晚期糖基化终末产物与其受体对糖尿病创面氧化应激反应的影响

目的 观察糖尿病患者皮肤和创面中晚期糖基化终末产物(AGE)的蓄积和炎症反应,并结合体外干预实验推测两者之间可能存在的关系. 方法 采集10例2型糖尿病患者(糖尿病组)和12例非糖尿病患者(非糖对照组)的皮肤和创面组织标本,部分于光学显微镜下观察胶原排列、细胞分布(HE染色),AGE及其受体(RAGE)表达(免疫组织化学染色);部分匀浆后采用ELISA法检测丙二醛含量.体外采集、分离健康人外周血中性粒细胞,并分为正常对照组(添加RPMI-1640培养液培养)、低浓度干预组、中浓度干预组和高浓度干预组,3个干预组分别在RPMI-1640培养液中添加AGE修饰的人血清白蛋白,其中AGE的浓度依次为0.315、0.625、1.250 mg/mL;噻唑蓝法检测细胞存活率,荧光探针二氢二氯荧光黄双乙酸钠测定细胞内活性氧水平.对数据进行t检验. 结果 与非糖对照组比较,糖尿病组皮肤组织中胶原萎缩,排列紊乱;创面组织中炎性细胞弥散分布,胶原排列稀疏紊乱.糖尿病组皮肤组织中AGE和RAGE表达均多于非糖对照组;2组创面组织中RAGE呈阳性表达的细胞数量均多于所在组皮肤组织,以糖尿病组更显著,其创面内可见大量RAGE呈阳性表达的炎性细胞.糖尿病组患者皮肤和创面组织中每毫克蛋白丙二醛含量分别为(6 3±1.0)、(7.1±2.4)nmol,均明显高于非糖对照组相应组织[(2.9±1.0)、(3.6±1.4)nmol,t值分别为8.017、4.349,P ＜0.05或P＜0.01].与正常对照组[(34±5)％]比较,低浓度干预组、中浓度干预组、高浓度干预组中性粒细胞存活率均明显上升[(59±8)％、(77±5)％、( 67±6)％,t值分别为7.195、14.890、11.130,P＜0.05或P＜0.01].与正常对照组(0.58±0.06)比较,低浓度干预组、中浓度干预组、高浓度干预组中性粒细胞内活性氧水平均升高(1.67±0.14、2.13±0.17、3 48±0.48,t值分别为20.195、24.905、16.864,P＜0.05或P＜0.01). 结论 异常的氧化应激水平导致糖尿病皮肤具有异常的创伤修复起点,创面愈合过程中AGE-RAGE效应是影响糖尿病创面氧化应激水平的重要因素.     

弱精子症大鼠模型的建立及左旋肉碱对其改善作用的相关研究

目的 研究弱精子症大鼠模型的建立及左旋肉碱(L-肉碱)与精子质量的关系.方法 24只雄性SD大鼠随机均分成3组,分别连续灌胃20d,A组(对照组):0.5%羟甲基纤维素钠(溶剂);B组:400mg/kg奥硝唑悬液:C组:400mg/kg奥硝唑悬液+100mg/kg左旋肉碱.末次给药24h后,麻醉处死所有大鼠,分别检测各组精子密度、活力、形态正常率以及附睾总L-肉碱和游离L-肉碱浓度.结果 A组、B组及C组的精子密度差异无统计学意义(P＞0.05);A组、C组精子活力、精子形态正常率及附睾总L-肉碱、游离L-肉碱浓度均明显高于B组(P＜0.05),A组与C组精子活力、精子形态正常率及附睾总L-肉碱、游离L-肉碱浓度比较,差异均无统计学意义.精子活力与附睾总L-肉碱、游离L-广肉碱浓度呈正相关(r=0.645,P＜0.05:r=0.676,P＜0.05),精子形态与附睾总L-肉碱、游离L-肉碱浓度呈正相关(r=0.557,P＜0.05;r=0.583,P＜0.05),均相关性其具有统计学意义.结论 奥硝唑可以降低大鼠精子活力、精子形态正常率,以及附睾L-肉碱水平,附睾L-肉碱浓度与精子活力、精子形态正常率呈正相关,L-肉碱对精子质量有改善作用.     

