热疗和热放疗对CNE-2细胞凋亡的影响

目的:研究热疗和热放疗对诱导鼻咽癌(CNE-2)细胞凋亡的作用.方法:将CNE-2细胞分为正常对照组、单纯放疗组、单纯热疗组和热放疗组,应用热疗联合放疗在不同照射剂量下诱导CNE-2细胞凋亡,以末端标记法(TUNEL法)检测其凋亡率.结果:单纯放疗、单纯热疗、热放疗均能诱导CNE-2细胞的凋亡,随放疗剂量的增加凋亡率明显升高(P<0.05)热放疗组的细胞凋亡率明显大于单纯放疗组和单纯热疗组(P<0.05).结论:单纯放疗、单纯热疗及热放疗均能诱导CNF-2细胞凋亡,热疗对CNE-2 细胞系有明显的放射增敏作用.     

小剂量顺铂连续化疗对鼻咽癌CNE-1细胞放射敏感性影响的体外研究

目的以小剂量顺铂连续化疗模拟节律化疗方式,采用细胞培养方法研究此种给药方式对鼻咽高分化鳞癌细胞株CNE-1细胞放射敏感性的影响,为临床鼻咽癌同步放化疗探索一种新的高效低毒的治疗模式。方法 MTT方法检测顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞的半抑制浓度(IC50),1/5IC50为小剂量化疗参考剂量,而IC70则为MTD化疗参考剂量。细胞分4组进行如下处理:A组剂量为1/5IC50的顺铂连续作用96h后进行放疗;B组剂量为IC70的顺铂连续作用3h后立即给予放疗;C组为IC70作用3h后间隔93 h进行放疗;D组为未加入顺铂化疗的鼻咽癌细胞株同样条件下培养96h后进行放疗。克隆形成实验计算细胞存活率,采用单击多靶模型绘制剂量存活曲线,比较各处理组辐射敏感性变化。结果顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞株作用72h的IC50值为0.26μg/ml,1/5IC50为0.05μg/ml,IC70为0.72μg/ml。采用单击多靶模型计算各处理组的SF2值与SER值如下:A组SF2为(0.414±0.008),SER值为(1.429±0.110);B组SF2值为(0.502±0.010),SER值为(1.012±0.129);C组SF2值为(0.411±0.014),SER值为(1.400±0.169);D组SF2为(0.603±0.100)。结论采用类似节律化疗方式给药,与放疗联用可以引起CNE-1细胞株放射敏感性增高。     

尼妥珠单抗对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的 初步探讨尼妥珠单抗对鼻咽癌CNE-2细胞的放射增敏作用.方法 MTT法检测尼妥珠单抗对CEN-2细胞的半数抑制浓度（IC50）,集落形成实验计算细胞存活率,多靶单击模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比,流式细胞仪检测尼妥珠单抗联合放疗的凋亡率及细胞周期分布.结果 尼妥珠单抗对CNE-2细胞有增殖抑制作用,24h IC50为945μg/ml,0.2×IC50及0.3×IC50剂量下的放射增敏比分别为1.26和1.38,尼妥珠单抗联合放疗组凋亡率、G0/G1期细胞比例较对照组增多（P＜0.05）.结论 尼妥珠单抗联合照射可提高鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性并阻碍细胞增殖、促进凋亡和干扰细胞周期分布.     

ApoG2联合放疗对鼻咽癌CNE-2细胞自噬与凋亡的影响研究

目的探讨ApoG2联合放射治疗对鼻咽癌(NPC)的CNE-2细胞自噬与凋亡的影响。方法将人NPC CNE-2细胞株分成空白对照组(仅加培养液,不加细胞)、放射治疗组、ApoG2组、联合组(放射+ApoG2),采用CCK-8法测定ApoG2+放射治疗对细胞增敏的作用,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态的变化,吖啶橙染色观察细胞自噬形态变化,检测细胞凋亡率的变化;Western bolt检测Beclin1、Bcl-2蛋白的表达情况变化。结果不同的放射剂量组间细胞增殖抑制率比较具有显著性差异(P<0.01),随着放射剂量的增加,鼻咽癌CNE-2细胞的抑制率也随之上升;不同的ApoG2药物浓度组间细胞增殖抑制率比较差异也具有显著性意义(P<0.01),随着药物浓度的增加,鼻烟癌CNE-2细胞的抑制率也上升。4组CNE-2细胞的凋亡率组间比较具有显著性差异,联合组凋亡率显著高于其他3组(F=140.2,P<0.01)。4组的Bcl-2、Beclinl的蛋白表达量组间比较差异具有统计学意义(Bel-2:F=71.24,P<0.01;Beclinl:F=107.53,P<0.01),其中联合组的Bcl-2蛋白表达量最低,Beclinl的蛋白表达量最高。结论ApoG2联合放疗能够通过诱导鼻咽癌CNE-2细胞的自噬与凋亡,从而抑制CNE-2细胞的增殖。     

