SAMHD1通过调控p27表达抑制肝细胞癌细胞增殖的研究

背景与目的：不育α基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1（sterile alpha motif and histidine/aspartic acid domain-containing protein 1，SAMHD1）具有抑制多种肿瘤细胞生长的作用，但其调节肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）细胞增殖的作用及机制尚未见报道。探究SAMHD1调控p27的表达对HCC细胞Huh7的增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法：首先通过蛋白质印迹法（Western blot）检测正常肝细胞和不同类型HCC细胞中SAMHD1的表达情况。利用基因修饰技术构建过表达SAMHD1、dNTP酶活性位点突变体（SAMHD1-D207N）和磷酸化位点突变体（SAMHD1-T592E）的重组质粒，然后利用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测过表达SAMHD1及其突变体或siRNA干扰沉默SAMHD1对HCC细胞增殖的影响，采用流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡情况。在癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas，TCGA）数据库中分析SAMHD1和p27表达的相关性。结果：HCC细胞中SAMHD1表达上调，过表达SAMHD1、SAMHD1-D207N和SAMHD1-T592E可以抑制Huh7细胞增殖，细胞周期停滞在G ₁ /G ₀ 期；相反，干扰SAMHD1后细胞增殖加快，细胞周期停滞在G ₂ /M期。机制研究表明，SAMHD1上调细胞周期蛋白激酶抑制因子p27的表达。在HCC组织中，p27的表达与SAMHD1表达呈正相关。结论：过表达SAMHD1可以上调p27的表达，导致细胞周期停滞在G ₁ /G ₀ 期，从而抑制HCC细胞增殖，这种抑制作用不依赖于其dNTP酶活性和磷酸化修饰。     

法洛四联症与NOTCH1和JAG1基因3'非编码区变异的相关性研究

目的 探讨法洛四联症(TOF)与NOTCH1和JAG1基因3'非编码区(3'UTR)变异的相关性,为TOF患者临床诊断提供遗传依据.方法 采用民族-病例-对照的研究方法,收集20例汉族TOF患者及14例回族TOF患者,并分别以20名汉族及20名回族健康体检者为对照组,筛选出TOF患者在两个民族人群中,NOTCH1和JAG1基因3'UTR存在的变异.通过PCR技术,结合DNA序列测序,测定、验证、确定样本人群中这些变异位点;进一步运用TargetScan、PicTar和microRNA.org等软件对变异位点可能结合miRNA进行分析,推测其和TOF发生、发展的相关性.结果 检测出TOF患者NOTCH1基因3'UTR存在3个单核苷酸多态性(SNP),JAG1基因3'UTR存在6个SNP位点.9个SNP位点在4组对象中的分布频数存在差异,但差异无统计学意义(P>0.05).其中JAG1基因3'UTR rs542746042位点在汉族对照组与汉族病例组之间的分布,差异有统计学意义(P<0.05).预测结果显示,JAG1基因3'UTR有差异的SNP位点(486delT)可与miRNA结合.结论 NOTCH1和JAG1基因3'UTR的核苷酸变异可能与TOF的发生相关.     

重组GST-HBx蛋白在表达过程中断裂状况的研究

目的 在对乙型肝炎病毒非结构蛋白HBx研究的过程中,发现体外表达HBx蛋白产物的稳定性存在差异.为了了解其中的原因,拟通过原核表达方式进行分析.方法 以包含全长HBV DNA的质粒pEco63为模板,通过PCR反应,扩增HBV X基因全长序列(1～154氨基酸)和截短序列(48～104氨基酸,48～146氨基酸,98...     