血红素氧合酶1对大鼠心肌细胞急性损伤的保护作用

目的 了解血红素氧合酶1(HO-1)对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制. 方法分离培养SD乳鼠心肌细胞,根据细胞悬液中所加刺激物的不同分为对照组(A组):常规培养;LPS组(B组):培养液中加入终浓度为30 μmol/L的LPS,作用1 h;LPS+氯化血红素(heroin)组(C组):加入终浓度为5 μmol/L的heroin,作用1 h后再加入30 μmol/L的LPS作用1 h;LPS+ZnPP组(D组):加入终浓度为3 μmol/L的ZnPPⅨ,作用1 h后再加入30 μmol/L的LPS作用1 h.硫代巴比妥酸比色法及黄嘌呤氧化酶法测定各组心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量;检测心肌细胞节律、存活率及凋亡率;用反转录-PCR法检测HO-1 mRNA表达;蛋白质印迹法检测心肌细胞HO-1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子кB(NF-кB)的表达. 结果 B、C、D组LDH和MDA值分别为(113±15)、(79±13)、(154±22)U/L和(1.88±0.36)、(1.16±0.32)、(2.84±0.44)mmol/L,高于A组[(69±10)U/L、(0.87±0.25)mmol/L,P<0.05],而以上3组的SOD值[(17.8±1.8)、(22.5±2.4)、(13.4±1.5)U/mL]却低于A组[(24.3±3.6)U/mL,P<0.05].B、C、D组心肌细胞节律,凋亡率均高于A组(P<0.05),存活率低于A组(P<0.05).B、C、D组心肌细胞HO-1 mRNA表达均高于A组(P<0.05),其中C组最高.B、C、D组心肌细胞HO-1、TNF-α、NF-кB值均高于A组(P<0.05),其中C组的HO-1值最高,D组TNF-α、NF-кB值最高. 结论 LPS对心肌细胞有明显的损伤作用.HO-1可能通过抗炎性反应、减轻氧化应激以及减少细胞凋亡途径,对心肌细胞产生保护作用.     

地塞米松防治皮瓣缺血-再灌注损伤及其机制

目的研究地塞米松对中性粒细胞凋亡与坏死的调控,阐明地塞米松防治皮瓣缺血-再灌注损伤的机制. 方法 30只Wistar大鼠腹部制备3 cm×6 cm 岛状皮瓣,分成3组(n＝10).A组正常皮瓣组;B组阻断静脉8 h,腹腔注射生理盐水作为对照组;C组阻断静脉8 h,腹腔注射地塞米松5 mg/kg,作为治疗组.术后7 d观察皮瓣成活面积;以Annexin V及Propidium双标记,流式细胞仪检测全血中性粒细胞凋亡、坏死水平;电镜观察凋亡、坏死中性粒细胞的形态.并于术后1 d,从各组大鼠皮瓣中央取材,电镜观察吞噬细胞吞噬凋亡中性粒细胞形态.阻断血管前,再灌注损伤后0、 3、6、12 及 24 h,以双夹心ELISA法测量血浆肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)及白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)浓度. 结果皮瓣成活面积A、C组大于B组(P<0.05),A、C组差异无统计学意义(P＞0.05).术后1、3 d,B组全血中性粒细胞凋亡含量明显低于A、C组, 6 d高于A、C组.术后1、3、6 d,中性粒细胞坏死水平B组高于A、C组.术后1 d,皮瓣中吞噬细胞吞噬凋亡中性粒细胞的数量C组明显高于B组(P<0.05).B组血浆TNF-α于再灌注1 h达到高峰,IL-10于再灌注3 h达到最低.C组TNF-α峰值明显低于B组,6 h即明显下降;IL-10再灌注1h达最低,3 h时明显上升,其浓度明显高于B组. 结论地塞米松防治皮瓣缺血再灌注损伤的机制在于调理了中性粒细胞的凋亡水平,减少了中性粒细胞的坏死数量,平衡了中性粒细胞分泌细胞因子.     

舒洛地特在NF-κB介导皮瓣缺血/再灌注损伤中保护作用的机制研究

目的探讨舒洛地特对大鼠皮瓣缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤保护作用的机制。方法建立皮瓣I/R损伤大鼠模型,将实验大鼠随机分为3组,每组24只。假手术组(A组):不进行灌注干预;I/R组(B组):术前1 h,于腹腔注射生理盐水10 ml/kg,进行I/R处理;舒洛地特组(C组):注入同等量稀释的舒洛地特注射液(10 mg/kg)进行I/R处理。采用SPSS21.0统计软件,对检测皮瓣组织中NF-κB的含量进行数据处理;7 d后,采用图像分析皮瓣的存活率。结果免疫组化提示,B组比C组、A组的表达明显增强,且阳性部位主要是血管壁细胞及中性粒细胞。C组再灌注后,NF-κB活性受到抑制,中性粒细胞浸润及组织水肿程度较B组明显改善。采用Western blot检测NF-κB提示,B组C组A组;7 d后,皮瓣的存活率检测提示,A组C组B组。结论舒洛地特在皮瓣缺血/再灌注损伤时能有效保护皮瓣,其机制可能与抑制NF-κB表达及降低局部炎性反应有关。     

