柚皮苷对骨肉瘤细胞生物学功能的影响

目的:探讨柚皮苷对骨肉瘤细胞生物学功能的调节作用。方法:将骨肉瘤MG63细胞分成三组,分别用NaCl（对照组）、10 μmol/ml和20 μmol/ml浓度的柚皮苷作用于细胞,通过MTT实验观察不同时间不同浓度的柚皮苷对MG63细胞增殖的作用。流式细胞术分析10 μmol/ml和20 μmol/ml柚皮苷对MG63细胞细胞周期的影响。通过Western blot检测不同浓度柚皮苷对增殖相关蛋白（Cyclin D1）的调节作用。Transwell实验观察10 μmol/ml和20 μmol/ml柚皮苷对MG63细胞迁移能力的影响。通过Western blot检测不同浓度柚皮苷对侵袭转移相关蛋白（MMP2）的调节作用。结果:MTT检测结果发现10 μmol/ml和20 μmol/ml浓度的柚皮苷作用MG63细胞24 h后,对MG63细胞增殖的抑制率分别为（24.10±0.03）%和（46.94±0.03）%。流式细胞术结果发现柚皮苷可以对MG63细胞G1/S期的转导造成阻滞。Western blot结果指出,柚皮苷可以抑制Cyclin D1的表达。Transwell实验发现柚皮苷作用后可以显著抑制MG63细胞的迁移。Western blot检测发现,柚皮苷可以抑制MG63细胞中MMP2的表达。结论:柚皮苷可以抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移。     

miR-199a通过下调ITGA3抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移与侵袭

目的:探讨miR-199a对卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用及机制。方法:采用qRT-PCR和Western blot分别检测卵巢癌组织和细胞中miR-199a和整合素α3（integrin alpha 3，ITGA3）的表达。将miR-199a mimic转染入CAR3细胞后，双荧光素酶报告基因实验、Western blot检测miR-199a对ITGA3的调控作用；MTT和Transwell实验研究了miR-199a和ITGA3对CAR3细胞增殖、迁移与侵袭的作用。结果:卵巢癌组织和细胞中miR-199a表达降低（P＜0.01），ITGA3表达增加（P＜0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-199a与ITGA3 3'-UTR有结合作用。Western blot结果证实miR-199a可抑制ITGA3表达（P＜0.01）。miR-199a过表达抑制CAR3细胞增殖、迁移与侵袭（P＜0.01）；而过表达ITGA3能逆转miR-199a过表达的作用（P＜0.01）。结论:miR-199a抑制卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用可能与其通过下调靶基因ITGA3表达相关。     

miR-520b靶向DAD1调控肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的:探讨miR-520b和抗细胞凋亡因子（DAD1）对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:qRT-PCR和Western blot实验检测A498人肾癌细胞中miR-520b和DAD1表达。将miR-520b mimics或DAD1 siRNA转染至A498细胞，MTT和Transwell实验检测细胞活力、迁移和侵袭。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-520b和DAD1的靶向关系。将miR-520b mimics和pcDNA-DAD1共转染至A498细胞，检测细胞活力、迁移和侵袭。结果:在A498细胞中，miR-520b表达下调而DAD1表达上调。在A498细胞中过表达miR-520b或敲减DAD1，细胞活力下降，迁移和侵袭细胞数减少。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western blot实验结果表明，miR-520b可负调控DAD1蛋白表达。过表达DAD1可逆转miR-520b对A498细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:miR-520b能够通过靶向调节DAD1表达抑制A498细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-637抑制结肠癌HCT116细胞生长和迁移的机制研究

