TNF-α对3T3-L1脂肪细胞PPAR-γ2 mRNA表达及脂联素分泌的影响

用肿瘤坏死因子α（TNF-α）分别处理未分化、已分化的3T3-L1细胞，检测培养细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPAR-γ2）mRNA的表达和脂联素的分泌。结果表明TNF-α可明显抑制3T3-L1脂肪细胞的PPAR-γ2 mRNA表达和脂联素的分泌（P〈0.05或P〈0.01），提示TNF-α可能通过PPAR-γ影响脂联素的分泌。     

TNF-α和吡格列酮对3T3-L1脂肪细胞adiponutrin mRNA表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）和吡格列酮（PIO）对3T3-L1脂肪细胞中，脂肪滋养蛋白（adiponutrinADPN） mRNA表达的影响及时间效应。方法用100Fmol／L的PIO和100ng／ml的TNE-α处理不同阶段的3T3-L1脂肪细胞，RT-PCR检测ADPN的表达水平。结果在分化过程中和分化成熟的3T3-L1细胞中，TNF-α均增加ADPN的表达，PIO则可明显抑制其mRNA的表达。结论PIO和TNF-α可影响3T3-L1脂肪细胞的ADPN的表达。     

吡格列酮和肿瘤坏死因子α对3T3-L1脂肪细胞脂联素受体mRNA表达的影响

观察吡格列酮（PIO）和TNF-α对3T3-L1脂肪细胞中两种脂联素受体（AdipoR）mRNA表达的影响，发现AdipoR mRNA存3T3-L1细胞分化过程中的表达呈逐渐上调趋势；PIO能增加未分化和已分化3T3-L1细胞的AdipoR mRNA表达，且其促进效应与时间、剂量旱依赖关系；TNF—α对AdipoR mRNA的表达无影响     

肿瘤坏死因子α对人脂联素3T3-L1细胞PPARγ2 mRNA表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）对稳定表达人脂联素3T3-L1细胞过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ2 mRNA表达的影响，为进一步研究脂联素功能提供了实验基础。方法重组脂联素真核表达质粒（pcDNA3．1^＋-hADPN）脂质体法稳定转染3T3-L1细胞。用TNF-α（100ng／m1）处理未转染、转染空载载体、转染pcDNA3．1^＋-hADPN的3T3-L1细胞，RT-PCR检测PPARγ2 mRNA的表达量。结果（1）稳定转染了pcDNA3．1^＋-hADPN的未分化和已分化3T3-L1细胞中，PPARγ2表达量较未转染组明显增加（P〈0.01）。（2）TNF-α可明显抑制PPARγ2 mRNA的表达（P〈0.05）。（3）稳定转染pcDNA3．1^＋-hADPN可改善TNF-α抑制作用（P〈0.05）。结论稳定转染pcDNA3．1^＋-hADPN可明显增加未分化和已分化的3T3-L1细胞PPARγ2 mRNA表达。TNF-α抑制PPAR-γ2 mRNA表达，而转染pcDNA3．1^＋-hADPN可改善TNF-α抑制作用。     

游离脂肪酸调节脂肪细胞脂联素受体基因的表达

采用RT-PCR法检测以游离脂肪酸（FFA）孵育的（前）脂肪细胞中脂联素受体（AdipoR）mRNA的表达规律。结果表明3T3-L1脂肪细胞AdipoR1和AdipoR2基因表达呈分化依赖性增强。油酸仅对前脂肪细胞AdipoR的表达起抑制作用，而高浓度棕榈酸能抑制（前）脂肪细胞AdipoR的表达。     