血管内皮生长因子对关节软骨细胞基质金属蛋白酶-13表达的影响

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)对体外培养的关节软骨细胞基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达的影响.方法 体外培养SD乳鼠关节软骨细胞,分为4组,每组加入不同处理因素进行干预,A组:(对照组)不加任何处理因素;B组:10 μg/L VEGF;C组:10 μg/L白细胞介素(IL)-1β;D组:10 μg/L VEGF+ 10 μg/L IL-1β.采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测MMP-13 mRNA的表达,蛋白免疫印迹法检测MMP-13蛋白的表达.结果 B组(0.88±0.47)、C组(3.69 ±0.45)及D组(3.85 ±0.48)的MMP-13 mRNA表达水平均显著高于A组(0.73±0.56),D组软骨细胞MMP-13的mRNA表达水平明显高于B组(P＜0.01)及C组(P＜0.05).与A组(0.36 ±0.17)比较,B组(0.63±0.21)、C组(0.76±0.24)及D组(0.99±0.26)的MMP-13蛋白表达水平显著升高,D组MMP-13的蛋白表达水平明显高于B组(P＜0.05)及C组(P＜0.05).结论 在骨关节炎的发病过程中VEGF可能通过上调软骨细胞MMP-13的表达发挥重要作用.     

硫化氢对2型糖尿病骨质疏松大鼠白细胞介素-1、肿瘤坏死因子-α水平的影响

目的 观察硫化氢对2型糖尿病骨质疏松大鼠血液中白细胞介素(IL)-1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响.方法 选取8周龄的SD大鼠90只进行2型糖尿病大鼠造模,同时设立正常对照组(A组)25只,糖尿病组(B组)29只,硫化氢处理糖尿病组(C组)30只,在造模成功后的2、4、6周3个时间点对大鼠血液中IL-1、TNF-α进行检测.结果 A、B、C组3个时间点IL-1水平分别为:0.41 ±0.01、0.65±0.02、0.51 ±0.03;0.35±0.02、0.77±0.05、0.40±0.08;0.47±0.02、1.50±0.30、0.71 ±0.03;TNF-α结果均值分别为:0.20±0.02、0.47 ±0.03、0.36±0.02;0.11±0.02、0.46±0.05、0.22±0.03;0.26 ±0.02、0.93±0.05、0.43±0.05.相对于A组,B组IL-1、TNF-α水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).C组IL-1、TNF-α水平相对于B组的状况改善显著,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 硫化氢能降低糖尿病骨质疏松大鼠IL-1、TNF-α水平,调节炎性细胞因子的产生,抑制炎性反应.     

热应激反应对内毒素刺激中性粒细胞释放蛋白酶的影响

目的探讨热应激反应对内毒素刺激中性粒细胞释放蛋白酶的影响。方法将中性粒细胞分成四组:内毒素组,加入内毒素后37℃下孵育;热休克组,42℃下热休克40min,加入内毒素,37℃下再孵育;氯化镉组,加入热应激反应诱导剂氯化镉孵育1h,加入内毒素,37℃下再孵育;对照组,37℃下孵育。在热应激后各组取细胞测定热休克蛋白(HSP)70表达水平,然后相当于内毒素刺激30min后,分别加细胞松弛素B及甲硫三肽(fMLP),37℃5min后,取上清液测溶菌酶、葡萄糖醛酸苷酶、弹性蛋白酶释放量。结果热休克组和氯化镉组,中性粒细胞HSP70mRNA表达及HSP70水平均明显高于内毒素组和对照组。有内毒素刺激的各组溶菌酶、葡萄糖醛酸苷酶、弹性蛋白酶释放量百分比高于对照组;但热休克组和氯化镉组的三种蛋白酶释放量百分比均低于内毒素组。结论热应激反应抑制内毒素刺激中性粒细胞蛋白水解酶的释放可能是机体为减轻炎性损伤的一种保护性反应。     