目的:分析miR-637对结肠癌HCT116细胞生长和迁移的影响。方法:分别构建miR-637过表达或者低表达的结肠癌HCT116细胞系。通过MTT方法检测miR-637对细胞增殖的作用,PI（propidium iodide）染色检测miR-637对细胞周期的影响,Annexin V-FITC/PI染色检测miR-637对细胞凋亡的作用。Western blot检测miR-637对细胞中CDK4和Bcl-2的影响。Transwell实验检测miR-637对细胞迁移的作用,进一步通过Western blot检测miR-637对细胞中MMP2的影响。结果:miR-637抑制HCT116细胞的增殖,抑制G1/S期进程,促进细胞凋亡,Western blot结果显示,miR-637抑制CDK4和Bcl-2在HCT116细胞中的表达。Transwell实验指出,miR-637抑制细胞的迁移,Western blot结果指出miR-637抑制MMP2在HCT116细胞中的表达。结论:miR-637可以通过抑制CDK4、Bcl-2和MMP2的表达抑制HCT116细胞的生长和迁移。     

miR-219调控PRKCI表达在舌鳞状细胞癌中作用和机制

目的 探讨PRKCI与miR-219表达的相关性以及对舌鳞状细胞癌的细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法 利用双荧光素酶报告基因实验对预测的靶基因进行验证, 用qRT-PCR和Western blot实验检测外源过表达miR-219对舌鳞状细胞癌细胞中转染的PRKCI基因和蛋白表达的影响。最后在过表达miR-219的稳转细胞系中再过表达PRKCI, 利用MTT法、细胞平板克隆实验、划痕实验和Transwell小室法分析PRKCI对miR-219抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖、克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力的逆转效果。通过qRT-PCR法检测舌鳞状细胞癌组织中PRKCI基因的表达情况并进一步分析PRKCI和miR-219之间的关系。结果 通过生物信息学分析预测得到miR-219下游靶基因为PRKCI。双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-219能够降低野生型PRKCI报告基因载体的荧光活性。此外qRT-PCR实验和Western blot实验也显示miR-219能够下调PRKCI在舌鳞状细胞癌细胞中的表达。MTT结果显示过表达PRKCI能够逆转miR-219对舌鳞状细胞癌细胞增殖活性的抑制效应, 进一步通过细胞平板克隆实验、划痕实验以及Transwell实验证明PRKCI过表达能够逆转miR-219对TSCC细胞增殖、侵袭和转移的抑制效应。结论 miR-219通过直接靶向PRKCI、负调控PRKCI的表达发挥抑制肿瘤的作用。在舌鳞状细胞癌组织中, miR-219与PRKCI的表达呈负相关。     

miR-185通过靶向调控CDC42基因表达抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖和迁移

目的： 分析miR-185以及细胞分裂周期蛋白42 （CDC42）在骨肉瘤组织和细胞中的表达情况,初步探究miR-185是否通过调控CDC42影响骨肉瘤MG63细胞的增殖与迁移。 方法： 选取2020年1月至2021年1月于衡水市第四人民医院经病理确诊为骨肉瘤的的28例患者的癌组织及癌旁组织,采用免疫组化法检测骨肉瘤组织中CDC42的表达,采用qPCR法检测骨肉瘤组织中miR-185的表达。双荧光素酶报告基因实验验证CDC42基因与miR-185间的靶向关系。根据转染物不同,将MG63细胞分为miR-185 mimic组、miR-NC组、miR-185 inhibitor组、NC-inhibitor组、CDC42组（转染CDC42过表达载体）及阴性对照（NC）组,采用划痕愈合实验、CCK-8法和流式细胞术分别检测miR-185和CDC42表达对MG63细胞迁移、增殖和周期的影响。构建骨肉瘤MG63细胞裸鼠移植瘤模型,采用免疫组化法、qPCR法和WB法检测过表达或敲降miR-185对移植瘤组织中Ki67与CDC42表达的影响。 结果： 与癌旁组织相比,骨肉瘤组织中miR-185表达明显降低,而CDC42表达显著升高（均P<0.01）。CDC42是miR-185的靶基因。与对照组相比,miR-185 mimic组MG63细胞的迁移和增殖能力均受到抑制（均P<0.01）,而CDC42组MG63细胞的迁移和增殖能力均升高、细胞周期阻滞于S期（均P<0.01）;与miR-185组相比,miR-185+CDC42组MG63细胞的迁移和增殖能力均升高、S期细胞比例升高（均P<0.01）。与对照组相比,miR-18 5 mimic组移植瘤组织中Ki67、CDC42表达均显著降低（均P<0.01）,而miR-185 inhibitor组则相反（均P<0.01）。 结论： 在骨肉瘤组织中,miR-185呈低表达而CDC42呈高表达,miR-185能够通过负调控 CDC42的表达,从而抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖和迁移。     

