Rutaecarpine attenuates osteoclastogenesis by impairing macrophage colony stimulating factor and receptor activator of nuclear factor κ‐B ligand‐stimulated signalling pathways

Rutaecarpine is a major alkaloid isolated from Evodia rutaecarpa. Here, we investigated the effects of rutaecarpine on osteoclast differentiation induced by macrophage colony stimulating factor (M‐CSF) and receptor activator of nuclear factor κ‐B ligand (RANKL) in bone marrow‐derived macrophages (BMMs). Treatment with rutaecarpine significantly inhibited osteoclastogenesis and prevented bone resorption of BMM‐derived osteoclasts. Mechanistically, rutaecarpine decreased the protein level of nuclear factor of activated T cells cytoplasmic‐1 (NFATc1) and the phosphorylation of other signalling pathways during the osteoclast differentiation. Thus, rutaecarpine may be useful as a therapeutic agent for the treatment of bone diseases.     

基于谱效关联分析的吴茱萸抗炎活性的质量标志物研究

目的采用谱效关联分析方法探索吴茱萸Euodia rutaecarpa抗炎活性的质量标志物(quality marker,Q-Marker),为其抗炎活性的质量控制提供依据。方法采用超高效液相色谱(UPLC)对24批吴茱萸药材进行指纹图谱分析;以脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7建立体外炎症细胞模型,考察24批吴茱萸药材对细胞上清液中一氧化氮(nitric oxide,NO)以及细胞内诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide-synthase,iNOS)水平的影响;采用SPSS软件关联指纹图谱色谱峰峰面积与抗炎活性的关系,并采用UPLC-四级杆飞行时间质谱(QTOF-MS)对吴茱萸的抗炎活性成分进行指认。结果 24批吴茱萸药材对RAW264.7细胞上清液NO抑制率为12%～82%,谱效关联分析共筛选出14个吴茱萸潜在抗炎成分,分别为吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱等吲哚喹唑啉类生物碱以及奎宁酸类成分、绿原酸类成分、喹诺酮类生物碱等。与模型组比较,柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、奎宁酸、去氢吴茱萸碱、二氢吴茱萸卡品碱、绿原酸、隐绿原酸可显著抑制RAW264.7细胞上清液中NO水平及细胞内iNOS水平(P0.05、0.01)。结论柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、奎宁酸、去氢吴茱萸碱、二氢吴茱萸卡品碱、绿原酸和隐绿原酸为吴茱萸抗炎活性的Q-Marker。     

不同商品规格吴茱萸有效成分含量和肝细胞毒性的研究

目的评价市售吴茱萸EuodiaeFructus的质量并研究不同商品规格吴茱萸中化学成分与肝细胞毒性的相关性,为吴茱萸全面质量控制提供依据。方法按吴茱萸药材商品规格收集小花吴茱萸7批,中花吴茱萸22批,大花吴茱萸10批,建立了UPLC法同时测定吴茱萸中柠檬苦素(limonin,LIM)、吴茱萸碱(evodiamine,EVD)、吴茱萸次碱(rutaecarpine,RUT)、 1-甲基-2-壬基-4-(1H)-喹诺酮[1-methyl-2-nonyl-4(1H)-quinolone, MNQ]、 1-甲基-2-十一烷基-4(1H)-喹诺酮[1-methyl-2-undecyl-4(1H)-quinolone,MUQ]和吴茱萸新碱(evocarpine,EVC)的含量;采用CCK-8法检测吴茱萸对L02肝细胞的生长抑制作用。运用SIMCA-P 14.1统计软件对吴茱萸的细胞存活率进行主成分分析(principal component analysis,PCA)。结果有19批商品符合《中国药典》2020年版规定,不符合药典要求的20批样品中有10批为药材基原不符,有1批EVD和RUT的总量不符合药典规定,9批LIM含量不符合药典规定。7批小花吴茱萸中1批不符合药典要求,22批中花吴茱萸中10批不符合药典要求,10批大花吴茱萸中9批不符合药典要求。同时发现小花吴茱萸中LIM含量高于中花和大花吴茱萸,而生物碱含量中花和大花吴茱萸中较高。其中S33～S39样品按果实大小属于中花吴茱萸但不含LIM,将其称为中花样吴茱萸劣品。基于建立的UPLC方法同时测定吴茱萸中LIM和5种生物碱含量;PCA分析模型将小花吴茱萸、中花吴茱萸、大花吴茱萸和中花样吴茱萸劣品的毒性很好地区分为4个区域,对L02肝细胞的生长抑制作用为中花样吴茱萸劣品大花吴茱萸中花吴茱萸小花吴茱萸,且LIM与5种生物碱的比值和吴茱萸对L02肝细胞的半数抑制率(IC_(50))总体上呈正相关。结论吴茱萸的毒性与LIM和5种生物碱比例有关,LIM与5种生物碱含量和的比值越大,吴茱萸样品毒性越小。提示大花吴茱萸不适合作为商品流通,同时吴茱萸质量控制应考虑药材中LIM和生物碱类成分含量的比例。     