还原谷胱甘肽对体外循环中性粒细胞激活的干预作用

目的研究还原谷胱甘肽对体外循环(CPB)患者中性粒细胞激活的干预作用. 方法采用数字法随机抽取年龄6～12岁先天性心脏病患者20例,配对分为两组,对照组10例;干预组10例,CPB预充液中加入还原谷胱甘肽30 mg/kg.两组分别于术前24小时、CPB开始20分钟、复温前、CPB结束前、术后4和24小时抽取静脉血,分离中性粒细胞,提取核蛋白,以电泳迁移率实验测定核转录因子κB(NF-κB)活性变化;免疫组织化学法检测细胞间粘附分子1(ICAM-1)的表达. 结果对照组CPB开始20分钟后,中性粒细胞NF-κB已被激活, 在复温前达到峰值;复温前ICAM-1表达增加,术后4小时达到峰值,均于术后24小时逐渐恢复至术前水平.干预组二者表达均较对照组低,差别具有显著性意义(P＜0.05). 结论 CPB过程中可激活中性粒细胞NF-κB,表达ICAM-1,在中性粒细胞介导的CPB创伤、炎性反应中起重要作用;还原谷胱甘肽可抑制中性粒细胞激活,减轻炎性反应.     

辛伐他汀防治人工关节无菌性松动的实验研究

目的通过观察辛伐他汀对钛颗粒刺激人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)而释放TNF-α及单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein1,MCP-1)的影响,分析该过程中p42/p44激酶磷酸化的情况,评价辛伐他汀在防治人工关节无菌性松动中的作用。方法取成年健康志愿者外周血45mL,分层梯度离心法分离获得PBMC,制成密度为5×108个/mL的细胞悬液,根据培养液不同分成5组。A组:加入3mL RPMI-1640培养液及1mL0.01%钛颗粒悬液;B、C、D、E组:同A组试剂外,分别加入2mL浓度为1×10-5、1×10-6、1×10-7mmol/L辛伐他汀和20μmol/L U0126。取培养24h后上清液检测TNF-α及MCP-1含量。取培养2h后PBMC,按A～E组分组方法分别用不同培养液预处理60min,钛颗粒分别刺激培养30、60min,采用Western blot检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK1/2)的表达水平。结果A、B、C、D、E组TNF-α含量分别为1.1155±0.2436、0.6936±0.3543、0.6957±0.3873、0.7164±0.4789、0.2635±0.1016;MCP-1分别为1.4210±0.1053、0.9151±0.4113、1.0035±0.4642、1.1020±0.3539、0.2713±0.1451。A组TNF-α及MCP-1含量明显高于其他组,差异有统计学意义(P0.05);E组与B、C、D组比较差异有统计学意义(P0.05),B组与C、D组比较差异有统计学意义(P0.05),C、D组间比较差异无统计学意义(P0.05)。Western blot检测显示钛颗粒刺激培养30、60min各组均见ERK1/2表达;刺激培养30min时A、B、C、D、E组ERK1/2含量较低;60min时A、B、C、D、E组ERK1/2含量分别为1.6121±0.0682、1.0781±0.0728、1.2687±0.2231、1.4397±0.1801、0.7320±0.1104,组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论ERK1/2通路是磨屑诱导巨噬细胞生成TNF-α和MCP-1的主要通路,辛伐他汀可抑制此通路,进而有效防止关节磨屑诱导的人工关节松动。     

不同表皮对成纤维细胞增殖及胶原含量的影响

目的 了解不同表皮对成纤维细胞（Fb）增殖的影响，并探寻其机制。方法 将10例增生期瘢痕患者自身的正常皮肤Fb＋正常表皮、瘢痕Fb＋瘢痕表皮进行非接触性共同培养，另培养不加表皮的瘢痕Fb，将这3个培养体系依次设为A、B、C组；另将10例成熟期瘢痕患者的皮肤同法培养，也建立3个培养体系依次为D、E、F组。检测各组Fb培养72h后的细胞数量、培养上清液中I型与Ⅲ型胶原含量及其比值的变化。结果 C组与A组、F组与D组比较，均表现为细胞数显著升高，培养上清液中I、Ⅲ型胶原含量上升，I型与Ⅲ型胶原比值下降（P〈0．05）；B组与C组比较，培养上清液中Ⅲ型胶原含量增高，I型与Ⅲ型胶原的比值下降（P〈0．05），细胞数和I型胶原含量两组相近；E组与F组比较，细胞数显著降低且上清液中I、Ⅲ型胶原含量下降（P〈0．05），两者比值无明显变化。B组与A组、E组与D组比较，细胞数及I、Ⅲ型胶原含量均显著增高（P〈0．05），I型与Ⅲ型胶原的比值均显著下降（A、B组为2．20±0．27、1．16±0．21，D、E组为2．18±0．14、1．93±0．26，P〈0．05）。结论 正常表皮可能通过产生某些活性物质调节Fb增殖及胶原合成，在防止瘢痕增生中发挥重要作用。     