FUDR对鼻咽癌CNE-1细胞系的放射增敏作用

目的研究氟尿嘧啶脱氧核苷(FUDR)对鼻咽癌细胞系CNE-1的细胞毒性作用及联合放疗的放射增敏作用,同时和5-氟尿嘧啶(5-Fu)作比较。方法应用CCK-8法分析FUDR及5-Fu对鼻咽癌细胞的毒性作用,绘制药物的浓度抑制率曲线。通过成克隆分析法研究低浓度的FUDR及5-Fu(浓度均<50%半数致死浓度ID50的1/5)联合照射对鼻咽癌细胞系CNE-1的体外放射增敏作用。流式细胞仪分析加药后各时间段的细胞周期变化。Western blot分析5-Fu和FUDR处理后细胞p53蛋白表达变化。结果从浓度抑制率曲线得出FUDR和5-Fu的ID50分别为0.078和0.509 mg/mL;成克隆分析法得出FUDR的放射增敏比和放疗2 Gy时的增敏比分别为1.504和1.677;5-FU的放射增敏比和放疗2 Gy时的增敏比分别为1.159和1.287;加入FUDR或5-Fu后各时间段S期细胞较对照组均增多,加药12 h后各时间段的差异均有统计学意义(P<0.05),但两药比较无统计学差异。Western blot结果显示,应用FUDR和5-FU处理后CNE-1细胞系p53蛋白表达增加,FUDR组增加更明显。结论低浓度的FUDR和5-Fu分别联合放疗均能增加鼻咽癌细胞系CNE-1的放射敏感性,且FUDR的增敏作用强于5-Fu;FUDR和5-Fu作用于鼻咽癌CNE-1细胞系均增加p53蛋白表达,FUDR作用更明显。FUDR和5-Fu作用于CNE-1细胞系后未见细胞周期重新分布于放射敏感时相,且二者对细胞周期的影响无明显差异。     

顺铂不同给药方式对鼻咽癌细胞毒性以及细胞周期影响体外研究

目的:采用细胞培养方法研究顺铂不同给药方式对鼻咽高分化鳞癌细胞株CNE-1的细胞毒性以及细胞周期的影响.方法:MTT方法检测顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞的半抑制浓度(IC50),1/5IC50为小剂量化疗参考剂量,而IC70则为MTD化疗参考剂量.细胞分4组进行如下处理:A组剂量为1/5IC50的顺铂连续作用96 h;B组剂量为IC70的顺铂连续作用3h;C组为IC70作用3h后间隔93 h;D组为未加入顺铂化疗的鼻咽癌细胞株同样条件下培养96 h.采用流式细胞仪进行细胞周期的检测.结果:顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞株作用72 h的IC50值为0.26 μg/ml,1/5IC50为0.05 μg/ml,IC70为0.72 μg/ml.顺铂为0.05μg/ml剂量时对CNE-1细胞无明显毒性,但细胞周期研究发现,当其连续作用96 h时,与阴性对照组相比可引起明显G2/M期阻滞(P＜0.05);而顺铂剂量为0.72 μg/ml连续作用3h后间隔24 h以及93 h时检测细胞周期变化也出现显著G2/M期阻滞(P＜0.05);但在0.72 μg/ml的顺铂作用3h后立即检测细胞周期变化,与相应阴性对照组相比无统计学意义(P＞0.05).结论:体外低毒性的小剂量顺铂连续给药可诱导鼻咽癌细胞株CNE-1细胞周期G2/M期阻滞.     

冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞的放射增敏作用

目的:观察冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞的放射增敏作用,并探讨其可能机制。方法:用克隆形成实验计算药物的放射增敏比,流式细胞仪法分别检测、比较单纯药物组、单纯照射组、联合治疗组各组的细胞周期变化。结果:冬凌草甲素的放射增敏比为1.227,流式细胞仪法分析显示,联合治疗组的细胞周期变化以G2/M期阻滞为主(45.2%),与单纯药物组、单纯照射组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞具有一定的放射增敏作用,其机制可能与改变细胞周期有关。     

