miR-513a-5p慢病毒载体的构建及其对人骨肉瘤细胞放疗敏感性的影响

目的:构建miR-513a-5p慢病毒过表达载体，转染人骨肉瘤细胞株，观察miR-513a-5p对人骨肉瘤细胞放疗敏感性的影响。方法:PCR法扩增人miR-513a-5p基因，克隆入pLentis-CMV-GFP-MCS-PGK-PURO载体获得重组质粒pLentis-miR513a，双酶切鉴定并测序后将正确的重组质粒和对照质粒转染293FT细胞制备慢病毒，分别转染骨肉瘤HOS和U2OS细胞，qRT-PCR法及荧光显微镜鉴定转染结果。克隆形成实验、MTT法检测miR-513a-5p高表达HOS和U2OS细胞在X射线照射下细胞存活情况。结果:双酶切及测序结果确定成功构建miR-513a-5p慢病毒载体pLentis-miR513a。qRT-PCR结果提示，转染骨肉瘤细胞株后miR-513a-5p表达显著升高。克隆形成实验结果显示miR-513a-5p高表达后骨肉瘤细胞在X射线照射下细胞增殖减慢。MTT结果提示miR-513a-5p高表达骨肉瘤细胞经X射线照射后细胞存活减少。结论:成功构建了miR-513a-5p慢病毒载体，建立了高效稳定表达miR-513a-5p的骨肉瘤细胞株，高表达miR-513a-5p能显著增加X射线照射后骨肉瘤细胞的放疗敏感性。     

土木香内酯对人骨肉瘤143B细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨土木香内酯（alantolactone，ALT）对人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。方法：用不同浓度（0、4、6、8、10 μmol/L）的ALT处理人骨肉瘤143B细胞后，用结晶紫染色法和MTT实验检测细胞的增殖能力，用划痕愈合实验、Transwell 小室法、Hoechst33258 染色法分别检测细胞的迁移、侵袭和凋亡水平，用qPCR及Western blotting（WB）分别检测细胞中E-cadherin 和N-cadherin、caspase-3、cleaved-caspase-3（c-caspase-3）、PARP和cleaved-PARP（c-PARP）mRNA和蛋白表达水平。用荧光素酶报告基因实验检测T细胞淋巴因子或淋巴增强因子（T cell lymphocyte factor/lymphoid enhancer factor,TCF/LEF）转录活性，qPCR及WB检测β-catenin 及MMP-7、c-Myc mRNA和蛋白表达水平。结果：ALT能够抑制骨肉瘤143B 细胞的增殖、迁移和侵袭，同时促进细胞凋亡（P<0.05 或P<0.01）。经8、10 μmol/L ALT处理后，143B细胞中PARP mRNA和蛋白水平显著上调，c-caspase-3 和c-PARP 蛋白水平表达增加（均P<0.05）；E-cadherin mRNA 和蛋白水平表达上调、N-cadherin mRNA 和蛋白表达水平下调，同时TCF/LEF 转录活性明显下降（P<0.05 或P<0.01），β-catenin、MMP-7 和c-Myc mRNA和蛋白表达水平显著下调（P<0.05 或P<0.01）。结论：ALT通过抑制Wnt/β-catenin 信号通路的活性从而抑制人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移和侵袭，并促进其凋亡。     

miR-548d抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-548d对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响。方法:通过Real time PCR及Western blot检测miR-548d和KRAS在30例骨肉瘤组织以及293、MG63和U2OS细胞中的表达情况。对30例骨肉瘤组织中miR-548d和KRAS含量的相关性进行分析，随后通过报告基因实验印证miR-548d对KRAS的靶向作用。MG63细胞中分别过表达或沉默miR-548d后，通过Western blot实验分析KRAS的变化情况，MTT实验观察miR-548d对细胞增殖的影响，Transwell实验观察miR-548d对其迁移能力的影响。结果:骨肉瘤组织及细胞中miR-548d表达较低，KRAS表达较高。在骨肉瘤组织中miR-548d与KRAS的表达呈负相关。报告基因实验证明miR-548d可以直接打靶KRAS。Western blot指出miR-548d可以抑制KRAS的表达。最后MTT和Transwell实验指出miR-548d可以抑制MG63细胞的增殖与迁移。结论:miR-548d可以通过打靶KRAS抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移。     

脊柱巨细胞型骨肉瘤1例

正巨细胞型骨肉瘤(giant cell rich osteosarcoma,GCRO)是骨肉瘤的一种少见类型,影像学及组织学上易误诊为骨巨细胞瘤,而发生于脊柱GCRO极为罕见,查阅国内外文献未见报道。现将我院手术病理证实诊断GCRO 1例报道如下。女,45岁,半年前因腰部疼痛、肿胀,休息后可缓解,1个月前因腰部疼痛加重入院就诊,无外伤史。查体:患者仰卧脊柱生理弯曲存在,T_(12)棘突有压痛,其余各棘旁无明显压痛、叩     

树突状细胞疫苗抗骨肉瘤免疫治疗

树突状细胞(dendritic cell, DC)是体内最重要、功能最强大的专职抗原递呈细胞(APC),且是机体内唯一能激活初始T淋巴细胞的APC,可有效触发诱导细胞毒性T细胞免疫应答。DC参与抗原摄取、加工处理和递呈。以DC为主特别DC疫苗的抗肿瘤疗法已取得令人鼓舞的进展。然而,DC疫苗目前还存在一定的局限性。骨肉瘤抗原异常表达、MHC-I分子下调以及肿瘤微环境中高浓度免疫抑制因子的存在等原因使得骨肉瘤发生免疫逃逸,限制了DC疫苗的应用。本文现就以DC疫苗及骨肉瘤相关免疫治疗基础进行综述。     

两种清创方法治疗GustiloⅢ型开放性骨折的疗效和卫生经济学观察

目的 比较水动力清创系统清创与常规清创在开放性四肢骨折清创中的效果及经济实用性.方法 采用回顾性队列研究,选择2017年12月—2019年12月空军军医大学第二附属医院骨科收治接受清创植皮或皮瓣治疗的开放性骨折(GustiloⅢ型)患者46例,根据清创方式不同分为水刀清创组(21例)和常规清创组(25例).水刀清创组男性16例,女性5例;年龄38～78岁,平均59.4岁;常规清创组男性22例,女性3例;年龄29～79岁,平均52.8岁.观察比较两组患者术中出血量,首次清创所用时间,术前及术后白细胞、中性粒细胞、超敏C反应蛋白、白蛋白水平的变化,创面准备时间,创面准备所需清创次数,住院时间、费用及感染率.结果 清创后1、3、7d,常规清创组患者白细胞、中性粒细胞和超敏C反应蛋白水平显著高于水刀清创组.水刀清创组首次清创时间(27.2±9.5)min、创面准备时间(13.2±4.5)d、住院时间(22.5±4.1)d均显著少于传统清创组[(40.4±6.8)min,(15.8±4.2)d,(24.8±3.8)d,P<0.05].两组患者术中出血量、白蛋白下降程度、住院费用及感染发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 水刀清创可明显缩短开放性骨折患者的手术时间,减轻炎症反应,减少清创次数,缩短创面准备时间和住院时间,可能减少术中出血量、白蛋白损失和增加住院费用.两种清创方式感染率方面无显著差异,若能降低水刀使用成本,水动力清创系统有望取代传统清创方法,成为开放骨折患者的常规清创手段.