红芪减方不同组分促周围神经再生作用的初探

目的 观察淫羊藿苷和按红芪减方由淫羊藿苷、红芪多糖、地龙水提液组成的混药对大鼠周围神经再生的促进作用.方法 制备浓度为0.005 g/mL的淫羊藿苷溶液和浓度约等于1 g(原药材)/mL的由淫羊藿苷、红芪多糖、地龙水提液组成的混药.取体重为(200±10)g的雄性SD大鼠20只,随机分为4组(n=5),分别为假手术组(A组)、模型组(B组)、淫羊藿苷组(C组)和混药组(D组).A组仪暴露左侧坐骨神经后缝合皮肤,不钳夹神经:B、C和D组以钳夹左侧坐骨神经的方式制备大鼠周围神经损伤模型:右侧不作任何处理.于次日开始每日定时灌胃给药,A组和B组给予生理盐水;C组给予淫羊藿苷溶液,D组给予混药,均为2 mL/d.给药后观察大鼠一般情况,给药后第21天检测神经功能指数、坐骨神经传导速度和有髓坐骨神经纤维形态及数量.结果 术后各组大鼠存活至实验完成,一般状况良好.第21天,A、B、C及D组大鼠体重分别为(366.94±14.0)、(370.14±16.3)、(373.3±19.6)及(374.0±11.4)g,各组间差异无统计学意义(P＞0.05).坐骨神经功能指数测定A组与D组、B组与C组间差异无统计学意义(P＞0.05),余各组间差异有统计学意义(P＜0.05);胫神经功能指数,A组与B、C、D组间差异有统计学意义(P＜0.05),B组与C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05);腓总神经功能指数,A组与C、D组间、B组与C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05).A、B、C和D组坐骨神经传导速度分别为(45.0±2.9)、(8.0±2.6)、(13.4±6.8)及(19.6±9.3)m/s,B组与C组间差异无统计学意义(P＞0.05),A组与B、C、D组间,B组与D组间差异有统计学意义(P＜0.05).锇酸染色观察B、C、D组的再生有髓坐骨神经纤维较A组细;B、C、D组再生有髓坐骨神经纤维数分别为A组的93.3%±35.6%、90.6%±37.1%和115.4%±40.6%,各组间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 淫羊藿苷和混药具有良好的安全性,混药促周围神经再生作用较淫羊藿苷显著,提示应整体研究红芪减方,以期发现有效部位或多个化合物以固定配比组成的有效成分群.     

TGF-β1抗体复合生物蛋白胶预防鞘管区术后粘连的实验研究

目的 研究TGF-β1抗体(TGF-β1,antibody,TGF-β1Ab)复合生物蛋白胶(fibdn glue,FG)预防鞘管区屈肌腱粘连的作用和对肌腱愈合的影响. 方法 72只成年雄性来亨鸡制备左足第3、4趾趾深屈肌腱横断模型.按鞘管区给药随机分为4组A组0.2 mL TGF-β1Ab、B组0.2 mL FG、C组0.2 mL TGF-β1.Ab及FG复合液、D组0.2 mL生理盐水,仅术中注入1次.术后1、3及8周,每组各取6只鸡第4趾行大体及组织学观察;3、8周第3趾行生物力学测定. 结果 术后1周各组肌腱粘连程度评分无明显差异(P＞0.05);3及8周C组与A、B及D组比较差异有统计学意义(P＜0.05).组织学观察,术后3、8周A、B及D组胶原纤维排列紊乱,C组胶原纤维排列整齐.术后3周,各组肌腱滑动距离比值分别为0.45 4±0.05、0.40±0.10、0.79±0.09、0.25±0.07;模拟主动屈曲度比值分别为0.61±0.02、0.67±0.03、0.91±0.03、0.53±0.04;屈曲功分别为(18.00±0.77)、(17.80±1.13)、(27.60±1.73)、(15.60±1.27)°/N.C组3项指标与A、B及D组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);各组最大抗断裂载荷分别为(14.2±1.9)、(15.2±2.2)、(16.0±2.2)、(14.7±2.7)N,各组间差异均无统计学意义(P＞0.05).术后8周,各组肌腱滑动距离比值分别为0.45±0.07、0.43±0.08、0.80±0.09、0.29±0.05;模拟主动屈曲度比值分别为0.61±0.02、0.63±0.03、0.92±0.03、0.53±0.03;屈曲功分别为(18.30±0.84)、(18.60±0.80)、(27.90±1.24)、(15.30±0.75)°/N.C组3项指标与A、B及D组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);各组最大抗断裂载荷分别为(51.9±3.0)、(51.4±1.4)、(53.3±1.3)、(52.3±2.2)N,各组间差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 TGF-β1Ab复合FG可以有效预防术后肌腱粘连,不影响肌腱的正常愈合.     