吴茱萸次碱对脑缺血再灌注小鼠的保护作用及作用机制研究

目的:观察吴茱萸次碱(Rut)对脑缺血再灌注(I/R)损伤小鼠的学习记忆能力的保护作用及作用机制。方法:采用改进的Himori法暂时性阻断两侧颈总动脉制备小鼠脑I/R损伤模型,采用跳台实验,观察腹腔注射吴茱萸次碱(84,252,504μg.kg-1)对脑I/R损伤小鼠的学习记忆能力的保护作用,并于缺血再灌注后48 h测定小鼠脑组织中一氧化氮(NO)的含量、一氧化氮合酶(NOS)和诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的活性。结果:脑缺血再灌注后,小鼠学习记忆能力降低,脑组织中NO的含量,NOS和iNOS的活力升高。腹腔注射吴茱萸次碱可不同程度的改善脑I/R损伤造成的学习记忆能力障碍;吴茱萸次碱可降低NO的含量,NOS和iNOS的活力;与模型组比较,吴茱萸次碱(504μg.kg-1)可显著改善小鼠的学习记忆功能障碍,降低NO的含量,NOS和iNOS的活力(P<0.01)。结论:吴茱萸次碱对脑缺血再灌注(I/R)损伤小鼠的学习记忆能力具有保护作用,其机制可能与降低NO的含量,影响NOS和iNOS的活力有关。     

左金微乳凝胶与水凝胶体外释放和经皮渗透特性的研究

目的:研究、比较左金微乳凝胶、水凝胶体外释放和经皮渗透特性,探讨微乳凝胶对药物释放及透皮性能的影响。方法:采用改良Franz扩散池,以凝胶中小檗碱、巴马汀、吴茱萸碱、吴茱萸次碱等4种生物碱为评价指标,采用HPLC方法测定接收液中上述4个成分含量。结果:吴茱萸次碱的体外释放速率水凝胶高于微乳凝胶,而吴茱萸碱释放速率微乳凝胶高于水凝胶,其余两个成分体外释放无明显差异。微乳凝胶中吴茱萸碱、巴马汀、小檗碱的经皮渗透速率比水凝胶分别提高了10倍、36倍、26倍,提示微乳凝胶具有明显的经皮渗透优势。两种凝胶中四个指标成分的体外释放和经皮渗透行为均符合零级方程。吴茱萸次碱较为特殊,其在水凝胶中透皮速率比微乳凝胶高1.6倍。结论:微乳凝胶能显著增强药物成分的经皮渗透能力。     

采用多元定时释药技术制备雷公藤胃漂浮缓释胶囊的研究

目的：建立吴茱萸一测多评的含量测定方法，考察不同类型化合物之间采用相对校正因子进行一测多评含量测定的准确性和可行性。方法：以吴茱萸为研究对象，建立吴茱萸次碱与吴茱萸内酯、吴茱萸碱的相对校正因子，并用该校正因子进行吴茱萸内酯、吴茱萸碱的含量计算，实现一测多评；同时采用外标法测定药材中吴茱萸内酯、吴茱萸碱及吴茱萸次碱的含量，并比较计算值与实测值的差异。结果：11批吴茱萸药材中2种成分含量的计算值与实测值间无显著差异(RSD<5%)。结论：以外标法测定吴茱萸次碱，利用相对校正因子实现对吴茱萸内酯和吴茱萸碱测定是准确的、可行的，一测多评法可以用于特定的不同类型成分间的测定。     

Antinociceptive Activity of Aqueous and Alcohol Extract of Evodia Rutaecarpa

Water, methanol and ethanol extracts of Evodia rutaecarpa were tested for antinociceptive activity, which were correlated with the contents of evodiamine, rutaecarpine and evodine. Determination of contents was achieved by chromatographic techniques. Extracts were evaluated for antinociceptive activities using hot-plate test; acetic acid-induced writhing test and formalin test. All three extracts of Evodia rutaecarpa showed antinociceptive activities but the ethanol extract exhibited better effect. The better antinociceptive activity appeared to be related to higher contents of evodiamine, rutaecarpine and evodine in ethanol extract of Evodia rutaecarpa.     

