创伤后肝细胞凋亡与坏死的检测及其意义

目的：探讨严重创伤后肝细胞凋亡及坏死在急性肝功能障碍发病机制中的作用。方法：复制多发性骨折合并休克的大鼠创伤模型，采用Annexin-V-Flous，碘化丙锭（propidium iodid,PI)双标法经流式细胞仪检测创伤后各时间点肝细胞凋亡与坏死的数量变化，结合光镜，电镜和电泳观察细胞凋亡与坏死，并与肝功能变化相比较。结果：创伤后早期肝细胞即发生凋亡和坏死，坏死肝细胞的数量进行性升高，与肝功能变化显著呈正相关，凋亡肝细胞在创伤后3h达高峰，部分凋亡肝细胞发生继发性坏死，其数量与肝功能变化显著正相关。结论：肝细胞坏死与凋亡是严重创伤后肝功能损害的重要原因，坏死肝细胞是肝功能损害的直接因素，凋亡肝细胞通过发生继发性坏死加重肝功能损害。     

创伤后肺内炎性细胞凋亡与继发性坏死的观察及意义

目的 探讨严重创伤后肺内炎性细胞凋亡与继发性坏死在急性肺损伤发病机制中的地位和作用。方法 复制大鼠多发骨折合并休克模型,采用Annexin-V和PI双标法经流式细胞仪检测创伤后肺泡灌洗液中凋亡与坏死炎性细胞的数量变化,测定细胞分类计数及肺通透指数并作比较。结果伤后动物肺泡灌洗液中巨噬细胞数量减少,而白细胞数量增加。伤后凋亡炎性细胞数量增加,于伤后3h达到高峰。部分凋亡炎性细胞发生继发性坏死,其数量进行性升高并与肺通透指数变化显著相关（r=0.90,P<0.01）。结论 严重创伤后肺泡内炎性细胞发生凋亡,可能因为继发性坏死致炎性内容物外泄而引发急性肺损伤。     

105例创伤后肝功能损害的影响因素分析

目的 探讨创伤后肝功能损害的原因及影响因素.方法 总结105例发生创伤后肝功能损害患者的临床资料及丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)等肝功能指标,分析创伤伤情以及饮酒或脂肪肝对肝功能的影响.结果 创伤后肝损害的发生率为14.6%.肝功能各项指标变化以ALT[(88.7±77.0)U/L]、AST[(80.7±84.1)U/L]升高为主.肝功能指标AST、乳酸脱氢酶(LDH)、白蛋白(ALB)、凝血酶原时间(PT)的异常变化与全身炎症反应综合征、感染、休克、开放伤、多发伤及复合伤、血管神经损伤以及失血等因素显著相关(P<0.01).饮酒史患者的.沣谷氨酰转肽酶(GGT)明显高于无饮酒史患者(P<0.001);脂肪肝患者的LDH明显高于无脂肪肝患者(P<0.01).结论 创伤后肝功能损害较常见,早期即可出现;肝功能指标一般呈轻中度升高;创伤后出现全身炎症反应综合征的患者,其肝功能损害更明显,与伤情严重程度密切相关.既往有脂肪肝史患者创伤后LDH明显升高.GGT升高与饮酒有关,但与伤情程度无关.     

pHGF对TNF-α体外介导小鼠肝细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨促肝细胞生长因子（pHGF）对肿瘤坏死因子－α（TNF－α）介导小鼠原代肝细胞凋亡和坏死的抑制作用。方法：采用原位灌洗法分离小鼠肝细胞，体外培养后分别加入TNF-α、GalN、TNF－α＋GalN＋pHGF5h、10h、20h和30h后,观察小鼠肝细胞的形态及生化改变，测定培养上清液ALT和AST。结果：TNF－α单独作用于培养肝细胞，无肝细胞凋亡和坏死，经GalN致敏后，TNF－α可诱导大量肝细胞凋亡（10h ),随后（20h后）出现肝细胞坏死，其程度随培养时间延长和药物剂量的增加而明显。单独使用GalN也可造成肝细胞凋亡和坏死，但程度较TNF－α＋GalN合用轻，加用pHGF后可使肝细胞凋亡坏死明显减少，其效应在一定药物剂量范围内成正比。结论：pHGF对TNF－α诱导肝细胞凋亡和坏死具有抑制作用。     