釉基质蛋白对人皮肤成纤维细胞黏附、增殖及Ⅰ型胶原前mRNA合成影响的体外研究

目的 观察釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对体外培养的人正常皮肤成纤维细胞黏附、增殖及Ⅰ型胶原前mRNA合成的影响.方法 取自愿捐赠包皮环切术后包皮组织,采用组织块法培养人皮肤成纤维细胞,取第3～6代细胞进行实验.以终浓度为50、100、150、200 μg/mL的EMPs工作液预铺培养板.①细胞黏附实验:取细胞以1 × 106个/mL置于预铺EMPs的96孔培养板,每孔0.2 mL,作为实验组(A、B、C、D组).培养1.5、3.0和4.5 h后MTT比色法测定黏附细胞量.②细胞增殖实验:取细胞以5 × 104个/mL置于预铺EMPs的培养板,每孔0.2 mL,作为实验组(A1、B1、C1、D1组).于第2、4、6、8天以MTT比色法测定增殖细胞量.③细胞Ⅰ型胶原前mRNA合成实验:取细胞以1×106个/mL置于预铺EMPs培养板,每孔2 mL,作为实验组(A2、B2、C2、D2组).于培养第5天RT-PCR法测定Ⅰ型胶原前mRNA合成的量.以上实验均以相同浓度细胞悬液加入未预铺EMPs的板孔作为对照组,每组均3个复孔.结果 ①细胞黏附实验中,各时间点B、C、D组与A组及对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);A组与对照组间及B、C、D组间比较差异均无统计学意义(P＞005).②细胞增殖实验中,第2天各组间差异均无统计学意义(P＞0.05):第4、6天,B1、C1、D1组吸光度(A)值分别为0.598±0.020、0.582±0017、0.574±0.021及0.639±0.016、0.641±0.020、0.635±0.021,均高于对照组的0.548±0.021及0.605±0.019(P＜0.05);A1组A值分别为0.545±0.023及0.603±0.016,与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).第8天,B1、C1组A值分别为0.629±0.012、0.631±0.014,高于对照组的0.606±0.031(P＜0.05),A1、D1组与对照组比较,差异无统计学意义(P＞005).③细胞Ⅰ型胶原前mRNA合成实验中,B2、C2、D2组Ⅰ型胶原前mRNA合成量高于对照组.结论 EMPs促进人正常皮肤成纤维细胞黏附、增殖及Ⅰ型胶原前mRNA合成,且EMPs在100μg/mL浓度时可发挥最大促进作用.     

An in situ evaluation of distal splenic arteriovenous fistula on pancreas function in an isolated pancreas segment

To determine the effects of a distal splenic arteriovenous fistula on endocrine function and pancreatic blood flow, 25 dogs underwent proximal pancreatectomy with the pancreatic tail left in situ and free intraperitoneal drainage of the pancreatic duct. Group A served as controls. In groups B through E, ligation of all nonpancreatic splenic vessels was accomplished. In group B, no further manipulations were performed. In group C, an arteriovenous fistula was created. Groups D and E were identical to groups B and C, respectively, except for the induction of bile pancreatitis. During intravenous glucose tolerance testing, the mean (+/- SEM) basal-to-peak insulin difference was 10.1 +/- 3.5 microU/mL in group A, 16.3 +/- 3.6 microU/mL in group B, 14.8 +/- 5.1 microU/mL in group C, 16.4 +/- 3.1 microU/mL in group D, and 13.0 +/- 4.4 microU/mL in group E. Corresponding mean (+/- SEM) glucose clearance values were as follows: -0.907% +/- 0.24%/min, -0.867% +/- 0.14%/min, -1.056% +/- 0.21%/min, -1.365% +/- 0.26%/min, and -0.887% +/- 0.20%/min. These values were not significantly different. Ligation of all splenic arterial and venous branches resulted in a 64.8% to 78.3% reduction in splenic artery blood flow that was restored to 60.9% to 84.9% of basal flow by an arteriovenous fistula (groups C and E). In conclusion, the creation of a splenic arteriovenous fistula was not beneficial in this model and other factors (rejection or technical) should be considered in vascular thrombosis following segmental pancreatic transplantation.     