沉默Pokemon基因对鼻咽癌细胞株CNE-2放射敏感性的影响

【目的】探讨沉默Pokemon基因对鼻咽癌细胞(CNE-2)放射敏感性的影响,寻求放射治疗鼻咽癌的新方法。【方法】首先利用siRNA预测软件得到3条siRNA序列,并制备合成siRNA片段,利用RT-PCR和免疫印迹法检测其沉默Pokemon基因的效果,筛选出沉默效果最佳的siRNA片段,转染CNE-2细胞后观察其对CNE-2细胞p53基因表达的影响、MTT法检测细胞的增殖活性、流式细胞术检测细胞的凋亡、克隆形成法检测转染siRNA联合放射处理后细胞的放射增敏比。【结果】成功筛选出了沉默效应最佳的siRNA片段,转染CNE-2细胞后能显著降低其Pokemon基因的表达、提高p53基因的表达、降低细胞的增殖活性、加速细胞的凋亡,同时增加了CNE-2细胞的放射敏感性。【结论】沉默Pokemon基因能增加鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性,这为临床鼻咽癌的放射增敏治疗提供了新思路。     

EGCG对鼻咽癌细胞株裸鼠移植瘤的放疗增敏作用以及对Survivin表达的影响

目的研究凋亡抑制基因Survivin的表达与EGCG对鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤放疗增敏作用的关系。方法将低分化鼻咽癌细胞CNE-2接种于4~6周龄的雌性裸鼠皮下,待移植瘤生长至4~6 mm时,随机分为4组,分别采用NS、EGCG[50 mg/(kg.w)]、放疗(15 Gy)、EGCG给药24 h后再行放疗等方法分别处理各组裸鼠,处理前后分别测量裸鼠移植瘤的短径、体积。21 d后处死裸鼠,取出肿瘤并称重,将肿瘤组织分成两份,分别用来进行病理切片TUNEL染色以及RT-PCR检测Survivin mRNR的表达。结果EGCG+放疗对裸鼠移植瘤的生长抑制最为明显,肿瘤生长抑制率为89.3%,消退率为40.0%。与对照组EGCG组、放疗组相比,EGCG+放疗组的凋亡指数均明显增加(P<0.05),同时,伴有Survivin mRNR的表达显著下降(P<0.05)。结论EGCG对鼻咽癌裸鼠移植瘤可能具有放疗增敏作用,这种作用可能与凋亡抑制基因Survivin的表达下调有关。     

奈达铂对不同EBV状态鼻咽癌细胞放射增敏的实验研究

目的 观察奈达铂对人鼻咽癌细胞系CNE2（EBV-）和C666（EBV＋）的抑制作用及放射增敏作用,并探讨其作用机制.方法 不同浓度奈达铂（0～100μg/ml）作用于人鼻咽癌CNE2（EBV-）和C666（EBV＋）细胞,MTS法检测奈达铂的细胞增殖抑制作用,并计算IC50值;以IC5和IC10奈达铂浓度作为增敏剂量,MTS法和克隆形成法检测细胞放射敏感性的变化,流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞周期的改变.结果 MTS实验奈达铂对CNE2和C666细胞IC50值分别为34.32μg/ml和63.69μg/ml（24h）;增敏实验分为空白对照组、NDP1组（CNE2 0.34μg/ml,C666 0.69μg/ml）和NDP2组（CNE2 0.64μg/ml,C666 1.27μg/ml）,4Gy照射后三组细胞存活率,CNE2细胞为（90.0±0.3）%、（80.2±0.5）%、（53.3±0.7）%（24h）,（76.7±0.1）%、（60.0±0.6）%、（40.0±0.2）%（48h）,（66.7±0.7）%、（40.2±0.4）%、（30.0±0.6）%（72h）;C666细胞为（92.3±0.2）%、（61.5±0.7）%、（50.3±0.3）%（24h）,（77.7±0.2）%、（44.6±0.9）%、（36.2±0.4）%（48h）,（53.8±0.2）%、（34.6±0.3）%、（23.1±0.4）%（72h）;以克隆形成结果拟合存活曲线,CNE2细胞SF2为0.46、0.26、0.14,C666细胞SF2为0.43、0.31、0.20;CNE2和C666细胞SER（SF2）为1.77和1.39（NDP1）,3.29和2.15（NDP2）;照射后三组细胞凋亡率,CNE2为（4.55±0.12）%、（9.02±0.75）%和（14.55±0.45）%,C666细胞为（4.02±0.33）%、（7.11±0.32）%和（10.36±0.58）%;三组细胞G2/M期比例,CNE2为（3.49±0.25）%、（17.55±0.55）%和（32.09±0.48）%,C666为（3.65±0.18）%、（13.75±0.51）%和（30.11±0.77）%;两种细胞系组间比较差异均具统计学意义（P＜0.05）.结论 奈达铂对不同EBV状态的人鼻咽癌CNE2和C666细胞具有放射增敏作用,增敏作用CNE2细胞（EBV-）优于C666细胞（EBV＋）,其增敏机制与增加细胞凋亡、调节G2/M期比例有关.