基于网络药理学吴茱萸致肝毒性机制研究

目的筛选吴茱萸主要肝毒性成分,预测毒性成分作用靶点,探讨其多成分-多靶点-多通路的肝毒性作用机制。方法依据TCMSP数据库、PubChem数据库Pharmmapper服务器、UniprotKB数据库筛选吴茱萸的活性成分,并预测肝毒性作用靶点。借助Cytoscape软件构建吴茱萸毒性成分-作用靶点网络,通过KOBAS3.0数据库对靶点基因功能及代谢通路进行分析。结果网络分析结果表明吴茱萸中筛选得到14-甲酰基二氢吴茱萸次碱、芳樟醇、1-甲基-2-戊烷基-4(1H)喹诺酮、辛弗林、柠檬烯等147个潜在毒性成分,涉及靶点F2、PIM1、MMP13、MAOB等49个,经建立网络连接,细胞代谢、催化活性、刺激反应等通路可能与肝毒性作用相关。结论应用网络药理学的方法,发现吴茱萸中的多种潜在毒性成分可能通过多个靶点与细胞代谢、催化活性等通路相互作用,从而可能产生肝毒性,为后续进一步深入验证吴茱萸肝毒性作用机制研究提供新线索。     

基于谱效关联分析的吴茱萸抗炎活性的质量标志物研究

目的采用谱效关联分析方法探索吴茱萸Euodia rutaecarpa抗炎活性的质量标志物(quality marker,Q-Marker),为其抗炎活性的质量控制提供依据。方法采用超高效液相色谱(UPLC)对24批吴茱萸药材进行指纹图谱分析;以脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7建立体外炎症细胞模型,考察24批吴茱萸药材对细胞上清液中一氧化氮(nitric oxide,NO)以及细胞内诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide-synthase,iNOS)水平的影响;采用SPSS软件关联指纹图谱色谱峰峰面积与抗炎活性的关系,并采用UPLC-四级杆飞行时间质谱(QTOF-MS)对吴茱萸的抗炎活性成分进行指认。结果 24批吴茱萸药材对RAW264.7细胞上清液NO抑制率为12%～82%,谱效关联分析共筛选出14个吴茱萸潜在抗炎成分,分别为吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱等吲哚喹唑啉类生物碱以及奎宁酸类成分、绿原酸类成分、喹诺酮类生物碱等。与模型组比较,柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、奎宁酸、去氢吴茱萸碱、二氢吴茱萸卡品碱、绿原酸、隐绿原酸可显著抑制RAW264.7细胞上清液中NO水平及细胞内iNOS水平(P0.05、0.01)。结论柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、奎宁酸、去氢吴茱萸碱、二氢吴茱萸卡品碱、绿原酸和隐绿原酸为吴茱萸抗炎活性的Q-Marker。     

选择性5-羟色胺再摄取抑制剂治疗帕金森病伴抑郁有效性与安全性的系统评价

目的系统评价5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)治疗帕金森病伴抑郁的有效性与安全性。方法计算机检索The Cochrane Library(2014年第5期)、Pub Med、EMbase、CNKI、VIP和Wan Fang Data数据库,全面收集SSRIs治疗帕金森病伴抑郁的随机对照试验(RCT),检索时限均为从建库至2014年5月。由2位评价员按纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料和评价纳入研究的偏倚风险后,采用Rev Man 5.2软件进行Meta分析。结果共纳入12个研究。Meta分析结果显示:与安慰剂相比,SSRIs治疗帕金森病伴抑郁在有效率[RR=2.18,95%CI(1.60,2.97),P<0.000 01]和不良事件相关的失访发生率[OR=3.02,95%CI(1.04,8.79),P=0.04]方面,差异有统计学意义。但两组不良事件发生率差异无统计学意义。结论当前证据显示,SSRIs治疗帕金森病伴抑郁有效。受纳入研究数量和质量所限,该结论尚需开展更多大样本、高质量的RCT进一步验证。     