人平足蛋白单抗SZ168抑制人骨肉瘤细胞增殖和迁移作用及机制研究

目的:探究人骨肉瘤细胞株MG63的平足蛋白（podoplanin,PDPN）表达及PDPN对MG63细胞增殖、迁移作用的影响和机制,在此基础上进一步研究抗人PDPN单抗SZ168体外抑制MG63细胞增殖和迁移的作用,判断SZ168靶向治疗骨肉瘤的临床应用潜力。方法:流式细胞术及蛋白免疫印迹实验检测PDPN在MG63中的表达。血小板聚集实验探究MG63细胞诱导血小板聚集作用,研究SZ168抑制血小板聚集作用及机制;CCK8实验检测活化血小板对MG63细胞增殖的影响;细胞划痕实验和Transwell实验探究活化血小板在MG63细胞迁移中的作用及机制。结果:MG63细胞高表达PDPN,该细胞能够诱导血小板聚集,且该作用能被SZ168呈剂量依赖性抑制,最大抑制率为（90.8±3.0）%。5×105个/mL及5×104个/mL活化血小板促进MG63细胞的增殖和迁移,与无血小板组相比差异有显著统计学意义（P＜0.01)。在CCK8实验中,与对照组比较, SZ168显著抑制MG63细胞增殖（P＜0.01）;在Transwell实验及细胞划痕实验中,与对照组比较,SZ168均显著抑制MG63细胞迁移（P＜0.05)。结论:高表达PDPN的MG63细胞与血小板表面的CLEC2受体相互作用使血小板活化,活化血小板进一步促进MG63细胞增殖和迁移。SZ168通过阻断PDPN-CLEC2轴,有效抑制MG63细胞的增殖及迁移,具有靶向治疗骨肉瘤的临床应用潜力。     

miR-141靶向YAP1抑制肝癌细胞HCC-LM3增殖、迁移和侵袭

目的:探究microRNA-141（miR-141）对肝癌细胞HCC-LM3增殖、迁移、侵袭的影响。方法:通过荧光定量PCR（qPCR）检测肝癌细胞系（HepG2、Huh7、HCC-LM3）与肝上皮细胞THLE-3中miR-141的表达量；免疫印迹试验（Western blot）分析Yes相关蛋白1（YAP1）的表达量。采用噻唑蓝（MTT）实验分析过表达miR-141或沉默YAP1对HCC-LM3细胞增殖的影响，Transwell实验检测细胞的侵袭、迁移能力。采用生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-141的靶基因。功能性实验检测过表达YAP1对miR-141调控的HCC-LM3细胞增殖、迁移、侵袭作用的影响。结果:qPCR和Western blot的结果表明，肝癌细胞系（HepG2、Huh7、HCC-LM3）中miR-141的表达量下调，YAP1的表达量上调；过表达miR-141和沉默YAP1可以抑制HCC-LM3细胞增殖、侵袭、迁移；生物信息学预测YAP1可能是miR-141的靶基因，双荧光素酶报告基因证实YAP1是miR-141的靶基因；过表达YAP1逆转miR-141对HCC-LM3细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:miR-141直接靶向YAP1抑制肝癌HCC-LM3细胞增殖、迁移、侵袭。     

