多中心完全随机、标准治疗平行对照评价京万红软膏治疗糖尿病足慢性创面的临床研究

目的：：通过多中心完全随机、标准治疗平行对照方法评价京万红软膏治疗糖尿病足慢性创面的疗效。方法：本研究共有11家医院参加,采用多中心完全随机、标准治疗平行对照、前瞻性临床研究设计。131例糖尿病足溃疡患者随机分为京万红软膏组67例和对照组64例,两组创面面积分别为(16.7±6.1)cm2和(15.9±8.3) cm2,创面形成时间(45.7±68.3)d和(52.5±79.6)d 。两组分别用京万红软膏或复方磺胺嘧啶锌凝胶涂于创面,观察疗程均为20周。结果：两组患者年龄、糖尿病病程、血常规、肝功能、肾功能等数据差异无统计学意义。京万红组于2、5、10、15周创面愈合速率明显优于复方磺胺嘧啶锌凝胶组,以第5周、10周最为明显(P<0.01)。京万红组创面达到完全上皮化平均时间为(46.5±15.6)d,复方磺胺嘧啶锌凝胶组为(67.9±17.9)d,差异显著(P<0.05)。结论：京万红软膏与复方磺胺嘧啶锌凝胶均有促进糖尿病足创面愈合的作用,京万红软膏作用更优。     

创面信息管理系统:一种标准化的创面信息采集、存储和处理方案

目的 利用新型创面信息管理系统,探讨客观、标准化和便利的创面信息管理方案.方法 选择创面信息采集终端,确定创面信息采集内容,制作相关软件,建立创面信息数据库和创面信息管理系统.在临床应用中评价其效能. 结果 由第3代手机和操作软件共同构成标准化创面信息采集系统,借助终端手机可以从数据库中获取相关信息,包括创面的文字描述、图像及治疗方案等.使用4个月,共录入就诊信息232例次,已自动生成38例患者的完整资料. 结论 该系统能够将创面信息采集标准化并传输储存,适用于医院特别是基层卫生机构,为未来大样本的流行病学调查提供了良好的数据平台.     

高糖环境中真皮成纤维细胞生物学行为的变化

目的 探讨糖尿病（DM）状态对真皮成纤维细胞（FB）生物学行为的影响。方法 通过DM大鼠模型，对皮肤的组织生物学特征及真皮FB的生物学行为进行检测。结果 （1）在DM状态下，皮肤出现一系列组织学改变（厚度明显变薄和炎性细胞浸润等）、皮肤糖含量与炎症介质水平及糖基化终末产物（AGEs）的表达异常升高、真皮FB的真皮增殖细胞核内抗原表达上升，但增殖周期显示处于S期细胞比例升高而G2／M期细胞却未相应增加。（2）在高糖和AGE-人血清白蛋白（HSA）干预下，真皮FB的生长抑制和凋亡细胞百分率显著高于正常对照（NC）组（P〈0．05或0．01），且生长抑制和凋亡率呈AGE-HSA的剂量依赖性。结论 在DM状态下，高糖环境和AGEs蓄积是导致FB功能异常的重要原因，可能也是造成DM患者皮肤“隐性损害”以及创面难愈的重要原因之一。     

