siRNA干扰Caco-2细胞鞘磷脂合酶2 (SMS2)基因对药物转运体的影响

 目的  研究鞘磷脂合酶2 (sphingomyelin synthase 2,SMS2)缺损对人结肠癌细胞(colon cancer cell,Caco-2)中药物转运体P 糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药相关蛋白2 (multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的表达与功能的影响。方法  SMS2特异性siRNA转染至Caco-2细胞。采用RT-PCR和real-time PCR检测SMS2-特异性siRNA的干扰效率;采用Western blot法检测siRNA转染后P-gp和 MRP2蛋白表达的变化;采用胞内蓄积试验,通过HPLC检测P-gp及MRP2专一性底物罗丹明123及普伐他汀的蓄积含量,分析下调SMS2水平对Caco-2细胞中P-gp及MRP2功能的影响。结果  应用siRNA下调SMS2水平后,P-gp和MRP2的蛋白质水平均显著下调;胞内蓄积实验结果显示罗丹明123及普伐他汀的蓄积量明显增加,说明P-gp和MRP2的外排功能减弱。结论  SMS2基因表达下调对Caco-2细胞中P-gp和MRP2的表达以及功能均有显著影响。     

多壁碳纳米管和富勒烯碳60对P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白转运功能的影响

目的:比较多壁碳纳米管(MWCNTs)和富勒烯碳60(C60)对P-糖蛋白(Pgp)和多药耐药相关蛋白(MRP)转运活性的影响.方法:将表达Pgp和MRP的大鼠星形胶质细胞分别以MWCNTs和C60处理24 h.以流式细胞术检测细胞对PgP特异性底物罗丹明123和MRP特异性底物荧光素的摄取、潴留和外排转运动力学.并以透射电子显微镜观察细胞对两种材料的内化.结果:MWCNTs对罗丹明123和荧光素的摄取无明显影响,但浓度依赖性地增加两种底物在细胞内的潴留.动力学分析也表明MWCNTs明显降低细胞对两种底物的外排速率.与MWCNTs相比,C60对两种底物的摄取、潴留以及外排速率无明显影响.结论:MWCNTs可抑制Pgp和MRP介导的外排转运.不同的纳米结构可使碳的同素异形体表现出截然不同的细胞效应.     

Caco-2 细胞单层模型中熊果酸摄取转运机制的研究

目的 研究熊果酸在 Caco-2 细胞单层模型中的吸收转运机制。方法 利用人源结肠腺癌细胞系 Caco-2 细胞单层模型研究熊果酸在有或无 P-糖蛋白专属性抑制维拉帕米存在时,评价其双向转运特征,并考察时间、药物浓度、体系温度以及培养介质 pH 值对 Caco-2 细胞摄取熊果酸的影响。采用高效液相色谱-紫外检测法对熊果酸进行定量分析,计算其表现渗透系数 (Papp)。结果 浓度在 10～40 μmol/L 内,Caco-2 细胞对熊果酸摄取量呈线性增加。双向转运研究发现加入 P糖蛋白专属性抑制剂维拉帕米后,其 Papp 发生显著改变,表观渗透率由 3.445 下降至 1.386。结论 熊果酸在 Caco2 细胞模型的吸收转运机制以被动转运为主,P-糖蛋白参与主动转运的过程。     