Cathepsin L调节ox-LDL诱导的巨噬细胞脂质蓄积

目的探讨非诺贝特对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导3T3-L1成熟脂肪细胞中炎症相关蛋白CD40L/CD40表达的影响及其是否通过Sirt1-NF-κB途径调控TNF-α诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应。方法 3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化成为成熟脂肪细胞后,免疫荧光检测Sirt1及CD40L/CD40的表达定位。TNF-α刺激细胞以及加入非诺贝特、Sirt1特异性激动剂和抑制剂和NF-κB信号通路阻断剂后,采用免疫印迹法检测细胞内Sirt1、CD40和NF-κB蛋白表达水平,采用RT-Q-PCR检测Sirt1和CD40 mRNA表达水平。结果油红O染色结果表明成功建立诱导分化体系。Sirt1在3T3-L1成熟脂肪中有表达且主要定位于细胞核。免疫荧光和逆转录PCR结果表明,3T3-L1成熟脂肪细胞表达CD40且主要定位于细胞膜上,但不表达CD40L。非诺贝特剂量依赖性下调TNF-α(10μg/L)诱导的成熟脂肪细胞中CD40蛋白和mRNA的表达,上调TNF-α诱导的成熟脂肪细胞中Sirt1蛋白和mRNA的表达。Sirt1特异性激动剂白藜芦醇增强非诺贝特对TNF-α诱导的成熟脂肪细胞中CD40蛋白和mRNA...     

非诺贝特和TNF-α对3T3-L1脂肪细胞内脂素表达的影响

目的 研究非诺贝特和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对3T3-L1脂肪细胞内脂素(Visfatin)表达的影响.方法 分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,用不同终浓度非诺贝特(0、50、100、200 μmol/L)刺激48 h;用100 μmol/L非诺贝特刺激不同时间(0、12、24、48 h);用10 ng/ml TNF-α和10 ng/ml TNF-α加100 μmol/L非诺贝特联合刺激48 h.使用半定量RT-PCR法检测3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA的表达.结果 Visfatin mRNA表达随非诺贝特浓度增加、作用时间延长而增加;TNF-α作用48 h后Visfatin mRNA表达量减少(P<0.05),联用非诺贝特组高于TNF-α组(P<0.01).结论 非诺贝特能促进3T3-L1脂肪细胞Visfatin表达,这可能是其改善胰岛素抵抗的机制之一.     

持续激活的Akt减少了 3T3-L1脂肪细胞脂联素蛋白的表达

目的 研究蛋白激酶B（Akt／PKB）的持续激活与灭活对3T3-L1脂肪细胞内脂联素蛋白表达的影响。方法 通过腺病毒表达系统将持续激活的Akt（myrAkt）和无酶活性的Akt（Akt-AA）导入3T3-L1脂肪细胞内，应用免疫印迹法检测3T3-L1脂肪细胞脂联素蛋白的表达。结果 表达myrAkt的3T3-L1脂肪细胞中脂联素明显减少，表达Akt-AA的3T3-L1脂肪细胞中脂联素无明显变化。结论Akt的激活抑制了3T3-L1脂肪细胞中脂联素蛋白的表达，且Akt的激活是影响脂联素的充分条件，而不是必要条件。     

黄连素对胰岛素抵抗3T3- L1脂肪细胞脂联素、瘦素、TNF-α和IL-6的影响

目的探讨黄连素对胰岛素抵抗(IR)3T3-L1脂肪细胞脂联素、瘦素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)蛋白表达的影响,分析黄连素改善IR的分子机制。方法将3T3-L1脂肪细胞随机分为对照组、IR组、黄连素组,应用地塞米松诱导细胞IR,黄连素组同时加入黄连素。采用葡萄糖氧化酶法测定3组细胞上清液葡萄糖消耗量,观察黄连素对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响;应用免疫印迹试验测定脂肪细胞脂联素、瘦素蛋白水平变化;应用酶联免疫吸附实验检测脂肪细胞TNF-α和IL-6蛋白水平变化。结果与对照组比较,IR组脂联素蛋白表达水平明显下降(P<0.05),瘦素、TNF-α和IL-6蛋白表达水平升高;经黄连素干预后,脂联素蛋白表达水平有一定升高,瘦素、TNF-α和IL-6蛋白表达水平降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄连素可能通过增加脂联素蛋白分泌,减少瘦素、TNF-α和IL-6蛋白水平而改善IR。     