1，25（OH）2VD3诱导小鼠胚胎干细胞向成骨细胞分化的研究

目的 探讨1,25(OH)2VD3在诱导小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)向成骨细胞分化过程中的重要作用.方法 取2 d龄昆明小白鼠颅盖骨进行成骨细胞分离培养;参照并改进zur Nieden等的方法制备拟胚体(embryoid bodies,Ebs).将Ebs根据培养液不同分为4组:A组:不含白血病抑制因子Ebs培养液;B组:Ebs培养液中添加50μg/mL维生素C、50 mmol/L β-磷酸甘油;C组:培养液同B组,另每孔接种5×104个第3代成骨细胞;D组与C组相同,另添加4 × 10-9 mol/L 1,25(OH)2VD3.检测ALP活性,实时定量PCR检测骨钙素mRNA的表达,茜素红S染色进行矿化骨结节计数.结果 Ebs贴壁后前5 d,各组ALP表达未发生明显变化,5 d后ALP表达逐渐增加,其中D组在第20天表达水平最高.光镜下可见轮廓清晰大小不等的红色结节.茜素红S染色测得A、B、C、D组骨结节数分别为(20±8)、(18±5)、(31±1)、(50±1)个:实时定量PCR测得A、B、C、D组骨钙素mRNA分别为10.18±1.17、20.29±1.03、18.84±4.07、32.15±5.23:C、D组与A、B组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),A、B组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),C、D组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在浓度为4 × 10-9 mol/L 1,25(OH)2VD3和维生素C、β-磷酸甘油共同作用下,有效促进了ESCs源性成骨细胞的产生.     

晚期糖基化终末产物对表皮角质形成细胞细胞周期的调控及信号通路的影响

目的 了解晚期糖基化终末产物(AGE)对表皮角质形成细胞细胞周期的影响及其可能的信号通路. 方法 体外制备AGE修饰的蛋白质(AGE-HSA,150 mg/L)作为干预手段.将原代培养的表皮角质形成细胞分为:正常组,采用无血清DK-SFM培养液培养;AGE干预组,采用含150mg/L AGE-HSA的DK-SFM培养液培养;对照组以10μmol/L UO126处理后同正常组条件培养;干预对照组以上述UO126处理后同AGE干预组条件培养.采用流式细胞仪检测细胞周期,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1、B1以及细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)和p44/42丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达. 结果 与正常组比较,AGE干预组S期和G2/M期细胞百分比均显著降低(P＜0.05);对照组、干预对照组G2/M期细胞百分比亦显著降低,分别为(9.7±1.1)%、(9.8±0.7)%(P＜0.05).与正常组比较,其余3组细胞周期蛋白D1表达下降,其中干预对照组该蛋白仅有微弱表达;正常组、AGE干预组CDK4、细胞周期蛋白BI、p44/42 MAPK蛋白表达相似,对照组、干预对照组的3种蛋白表达显著低于前2组. 结论 AGE通过下调细胞周期蛋白D1的表达阻碍表皮角质形成细胞的细胞周期进程.     

Epidural sufentanil for postoperative analgesia: dose-response in patients recovering from major gynecologic surgery.

To determine the lowest effective dose of epidural sufentanil given for analgesia, 41 patients undergoing elective abdominal gynecologic surgery during continuous epidural anesthesia (lidocaine 2%) were randomly assigned to one of four postoperative treatment groups. Patients received an epidural bolus of either 25 (group A), 40 (group B), 55 (group C), or 70 micrograms (group D) sufentanil in 10 mL of saline. They were evaluated for the next 8 h using a 10-cm visual analogue scale. Except for two individuals in group A, all patients achieved a visual analogue scale score of 1 cm or less during the study interval. The onset of analgesia was most rapid in the two higher dose groups (A vs C and D; P less than 0.05). Pairwise comparison between groups showed a significant difference in the time needed to achieve maximum pain relief between the lowest and highest treatment groups (A vs D; P less than 0.05). Duration of analgesia was also significantly longer in groups C and D than in group A (208.0 +/- 21.1 and 224.0 +/- 14.7 vs 140.0 +/- 10.7 min; P less than 0.05). There were no differences among groups with regard to mean respiratory rate, level of sedation, 24-h narcotic requirements, or incidence of nausea, vomiting, and pruritus (P = NS). A single patient in group D suffered profound respiratory depression within seconds of administration. We conclude that, in patients recovering from lower abdominal surgery, a single 40-55-micrograms epidural bolus of sufentanil provides 3-3.5 h of effective analgesia, and that larger doses are not warranted.     