神经管畸形与还原叶酸载体基因(RFC1 A80G)多态性及可疑危险因素的流行病学研究

目的:探讨还原叶酸载体基因(Reduced folate carrier gene,RFC1)A80G多态性及可疑危险因素对神经管畸形(neural tube defects,NTDs)的影响,为寻找NTDs的遗传易感标志物提供流行病学依据.方法:采用限制性片段长度多态性-聚合酶链式反应(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,RFLP-PCR)方法,对104个NTDs儿核心家庭和100个健康对照儿核心家庭RFC1 A80G多态性进行检测,并且对家系成员RFC1基因型及其他因素进行单因素和多因素分析,在控制其他因素后观察RFC1基因型、母亲孕早期未增补叶酸对NTDs的独立影响,对NTDs杂合子父母G等位基因进行传递不平衡检验(transmission/disequilibrium test,TDT).结果:NTDs患儿G等位基因频率(64.42%)高于对照儿(52.53%),并且差异有统计学意义(χ2=5.9198,P＜0.05);在单因素分析中,携带RFC1 GG基因型的子代发生NTDs危险高于AA基因型子代(OR=2.56,95% CI=1.04～6.36),母亲孕早期未增补叶酸,生育NTDs的危险高于增补叶酸的母亲(OR=7.69,95% CI=2.86～21.75),其他危险因素(如父亲年龄、母亲孕早期发热、母亲自然流产史)在病例对照之间差异有统计学意义;在多因素Logistic回归分析中,子代RFC1 GG基因型(OR=2.91,95% CI=1.35～6.30)、母亲孕早期未增补叶酸(OR=4.32,95%CI=1.62～11.55)、母亲孕早期发热(OR=3.22,95%CI=1.26～8.26)对NTDs的发病危险具有统计学意义.TDT结果显示,RFC1基因G等位基因与NTDs之间存在关联(χ2=5.236,P＜0.05).结论:在该研究人群中,RFC1 GG基因型可能是NTDs发生的遗传易感基因之一,母亲孕早期未增补叶酸、发热对NTDs的发病也具有重要影响.     

9-硝基喜树碱在Caco-2细胞模型中的体外摄取、转运及外排动力学

目的 研究9-硝基喜树碱(9-NC)的细胞摄取、转运及外排特性。方法 一种体外培养的人小肠上皮细胞模型Caco-2应 用于9-NC的小肠上皮细胞的摄取、跨膜转运及外排动力学研究。评价了时间、温度、p14,p-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制 剂对细胞摄取的影响。采用HPLC测定药物含量。结果9-NC以被动扩散为主要方式被细胞摄取和转运。药物的摄取与时 间呈正相关,与温度、pH呈负相关。P-gp抑制剂环孢菌素和维拉帕米增加9-NC细胞摄取(P<0.05)。药物从Basolateral(B, 基底面)到Apical(A,肠腔面)的渗透系数Papp大于A到B(2.6-6.9倍)。9-NC外排符合二级外排动力学过程,A侧m。 [(148.0±2.2)pmol·cm-2]和外排速率(41.1 pmol·cm2·min-1)高于B侧的m。[(121±7)pmol·cm-2(P<0.05)]和外排速率 (29.2 pmol·cm2·min-1)(P<0.01)。结论 9-NC是以被动扩散方式为主要方式被小肠上皮细胞摄取和转运,并受到P-gP 强烈的外排作用。 [全文刊登于药学学报,2004,39(10):839]     

应用Caco-2细胞模型观察介质pH和氨氯地平对替米沙坦跨膜吸收转运的影响

目的 探讨介质pH值和常用合并用药氨氯地平对血管紧张素Ⅱ受体(AT1型)拮抗剂替米沙坦跨膜吸收转运的影响.方法 体外培养人结直肠癌Caco-2细胞,通过细胞形态观察、跨上皮细胞电阻(TEER)测定和荧光黄通透性实验验证Caco-2细胞单层完整性;通过ATP酶活性测定和双向转运实验分析替米沙坦是否外排糖蛋白(P-gp)底物;观察改变介质pH及合并使用氨氯地平时对替米沙坦跨膜吸收转运的影响.结果 建立的Caco-2细胞单层完整,适用于转运实验.替米沙坦ATP酶活性与空白对照ATP酶活性的比值为1.73,双向转运实验结果显示外排比率为4.53.随着pH值(8.0～5.0)的降低,替米沙坦吸收表观通透性逐渐增强,跨膜吸收转运呈现明显的pH依赖性.在pH 7.4且合并氨氯地平时,替米沙坦吸收表观通透性明显增强.结论 P-gp可能参与替米沙坦跨膜分泌转运,介质pH酸性环境和氨氯地平可易化替米沙坦跨膜吸收转运.     