miR-143-3p靶向KRAS阻滞PI3K/Akt信号通路抑制分化型甲状腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨miR-143-3p对分化型甲状腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:采用qRT-PCR检测miR-143-3p在30例分化型甲状腺癌组织和对应的癌旁组织,以及人分化型甲状腺癌细胞（TCP-1、FTC-133、SW579、BCPAP）和甲状腺滤泡上皮正常细胞（Nthy-ori3-1）中的表达水平。将miR-143-3p mimic和miR-143-3p mimic+pcDNA3.1-KRAS转染于FTC-133细胞中,采用CCK-8检测FTC-133细胞增殖活力;Transwell检测FTC-133细胞侵袭和迁移能力。双荧光素酶报告基因验证miR-143-3p和KRAS的靶向关系。Western blot检测蛋白的表达水平。结果:miR-143-3p在分化型甲状腺癌组织中的表达水平明显低于对应的癌旁组织。miR-143-3p在分化型甲状腺癌细胞系中的表达水平低于甲状腺滤泡上皮正常细胞的表达,尤其在FTC-133细胞中表达最低。过表达miR-143-3p显著抑制了FTC-133细胞增殖、侵袭和迁移能力。此外,双荧光素酶报告基因证实,KRAS为miR-143-3p的靶基因。进一步,过表达KRAS通过激活PI3K/Akt信号通路缓解了仅过表达miR-143-3p对FTC-133细胞增殖、侵袭和迁移能力的抑制作用。结论:过表达miR-143-3p通过靶向KRAS且阻滞PI3K/Akt信号通路,进而抑制分化型甲状腺癌细胞恶性生物学行为。     

沉默 H19对骨肉瘤细胞系 MG63增殖、侵袭的影响

目的：研究长链非编码 RNA H19对骨肉瘤 MG63细胞增殖、侵袭的影响。方法：RNA 干涉技术沉默MG63细胞中 H19,荧光实时定量 PCR（RT －qPCR）检测骨肉瘤 MG63细胞中 H19的表达情况;流式细胞术检测细胞周期的变化;MTT 实验检测沉默 H19表达对细胞增殖的影响;Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果：H19－siRNA 可有效沉默 H19在骨肉瘤细胞 MG63中的表达,沉默 MG63细胞中 H19的表达可以明显抑制骨肉瘤细胞的细胞周期,降低骨肉瘤细胞的增殖、侵袭能力。结论：H19在骨肉瘤的发生发展及侵袭中发挥重要作用。     

miR-182-5p通过靶向调节KLF7抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究miR-182-5p对人骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法:用qRT-PCR检测法比较人骨肉瘤细胞系（U2OS、MG63、SAOS2）、人正常细胞和人成骨细胞（HFOB1.19）中miR-182-5p的表达水平。转染miRNA模拟物或抑制剂或模拟物+KLF7,以转染miR-182-5p表达的上调或下调。通过EDU、迁移分析和侵袭分析来检测细胞功能。双荧光素酶报告分析检测miR-182-5p与KLF7的关系,蛋白质印迹分析检测KLF7的表达。结果:miR-182-5p在骨肉瘤细胞系中被下调。miR-182-5p过表达抑制肿瘤生长、迁移和侵袭。随后的研究显示,KLF7是骨肉瘤细胞中miR-182-5p的直接和功能靶点。miR-182-5p通过调节KLF7来抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。结论:miR-182-5p通过靶向调节KLF7而起到抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用。     

miR-152通过调节AKT-ERK信号通路对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨miR-152对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响。方法:通过实时定量PCR法检测miR-152在骨肉瘤组织和细胞中的表达;在骨肉瘤细胞中进行miR-152过表达后,MTT联合克隆形成法检测细胞增殖的变化;划痕法考察miR-152对骨肉瘤细胞迁移的影响;Western blot法检测骨肉瘤细胞中AKT-ERK的表达;免疫组化方法分析骨肉瘤组织和癌旁组织中AKT-ERK蛋白的表达。结果:相比于癌旁组织以及成骨细胞,miR-152在人骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞中表达有不同程度降低,其中在U2OS细胞中降低最为显著（P<0.01）;在U2OS细胞中过表达miR-152,72 h后细胞增殖能力明显降低（P<0.01）;同时,骨肉瘤细胞的迁移率也显著降低（P<0.01）。AKT-ERK蛋白在骨肉瘤组织和细胞中高表达,miR-152能够降低AKT-ERK表达及其磷酸化。结论:miR-152作为一种抑癌小RNA,其能够通过调节AKT-ERK通路,从而抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移。     