海藻玉壶汤加减方对实验性自身免疫性甲状腺炎凋亡蛋白Fas/FasL表达的影响

目的：观察海藻玉壶汤加减方对实验性自身免疫性甲状腺炎（EAT）大鼠甲状腺中Fas/FasL蛋白表达的影响。方法：在建立EAT大鼠模型的基础上,设立海藻玉壶汤加减方（浸膏）高、低剂量组、模型组、正常组、丙基硫氧嘧啶组、雷公藤多苷片组、夏枯草膏组,采用免疫组化法检测EAT大鼠的Fas/FasL蛋白表达情况。结果：正常组甲状腺组织Fas和FasL免疫阳性物表达颜色较浅,表达范围小,模型组免疫阳性物颜色较深,表达范围广。其中,模型组的Fas和FasL表达程度与正常组相比有显著性差异（P〈0.01）;海藻玉壶汤加减方高剂量组、雷公藤多苷片组与丙基硫氧嘧啶组、夏枯草膏组相比有显著性差异（P〈0.01）。结论：海藻玉壶汤加减方高剂量组对凋亡蛋白Fas/FasL的表达具有一定的抑制作用,提示海藻玉壶汤加减方可能通过抑制各凋亡蛋白的表达,从而避免细胞过度凋亡对甲状腺组织的破坏。     

散结消瘿颗粒治疗实验性自身免疫性甲状腺炎研究

目的:观察散结消瘿颗粒、海藻玉壶汤加减方(临床用汤剂)对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)小鼠甲状腺功能及抗体水平的影响。方法:在建立EAT小鼠模型的基础上,设立散结消瘿颗粒(富碘型组和多糖型组)、海藻玉壶汤加减方组(临床用汤剂)、模型组、正常组、对照组,采用化学发光法测定EAT小鼠T3、T4、TGAb、TPOAb。结果:在给予小鼠灌胃54g生药/kg的剂量下,散结消瘿颗粒(富碘型组和多糖型组)对甲状腺激素的调节作用优于临床汤剂海藻玉壶汤组;模型组小鼠血清TGAb水平高于正常组(P<0.01);散结消瘿颗粒组与临床汤剂组相比,TGAb水平呈整体下降趋势,其中富碘型散结消瘿颗粒则优于多糖型散结消瘿颗粒。结论:散结消瘿颗粒(富碘型组及多糖型组)能调节EAT小鼠模型的甲状腺激素及抗体的水平,且具有一定的治疗作用,其效果优于海藻玉壶汤加减方组(临床用汤剂)。     

海藻玉壶汤加减方对自身免疫性甲状腺炎模型大鼠的保护作用

目的:研究海藻玉壶汤加减方对自身免疫性甲状腺炎(EAT)模型大鼠的保护作用。方法:多点皮下注射猪甲状腺球蛋白(PTg)进行初次免疫,于第2周进行加强免疫,以后每周加强免疫1次,共加强免疫4次,以复制大鼠EAT模型。70只SD大鼠分为正常对照(等容生理盐水)组、模型(等容生理盐水)组、丙基硫氧嘧啶(23.43 mg/kg)组、雷公藤多苷(6.25 mg/kg)组、夏枯草(1.875g/kg)组与海藻玉壶汤加减方高、低剂量(39.4、19.7 g/kg)组。灌胃给药,每天1次,连续16周。末次给药后大鼠眼眶取血测定血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)含量与甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)活性;取甲状腺,称定质量,计算甲状腺脏器指数(甲状腺质量/体质量)。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠T3、T4含量增加,TGAb活性增强,甲状腺脏器指数升高,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较,海藻玉壶汤加减方高、低剂量组大鼠TGAb活性减弱,甲状腺系数降低,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05);海藻玉壶汤加减方高剂量组大鼠T4含量减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:海藻玉壶汤加减方能调节EAT模型大鼠的甲状腺激素及抗体的水平。     