槲皮素对17α-乙炔雌二醇诱导胆汁淤积的肝保护作用研究

目的探讨槲皮素（Que）对17α-乙炔雌二醇（EE）诱导胆汁淤积的肝保护作用及可能机制。方法采用随机数字表法将SD大鼠分为对照组、模型组、给药组（Que50mg/kg组和Que100mg/kg组）,每组8只。模型组及给药组连续5d皮下注射5mg/kgEE造模,对照组皮下注射EE溶剂丙二醇。Que50mg/kg组和Que100mg/kg组分别予50mg/kg和100mg/kgQue（溶于0.5%羧甲基纤维素钠溶液）灌胃,对照组及模型组予Que溶剂0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。采用HE染色和血清生化指标评价大鼠肝损伤情况,按照胆汁酸测定试剂盒测定血清与肝脏中胆汁酸水平;眼科剪顺着胆管方向剪一个小口,收集1h内的胆汁酸,并计算胆汁流量;RT-qPCR测定胆汁酸摄取转运体、外排转运体、胆汁酸合成酶及代谢酶mRNA表达情况。结果与模型组相比,Que显著减轻EE诱导的胆汁淤积肝损伤,减轻大鼠血清AST、ALT和ALP水平（均P＜0.05）,增加大鼠胆汁流量（均P＜0.01）,降低血清及肝脏胆汁酸水平（均P＜0.05）,显著增加外排转运体胆汁酸盐输出泵、多药耐药相关蛋白（MRP）2、MRP3、MRP4和胆汁酸代谢酶细胞色素P450酶（CYP）3A2、CYP2B10、硫酸基转移酶2A1的表达（均P＜0.05）,显著抑制胆汁酸摄取转运体钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白和胆汁酸合成酶CYP7A1和CYP8B1表达（均P＜0.05）。结论Que可通过调节胆汁酸转运体与酶的表达缓解肝脏胆汁酸累积,从而发挥保肝利胆的功效。     

补阳还五汤黄酮类有效成分在Caco-2细胞单层模型的转运特征及对CYP450酶活性的影响

目的研究补阳还五汤3个黄酮类有效成分(羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮、芒柄花素)在Caco-2细胞单层模型中的转运特征及其在大鼠肝微粒体中对CYP450酶亚型活性的影响。方法 MTT法研究药物在Caco-2细胞单层模型的安全浓度范围,以Caco-2细胞单层模型研究黄酮类有效成分的双向转运机制,以表观渗透系数(Papp)为检测指标,考察时间、浓度以及P-gp抑制剂维拉帕米对转运的影响,利用Cocktail探针法研究药物对CYP450亚型的体外抑制作用。结果从顶侧(apical,AP)到底外侧(basolateral,BL)(AP→BL),芒柄花素、毛蕊异黄酮的Papp>10-6 cm/s,表明其吸收性良好,羟基红花黄色素A的Papp为10-6cm/s,表明其吸收性一般;且三者的转运量随浓度升高和时间延长而显著升高,BL→AP的转运量与AP→BL的转运量的比值小于1.5,其中芒柄花素、毛蕊异黄酮的转运都受到P-gp外排蛋白的外排作用;补阳还五汤黄酮类有效成分明显降低了CYP2E1、CYP1A2酶探针底物的代谢量(P<0.05)。结论 3种黄酮类有效成分在Caco-2细胞模型的转运方式均为被动转运,毛蕊异黄酮与芒柄花素明显受到P-gp的外排作用,补阳还五汤黄酮类有效成分可以增加主要通过CYP2E1、CYP1A2酶代谢的药物浓度。     