miR-139-5p靶向GPR56抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:研究miR-139-5p对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测软骨肉瘤细胞中miR-139-5p、GPR56的mRNA表达;Western blot检测细胞中GPR56的蛋白表达;将miR-139-5p组（转染miR-139-5p mimics）、miR-NC组（转染miR-NC）、si-NC组（转染si-NC）、si-GPR56组（转染si-GPR56）、miR-139-5p+pcDNA3.1组（miR-139-5p mimics和pcDNA3.1共转染）、miR-139-5p+pcDNA3.1-GPR56组（miR-139-5p mimics和pcDNA3.1-GPR56共转染）,均以脂质体法转染至U-2OS细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;Transwell检测各组细胞的迁移、侵袭。结果:与人正常成骨细胞hFOB1.19相比,人骨肉瘤细胞U-2OS中miR-139-5p表达显著降低,GPR56表达显著升高（P＜0.05）。过表达miR-139-5p、敲减GPR56均可明显抑制U-2OS细胞增殖、迁移、侵袭;GPR56是miR-139-5p的靶点。过表达GPR56可逆转miR-139-5p对U-2OS细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:miR-139-5p可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向GPR56有关,将可为骨肉瘤的治疗提供新靶点。     

利多卡因通过调控lncRNA TTN-AS1/miR-524-5p表达对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究利多卡因对骨肉瘤细胞MG-63增殖、迁移和侵袭的影响,并探索其作用机制。方法:使用1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L浓度利多卡因处理MG-63细胞,MTT法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白表达,qRT-PCR检测长链非编码RNA TTN-AS1（TTN-AS1）和微小RNA-524-5p（miR-524-5p）表达,starBase软件结合双荧光素酶报告实验分析TTN-AS1与miR-524-5p的靶向关系。MG-63细胞中转染si-TTN-AS1、miR-524-5p或pcDNA-TTN-AS1（并进行10 mmol/L利多卡因处理）,观察细胞的增殖、迁移、侵袭。结果:不同浓度利多卡因明显提高细胞增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05）,显著减少迁移细胞数、侵袭细胞数和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）,均呈剂量依赖性。TTN-AS1可靶向调控miR-524-5p表达。抑制TTN-AS1表达与miR-524-5p过表达显著增加MG-63细胞的增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05）,明显降低迁移细胞数、侵袭细胞数和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）。TTN-AS1过表达逆转了利多卡因对MG-63细胞增殖、迁移、侵袭和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用,以及对miR-524-5p、p21蛋白表达的促进作用。结论:利多卡因通过调控lncRNA TTN-AS1/miR-524-5p表达抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移和侵袭。     

长链非编码RNA TUG1调控miR-138-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸调节基因1(TUG1)调控miR-138-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:在骨肉瘤细胞U-2OS中转染TUG1 siRNA和siRNA control，qRT-PCR测定干扰效果，MTT测定增殖，流式细胞术测定凋亡，Transwell小室测定细胞侵袭和迁移。starBase预测TUG1与miR-138-5p有结合位点，双荧光素酶报告载体鉴定靶向调控关系。将miR-138-5p抑制物和TUG1 siRNA共转染至骨肉瘤细胞中，测定干扰miR-138-5p对下调TUG1的骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果:转染TUG1 siRNA后的骨肉瘤细胞中TUG1表达水平明显低于转染siRNA control后的细胞（P<0.05）。下调TUG1后的骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力降低，细胞凋亡率升高（P<0.05）。野生型TUG1荧光素酶报告载体与miR-138-5p共转染后细胞荧光素酶活性降低（P<0.05）。与转染TUG1 siRNA的细胞比较，miR-138-5p抑制物和TUG1 siRNA共转染后的细胞增殖、侵袭和迁移能力升高，细胞凋亡率降低（P<0.05）。结论:下调LncRNA TUG1表达通过调控miR-138-5p表达抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力并诱导细胞凋亡。