缺血性急性肾损伤大鼠肝细胞的微细结构变化

目的观察缺血性急性肾损伤大鼠肝细胞的结构变化。方法健康SD大鼠被分为假手术组(Sham)、缺血性急性肾损伤组(IAKI)和双肾切除组(BNx)。成功制造IAKI模型后24 h经颈总动脉取血进行肾功能和肝功能检测;采用光学和电子显微镜技术观察缺血性急性肾损伤大鼠的肝脏结构变化。结果缺血性急性肾损伤的动物发生了急性肝损伤,肝功能受损。肝脏出现了大小不等坏死病灶。肝细胞损伤的形态学为苍白样坏死、空泡样坏死、固缩性死亡以及细胞凋亡,其中以细胞坏死多见。结论缺血性急性肾损伤可引起肝细胞坏死和凋亡,但以细胞坏死为主。     

全脑缺血再灌注后神经元凋亡的时相和分布特征

目的探讨大鼠全脑缺血再灌注后神经元凋亡的时相和分布特征,为神经元损伤的早期干预和继发性脑损害的防治提供实验依据.方法建立大鼠全脑缺血模型,采用TTC染色、原位细胞凋亡检测(原位末端标记法,TUNEL)及AO/EB荧光比色法观察脑缺血再灌后海马、皮层凋亡发生的数量和分布,用荧光指示剂Fura-2 AM标记,检测脑海马细胞内游离钙的浓度.结果 TUNEL显示再灌注3 h海马部位即出现散在凋亡细胞,并向皮层区域扩展,24～48 h达高峰;坏死细胞迟于凋亡出现,弥散分布于凋亡细胞周围,再灌注48 h后坏死细胞增多,72 h最多.AO/EB法显示海马、额叶和顶叶凋亡细胞总数分布在再灌注后24 h和72 h达高峰,并显著高于对照组(P＜0.05).TTC染色证实全脑缺血再灌注后不出现梗死灶,而是在海马及大脑皮层有弥散性坏死.胞内[Ca2 ]i各时间点与对照相比匀显著升高(P＜0.01).结论全脑缺血再灌后受累神经元经历了由凋亡到死亡的过程,对缺血敏感的海马神经元首先受损,并向顶叶和额叶皮层扩展,细胞质内[Ca2 ]i增加是主要原因.利用凋亡时间窗进行早期干预可能有益于保护和挽救凋亡前期神经元,减小继发性损害的严重程度.     

脓毒症模型大鼠循环内皮细胞与肝功能状态间关系的相关性研究

目的 探讨大鼠脓毒症中循环内皮细胞(circulating endothelial cells, CEC)数量的变化及其与肝功能改变的关系.方法 利用盲肠结扎穿孔模型(CLP)在大鼠制作脓毒症模型.观察CEC数量、白细胞数量的变化、以及肝组织病理组织学、血天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)的改变.并探讨CEC数量与AST和ALT的相关关系.结果 CLP 6 h后动物肝细胞明显肿胀,24 h组肝细胞大量空泡变性,乃至坏死.CLP 3 h组白细胞和CEC数量比对照组明显升高.而CLP 6 h后AST、ALT才出现明显增高.CEC数量与AST和ALT水平呈负相关,Pearson相关系数(r)分别为-0.774 和-0.734(P＜0.01).用非线性回归分析CEC数量与AST和ALT的关系,发现CEC数量对ALT的最佳拟合曲线为幂函数(P＜0.05),其方程为ALT=33.052 681 24.097 309 CEC -1.CEC数量对AST的最佳拟合曲线为对数函数,但无统计学意义(P=0.607).结论 在大鼠脓毒症模型中,比起常规肝功能指标,CEC数量更能敏感反映肝脏病理进程.当肝功能指标高于正常阈值时肝细胞已经出现了显著损伤.因此,早期监测CEC数量结合已有的肝功能指标有助于早期提示肝功能损害,及时针对治疗.     

泰特治疗肝功异常43例临床观察

肝功能异常病因复杂,可以是原发肝细胞损害,也可以是继发性肝细胞损害。本文的目的是评价泰特在治疗肝功能异常中的价值。     

梗阻性黄疸形成中肿瘤坏死因子与肝细胞凋亡关系的实验研究

目的 :探讨梗阻性黄疸形成中肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)与肝细胞凋亡的变化。方法 :72只Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组和胆总管结扎手术组 ,以结扎胆总管 (ligatingcommonbileduct ,LCD)的Wistar大鼠为模型 ,采用放射免疫法 ,测定血清中TNF -α含量 ;TUNEL法检测大鼠肝细胞凋亡状态。结果 :LCD术后 3、7、14dTNF -α含量明显高于正常组和假手术组 ,并于LCD术后 7～ 14d达到高峰。结论 :Wistar大鼠在梗阻性黄疸形成中TNF -α明显增高诱导肝细胞凋亡 ,对肝功能损害起着一定作用。     