乳糖化-去甲斑蝥素及其纳米粒在Caco-2细胞模型中的跨膜转运机制

目的 研究乳糖化-去甲斑蝥素（Lac-NCTD）及其壳聚糖纳米粒（Lac-NCTD-NPs）的细胞摄取、转运机制。方法 采用Caco-2细胞单层模型研究Lac-NCTD和Lac-NCTD-NPs的摄取和跨膜转运;考察了时间、温度、pH值、药物质量浓度、吸收抑制剂和促进剂对药物跨膜吸收的影响,并比较两种剂型吸收过程的差异。结果 Lac-NCTD以主动转运为主要方式被细胞摄取和转运,少部分通过旁路转运。药物的摄取和时间呈正相关,与温度呈负相关。P-糖蛋白（P-gp）和多药耐药相关蛋白2（MRP2）抑制剂能增加Lac-NCTD的细胞摄取（P＜0.05）。药物从基底侧（basolateral,BL）到肠腔侧（apical,AP）的渗透系数（P_app(BL→AP)）大于P_app(AP→BL)。内吞抑制剂氧化苯砷对药物的转运无影响,旁路转运促进剂去氧胆酸钠能增加药物转运。结论 Lac-NCTD主要以主动转运方式被吸收,少部分通过旁路转运被Caco-2细胞摄取和转运,此过程受P-gp和MRP2外排蛋白作用,且药物纳米粒的摄取和转运较其溶液均有增加。     

儿茶素和茶提取物对Caco-2细胞中叶酸摄取的抑制作用

水溶性维生素叶酸盐在人和动物营养中用于补充和强化食品,而叶酸是其稳定的、合成的和氧化形式。还原的叶酸盐的一个主要生化作用是为高半胱氨酸到蛋氨酸的再甲基化提供一个甲基基团。人体出现叶酸盐吸收障碍会导致叶酸盐缺乏,以至引起许多疾病。作者进行此项研究的目的是检测绿茶中的儿茶素和茶的完全提取物对Caco-2细胞单层摄取叶酸是否具有抑制作用。经过培养的Caco-2细胞单层分别在pH为6.5和7.4的条件下与叶酸(0.1~5μmol/L)共同培养,以测定pH值对叶酸摄取的影响。由于在pH6.5时,叶酸具有高的摄取率,因此所有抑制实验均在此条件下进…     

Red cell folate concentrations in patients with Crohn's disease on parenteral nutrition

To examine changes in the folate concentrations in red cell during relatively long-term total parenteral nutrition (TPN), 10 Japanese patients with Crohn's disease (7 males), the mean Crohn's disease activity index on admission being 211, were given folic acid in a dose of 400 micrograms/day (AMA-FDA formulation) or 800 micrograms/day for 6-16 weeks (mean 10.5). The red cell folate concentrations were determined before TPN and once every week or 2-4 weeks thereafter. The folate concentrations were very low even after TPN with folic acid of 400 micrograms/day. In those given 800 micrograms of daily folic acid, the folate levels tended to increase, but did not reach the normal range. We propose that folic acid over 800 micrograms/day or a double dose of AMA-FDA formulation should be prescribed for Crohn's disease treated with long-term TPN.     

叶酸偶联白蛋白纳米粒肿瘤细胞靶向性研究

目的 研究能通过叶酸受体介导靶向肿瘤细胞的叶酸偶联白蛋白纳米粒。方法 利用叶酸活性醢在碱性条件下与白蛋白纳米粒表面上的氨基反应,制得叶酸偶联的白蛋白纳米粒。以荧光定量法确定浓度、时间、游离叶酸对肿瘤细胞摄取叶酸偶联白蛋白纳米粒的影响程度。结果 成功制备了叶酸偶联白蛋白纳米粒,叶酸偶联白蛋白纳米粒的肿瘤细胞摄取量随纳米粒浓度增大、培养时间延长而增加,肿瘤细胞对叶酸偶联白蛋白纳米粒的摄取可被过量的外源性游离叶酸所抑制。结论 叶酸偶联白蛋白纳米粒能通过细胞膜上的叶酸受体介导内吞入胞,可显著靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞。     