经皮同轴大通道内镜下与微创经椎间孔入路腰椎椎间融合术治疗退变性腰椎管狭窄症疗效比较北大核心CSCD

目的 比较经皮同轴大通道内镜下腰椎椎间融合术(percutaneous coaxial large-channel endoscopic lumbar interbody fusion,PE-LIF)与微创经椎间孔入路腰椎椎间融合术(minimal invasive transforaminal lumbar interbody fusion,MIS-TLIF)治疗退变性腰椎管狭窄症的疗效。方法 回顾分析2019年1月—2021年1月收治且符合选择标准的134例单节段退变性腰椎管狭窄症患者临床资料,其中PE-LIF组52例,MIS-TLIF组82例。两组患者性别、年龄、病程、手术节段及术前腰痛、下肢痛疼痛视觉模拟评分(VAS)、Oswestry功能障碍指数(ODI)等一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05)。记录并比较两组患者手术时间、术中出血量、术后引流量、住院时间及并发症发生情况;记录术前1 d及术后1、3 d血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)水平评估术中肌肉损伤情况;采用Brantigan标准评价两组椎间融合情况;记录并比较两组术前1 d及术后3 d、3个月、1年的腰痛、下肢痛VAS评分,术前1 d及术后3个月、1年ODI评分。结果 两组患者手术时间和住院时间差异无统计学意义(P>0.05),PE-LIF组术中出血量及术后引流量均显著低于MIS-TLIF组(P<0.05)。术前两组患者血清CK水平差异无统计学意义(P>0.05),PE-LIF组术后1、3 d血清CK水平均显著小于MIS-TLIF组(P<0.05)。所有患者均获1年规律随访。两组术后各时间点腰痛、下肢痛VAS评分及ODI评分均较术前明显下降(P<0.05);各时间点两组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术后1年PE-LIF组48例椎间融合成功,MIS-TLIF组77例椎间融合成功;两组术后3个月及1年的椎间融合分级比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术后PE-LIF组和MIS-TLIF组分别有2例和3例发生下肢麻木,1例和3例发生神经水肿性疼痛,1例和1例发生Cage移位,1例和1例发生椎弓根螺钉松动,两组均无感染及硬膜囊撕裂发生;两组患者并发症发生率(9.6%vs.9.8%)比较差异无统计学意义(χ2=0.001,P=0.979)。结论 在治疗单节段退变性腰椎管狭窄症时,PE-LIF能达到与MIS-TLIF相似的临床疗效,且术中出血更少、肌肉损伤更小。     

细菌纤维素构建组织工程角膜基质的方法及其评价

目的：探讨以细菌纤维素(BC)为支架构建组织工程角膜基质的可行性。方法： 体外分离培养兔和人角膜基质细胞,种植到BC膜中,构建完成后进行兔和人角膜基质细胞-BC复合膜的生物检测,并将兔角膜细胞生物复合物进行同种异体移植。术后1、4和8周时分别活体行前节OCT、角膜共焦显微镜检查,离体后组织学及免疫组织化学检查。结果： 人和兔角膜基质细胞长入BC的网架结构,细胞生长状态良好。移植术后1周兔眼无炎症反应及新生血管,4周后植片边缘出现新生血管,表面无水肿及溃疡形成。术后8周角膜共焦显微镜显示：移植片周围基质细胞增生活跃,邻近的角膜内皮细胞数量和形态正常。前节OCT显示：移植后复合膜逐渐降解,4周时复合膜边界模糊,8周时密度接近正常角膜组织。离体组织学检查显示：BC复合膜与正常角膜基质相似,有炎细胞浸润和血管形成,角膜组织无坏死和溶解。结论： BC无细胞毒性,具有良好的组织相容性和可降解性,可作为构建组织工程角膜基质的生物支架。     

药学服务对住院患者治疗作用影响分析

目的：探讨药学服务在维吾尔族精神分裂症的住院患者的临床疗效。方法：选取2013年9月至2014年3月,在本院治疗的维吾尔族精神分裂症的192例患者为研究对象,按照入院日期,将其随机分为对照组和观察组每组各96例。其中,观察组在常规药物治疗的基础上,附加药学服务模式,对照组常规药物治疗,但无干预措施。比较2组患者的用药依从性、患者满意度、复诊率、不良反应以及简明精神病量表（ BPRS）。结果：2组患者在治疗前性别、年龄、病情程度以及简明精神病量表等无显著性差异（P＞0．05）;与治疗前比较,2组患者治疗后,简明精神病量表有统计学差异（P＜0．05）。而且观察组在用药依从性、患者满意度、复诊率、不良反应以及简明精神病量表方面与对照组比较,差异均具有统计学意义（P＜0．05）,观察组的依从性好,患者满意度高,复诊率低,不良反应发生率少,简明精神病量表评分更低。结论：药学服务能够提高维吾尔族精神分裂症患者的生活质量,为今后制定科学的药学服务路径提供参考。     