烫伤豚鼠痂下水肿液诱导肝细胞凋亡和坏死

目的 探讨烧伤痂下水肿液(STF)在诱导肝细胞凋亡和坏死中所起的作用。方法 建立Ⅲ°30%体表总面积(TBSA)烫伤的豚鼠模型并提取其STF,将STF与正常肝细胞共同孵育12、24h后检测细胞凋亡和坏死百分率,同时测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和谷丙转氨酶(ALT)活性。结果STF刺激肝细胞12h即可诱导肝细胞凋亡与坏死,随着刺激时间延长,肝细胞凋亡及坏死率增加,且肝细胞培养液中 LDH和ALT的活性进一步增强。结论烧伤后STF可诱导肝细胞凋亡与坏死,在烧伤早期脏器损害中可能起重要作用。     

Deleterious effects of postburn subeschar tissue fluid on cultured cells

Multiple organ dysfunction and disturbance ofhemodynamics may develop or aggravate in seriously miedbum patients when the edema fluid is reabsorbed into thesystendc ciedation, which is one of the haportant causesOf death. In recent yeaxs, it was found that early eXtensive excision of eschar and bang has ~fested good effectS in reducing or pmhng the occ~nce Of systendcinflalnlnatory resPOnse syndIDme (SIRS), infechon andviscera olgan injury['j, but the mechedsm is shll nuclear. By the remov…     

AFB_1所致实验性大鼠急性肝损伤的组织学、组织化学及超微病理学研究

应用组织学、酶组织化学和电镜技术,系统观察了黄曲霉毒素B_1(AFB_1)诱发的大鼠肝损伤。发现以汇管区周围肝细胞变性坏死为主的组织学改变、SDH和ATPase活性明显降低、ACPase活性增高等酶组化反应和肝窦扩张、窦内充填坏死肝细胞碎屑和凋落小体以及肝细胞核仁变性、核仁帽形成、核仁溶解、内浆网扩张、脂肪变性、大量自噬小体出现等超微结构损伤。笔者认为,AFB_1对肝细胞膜以及膜性结构的直接毒性作用是导致肝细胞急性变性坏死的主要因素。     

大鼠肺缺血再灌注损伤中肺泡细胞凋亡的动态观察

目的研究大鼠肺缺血再灌注损伤(IR)中肺泡细胞凋亡的动态过程及其与肺损伤的相关性。方法采用大鼠单肺原位热缺血再灌注模型。于缺血再灌注0min、30min、1h、2h,6h及12h采取肺组织及左房血标本,测定血氧分压、肺组织湿／干重比,并作光镜和透射电镜观察组织、细胞形态及亚显微结构,确定凋亡发生。TUNEL法测定肺组织中凋亡指数。台盼蓝活体染色评价细胞死亡程度,并结合同组凋亡水平间接推测细胞坏死水平。结果肺IR后,肺组织透射电镜观察可见肺泡Ⅱ型上皮细胞增多,并且不同程度出现形态学改变,细胞体积缩小变圆,细胞核呈多形性,核被膜外折或内陷,核固缩并边集在核膜下呈月牙状或腰带状,胞浆浓缩,胞浆内嗜锇性板层体减少、排空增多,细胞膜上微绒毛减少或消失,提示细胞凋亡发生,肺泡Ⅰ型上皮细胞则少有上述改变。单独缺血30min,肺泡细胞凋亡指数无增高。肺再灌注后0．5h起,肺泡细胞凋亡指数显著增高,再灌注2h时达到高峰。与细胞凋亡指数相比,坏死指数与肺功能损害的相关性更显著。结论肺IR后发生凋亡的主要是肺泡Ⅱ型上皮细胞。肺泡细胞凋亡指数于再灌注2h达到高峰。肺泡细胞坏死指数与肺功能损害的相关性较凋亡指数更显著。     

大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡与坏死的研究

用凝胶电泳及原位末端标记研究大鼠脑缺血再灌流后神经元的凋亡与坏死。采用可逆性大脑中动脉阻塞２ 小时,再灌流０．５～４８ 小时,造成脑缺血再灌流模型（３０ 只）,用ＨＥ、原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）和琼脂糖凝胶电泳观察神经元的改变。结果：缺血损伤区位于视前区、纹状体和皮质,再灌流０．５ 小时,视前区的缺血损伤区有较多的凋亡细胞,而皮质、纹状体仅有散在的凋亡细胞。再灌流３～６小时,凋亡细胞数量增多,并可见坏死细胞,１２小时达高峰,持续到２４ 小时,并可见凋亡细胞各种形态,凋亡细胞主要位于缺血损伤区内界,坏死细胞也增多。４８小时完全坏死区周围有成群的凋亡细胞。电泳显示涂片状背景上有明显的ＤＮＡ带。细胞凋亡参与缺血再灌流所致的神经元损伤,凋亡细胞与坏死细胞并存,细胞凋亡使梗塞区面积扩大。     