缺氧对多药耐药相关蛋白2 表达及调控机制的影响

药物外排转运蛋白对药代动力学参数变化起着关键性作用。近年来研究较多的外排型转运蛋白除了P-糖 蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)外,多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein 2,MRP2)逐渐成为了研究的热点。肿瘤微缺氧环境中一些信号转导通路、转录因子参与MRP2基因 的表达调控,这些因子包括过氧化物酶体增殖剂激活受体(peroxisome proliferators-activated receptors,PPARα)、核因 子-κB(nuclear factor κB,NF -κB)、孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)、组成 型雄烷受体(constitutive androstane receptor,CAR)和microRNA等,但MRP2在缺氧条件下的调控机制尚不完全清楚,且 是一个很复杂的过程。MRP2作为最主要的外排转运蛋白之一,多种常用药物及抑制剂是其底物,MRP2的表达变化 会显著影响这些底物药代动力学(吸收、分布、代谢、排泄)。同时,缺氧状态下MRP2不仅是由单一的信号通路或者 某个转录基因调控,而是涉及多个信号通路以及诸多基因,从而构成一个调控网络。     

The Incidence and Prevention of Folate Deficiency in a Pregnant Clinic Population

Non-anemic women attending a public antenatal clinic were given, daily, a multivitamin tablet containing 78 mg. of elemental iron. The follow-up studies included an analysis of their diets. A total of 311 patients were included, of which one group received a supplement of 0.5 mg. folic acid and 0.005 mg. vitamin B₁₂. The incidence of megaloblastic bone marrow change in the unsupplemented group was 26% and of low blood folates approximately 50%. The incidence of megaloblastic changes was sharply reduced in the supplemented group and the blood folates were elevated to supranormal levels, indicating that the dose of folic acid used may have been above the minimal requirement. Formiminoglutamic acid (FIGLU) excretion could not be correlated with other parameters of folate deficiency. Neutrophil lobe counts did not relate to megaloblastic changes or low folate levels unless there was more than 5% hypersegmentation. The dietary intake was suboptimal in total calories, iron and food folate.     

小剂量叶酸预防妊娠期高血压有效剂量的实验研究

目的 探讨不同剂量叶酸对高同型半胱氨酸妊娠期SD大鼠血清叶酸及血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平的影响作用,找出预防妊娠期高血压的最佳有效剂量.方法 将40只12周龄雌性SD大鼠按照叶酸干预剂量分为4组:低、中、高3个剂量叶酸组[0.8 mg/(kg·d),n=10],中剂量叶酸组[1.6 mg/(kg·d),n=10]、高剂量叶酸组[2.0 mg/(kg·d),n=10]和对照组(灭菌水500μL,n=10).干预7 d后,将雌鼠和同品类雄鼠合笼,第2~3天进行阴道栓检测,将受孕大鼠纳入研究,采用1%蛋氨酸饮食建立高同型半胱氨酸模型,干预前后分别抽取血液样本,测定各组血清叶酸及血浆Hcy水平.结果 32只雌鼠受孕并纳入干预研究,4组SD大鼠体质量在干预前后比较,差异均无统计学意义(P>0.05);中剂量叶酸组、高剂量叶酸组与对照组比较,叶酸水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,高剂量叶酸组SD大鼠Hcy水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 不同剂量叶酸干预效果存在差异,在安全剂量下,高剂量组叶酸能够提高妊娠期SD大鼠的叶酸水平和降低Hcy水平,从而达到预防妊娠期高血压的目的.     

