BRCA1 通过 Wnt/β-catenin 通路对非小细胞肺癌 H1650 细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨人乳腺癌易感基因1（breast cancer susceptibility gene 1, BRCA1）通过Wnt/β-catenin通路对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）H1650 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：采用 WB 法和 qPCR 法检测 NSCLC 细胞系A549、H1299、H1650和正常肺上皮细胞 BEAS-2B中BRCA1 mRNA和蛋白的表达水平。在H1650细胞中构建稳定BRCA1过表达细胞株（LV-BRCA1）,实验分为空白对照组（NC）、阴性对照组（LV-BRCA1-NC）、实验组（LV-BRCA1）和抑制剂组（LV-BRCA1+XAV-939）。用MTT法、划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力,WB法检测细胞中BRCA1、cyclin D1、β-catenin、c-Myc和Cox2蛋白的表达水平。结果：NSCLC细胞中BRCA1 mRNA和蛋白的表达水平均显著高于BEAS-2B细胞（均P<0.01）。上调BRCA1可显著提高H1650细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）,上调细胞中cyclin D1、β-catenin、c-Myc、Cox2和c-Jun蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）;XAV-939可显著下调过表达BRCA1细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）,并降低细胞中cyclin D1、β-catenin、c-Myc、Cox2和c-Jun蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）。结论：BRCA1通过激活Wnt/β-catenin通路促进NSCLC H1650细胞的增殖、迁移与侵袭,其有望成为NSCLC诊断标志物和治疗靶标。     

结缔组织生长因子对体外模拟微环境中人骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响

目的 :采用体外共培养技术模拟骨肉瘤微环境,研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)对人骨肉瘤143B细胞增殖和迁移的影响,并探讨其可能的分子作用机制。方法 :将重组腺病毒Ad CTGF导入骨肉瘤143B细胞,然后与骨髓基质细胞HS-5建立间接共培养体系。共培养3 d后,采用MTT法检测143B细胞的增殖能力变化,划痕愈合实验和Transwell小室法检测143B细胞的迁移能力变化,RT-PCR法及蛋白质印迹法检测CTGF和β-连环素(β-catenin)的表达水平变化,蛋白质印迹法检测磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(phosphorylated glycogen synthase kinase 3β,p-GSK3β)的表达水平变化。结果 :重组腺病毒Ad CTGF感染后,共培养体系中骨肉瘤143B细胞的CTGF过表达。在体外模拟的骨肉瘤微环境中,过表达CTGF能有效促进骨肉瘤143B细胞的增殖(P<0.01),且明显提高细胞划痕愈合率和穿膜细胞数(P<0.01)。过表达CTGF后,143B细胞中β-catenin、p-Akt和p-GSK3β表达水平均显著上调(P均<0.05)。结论 :在模拟骨肉瘤微环境中过表达CTGF可促进骨肉瘤143B细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/Akt和Wnt/β-catenin信号通路有关。     

血根碱对人肺腺癌细胞迁移、侵袭和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨血根碱对人肺腺癌细胞迁移、侵袭的影响及其初步分子机制。方法 MTT法检测血根碱对肺腺癌细胞活性的影响；利用划痕和Transwell小室实验分析血根碱对细胞迁移、侵袭的影响；RT-qPCR和免疫印迹法检测不同浓度血根碱对Wnt/β-catenin通路相关基因和核心蛋白的影响。结果 与空白对照组比，血根碱（1~10 μmol/L）呈浓度-时间依赖性地抑制人肺腺癌细胞的活力（P<0.05）；低浓度1 μmol/L作用48 h后，A549和H1975细胞的迁移和侵袭能力明显减弱（P<0.01）；血根碱（1、2.5、5 μmol/L）可显著下调Wnt/β-catenin通路中核心分子β-catenin及上游磷酸化GSK3β、DVL2蛋白表达，进而抑制下游靶基因TCF/LEF，CyclinD1的mRNA水平（P<0.05），并呈一定的浓度依赖性。结论 血根碱可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路起到抑制人肺腺癌细胞迁移、侵袭的作用。     