Apoptosis and necrosis of neuron after focal ischemia in brain of rats]

This article reports the apoptosis and necrosis of neurons following ischemia-reperfusion in the brain of rats. The focal ischemia model was established by occluding the middle cerebral artery for 2 h and reperfusing for 0.5-48 h. The neuronal changes were investigated by HE staining, TUNEL and agarose gel-electrophoresis. The foci of ischemia were in the preoptic area, striatum and cortex. At 0.5 h of reperfusion, there were quite a few apoptotic neurons in the preoptic ischemic focus, but only a few scattered apoptotic cells were seen in the striatum and cortex. During 3-6 h of reperfusion, the number of apoptotic cells increased and the necrotic cells appeared. The number of apoptotic cells reached a peak at 12-24 h and the in morphology varied, and they were mainly located in the inner boundary of infarct. At 48 h, the apoptotic cells decreased; and the necrotic cells increased. Agarose gel-electrophoresis showed the dense smear and ladder pattern of DNA fragments, the apoptosis and necrosis of neurons coexisted, and apoptosis contributed to the enlargement of the ischemic infarct.     

丙型肝炎肝细胞凋亡的电镜和免疫组化研究

目的探讨丙型肝炎肝细胞凋亡与Ｆａｓ抗原表达及病理损伤的关系。方法应用电镜和免疫组化方法检测了２３例慢性丙型肝炎患者的肝组织。结果凋亡肝细胞呈多种形态学改变;Ｆａｓ抗原中,强度表达及组织炎症活动度积分高者,细胞凋亡指数增高。结论肝细胞凋亡是一系列超微病理改变过程,Ｆａｓ系统在介导细胞凋亡中起重要作用,细胞凋亡是慢性丙型肝炎肝组织的重要病理变化。     

TNF-α、Caspase-3在大鼠酒精性肝病细胞凋亡中的表达

目的：观察大鼠酒精性肝病组织病理形态学改变,探讨细胞凋亡与TNF-α、Caspase-3的表达及意义。方法：采用灌胃法制备大鼠酒精性肝病（ALD）模型,模型组用40％酒精8g／（kg·d）分2次灌胃,共12周,对照组灌等量的生理盐水,实验第8、12周末分批处死动物。用HE染色观察肝脏病理学改变,用TUNEL法检测肝细胞的凋亡,用免疫组化法检测TNF-α、Caspase-3的表达。结果：模型组肝细胞凋亡明显增多,主要分布在中央静脉周围,点状、灶状坏死区;TNF—α、Caspase-3主要分布在中央静脉及肝细胞坏死灶周围细胞的胞质中,模型组TNF—α、Caspase-3表达强度明显高于对照组（P〈0．05）,且TNF-α的表达与Caspase-3的表达呈正相关（r=0．648,P〈0．01）。结论：大鼠酒精性肝病的发生、发展过程中TNF-α、Caspase-3参与肝细胞凋亡;TNF-α通过其受体介导Caspase-3活化参与酒精性肝病的肝细胞凋亡。     

大鼠酒精性肝病细胞凋亡中Caspase-3、NF-κB的表达

目的:观察大鼠酒精性肝病组织病理形态学改变,探讨细胞凋亡与Caspase-3、NF-κB的表达及意义。方法:采用灌胃法制备大鼠酒精性肝病(ALD)模型,模型组用40%酒精8g/(kg·d)分两次灌胃共12周,对照组灌等量的生理盐水,实验第8、12周末分批处死动物。用HE染色和电镜分别观察肝组织病理变化和肝细胞超微结构变化,用TUNEL法检测肝细胞的凋亡,用免疫组化法检测Caspase-3、NF-κB的表达。结果:模型组肝细胞凋亡明显增多,主要分布在中央静脉周围,点状、灶状坏死区;Caspase-3、NF-κB主要分布在中央静脉及肝细胞坏死灶周围细胞的胞质中,模型组Caspase-3、NF-κB表达强度明显高于对照组,且NF-κB的表达与Caspase-3的表达呈正相关。结论:大鼠酒精性肝病的发生、发展过程中Caspase-3、NF-κB参与肝细胞凋亡。