酰基化Ghrelin对肿瘤坏死因子α诱导的脂肪细胞单核细胞趋化蛋白1及脂联素分泌紊乱的影响

目的探讨酰基化Ghrelin是否可保护3T3-L1小鼠脂肪细胞免受肿瘤坏死因子α(TNF-α)所介导的炎症损伤。方法成熟3T3-L1脂肪细胞分为对照组、TNF-α处理组、酰基化Ghrelin处理组、酰基化Ghrelin+TNF-α处理组。干预完成后,分别检测3T3-L1脂肪细胞上Toll样受体4(TLR-4)mRNA及蛋白水平、核因子κB p65(NF-κB p65)磷酸化蛋白水平以及细胞上清液中脂联素和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达水平。结果 1与对照组比较,TNF-α处理组3T3-L1脂肪细胞TLR-4 mRNA和蛋白水平、NF-κB p65磷酸化蛋白水平均上调,细胞分泌MCP-1增多,脂联素减少(P0.05,n=5)。2与对照组比较,酰基化Ghrelin处理组TLR-4 mRNA和蛋白水平以及NF-κB p65磷酸化蛋白水平下降(P0.05,n=5),脂肪细胞分泌脂联素减少(P0.05,n=5),MCP-1仅有下降趋势(P0.05,n=5)。3与TNF-α(100μg/L)处理组比较,酰基化Ghrelin预孵育4 h可下调TNF-α所致的3T3-L1脂肪细胞TLR-4 mRNA表达增多,其蛋白水平以及NF-κB p65磷酸化蛋白水平亦有所下调(P0.05,n=5),且呈剂量依赖性;而脂肪细胞MCP-1及脂联素的分泌水平差异无显著性(P0.05,n=5)。结论 TNF-α导致3T3-L1细胞TLR-4、NF-κB p65炎症通路活化,脂肪细胞分泌促炎因子(MCP-1)增加,而抗炎因子(脂联素)减少;酰基化Ghrelin可剂量依赖性抑制TNF-α介导的3T3-L1细胞TLR-4、NF-κB p65炎症通路的活化,但不能完全改善脂肪细胞分泌促炎因子和抗炎因子的紊乱。     

肿瘤坏死因子-α对脂肪细胞中脂联素表达的影响

目的:通过体外脂肪细胞的培养,研究肿瘤坏死因子-(TNF-α)对脂肪细胞因子脂联素表达的影响。方法:取雄性SD大鼠大网膜及双侧肾脏周围脂肪组织,提取前脂肪细胞并进行培养,经诱导使其转化为脂肪细胞,在细胞诱导分化后第8天分别以不同浓度的重组TNF-α以及罗格列酮干预培养36h,最后测量所培养的脂肪细胞中脂联素mRNA表达情况,并收集培养上清液测量脂联素浓度。结果:不同浓度的TNF-α作用于培养成熟脂肪细胞36h后,脂联素mRNA的表达水平均显著低于对照组,同时培养上清液中脂联素水平亦显著低于对照组;并且TNF-α的作用浓度越大,脂肪细胞中脂联素mRNA的表达水平及上清液中脂联素浓度越低下;罗格列酮可以阻止TNF-α对脂联素表达的抑制作用。结论:TNF-α能直接抑制脂肪细胞中脂联素mRNA的表达,并导致脂联素水平的下降。     

氯化钴诱导低氧上调3T3-L1脂肪细胞单核细胞趋化蛋白1的表达

研究氯化钴体外模拟低氧对小鼠3T3-L1脂肪细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响.体外培养3T3-L1前脂肪细胞,并将其诱导分化为成熟脂肪细胞,油红O染色鉴定脂肪细胞分化程度和脂质积聚情况.氯化钴化学模拟脂肪细胞低氧环境,采用实时荧光定量PCR与蛋白免疫印迹法检测低氧诱导因子-1α的mRNA和蛋白水平;采用实时荧光定量PCR与酶联免疫吸附法检测单核细胞趋化蛋白1的mRNA和蛋白水平,并对两者的蛋白水平进行相关性分析.氯化钴处理分化成熟的3T3-L1脂肪细胞后,低氧诱导因子-1α在mRNA及蛋白水平均显著上调;同时发现单核细胞趋化蛋白1 mRNA的表达水平和培养液中单核细胞趋化蛋白1蛋白的分泌水平均升高,且低氧诱导因子-1α与单核细胞趋化蛋白1蛋白水平呈现线性相关( r=0.864,P＜0.01).氯化钴诱导低氧上调3T3-L1脂肪细胞单核细胞趋化蛋白1的表达,参与脂肪组织慢性低度炎症的发生.     