Changes in the cooling rate and medium improve the vascular function in cryopreserved porcine femoral arteries

PURPOSE: The purpose of this study was to design an adequate technique with which to cryopreserve pig femoral arteries and to assess the influence of storage times in vascular function. METHODS: Fifty-two femoral arteries were distributed in seven groups. In group A (control), 10 arteries were studied after harvest; in groups B1 and B2, 19 arteries were suspended in RPMI 1640 plus fetal calf serum plus dimethylsulfoxide and were cryopreserved at 1 degrees C per minute or 0.3 degrees C per minute, respectively. In groups C1 to C4, 23 arteries were suspended in modified Krebs-Henseleit plus dimethylsulfoxide plus sucrose, cryopreserved at 0.7 degrees C per minute, and kept frozen for 1, 15, 60, or 180 days, respectively. After being thawed, arteries were examined for contraction and endothelial-dependent vasodilation (organ bath studies), antithrombotic properties of the endothelial layer(perfusion studies), and vessel structure (electron microscopy). RESULTS: Endothelial cells were present in both cryopreserved and control arteries. The control vessels showed a mean contraction to norepinephrine (10(-7) mol/L) of 13010 +/- 3181 mg. Arteries in groups B1 and B2 did not respond to norepinephrine. Contraction in groups C1 to C4 was as follows: C1, 5354 +/- 1222 mg; C2, 5187 +/- 2672 mg; C3, 6867 +/- 2292 mg; C4, 7000 +/- 2858 mg, which represent 50% of the control values (P <.001). Vasodilation was similar in control (99% +/- 3%) and cryopreserved arteries (C1, 90% +/- 13%; C2, 93% +/- 12%; C3, 89% +/- 15%; C4, 88% +/- 22%). Storage time did not influence vascular function. Platelet interaction was almost absent and similar in all groups. CONCLUSION: A modified cryopreservation technique preserves endothelial function independently of the storage time up to 6 months.     

HA复合rhBMP-2转染的BMSCs对羊胫骨延长骨愈合的影响

目的 评价HA复合rhBMP-2的腺病毒(adenovirus mediated rhBMP-2,Adv-rhBMP-2)转染的羊BMSCs对骨痂延长骨愈合的影响. 方法 成年山羊19只,雌雄不限,体重15～20 kg.于每只羊髂嵴上穿刺抽取骨髓10 mL,常规传代培养BMSCs.取第3代BMSCs,以感染复数200转染腺病毒.取0.25%胰蛋白酶消化转染后3 d的细胞1×108个,与HA充分混匀制备Adv-rhBMP-2/BMSCs/HA.建立山羊右侧胫骨延长模型,术后立即于截骨部位注射自体细胞复合物.按术后注入物质不同随机分成4组A组为Adv-rhBMP-2/BMSCs/HA组(n=6),B组为Adv-rhBMP-2/BMSCs组(n=5),C组为Adv-β-gal/BMSCs/HA组(n=4),D组为空白组(n=4).术后第7天开始行胫骨延长,速度1 mm/d,共延长4周.术后5、8、12周摄X线片观察骨痂生长情况,12周处死动物,取标本分别行骨密度检测、生物力学测定、组织学观察和骨形态计量学分析. 结果 X线片检查示,术后5、8周A、B组骨痂生成量明显多于C、D组,X线片定量评分A、B组明显高于C、D组,差异均有统计学意义(P＜0.05);12周各组均在骨延长部位形成连续骨痂.骨密度测定术后12周A、B、C、D组延长部位骨矿物质含量分别为(4.175 ±1.921)、(2.600 ±0.638)、(2.425±0.826)和(1.175 ±0.574)g,骨矿物质密度分别为(0.612 ±0.196)、(0.630 ±0.159)、(0.450 ±0.166)和(0.266 ±0.113)g/cm2,A、B组显著高于C、D组(P＜0.05).生物力学测定A、B、C、D组最大载荷分别为(490.20 ±155.08)、(350.59±80.48)、(221.95±68.79)和(150.65±92.29)N,弹性模量为(178.24±105.80)、(105.88 ±27.09)、(81.18±48.67)和(50.35±47.64)Mpa,各指标A组显著高于C、D组(P＜0.05).组织学观察见A组骨延长处大量新生骨组织,骨小梁多为纵行网状排列.骨形态计量分析示A、B、C、D组新骨体积分别为72.35%±5.68%、67.58%±7.42%、49.63%±4.87%和38.87%±2.35%,A组新生骨生成量明显比D组多(P＜0.05). 结论 HA复合rhBMP-2修饰的BMSCs制备的组织工程骨可促进羊胫骨延长骨愈合.