外敷氨基胍霜剂对糖尿病大鼠皮肤组织的影响

目的 观察外敷氨基胍霜剂对糖尿病大鼠皮肤组织晚期糖基化终末产物(AGE)形成、KC细胞增殖及氧化应激的影响.方法 将硬脂酸、液状石蜡、凡士林、羊毛脂、肉豆蔻酸异丙酯、甘油、50 g/L尼泊金醇、盐酸氨基胍等试剂按一定比例混合制成氨基胍霜剂,以不含有氨基胍的霜剂为基质.取健康大鼠背部皮肤,分别用5、10 g/L氨基胍霜剂和5 g/L氨基胍+10g/L氮酮霜剂处理,于用药后2、4、7、10、12、24 h测定药物透皮效果.将30只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组6只、糖尿病组8只、氨基胍治疗组8只、基质治疗组8只.后3组大鼠腹腔注射链脲佐菌素65 mg/kg,诱导糖尿病模型;对照组大鼠注射0.05 mmol/L柠檬酸缓冲液.注射1周后,正常对照组与糖尿病组大鼠不行任何治疗,氨基胍治疗组与基质治疗组大鼠背部分别连续外用10 g/L氨基胍霜剂与基质治疗4周.取各组皮肤组织,胶原提取液荧光强度检测法测定AGE含量,流式细胞仪分析表皮KC周期,检测氧化应激相关指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、总抗氧化能力、髓过氧化物酶(MPO)含量.对实验数据行t检验.结果 10 g/L氨基胍霜剂透皮效果优于5g/L氨基胍和5 g/L氨基胍+10 g/L氮酮的霜剂.1只基质治疗组大鼠未诱导成功.建模后4周,糖尿病组与氨基胍治疗组大鼠分别死亡4只和1只.糖尿病组大鼠皮肤组织AGE含量为每毫克羟脯氨酸(OHP)中(36.8±2.6)U,明显高于正常对照组的每毫克OHP中(24.6±2.7)U(t=7.2,P＜0.01);氨基胍治疗组AGE含量为每毫克OHP中(28.6±3.7)U,明显低于糖尿病组(t=-3.9,P＜0.05);基质治疗组AGE含量[每毫克OHP中(32.2±5.2)U]与糖尿病组相近(t=1.6,P＞0.05).糖尿病组大鼠S期KC比例为(5.3±0.6)%,低于正常对照组的(7.6±0.9)%(t=4.50,P＜0.01);氨基胍治疗组大鼠S期和G2/M期KC比例均明显高于糖尿病组(t值分别为6.80、3.17,P值均小于0.01);基质治疗组大鼠S期KC比例[(9.2±1.5)%]显著高于糖尿病组(t=4.90,P＜0.01).糖尿病组大鼠皮肤组织氧化应激指标含量均高于正常对照组,其中SOD和MPO差异有统计学意义(t值分别为4.4、3.7,P值均小于0.05);氨基胍治疗组各氧化应激指标含量均较糖尿病组降低,其中SOD含量显著低于糖尿病组(t=-1.4,P＜0.05);基质治疗组MDA、MPO含量显著低于糖尿病组(t值分别为2.6、2.9,P值均小于0.05).结论 外用氨基胍霜剂可以在一定程度上阻碍糖尿病大鼠皮肤组织中AGE的形成,改善表皮KC细胞增殖能力,适当降低皮肤组织氧化应激状态;单用霜剂基质也可适当降低皮肤组织氧化应激状态.

Abstract：

Objective To investigate the effects of aminoguanidine cream on the proliferation of keratinocytes (KC), content of advanced glycosylation end products (AGE) and oxidative stress in skin tissue of rats with diabetes. Methods Stearic acid, liquid paraffin, vaseline, lanolin, isopropyl myristate fat,glycerol, 50 g/L alcohol paraben, aminoguanidine hydrochloride etc. were mixed in certain proportion to make aminoguanidine cream, and cream without aminoguanidine was used as matrix. The dorsal skin of normal rats were harvested and treated by aminoguanidine cream with dose of 5, 10 g/L, or 5 g/L together with 10 g/L azone. The transdermal effect was respectively measured at post treatment hour 2, 4, 7, 10, 12,24. Thirty SD rats were divided into normal control(NC, n = 6) , diabetes(D, n = 8) , aminoguanidine cream-interfered(AI, n = 8), matrix cream-interfered groups(MI, n = 8) according to the random number table. Diabetes was reproduced by intraperitoneal injection of STZ (65 mg/kg) in rats of D, AI, and MI groups, and rats in NC group were injected with 0. 05 mmol/L citrate buffer as control. One week later, dorsal skin of rats in AI and MI groups were respectively treated with 10 g/L aminoguanidine cream and matrix cream by external use for 4 weeks. AGE content was determined with fluorescence detection from skin collagen extract. KC cell cycle was detected by flow cytometry. Skin tissue specimens were obtained for determination of levels of superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA), myeloperoxidase (MPO), and total antioxidant capacity. Data were processed with t test. Results Transdermal effect of aminoguanidine cream with dose of 10 g/L was better than that with 5 g/L or 5 g/L + 10 g/L azone cream. One rat was not induced successfully in MI group. Four weeks after model reproduction, 4 rats died in D group and 1 rat died in AI group. The AGE content in D group was obviously higher than that in NC group [(36.8 ± 2.6),(24. 6 ±2.7) U per milligram hydroxyproline, respectively, t = 7.2, P ＜0. 01], and that in AI group [(28.6 ±3.7) U per milligram hydroxyproline] was also lower as compared with that in D group(t = -3.9,P ＜ 0.05). There was no significant difference in AGE content between MI [( 32.2 ± 5.2) U per milligram hydroxyproline] and D groups(t = 1.6, P ＞ 0. 05). The percentage of KC in S phase was obviously lower in D group than in NC group [(5.3 ±0.6)%, (7.6±0.9)%, respectively, t =4.50, P ＜0. 01], while that in MI group [(9. 2 ± 1.5) %] was higher as compared with that in D group(t = 4.90, P ＜ 0. 01). It was more higher in AI group than in D group on KC percentage in S and G2/M phase (with t value respectively 6.80, 3.17, P values all below 0. 01). The oxidative stress indexes of skin tissue in D group were all higher than those in NC group, in which levels of MPO and SOD showed statistical difference(with t value respectively 4.4, 3.7, P values all below 0. 05). The oxidative stress indexes were all lower in AI group than in D group, especially in SOD level(t = -1.4, P ＜0. 05). Levels of MAD, MPO in MI group were significantly lower than those in D group(with t value respectively 2.6, 2.9, P values all below 0. 05).Conclusions Aminoguanidine cream can promote KC proliferation and appropriately reduce oxidative stress through inhibiting AGE formation to a certain extent in skin tissue of rats with diabetes. Signal use of matrix cream can also reduce oxidative stress in skin tissue of rats with diabetes.     