抗纤溶系统激活药物在体外循环中的血液保护作用机制与使用进展

体外循环为心血管手术奠定了基础,然而也伴随产生了许多问题,特别是对血液中有形成分的损伤与消耗。血液保护是伴随体外循环产生的一种临床治疗策略。血液保护是指通过改善生物兼容性、减少血液中某些成分激活、减少血液丢失、减少血液机械性破坏、应用血液保护药物和人工血液等各种方法,降低同种异体输血需求及其风险,保护血液资源。综合利用各种血液保护措施,尽可能减少血细胞损伤,减少异体输血成为如今体外循环心脏手术的目标。本研究重点阐述抗纤溶药物对血液保护的作用机制及重要性,对抗纤溶药物的使用历史及各自优缺点进行综述。     

丙型肝炎病毒P7蛋白体外原核表达状况的研究

目的:扩增丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)P7蛋白基因,克隆到多个原核表达系统,观察P7蛋白在体外表达的情况,获取具有生物学活性的HCV P7重组蛋白.方法:设计扩增全长HCVP7基因片段的特异引物,以H/FL质粒DNA(含HCV 1acDNA全长序列)为模板,通过PCR扩增全长HCVP7基因...     

乙肝病毒核心蛋白序列特征的生物信息学分析北大核心CSCD

目的乙型肝炎病毒C基因编码的核心(HBc)蛋白抗原性强,也与持续性病毒感染有关。采用生物信息学方法分析HBc蛋白的结构和序列特征,有助于HBc蛋白的优化表达和纯化,并为乙肝患者的治疗以及疫苗的研制提供参考。方法乙肝病毒HBc序列的获取来源于NCBI网站GenBank数据库。运用Prot-Param和ProtScale工具在线预测乙肝病毒HBc的理化性质及其亲疏水性;通过在线软件SignalP 4.0Server和TMHMM分别分析该序列的信号肽特征,跨膜区域及磷酸化位点;利用SOPMA和SWISS-MODEL全自动在线软件预测其二级结构和三级结构模型;利用IEDB Analysis Resource,ABCpred和SYFPEITHI HLA-A;02:01预测该蛋白抗原表位,利用Venny2.1.0工具筛选该蛋白最佳表位形成位置等。结果HBc蛋白由212个氨基酸组成,分子式为C_(1086)H_(1710)N_(314)O_(300)S_(12),分子质量单位为24.35017ku,理论等电点为9.49。为不稳定亲水性蛋白质。该蛋白质具有信号肽,没有跨膜区域,具有40个潜在的磷酸化位点。预测其主要二级结构为α螺旋和无规卷曲,含量分别36.32%和41.04%。结合HBc蛋白序列的T、B细胞表面抗原、表面可及性、β转角、线性表位的预测结果,发现HBc蛋白具有T、B细胞抗原表位,并且存在4个潜在的优势抗原决定簇区域,分别为37-38、110、158-164、180-208位氨基酸。结论生物信息学方法预测HBc蛋白存在潜在的抗原表位区域,具有多个磷酸化位点。这有利于疫苗的研发与制备。     

我国脑膜炎奈瑟菌孔蛋白PorA、PorB的多态性分析

目的以蛋白质组学研究为基础,分析2003—2005年我国流脑暴发流行期间C群脑膜炎奈瑟菌菌株特征,建立以致病性相关蛋白多态性为目标的新分型方法。方法利用双向电泳和MALDI-TOF质谱鉴定分析2003—2005年流脑流行期内分离的66株C群脑膜炎奈瑟菌菌株及2株参考菌株的蛋白表达,重点分析与致病性相关的蛋白多态性特征。结果根据孔蛋白PorA、PorB在双向电泳中的多态性,建立了12个特征菌型。安徽菌株的PorA和PorB蛋白电泳谱型显示出了高度的一致性,而其他地区的菌株则显示出高度的多态性。结论PorA和PorB蛋白2-DE电泳谱型可以作为一种新的菌株分型方法,可能在菌型变迁检测和流脑暴发预警中具有重要应用前景。