促红细胞生成素对缺血再灌注心肌HSP70及ERK1/2表达的影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)预处理对缺血再灌注的大鼠心肌组织热休克蛋白70(HSP70)及细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)表达的影响及其可能的机制.方法 建立大鼠在体缺血再灌注模型,结扎左前降支动脉30 min,松解2h.24只大鼠随机分为3组,每组8只.假手术组:建模前24 h腹腔注射生理盐2 mL;对照组:建模前24 h腹腔注射生理盐水2 mL;EPO组:建模前24 h腹腔注射EPO(5 000 U/kg).假手术组开胸手术,左前降支动脉下只穿线不结扎.RT-PCR方法分析左心室心肌组织HSP70和ERK1/2 mRNA的表达,并分析HSP70 mRNA和ERK1/2 mRNA表达量的关系.结果 EPO组HSP70mRNA表达(0.850±0.066)较盐水对照组(0.355±0.043)显著升高(P＜0.01);EPO组ERK1/2 mRNA( 1.150±0.125)较盐水对照组(0.576±0.116)表达水平显著升高(P＜0.01);EPO预处理组大鼠的心肌组织HSP70与ERK1/2 mRNA表达量呈显著正相关(r=0.965,P＜ 0.01).结论 EPO预处理能够促进缺血再灌注心肌组织HSP70及ERK1/2 mRNA的表达,HSP70表达量与ERK1/2mRNA表达量呈显著正相关.     

"Folate before pregnancy": the impact on women and health professionals of a population-based health promotion campaign in South Australia

OBJECTIVES: To evaluate a South Australian campaign to promote and implement knowledge that taking adequate folate/folic acid in the periconceptional period can reduce the risk of having a baby with a neural tube defect. DESIGN AND SETTING: The campaign, conducted in October 1994--August 1995, targeted women of reproductive age and health professionals. Evaluation was by computer-assisted telephone interviews undertaken by random dialling throughout the State before and after the campaign, and by self-administered questionnaires to health professionals and women in the postnatal period. PARTICIPANTS: Women of reproductive age and four groups of health professionals. MAIN OUTCOME MEASURES: Knowledge about folate, folate-rich foods and the periconceptional period; participation of health professionals in advising women about folate; use of periconceptional folic acid supplements; sales of folic acid tablets; and prevalence of neural tube defects. RESULTS: Significant increases in knowledge about folate followed the campaign. Health professionals and women in the postnatal period had higher initial levels of knowledge about folate, which also increased significantly. The proportions of women taking periconceptional folic acid supplements, and of health professionals advising women planning a pregnancy about folate, also increased significantly, and folic acid tablet sales doubled. Total prevalence of neural tube defects declined between 1966 and 1999 from a baseline of 2.0 per 1,000 births to 1.1 per 1,000 births (Poisson regression, P= 0.03; average decline of 1.0% per year). CONCLUSIONS: A short educational campaign with a limited budget ($40,000) can promote folate successfully, but alternative strategies such as food fortification are likely to be needed to achieve adequate periconceptional folate intake for a very high proportion of women.     

叶酸干预对复发性流产患者同型半胱氨酸及叶酸水平的影响探讨

目的：探讨叶酸干预对复发性流产患者同型半胱氨酸（HCY）及叶酸水平的影响。方法以42例复发性流产患者为研究对象，45例正常孕前检查者为对照，检测2组血清HCY水平、叶酸水平，根据检查结果给予叶酸干预，比较干预后2组HCY、叶酸水平。结果入组时复发性流产组血清HCY、血浆叶酸及红细胞叶酸水平与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。用药3个月后，复发性流产组血清HCY水平仍然显著高于对照组（P<0.05），红细胞叶酸水平显著低于对照组（P<0.05），但是血浆叶酸水平接近对照组，差异无统计学意义（P>0.05）。结论复发性流产患者血清同型半胱氨酸水平高于正常女性，叶酸水平偏低，叶酸干预可改善患者叶酸代谢紊乱、降低同型半胱氨酸水平。