内皮抑素局部注射对兔耳增生性瘢痕的影响

目的探讨内皮抑素局部注射对兔耳增生性瘢痕的影响及其机制。方法建立兔耳增生性瘢痕模型,于建模后第4周,右侧兔耳瘢痕组织内注射内皮抑素（实验组,n=10）,左侧兔耳瘢痕组织内注射生理盐水（对照组,n=10）,每周注射1次,连续注射3次;于建模后第7周,分别采集实验组和对照组兔耳瘢痕组织,苏木精-伊红染色观察瘢痕组织形态学改变,免疫组织化学法检测微血管标志物CD34表达,TUNEL法检测成纤维细胞凋亡。体外培养脐静脉内皮细胞,分别将不同浓度的内皮抑素加入Martrigel培养体系中,观察内皮细胞在Martrigel上形成微血管管腔数目的变化。结果与对照组比较,实验组增生性瘢痕缩小明显,紫红色逐渐减退,瘢痕组织内成纤维细胞数量减少,胶原疏松。实验组兔耳瘢痕组织内CD34阳性细胞百分比显著少于对照组,分别为（2.21±0.39）%和（6.11±1.32）%（P〈0.05）,凋亡细胞百分比明显高于对照组,分别为（9.06±1.54）%和（5.21±1.11）%（P〈0.05）。体外实验观察发现：在未加入内皮抑素的Martrigel培养体系中,内皮细胞形成较多微血管分支,随着内皮抑素质量浓度的提高,微血管形成管腔的数目逐渐减少。结论内皮抑素局部注射具有抑制增生性瘢痕形成并促进其成熟消退的作用,其机制可能与抑制微血管形成有关。     

糖基化终末产物对糖尿病大鼠烧伤创面愈合的影响

目的 了解糖基化终末产物(AGE)蓄积对糖尿病大鼠烧伤创面愈合的影响. 方法 将75只SD大鼠按完全随机化方法 分为对照组、糖尿病组及氨基胍干预组,每组25只.将大鼠造成深Ⅱ度烫伤(以下称烧伤)后,后2组制作成糖尿病模型,氨基胍干预组给予管饲氨基胍100 mg·kg~(-1)·d~(-1).于伤后0(伤后当天)、3、7、14、21 d处死大鼠.描取创面形状,并取全层皮肤组织待测.同时取大鼠背部表皮行KC培养及鉴定.观察各组创面愈合率及皮肤组织糖含量,创面组织形态学变化,皮肤组织中AGE分布.观察不同浓度AGE对KC增殖,凋亡的影响,以仅加表皮细胞培养液的KC为对照组. 结果 伤后7、14、21 d糖尿病组创面愈合率显著低于对照组(P<0.01),而氨基胍干预组却明显高于前2组(P<0.01).糖尿病组皮肤组织含糖量为(2.62±0.19)mmol/g,氨基胍干预组为(2.58±0.07)mmol/g,均高于对照组(1.04±0.09)mmol/g(P<0.01).对照组大鼠创面炎性细胞浸润强烈而局限,坏死组织形成、脱落及时,创面愈合无明显延迟;糖尿病组大鼠炎性细胞浸润缓慢、弥散而持久,坏死组织形成、脱落较迟,创面愈合明显延迟;氨基胍干预组大鼠炎性细胞浸润及时、强烈,坏死组织形成、脱落以及创面愈合时间较糖尿病组早.对照组中有少量散在的AGE沉积,糖尿病组AGE蓄积显著增加,而氨基胍干预组AGE含量显著降低.AGE作用48 h后,KC的增殖显著降低,呈现浓度依赖性,各剂量AGE干预组的吸光度值均低于对照组(P<0.01).100μg/mLAGE干预组KC早期凋亡连接素V阳性细胞比例为(15.1±2.3)%,明显高于对照组[(11.2±1.2)%,P<0.05];终未期凋亡双阳性细胞比例为(14.3±3.5)%,与对照组(15.2±2.4)%比较,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 高血糖可能是通过AGE蓄积,抑制KC等修复细胞增殖导致创面难愈;减少AGE蓄积,可改善糖尿病创面愈合延迟现象.     

