SAMHD1通过调控p27表达抑制肝细胞癌细胞增殖的研究

背景与目的：不育α基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1（sterile alpha motif and histidine/aspartic acid domain-containing protein 1，SAMHD1）具有抑制多种肿瘤细胞生长的作用，但其调节肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）细胞增殖的作用及机制尚未见报道。探究SAMHD1调控p27的表达对HCC细胞Huh7的增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法：首先通过蛋白质印迹法（Western blot）检测正常肝细胞和不同类型HCC细胞中SAMHD1的表达情况。利用基因修饰技术构建过表达SAMHD1、dNTP酶活性位点突变体（SAMHD1-D207N）和磷酸化位点突变体（SAMHD1-T592E）的重组质粒，然后利用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测过表达SAMHD1及其突变体或siRNA干扰沉默SAMHD1对HCC细胞增殖的影响，采用流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡情况。在癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas，TCGA）数据库中分析SAMHD1和p27表达的相关性。结果：HCC细胞中SAMHD1表达上调，过表达SAMHD1、SAMHD1-D207N和SAMHD1-T592E可以抑制Huh7细胞增殖，细胞周期停滞在G ₁ /G ₀ 期；相反，干扰SAMHD1后细胞增殖加快，细胞周期停滞在G ₂ /M期。机制研究表明，SAMHD1上调细胞周期蛋白激酶抑制因子p27的表达。在HCC组织中，p27的表达与SAMHD1表达呈正相关。结论：过表达SAMHD1可以上调p27的表达，导致细胞周期停滞在G ₁ /G ₀ 期，从而抑制HCC细胞增殖，这种抑制作用不依赖于其dNTP酶活性和磷酸化修饰。     

补肾活血方通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路改善DOR大鼠卵巢储备功能

目的 观察补肾活血方调节磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相关因子改善卵巢储备功能下降（DOR）大鼠卵巢储备功能的作用机制。方法 运用Ataya法腹腔注射环磷酰胺复制60只DOR模型大鼠，将其随机分为模型组、戊酸雌二醇组（0.000 9 g·kg^-1），补肾活血方高、中、低剂量组（33，16.5，8.25 g·kg^-1），同时另设正常组，每组12只；各组相应药物治疗，正常组和模型组给予等体积生理盐水，连续灌胃14 d，每天1次。治疗结束后，苏木素-伊红（HE）染色卵巢组织，光镜观察初级卵泡数、成熟卵泡数、总卵泡数的变化；免疫组化检测卵巢组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织中PI3K，Akt，mTOR，半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测卵巢组织中PI3K，Akt，mTOR mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组卵巢组织中成熟卵泡数量、总卵泡数量明显减少（P<0.05，P<0.01），卵巢组织中VEGF，Caspase-3表达升高（P<0.05），PI3K，Akt，mTOR蛋白及mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，补肾活血方中、高剂量组成熟卵泡数量、总卵泡数量均有不同程度上升（P<0.05，P<0.01），VEGF补肾活血方中剂量组升高最为明显（P<0.05），补肾活血方低、中、高剂量组及戊酸雌二醇组Caspase-3下降，补肾活血方中、高剂量组PI3K，Akt，mTOR蛋白及mRNA表达水平均升高（P<0.05，P<0.01），且补肾活血方中剂量组更加接近于正常组。结论 补肾活血方可以有效地改善DOR大鼠卵巢储备功能，促进卵泡数量增加。作用机制可能与补肾活血方通过增加卵巢组织中VEGF的表达有关，进而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路，从而调节Caspase-3的含量，最后促进卵泡数量的增加。     

N- 甲基-D- 天冬氨酸受体在记忆网络中的作用

N- 甲基-D- 天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate，NMDA）受体属于谷氨酸离子型受体，其与突触的可塑性和学习记忆密切相关。中枢神经系统中与学习记忆相关的，如以胆碱受体、腺苷A1 受体等为代表的诸多受体及递质，以谷氨酸（glutamate，Glu）为代表的氨基酸能神经通路，以长时程增强（long-term potentiation，LTP）等为代表的脑内神经电活动，以脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）等为代表的基因蛋白遗传信息改变，甚至许多神经退行性疾病中Glu 的神经毒性等，都与NMDA 受体相关，通过NMDA 受体功能的改变调控学习记忆功能，进而对整个中枢神经系统产生影响。换句话说，如果把学习记忆的信息传递系统看做一个庞大的信息网络，那么NMDA 受体就是学习记忆相关神经网络中一个相对中心的关键位点。因此，以探讨NMDA 受体在学习记忆错综复杂网络中的关联为切入点，以微观深入研究为基础、以宏观视野分析为引领，全方位评价NMDA 受体在学习记忆网络中的作用，或许可以引领未来脑功能及相关疾病系统的研究。     

