利用猴模型开展神经疾病细胞及基因治疗的研究进展

非人灵长类动物与人类在生理构造、大脑结构与功能、生殖生理以及昼夜活动节律等方面均非常相似,因此其在神经系统疾病的机制研究和药物研发中具有显著而独特的优势。近年来,利用药物诱导、物理损伤以及基因工程技术,已逐步建立了多种神经系统疾病的猴模型,为开展细胞治疗、基因治疗以及新药研发提供了重要的实验模型。本文综述了神经系统疾病猴模型的特点以及在神经退行性疾病和遗传性神经发育疾病中的优势及其应用,阐述了利用猴模型开展神经疾病细胞及基因治疗的研究进展,期望对利用猴模型进一步探究疾病机制以及推进新疗法的临床前及临床研究提供参考。     

特应性皮炎的治疗进展

特应性皮炎(AD)是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病,以复发性湿疹性皮损为特征,伴有皮肤干燥和难治性瘙痒。AD发病机制复杂,可能与皮肤屏障功能障碍、遗传易感性、免疫功能紊乱的相互作用有关,严重影响患者及其家属的生活质量。以抗炎脱敏、免疫调节、恢复皮肤屏障为基础的传统AD治疗方案的短期疗效好,但不能预防疾病复发,且对部分难治性AD的疗效欠佳,对润肤剂、光疗法、中草药制剂、益生菌、生物制剂和基因疗法的研究有助于探索新的AD治疗方法。     

Triton X-100对脂质体介导的BMP-2基因转染大鼠BMSCs的作用

目的探讨Triton X-100对脂质体介导的BMP-2基因转染大鼠BMSCs的作用。方法 8周龄Wistar大鼠1只,雄性,体质量120 g。取Wistar大鼠股骨、胫骨骨髓,采用贴壁培养法分离培养BMSCs并鉴定。取第3代BMSCs,采用MTT法筛选Triton X-100适宜浓度。实验分成3组,实验组:BMP-2+脂质体+0.010%Triton X-100+BMSCs,常规转染组:BMP-2+脂质体+BMSCs,空白对照组:BMSCs+血清培养基。转染后48 h,倒置荧光显微镜观察各组绿色荧光蛋白表达情况;转染后72 h,采用实时荧光定量PCR检测BMP-2 m RNA表达。结果 0.010%Triton X-100既能使BMSCs保持一定的活力,又可达到一定的作用效果,故确定其为适宜浓度。转染后48 h,倒置荧光显微镜下见实验组和常规转染组均有绿色荧光蛋白表达,空白对照组无绿色荧光蛋白表达。转染后72 h,实验组BMP-2 m RNA相对表达量为5.94±0.12,常规转染组为4.99±0.08,差异有统计学意义(t=360.28,P=0.02)。实验组转染效率较常规转染组平均提高了19%。结论 0.010%Triton X-100可以促进脂质体介导的BMP-2基因转染大鼠BMSCs,并提高其转染效率。     

hBMP2/hVEGF165双基因腺病毒修饰BMSCs复合n-HA/PA66修复骨缺损影像学观察

[目的]探讨携带h BMP2/h VEGF165双基因重组腺病毒共修饰BMSCs复合多孔n-HA/PA66修复兔桡骨大段骨缺损在不同时相点影像学动态变化和临床影像评估的可靠性。[方法]选取40只成年新西兰大白兔,雄性,体重2.8~3.1 kg,采用完全随机法分为2大组,每组20只,手术制作15 mm双侧桡骨中段骨缺损模型。A1组:左侧骨缺损处不植入任何材料为空白对照组;A2组:右侧骨缺损处植入h BMP2/BMSCs/n-HA/PA 66人工骨材料;B1组:左侧骨缺损处植入BMSCs/n-HA/PA66人工骨材料;B2组:右侧骨缺损处植入h BMP2/h VEGF165/BMSCs/n-HA/PA 66人工骨材料。分别于术后2、4、8、12周进行X线、CT三维重建观察和甲苯胺蓝组织染色观察。[结果]B2组各个时期Lane-Sandhu法X线射线评分均高于其他各组,差异有统计学意义(P0.05),A2组优于B1组(P0.05),A1组最差(P0.05);且CT三维重建骨形成量和组织染色效果均优于同期其他各组。[结论]h BMP2/h VEGF165双基因重组腺病毒共修饰BMSCs复合多孔n-HA/PA66人工骨材料治疗兔大段骨缺损,影像学观察,直观、形象地显示了其持久、稳定、高效的骨修复作用,为基因治疗复合人工骨材料修复骨缺损提供了良好的实验依据。     