miRNA-95在骨肉瘤组织中的表达及其对MG-63细胞增殖和侵袭的影响

目的：研究miRNA-95在骨肉瘤组织和细胞株中的表达情况及其对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡、细胞周期和侵袭 能力的影响。方法：以实时荧光定量PCR检测15例骨肉瘤组织及其癌旁组织（标本收集自2015年1月至2018年1月青岛市海 慈医疗集团外科手术的病例）和骨肉瘤细胞株（MG-63、 U2OS、143B和HOS）与正常人成骨细胞株hFOB1.19中的miRNA-95表 达。利用Lipofectamine 2000将miRNA-95 mimics和miRNA-95 inhibitors分别转染至人骨肉瘤MG-63细胞株中，并设置miRNANC对照组，CCK-8法检测各组细胞增殖活力变化，流式细胞术检测各组细胞周期和凋亡变化，Transwell方法检测各组细胞侵袭 能力变化，双荧光素酶活性实验检测并验证miRNA-95在MG-63细胞中的靶向基因。结果：miRNA-95在人骨肉瘤组织中的表 达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）， 在MG-63、 U2OS、143B和HOS细胞中的表达水平显著高于hFOB1.19，且在MG-63细胞中表 达水平最高（P<0.01）。与miRNA-NC对照组相比，miRNA-95 mimics组中MG-63细胞的增殖活力显著上升、细胞凋亡率显著下 降而侵袭率显著上升（均P<0.01）、 而miRNA-95 inhibitors组中MG-63细胞增殖活力显著下降、细胞周期被阻滞、细胞凋亡率显著 上升而侵袭率显著下降（均P<0.01）；miRNA-95在骨肉瘤MG-63细胞中靶向上皮膜蛋白-1（epithelial membrane protein-1，EMP-1） 基因发挥作用。结论：miRNA-95在人骨肉瘤组织和细胞中均呈高表达，抑制骨肉瘤MG-63细胞中miRNA-95表达能够促进细 胞凋亡进而抑制细胞增殖、细胞周期及侵袭能力，该作用可能通过靶向EMP-1基因而发挥。     

银杏内脂B对人骨肉瘤Saos-2细胞的抑制作用研究

目的 探讨银杏内脂B（GB）对骨肉瘤（OS）细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响以及潜在机制。方法 将人骨肉瘤Saos-2细胞分别在含300、600和1200 μmol/L GB的培养液中培养24、48和72 h,采用CCK-8法检测Saos-2细胞的增殖情况,流式细胞仪检测Saos-2细胞凋亡率,Transwell小室迁移与侵袭实验检测GB对Saos-2细胞迁移和侵袭能力的影响;提取GB处理后Saos-2细胞的mRNA和蛋白,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测Bcl-2、Bax、MMP-2和MMP-9的基因及蛋白表达水平,Western blotting法检测Erk和Akt磷酸化及cleaved-caspase-3水平。结果 GB能明显抑制Saos-2细胞的增殖,且呈时间和浓度依赖性,600和1200 μmol/L GB可诱导Saos-2细胞凋亡,GB对Saos-2细胞的迁移及侵袭的抑制作用呈浓度依赖性;GB可升高Bax mRNA和蛋白水平,但降低Bcl-2、MMP-2和MMP-9的mRNA和蛋白水平;高浓度GB能抑制Erk和Akt的磷酸化且升高cleaved-caspase-3水平。结论 GB具有抑制Saos-2细胞增殖及迁移侵袭和诱导细胞凋亡作用,其机制可能与抑制Erk和Akt磷酸化有关。     

石斛酚通过NF-κB/PRL-3 通路抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭

[摘要] 目的: 探讨石斛酚对人成骨肉瘤U20S 细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用及其分子机制。方法：用不同质量浓度（10、25、50、75、100、150 μmol/L）的石斛酚处理U20S 细胞24、48 h 后,用CCK-8 法检测石斛酚对U20S 细胞增殖能力的影响。Transwell 实验检测25、50 μmol/L的石斛酚对U20S 细胞迁移、侵袭能力的影响,在脂多糖（LPS）诱导U20S 细胞炎症反应的基础上,再以石斛酚处理,qPCR、WB法分别检测U20S细胞中NF-κB（p65）、TNF-α、IL-6、PRL-3 mRNA和蛋白的表达水平。结果：不同质量浓度的石斛酚作用不同时间对肉瘤细胞U20S 增殖均具有抑制作用（P<0.05 或P<0.01）;25、50 μmol/L的石斛酚能够明显抑制骨肉瘤U20S细胞的迁移及侵袭能力（均P<0.01）,同时能够抑制细胞中NF-κB、TNF-α、IL-6、PRL-3 等蛋白的表达（P<0.05 或P<0.01）;LPS诱导后,U20S 细胞中NF-κB、TNF-α、IL-6、PRL-3 mRNA和蛋白表达水平均显著升高（均P<0.01）,25、50 μmol/L的石斛酚处理后均能够降低U20S细胞中NF-κB、TNF-α、IL-6、PRL-3 mRNA和蛋白的表达水平（P<0.05 或P<0.01）。结论：石斛酚对骨肉瘤U20S细胞增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,其作用机制可能与调控NF-κB/PRL-3 信号通路有关。     