蝉拟青霉/黄芪双向发酵菌质化学成分及抗高尿酸血症活性研究

目的：利用蝉拟青霉对黄芪进行发酵处理，探究发酵后所得菌质有效成分含量变化及其抗高尿酸血症活性。方法：采用硫酸-苯酚比色法、NaNO2-Al（NO3）3比色法、酸碱滴定法对黄芪及黄芪发酵菌质中多糖、总黄酮、总酸的含量进行测定；采用氧嗪酸钾盐诱导高尿酸血症（HUA）大鼠模型，将雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、菌质（150、300 mg·kg-1）组、黄芪（150、300 mg·kg-1）组及苯溴马隆（20 mg·kg-1）组，连续灌胃给药14 d，分别对大鼠血清中的尿酸（UA）、肌酐（CRE）、尿素氮（BUN）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、丙氨酸转氨酶（ALT）及天冬氨酸转氨酶（AST）水平进行测定。结果：黄芪药材经蝉拟青霉双向发酵后，总多糖的含量显著升高，总黄酮的含量显著降低，总酸的含量变化不明显。与对照组比较，模型组大鼠血清中UA、BUN、TC、TG、ALT和AST水平显著升高（P<0.05，P<0.001）；与模型组比较，黄芪组及黄芪发酵菌质组大鼠血清中UA、BUN、TC、TG、ALT和AST水平显著降低（P<0.05，P<0.01，P<0.001），且菌质组效果明显优于黄芪组。结论：黄芪经蝉拟青霉发酵后有效成分含量发生较大变化，所得蝉拟青霉/黄芪双向发酵菌质具有良好的抗高尿酸血症作用。     

血清谷丙转氨酶水平与不同性别2型糖尿病患病的关系

目的 探讨血清谷丙转氨酶（ALT）与新诊2型糖尿病（T2DM）患病风险之间的关联，为T2DM的防治提供科学依据。方法 采用4阶段分层随机抽样的方法选取2006年和2009年参与青岛糖尿病预防项目的研究对象男性3 012例、女性4 422例，采用Pearson相关检验分析不同性别ALT与FPG、2 h PG的相关性，并利用多因素logistic回归分析ALT与新诊T2DM患病的关系。结果 男性中，ALT与空腹血浆血糖（FPG）、餐后2 h血浆血糖（2 h PG）的Pearson相关系数分别为0.088、0.080（均P＜0.01）；多因素logistic回归显示，在调整了年龄、BMI、糖尿病家族史、城乡、教育、婚姻、收入、吸烟及饮酒状况等混杂因素后，ALT的第4分位（Q4）组新诊T2DM患病风险是第1分位（Q1）组的1.832倍（OR = 1.832，95% CI:1.324～2.534，P＜0.01）。女性中，ALT与FPG、2h PG的Pearson相关系数分别为0.065、0.108（均P＜0.01）；多因素logistic回归显示，在调整了年龄、BMI、糖尿病家族史、城乡、教育、婚姻、收入、吸烟及饮酒状况等混杂因素后，ALT的第4分位（Q4）组新诊T2DM患病风险是第1分位（Q1）组的1.445倍（OR = 1.445，95% CI:1.087～1.919，P＜0.05）。结论 在男、女性人群中，ALT水平升高与T2DM患病相关，且这种相关性不受年龄、BMI、糖尿病家族史等的影响。     

儿童自身免疫性脑炎临床研究

目的探讨儿童自身免疫性脑炎(AE)的临床特点、治疗及其预后。 方法选择2014年10月至2016年11月，首都儿科研究所附属儿童医院神经内科收治的12例AE患儿为研究对象，包括11例抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)脑炎及1例抗富亮氨酸胶质瘤失活蛋白1(LGI1)抗体相关脑炎患儿。对12例AE患儿的临床病例资料进行回顾性分析，包括临床表现、辅助检查、诊断、治疗及随访等，总结儿童AE的临床特点、治疗及预后。本研究遵循的程序符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求，与所有受试儿的监护人签署临床研究知情同意书。 结果①一般临床资料：本组12例AE患儿的平均年龄为7岁5个月，入院时平均病程为20.5 d，男、女患儿比例为5∶7。②临床表现：多为急性或亚急性起病，首发症状可见情绪及行为异常、发热伴头疼、惊厥、言语障碍、乏力、感觉异常等。11例抗NMDAR脑炎患儿主要临床表现为，90.9%(10/11)有精神症状，81.8%(9/11)有睡眠障碍，72.7%(8/11)有语言、认知障碍，或者运动障碍，54.5%(6/11)有惊厥发作，45.5%(5/11)有意识障碍，36.3%(4/11)出现自主神经功能异常。1例抗LGI1抗体相关脑炎患儿，临床以睡眠障碍为主要表现。③实验室检查结果：对12例AE患儿脑脊液进行常规检查的结果均显示基本正常，并且影像学筛查亦未发现肿瘤。12例AE患儿中，6例头颅MRI检查可见颅内异常信号，8例视频脑电图检查可见不同程度慢波背景。11例抗NMDAR脑炎患儿的脑脊液抗NMDAR抗体检测，均呈阳性或强阳性；1例抗LGI1抗体相关脑炎患儿的脑脊液抗LGI1抗体检测呈阳性。④治疗及随访结果：对12例AE患儿均采用甲泼尼龙和(或)静脉注射免疫球蛋白(IVIG)进行免疫治疗，对其随访时间为12～27个月。其中，9例患儿临床痊愈，2例存在不同程度神经系统后遗症，1例出院后即失访。⑤特殊表现：患儿1临床仅表现为视力障碍；患儿12临床表现主要为睡眠障碍；3例年龄<6岁患儿的临床症状以反复惊厥发作、意识障碍或运动障碍为主，病情均严重，并且一线免疫治疗的疗效差，均需联合应用二线免疫治疗。 结论儿童AE以抗NMDAR脑炎为主，抗LGI1抗体相关脑炎亦可见于儿童；临床以神经、精神症状为主，并且特异性不明显，免疫治疗的疗效确切。对危重症AE患儿，应早期联合二线免疫治疗，而且较为安全有效。