p53基因与涎腺肿瘤

涎腺肿瘤是口腔颌面部较常见的一类肿瘤,在其发生发展过程中,p53基因及其相关基因的改变起着重要作用,因此p53基因治疗被认为是提高治疗效果的很有希望的方法.本文就涎腺肿瘤中p53基因的突变情况及其与肿瘤诊断和治疗的关系作一综述.     

~(60)Co照射及低温保存对转基因细胞影响的分析

目的　观察经放射前后的转基因细胞Tca8113/TNF α的TNF α的分泌情况 ,为转基因细胞经致死剂量的放射线灭活作为“瘤苗”应用于临床前TNF α基因的有效表达提供依据。方法　利用基因转染技术 ,用逆转录病毒载体将肿瘤坏死因子基因 (TNF α基因 )转导入人舌癌Tca8113细胞 ,并获得表达 ;在此基础上 ,通过ELISA法分析转基因细胞Tca8113/TNF α在60 Co放射组及未放射组的TNF α分泌量的变化以及经液氮储存 4 8h、一周复苏后的TNF α分泌量的变化。结果　 (1) 60 Co放射组转基因细胞Tca8113/TNF α的TNF α的分泌量 (x±s) (pg/ml/ 10 6细胞 /2 4h)平均高达 (110± 5 6 2 ) ,而未转基因的Tca8113细胞的上清液中未检测到TNF α ,统计学上有明显的差异性 (P <0 0 1) ;(2 )经频率为 4 39 5cGy/min ,总剂量为 10 0 0 0cGy的60 Co放射后TNF α分泌量降低 ,但在 4～ 6d时有一分泌高峰 ;(3)转基因细胞Tca8113/TNF α经60 Co放射后在经 4 8h及一周的液氮内储存后TNF α能够分泌 ,其分泌量的变化趋势同储存前。 4 8h组和一周组之间无明显的统计学差异性。结论　转基因细胞Tca8113/TNF α作为“瘤苗”应用时 ,目的基因的表达可初步评价为有效     

BMP2诱导骨骼肌成骨的研究进展

20世纪90年代以来，组织工程技术不断发展，在组织工程化骨领域取得了较大进展，然而，迄今为止，组织工程化骨修复缺损，离临床的要求还有较大距离。目前认为，主要问题是种子细胞在一定传代后发生衰老而不能继续增殖。骨组织工程种子细胞多集中在骨髓基质干细胞的研究上，实际上机体骨髓中所含的基质干细胞数量非常有限^[1]，     

放射诱导调控序列的合成及其辐射诱导特性的研究

目的　合成放射诱导调控序列并鉴定其辐射诱导特性。方法　利用人工寡核苷酸片段合成含有 6个重复CArG元件的放射诱导调控序列 ,以绿色荧光蛋白 (GFP)作为报告基因转染Tca8113细胞检测其辐射诱导特性。结果　低剂量放射线照射可诱导这种人工调控序列增强GFP在Tca8113细胞中的表达 ,且 3Gy剂量最为明显 ,提高到放射前的 16 1%。结论　人工合成放射诱导调控序列在低剂量放射线照射下能明显增强其下游外源性基因的表达 ,为进一步研究放射 -基因治疗奠定了基础。