在3T3-L1脂肪细胞诱导分化中UCP4基因表达水平的变化及TNF-α对其调节作用的研究

观察3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中UCP4基因mRNA表达水平的变化，探讨TNF-α对成熟脂肪细胞中UCP4基因表达水平的调节作用。研究发现UCP4基因在3T3-L1细胞分化过程中表达逐渐下调，其机制可能有利于脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚，与肥胖发生有关；TNF-α能够上调成熟脂肪细胞中UCP4基因的表达，其效应总体趋势上呈现时间反应性特征。     

胰升血糖素样肽1对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响

目的探讨胰升血糖素样肽1（GLP-1）对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响。方法在3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的不同阶段添加不同浓度梯度的GLP-1（7—36）,使用XTT比色法测定细胞增殖情况,油红O脂肪染色、异丙醇萃取法评价细胞分化情况,RT-PCR法测定不同分化阶段PPAR-ymRNA表达水平。结果高浓度GLP-1（10^-9～10^-7mool／L）能够减弱3T3-L1前脂肪细胞的增殖能力;GLP-1在10^-11～10^-8mmoL／浓度梯度均存在抑制3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞分化的作用,但对分化过程中PPARymRNA的表达水平均未见显著影响。结论本研究发现GLP-1能够抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化,提示脂肪细胞可能也是GLP-1减轻体重作用的潜在靶点。     

S100A16基因促进3T3-L1前脂肪细胞分化

目的 研究S100A16基因在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中的作用及机制.方法 构建过表达S100A16的慢病毒载体(PLJMI-S100A16-GFP),转染3T3-L1细胞.以Western印迹法检测S100A16正常3T3-L1细胞分化过程中S100A16的表达;采用油红O观察脂滴堆积情况;采用Western印迹和实时定量PCR方法检测前体脂肪细胞分化过程中相关基因的表达变化.免疫共沉淀方法检测S100A16是否与p53相互作用.结果 成功构建S100A16过表达3T3-L1细胞株;随着3T3-L1前脂肪细胞的分化,S100A16蛋白表达水平逐渐升高;高表达S100A16能够促进3T3-L1前脂肪细胞分化,促进甘油三酯在脂肪细胞内聚集(P＜0.01),同时上调脂肪细胞分化标志基因PPARy、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBP-α)、脂蛋白脂酶、脂肪细胞脂肪酸结合蛋白(aP2)及脂肪酸合成酶的表达(P＜0.05或P＜0.01);免疫共沉淀结果提示,S100A16蛋白与p53相互作用.结论 S100A16通过抑制p53活性进而促进3T3-L1前脂肪细胞的分化.     

沉默脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因对脂肪细胞合成甘油三酯及脂联素分泌的影响

目的应用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对3T3-L1脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)的microRNA表达载体,研究沉默A-FABP基因的表达对脂肪细胞合成甘油三酯及脂联素分泌的影响。方法构建靶向A-FABP基因的microRNA表达载体转染3T3-L1脂肪细胞后,RT-PCR及Western blot法检测A FABP mRNA及蛋白表达。建立A-FABP基因沉默细胞模型,0.5 mmol/L游离脂肪酸和成熟脂肪细胞共孵育24 h,分为对照组、脂肪酸组、RNAi组、RNAi+脂肪酸组。ELISA法分别检测甘油三酯及脂联素水平,RT PCR法检测脂肪细胞A-FABP及脂联素mRNA的表达。结果 microRNA表达载体转染脂肪细胞后,能显著抑制A-FABP mRNA和蛋白表达。随着脂肪酸浓度的升高,脂肪细胞甘油三酯合成明显增加,脂联素分泌明显减少(P<0.05)。与对照组和脂肪酸组比较,RNAi组和RNAi+脂肪酸组甘油三酯水平明显降低,脂联素水平明显升高,脂联素mRNA表达明显上调(P<0.05)。结论阻断A-FABP基因有可能成为防治动脉粥样硬化及糖尿病的新靶点。     

重组人白介素6抑制SW872脂肪细胞脂联素及其受体1的表达和脂联素的分泌

油酸诱导体外培养的SW872前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞，然后加入重组人白细胞介素6（rhIL-6）干预；RT—PCR方法检测脂联素、脂联素受体1和2mRNA水平，ELISA方法检测细胞培养上清中脂联素蛋白的含量。结果显示，rhIL-6以剂量和时间相关的方式抑制SW872脂肪细胞脂联素及其受体1mRNA的表达及脂联素的分泌，对脂联素受体2mRNA的表达无影响。     