Zometa对骨肉瘤细胞中MMP-9、TIMP-1及COX-2表达的影响

目的 探讨唑来膦酸(Zometa)对骨肉瘤细胞中MMP-9、TIMP-1及COX-2表达情况的影响.方法 应用细胞增殖实验、细胞凋亡实验、细胞迁移和侵袭实验,研究Zometa对骨肉瘤细胞U2OS的影响;应用WB和qRT-PCR,研究Zometa对骨肉瘤细胞内COX-2、MMP-9和TIMP1蛋白和mRNA表达的影响.结果 Zometa抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,促进骨肉瘤细胞凋亡,且这些影响都存在剂量依赖性;经不同浓度Zometa处理后,骨肉瘤细胞内COX-2、MMP-9 蛋白和mRNA表达水平随浓度的增加而逐渐降低,TIMP-1 蛋白mRNA表达水平随浓度的增加而逐渐升高,且都存在剂量依赖性.结论 Zometa通过调节COX-2、MMP-9和TIMP1在细胞内的表达来影响骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可作为治疗恶性骨肿瘤的药物,且对患者预后情况的改善有一定的价值.     

STIM1在骨肉瘤细胞增殖和转移中的作用及机制研究

目的:探究STIM1对骨肉瘤细胞143B增殖和转移的作用及其具体机制研究。方法:使用shRNA构建STIM1敲减的143B稳转细胞株;通过实时荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测细胞敲减效率,通过克隆形成实验和CCK-8检测STIM1对骨肉瘤细胞143B增殖的影响;通过Transwell实验观察STIM1对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot实验检测基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的蛋白水平变化。结果:将STIM1从骨肉瘤细胞中敲减之后,细胞的增殖能力明显下降,差异具有统计学意义（P＜0.05）;STIM1的敲减能够有效抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力,差异具有统计学意义（P＜0.05）,并且能够下调细胞中基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的蛋白表达量。结论:STIM1的敲减可以有效下调MMP-2和MMP-9的蛋白水平,从而抑制骨肉瘤的细胞增殖、迁移和侵袭,其可能成为骨肉瘤新的治疗靶点。     

塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭的影响,阐明TPD7抑制细胞迁移和侵袭可能的作用机制。方法:采用细胞划痕法、Transwell小室侵袭法检测MCF-7和ZR-75-30细胞的迁移和侵袭。采用Western blot法检测MMP9、β-catenin及c-Myc的蛋白表达。RT-PCR法检测β-catenin及c-Myc的mRNA表达。结果:TPD7对MCF-7细胞和ZR-75-30细胞迁移和侵袭均有显著抑制作用,且下调MMP9、β-catenin、c-Myc的蛋白表达和mRNA表达,呈剂量依赖性。结论:TPD7抑制乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭,可能是通过Wnt信号通路抑制上皮-间质转化。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管贲门癌切除术黏膜层单层吻合法疗效分析

目的探讨食管、胃及空肠黏膜单层吻合法预防吻合口瘘、吻合口狭窄及返流性食管炎的效果.方法 1996年3月～2002年8月手术治疗食管癌235例,贲门癌195例,采用食管-胃及空肠黏膜延长、黏膜单层缝合法.结果术后10 d X线吞钡照片示钡剂通过顺畅,吻合口直径1.5～2 cm.术后随访1年,吞咽顺利,未见吻合口狭窄.结论该术式吻合口径宽,对预防吻合口瘘、狭窄及返流性食管炎效果显著,是食管及胃肠吻合较为理想的方法.     

12例子宫颈残端癌治疗分析

目的：探讨子宫颈残喘癌的预防和治疗。方法：1986年5月到1992年7月，我院共收治经病理证实的子宫颈残端癌12例。所有病人均在外院接受过子宫次全切除术。Ⅰ期2例，Ⅱ期4例，Ⅲ期6例。根据期别、组织学类型、解剖特点，治疗采用单纯手术，手术加放疗；单纯放疗、体外加后装腔内放疗；放疗加化疗。结果：全组7例存活，存活率58.3％，5例死亡中4例死于肿瘤，1例第8年死于其它疾病。结论：子宫颈残端癌预防的关键在于子宫次全切除前宫颈细胞学或病理证实无病变，术后严密随诊。治疗方法主要是放射治疗，部分全盆大野，盆腔四野加个体化后装腔内治疗。     

少见部位骨巨细胞瘤的X线影像分析

目的统计分析一组少见部位骨巨细胞瘤的Ｘ线影像表现,对易与之混淆的４种骨病提出鉴别诊断,以加深认识。方法搜集经手术、病理证实的少见部位骨巨细胞瘤４８例Ｘ线平片、ＣＴ和动脉造影片资料进行回顾性分析。结果表现为囊状膨胀性骨质破坏３０例,且内多有肥皂泡沫状表现;溶骨性骨质破坏１０例;骨外有软组织肿块,骨塌陷变扁伴局部膨出４例;侵犯邻骨４例;骨质增生硬化３例;异常血管及“肿瘤染色”３例。结论Ｘ线平片对少见部位骨巨细胞瘤诊断具有重要价值,ＣＴ优于平片,动脉造影有助于诊断与制定治疗方案。