mm3显著降低(P＜0.01).HE染色可见异丙酚用药组正常细胞较多.结论 细胞和动物模型均显示异丙酚对缺血再灌注损伤后神经细胞具有保护作用.