3T3-L1前脂肪细胞烟碱样胆碱能受体α7亚型功能状态对chemerin及其受体chemerinR基因表达的影响

目的观察3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中chemerin及其受体(chemerinR)基因表达水平的变化趋势,及脂肪细胞中非神经元型胆碱能系统尤其是烟碱样胆碱能受体α7功能状态对前脂肪细胞和诱导分化成熟脂肪细胞中新型促脂解脂肪因子chemerin和其受体基因表达水平的影响,旨在探讨脂肪细胞中非神经元型胆碱能系统对脂解影响的分子机制。方法"经典激素鸡尾酒法"(1-甲基3-异丁基黄嘌呤 胰岛素 地塞米松 胎牛血清 DMEM/F12培养基)诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,并于分化进程中0h,6h,12h,1d,3d,6d和9d收集细胞并提取总RNA,RT-PCR技术检测chemerin、chemerinR mRNA时序性变化规律。并加入不同浓度(10-8mol/L、10-6mol/L和10-4mol/L)的烟碱样乙酰胆碱受体α7激动剂氯化胆碱和拮抗剂甲基牛扁亭碱,分别处理3T3-L1前脂肪细胞和诱导分化成熟的脂肪细胞12 h、24 h和36 h后,抽提总RNA,RT-PCR检测chemerin、chemerinR mRNA的表达。结果①在诱导3T3-L1前脂肪细胞分化成熟的过程中,二者基因均呈现逐渐升高趋势,至分化末期表达水平最高。②与相应作用时点的空白对照组比较,氯化胆碱能显著下调前脂肪细胞chemerin、chemerinR mRNA和成熟脂肪细胞中chemerin mRNA水平;甲基牛扁亭碱则明显上调前脂肪细胞chemerin、chemerinR mRNA和成熟脂肪细胞中chemerin mRNA水平,上述两种干预均对成熟脂肪细胞中chemerinR mRNA水平无明显影响。③且在相同浓度、相同时间干预下,烟碱样胆碱能受体α7特异性激动剂或拮抗剂对前脂肪细胞中chemerin、chemerinR mRNA水平影响均较诱导分化成熟脂肪细胞组显著。结论前脂肪细胞上烟碱样胆碱能受体α7,很可能是介导前脂肪细胞固有胆碱能系统发挥生物学效应的重要物质,除参与脂解的直接调控外,还可能通过影响自身脂肪因子的表达实现间接调节。     

BRL37344对3T3-L1脂肪细胞脂肪分解与脂肪因子表达的影响

目的观察BRL37344对3T3-L1脂肪细胞脂肪分解及瘦素、TNF-αmRNA表达的影响。方法将3T3-L1前脂肪细胞分化成熟后,用0、10-9、10-7mol/L浓度与0、12、24、48 h作用时间的BRL37344进行干预。采用酶法检测甘油释放含量,RT-PCR法检测细胞瘦素、TNF-αmRNA表达。结果 BRL37344可显著增加3T3-L1脂肪细胞的脂肪分解,10-9、10-7mol/L的BRL37344作用48 h后,细胞内瘦素mRNA表达量分别降低38%、97%,TNF-αmRNA表达量分别降低65%、130%,呈剂量依赖性;10-7mol/L的BRL37344作用12、24、48 h后,瘦素mRNA表达量分别降低6%、48%、119%,TNF-αmRNA表达量分别降低10%、66%、158%,呈时间依赖性。结论 BRL37344可促进脂肪细胞的脂质分解,抑制瘦素、TNF-αmRNA表达,其抗肥胖作用与促进脂肪分解,改善瘦素、TNF-α抵抗状态有关。     

1,25二羟维生素D_3对人脂肪细胞脂联素、瘦素分泌的影响

目的研究1,25二羟维生素D3对人脂肪细胞脂联素、瘦素分泌的影响。方法原代分离培养人大网膜前脂肪细胞,前脂肪细胞诱导分化为脂肪细胞,应用免疫细胞化学法检测脂联素、瘦素的表达。结果成功培养人前脂肪细胞并诱导人前脂肪细胞分化为脂肪细胞。分化组脂联素及瘦素表达水平明显高于未分化组,加入不同浓度1,25二羟维生素D3后分化的脂肪细胞脂联素及瘦素表达水平均降低（P〈0.05）。结论 12,5二羟维生素D3对人脂肪细胞脂联素、瘦素的分泌有抑制作用。