吴茱萸次碱对肝肾毒性的初步研究

目的:探讨吴茱萸次碱Rutecarpine(Rut)在体外对人正常肝细胞(HL7702)、人胚胎肾细胞(HEK293)的影响,采用共培养体系初步比较Rut对肝肾细胞活力的影响,并选用小鼠进行整体验证。方法:①采用MTT法检测Rut在肝肾细胞单独培养或共培养体系中对细胞活力的影响并采用倒置显微镜对细胞形态进行观察;②给予Rut后,检测肝肾细胞培养上清液中丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),尿素氮(BUN),肌酐(Cr),乳酸脱氢酶(LDH)的变化;③整体实验观察静脉给予Rut对小鼠肝肾功能和组织病理学的影响。结果:①MTT法显示,2,4μg·mL-1的Rut使肝肾细胞活力均下降,且相同浓度下的Rut对肝细胞的抑制作用大于肾细胞;②4μg·mL-1的Rut使肝细胞上清液中的AST,ALP,LDH水平均升高(P<0.01);③整体实验表明,小鼠静脉给予10 mg·kg-1 Rut 7 d后,血清中的ALP水平有极显著的上升(P<0.01),ALT,AST,BUN,Cr水平只出现升高的趋势,病理学检查发现约1/3的小鼠肝脏出现肝细胞核分裂象增多,仅有1只小鼠肾脏出现嗜碱性病变。结论:大剂量Rut可能对肝肾具有一定的毒性作用,肝肾细胞共培养体系与细胞单独培养体系均可用于药物对细胞的毒性研究。     

吴茱萸化学成分研究

目的 研究吴茱萸Euodia rutaecarpa干燥果实的化学成分。方法 采用硅胶、Sephadex LH-20等开放柱色谱及半制备HPLC等方法对吴茱萸乙醇提取物进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果 从吴茱萸95%乙醇提取物中分离得到11个化合物,分别鉴定为吴茱萸碱（evodiamine,1）、吴茱萸次碱（rutaecarpine,2）、3-(2′-羟基乙酰基)-吲哚（3-hydroxyacetylindole,3）、N-反式对羟基肉桂酰基-对羟基苯乙胺 [N-(trans-p-coumaroyl)-tyramine,4]、N-顺式对羟基肉桂酰基-对羟基苯乙胺 [N-(cis-p-coumaroyl)-tyramine,5]、白鲜碱（dictamnine,6）、吴茱萸春（evolitrine,7）、6-甲氧基白鲜碱（6-methoxydictamnine,8）、茵芋碱（skimmiamine,9）、7-羟基吴茱萸次碱（7-hydroxyrutaecarpine,10）、阿塔宁I（atanine I,11）。结论 化合物3为首次从该属植物中分离得到;化合物4～11为首次从该植物中分离得到。     

吴茱萸指标成分体内外的肝损伤作用

目的:评价吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素体内外作用的肝损伤,为吴茱萸毒性物质基础研究提供依据。方法:吴茱萸水提物小鼠肝损伤实验,将美国癌症研究所(ICR)小鼠分为吴茱萸水提物高、中、低剂量组(80,60,40 g·kg^-1)和空白组,给药24 h后取血测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,取肝脏进行组织病理学检查。吴茱萸碱,吴茱萸次碱,柠檬苦素体外毒性实验,将不同单体成分分别作用于HepG2细胞24 h,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法考察细胞毒性。将雄性ICR小鼠分为吴茱萸碱组、吴茱萸次碱组、柠檬苦素组和空白组,每组分别采取灌胃给药和腹腔注射给药,给药剂量为200 mg·kg^-1,24 h后对小鼠进行大体观察,取血测血清ALT,AST活性,取肝脏称质量并计算肝体比。结果:与空白组比较,吴茱萸水提物高、中剂量组小鼠给药24 h后精神萎靡,眼部分泌物增多,低剂量组小鼠行为无明显异常,血清生化学结果显示,与空白组比较,吴茱萸水提物高、中剂量组小鼠血清ALT,AST活性显著升高(P<0.01),低剂量组小鼠血清ALT,AST活性有升高趋势,组织病理学检查结果显示,吴茱萸水提物高、中剂量组肝脏出现点状坏死,空泡变性,吴茱萸水提物低剂量组无明显异常。与空白组比较,吴茱萸碱、吴茱萸次碱对HepG2细胞的增殖具有一定抑制作用,抑制作用不强;柠檬苦素对HepG2细胞的增殖无明显抑制作用。与空白组比较,各组小鼠行为均无明显异常,灌胃给药的各给药组小鼠血清中ALT,AST活性及肝体比均无明显变化,腹腔注射给药的柠檬苦素组小鼠血清ALT活性显著升高(P<0.01),肝体比明显升高(P<0.05),吴茱萸次碱组小鼠血清AST活力明显升高(P<0.05),肝体比无明显变化,吴茱萸碱组则均无明显变化。结论:口服给予吴茱萸水提物能造成小鼠急性肝损伤;口服给予吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素对小鼠肝脏无损伤作用;腹腔给予吴茱萸碱、吴茱萸次碱对小鼠肝脏无损伤作用,腹腔给予柠檬苦素能造成小鼠急性肝损伤。