芪蟾口服结肠靶向片初步药效学研究

目的:观察芪蟾口服结肠靶向片浸膏对小鼠的急性毒性反应,以评价其安全性;研究芪蟾口服结肠靶向浸膏对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。方法:采用经典的急性毒性试验方法测定芪蟾口服结肠靶向浸膏的半数致死量(LD50),观察急性毒性症状,记录死亡数;建立H22荷瘤小鼠模型,随机分成6组,分别给予芪蟾口服结肠靶向浸膏高、中、低剂量灌胃,临床汤剂组灌胃,化疗药物5—Fu腹腔注射单独应用,生理盐水灌胃。正常饲养,给药10天后,摘眼球取血,处死小鼠,分别取出肿瘤组织、小鼠脾脏、胸腺,进行抑瘤率、脾指数、胸腺指数的检测。采用酶联免疫法测定TNF-α、IFN-γ细胞因子水平。结果:芪蟾口服结肠靶向片浸膏小鼠口服LD50为43.26g.kg-1,相当于人临床日用量的19.6倍,;芪蟾口服结肠靶向浸膏各剂量组均可有效抑制肿瘤生长,5-Fu腹腔注射单独应用的抑瘤率为40.52%,芪蟾靶向浸膏3个剂量组的抑瘤率分别为37.41%、33.21%、31.85%。与5-Fu组比较,芪蟾口服结肠靶向浸膏各剂量组能显著提高小鼠脾脏、胸腺的重量(P0.05)。与模型对照组相比,能明显提高细胞因子TNF-α,IFN-γ的水平(P0.05)结论:芪蟾靶向浸膏各剂量组均可不同程度抑制肿瘤的生长,以芪蟾靶向浸膏低剂量组效果最为明显,其作用机制与增加小鼠免疫器官重量、增加细胞因子TNF-α,IFN-γ水平等有关。提示芪蟾靶向浸膏有抗肿瘤作用,为临床应用提供科学的实验数据,对临床有实际的指导意义。     

芪蟾口服结肠靶向片(浸膏)及组成药味提取物体外抗氧化作用的研究

目的:研究芪蟾口服结肠靶向片(浸膏)及组成药味提取物体外抗氧化作用。方法:采用体外试验,对芪蟾口服结肠靶向片(浸膏)及组成药味提取物抑制红细胞溶血、抑制大鼠肝匀浆自发性脂质过氧化、清除DPPH自由基能力、还原能力、清除·OH能力等多个方面进行了系统研究。结果:芪蟾口服结肠靶向片(浸膏)及组成药味提取物对红细胞溶血均具有很好的保护作用,能有效地抑制肝匀浆自发性过氧化;并能有效地清除DPPH自由基以及·OH;对铁离子均具有良好的还原能力。结论:芪蟾口服结肠靶向片(浸膏)及组成药味提取物均具有良好的体外抗氧化能力。     

海藻玉壶汤加减方及方中相关药物碘含量的测定

目的:研究海藻玉壶汤加减方及方中相关药物碘含量的测定及碘在复方药物提取中的变化情况。方法:在弱酸性条件下,采用重铬酸钾氧化I-为I2,氯仿定量萃取比色,测定波长为510nm。结果:总碘含量(按一个处方药物配伍比例计算)的高低依次为海藻药材海藻药材提取液海藻玉壶汤加减方及不同药物组合提取液海藻醇处理上清液海藻玉壶汤加减方中相关药材及其提取液。结论:海藻玉壶汤加减方及方中相关药物碘含量的测定结果可为制剂工艺的优选、药效研究及甲状腺疾病分型治疗提供参考依据。     

芪蟾口服结肠靶向片的质量标准研究

目的:建立芪蟾口服结肠靶向片的质量控制标准.方法:采用TLC法对制剂中黄芪、干蟾皮、苦参进行定性鉴别;采用UPLC和HPLC法对制剂中黄芪甲苷、酯蟾毒配基和华蟾酥毒基、苦参碱进行定量分析.结果:薄层色谱主斑点清晰、特征明显、专属性强;黄芪甲苷线性范围为0.233 6～0.817 6 μg(r =0.999 6,n=6),平均回收率为99.66％( RSD 1.14％);酯蟾毒配基线性范围为0.001 75～0.0105 μg,(r=1.000 0,n=6),平均回收率为100.44％(RSD 1.94％):华蟾酥毒基线性范围为0.003 51 ～0.021 06 μg,(r=1.000 0,n=6),平均回收率为99.57％( RSD 2.73％);苦参碱线性范围为0.336 8～1.178 8μg,(r =0.999 8,n=6),平均回收率为100.30％( RSD 1.11％).结论:检测方法简便、可靠、重复性好,可作为芪蟾口服结肠靶向片的质量标准控制方法.