真皮组织微观化重建的探索性研究

目的 从微观角度探讨真皮基质三维结构对Fb生物学行为的影响.方法 借鉴平面几何、三角函数分析真皮组织三维结构,按照真皮组织由黏附成分和非黏附成分组成的原理,通过计算机辅助设计不同参数具有细胞黏着作用的点状结构阵列;运用微图案印刷和分子自组装法,建立4种(8μm×3 μm、间距6 μm,16 μm×3μm、间距6 μm,16 μm×5μm、间距8 μm,20 μm×3 μm、间距2 μm)具有细胞黏附点的桥墩样结构阵列细胞培养基质(MPGCC)培养人Fb,以无MPGCC培养的Fb为对照.利用免疫组织化学、荧光免疫组织化学、噻唑蓝法、羟脯氨酸含量测定法,检测培养Fb中骨架蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达、细胞活力和细胞分泌情况.结果 数学推导结果提示,真皮组织三维结构可用MPGCC进行模拟.用上述4种规格MPGCC培养的Fb其α-SMA表达百分率依次为(49±3)%、(61±3)%、(47±4)%、(51±3)%,与对照组(12±3)%比较,差异有统计学意义(P<0.05);Fb活力依次为0.12±0.03、0.13±0.04、0.14±0.03、0.19±0.03,与对照组0.35±0.04比较显著下降(P<0.05);羟脯氨酸含量依次为(0.95±0.04)、(0.87±0.03)、(0.81±0.03)、(0.77±0.03)μg/mg,与对照组(0.53±0.03)μg/mg比较显著上升(P<0.05).通过调整桥墩角度和桥墩间阵列参数,4组阵列相互对比,α-SMA表达、细胞活力和羟脯氨酸含量差异均有统计学意义(P<0.05).结论 MPGCC可能是真皮模板的基本功能单位或称为真皮模板单元,不同的真皮组织三维环境可产生不同的模板效应和创面愈合结局.     

黏着斑微操控在创伤和组织修复中的作用

目的 探讨真皮模板单元-黏着斑微操控制对皮肤成纤维细胞生物学行为影响. 方法 采用微图案方法制作微凸阵列,运用分子自组装在微凸上自组装结构蛋白分子,在自制细胞培养仪模拟皮肤生物力学进行细胞牵拉2周,并行形态学观察和细胞免疫组织化学分析. 结果 细胞牵拉2周后,细胞形态多样、丰满,分泌增加,呈现顺应性.细胞免疫组织化学分析发现,整合素β1、α5表达较对照显著减少,张力蛋白tensin表达显著降低. 结论 通过黏着斑微操控,增生性瘢痕成纤维细胞在形态学及生物学行为上发生改变.     

应用真皮模板改善创面愈合质量的研究

目的:动态观察真皮模板应用后对创面微血管形成的影响,为真皮模板应用改善创面愈合质量提供依据。方法:选取2001/2002Ш度小面积烧伤患者,采用真皮模板(异体无细胞真皮基质)加自体薄皮复合移植的方法,修复Ш度烧伤患者切痂后创面,并以单纯自体薄皮移植作为对照,分别于术后1,2,3,4,6周取材,实验组与对照组各15例次,采用苏木精-伊红染色观察、免疫组化技术检测标本中CD34的表达。结果:在术后1～6周,随着创面的修复,真皮模板组CD34表达逐渐降低,而薄皮组CD34持续高表达,且有逐渐升高趋势,其结果与HE染色所见一致。两组比较具有显著性差异。结论:真皮模板与自体薄皮复合移植后,可以抑制创面毛细血管超常增生,从而减少瘢痕形成,改善创面愈合质量。     

精氨酸对大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合影响的实验研究

精氨酸是一种条件必需氨基酸 ,在创伤时机体对精氨酸的需要量增加 ,而精氨酸合成不能相应增加 ,此时需要补充外源性精氨酸才能满足机体对精氨酸的需要。ＢａｒｂｕｌＡ等发现在人体内补充精氨酸可加速切口伤创面愈合。本实验的目的是为了探讨精氨酸是否可加速烧伤大鼠创面愈合及其量效关系 ,为临床合理应用精氨酸提供实验依据。1　材料与方法1.1　研究对象　清洁级Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ大鼠 ,体重 2 0 0～ 2 50 ｇ ,雌雄不拘 ,上海必凯 -西普尔实验动物有限公司供应 ,数量 36只。1.2　大鼠深Ⅱ度烫伤模型制作〔1〕。1.3　实验分组　…