黄芩苷改善肿瘤缺氧微环境抑制乳腺癌移植瘤的生长＊

目的 通过观察黄芩苷对乳腺癌组织毛细血管通透性（Capillary Vessel Permeability，CVP）、赖氨酰氧化酶（Lysyl Oxidase，LOX）及血清丙二醛（Malondialdehyde，MDA）等相关指标的影响，探讨黄芩苷可能的抗乳腺癌作用机制。方法 通过在裸鼠皮下接种MDA-MB-231乳腺癌细胞株建立乳腺癌移植瘤模型；实验分为模型组、黄芩苷组、阿霉素组、黄芩苷+阿霉素组。于接种第7日开始：黄芩苷组每天灌胃黄芩苷水溶液（100 mg·kg^-1），连续14天；阿霉素组每3天腹腔注射一次阿霉素（5mg·kg^-1），共用药5次；模型组每天灌胃生理盐水（10 mL·kg^-1），连续14天；黄芩苷+阿霉素组每天灌胃黄芩苷水溶液（100 mg·kg^-1），连续14天，并每3天腹腔注射一次阿霉素5 mg·kg^-1，共5次。给药期间监测移植瘤体积；紫外可见分光光度计620 nm下测OD值来反映黄芩苷对肿瘤毛细血管通透性的影响；硫代巴比妥酸（Thiobarbituric acid，TBA）比色法检测黄芩苷对裸鼠血清中丙二醛（MDA）的影响；免疫组化染色法检测乳腺癌组织中赖氨酰氧化酶（LOX）的表达情况。结果 ①与模型组比较，黄芩苷组、阿霉素组、黄芩苷+阿霉素组瘤体重量均明显减轻（P<0.05）；黄芩苷+阿霉素组瘤体重量较阿霉素组明显减轻（P<0.05）。②与模型组比较，黄芩苷组降低乳腺癌组织毛细血管的通透性，而阿霉素组则增加肿瘤组织中毛细血管的通透性，差异均具有统计学意义（P<0.05）。③黄芩苷组能够明显抑制荷瘤裸鼠血清MDA的表达，与模型组比较差异有显著统计学意义（P<0.01）；阿霉素组促进MDA的表达，与模型组比较差异有统计学意义；黄芩苷+阿霉素组促进MDA的表达，与模型组比较差异无统计学意义。④与模型组比较，黄芩苷组裸鼠乳腺癌组织LOX的表达显著下调（P<0.01），阿霉素组肿瘤组织中LOX表达增加（P<0.05）；黄芩苷+阿霉素组能下调裸鼠乳腺癌组织LOX的表达，与模型组比较差异无统计学意义。结论 黄芩苷能够明显抑制乳腺癌移植瘤的生长，其机制可能与黄芩苷降低肿瘤组织毛细血管的通透性，抑制裸鼠血清中丙二醛、乳腺癌组织中赖氨酰氧化酶的表达，从而改变肿瘤缺氧微环境有关。     

黄芩苷对肝星状细胞iNOS/PUMA信号通路的影响

目的研究黄芩苷通过iNOS/PUMA信号通路促进肝星状细胞凋亡的作用。方法MTT检测细胞增殖抑制率,Western Blot检测iNOS、PUMA蛋白表达,real-time PCR检测PUMA mRNA表达,一氧化氮检测试剂盒检测NO含量,iNOS抑制剂L-NAME预处理后检测细胞增殖抑制率和PUMA表达,Hoechst 33342核染色检测细胞凋亡。结果50 mM黄芩苷引起肝星状细胞活化诱导性死亡;黄芩苷促进肝星状细胞PUMA mRNA、蛋白表达;iNOS抑制剂L-NAME预处理后PUMA表达降低、细胞凋亡减少。结论黄芩苷能通过iNOS/PUMA信号通路促进肝星状细胞凋亡。     

复方氟康唑凝胶对耐氟康唑假丝酵母菌的抗菌效果研究

目的 验证复方氟康唑凝胶对耐氟康唑假丝酵母菌的抗菌效果。方法 选用琼脂扩散法,比较复方氟康唑凝胶与氟康唑凝胶对耐氟康唑假丝酵母菌的体外抑菌效果;通过感染耐氟康唑假丝酵母菌大鼠治疗试验,比较复方氟康唑凝胶与氟康唑凝胶治疗效果。结果 复方氟康唑凝胶抑菌圈直径(18.55±0.03)mm（n=20）,氟康唑凝胶抑菌圈直径(7.12±0.01)mm（n=20）,差异具有统计学意义（P<0.05）;复方氟康唑凝胶治疗感染耐氟康唑假丝酵母菌大鼠15d的转阴率为80%,氟康唑凝胶为40%,差异具有统计学意义（P<0.05,n=15）;复方氟康唑凝胶抑制阴道灌洗液炎性细胞因子水平能力、减轻病变损伤程度明显高于氟康唑凝胶（P<0.05,n=15）。结论 复方氟康唑凝胶对耐氟康唑假丝酵母菌的抗菌效果肯定,较氟康唑凝胶具有优势。     

基于网络药理学方法赤芍-牡丹皮药对治疗中风作用机制探讨

目的:采用网络药理学的分析方法研究赤芍-牡丹皮经典药对治疗中风的分子作用机制。方法:基于中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)、药物与疾病数据库(Drug Bank)、赤芍-牡丹皮的疾病与化学成分靶点网络则分别由治疗靶标数据库(TTD)建立,而它的药效成分与靶点网络主要运用Cytoscape 3.7.0软件构建而成,并同时进行了网络拓补分析; 至于核心靶点对基因本体(GO)的功能富集则主要运用DAVID数据库完成,同时也对百科全书KEGG(基因组)通路的功能富集进行了研究。结果:网络拓补分析结果表明,最核心的药效成分可能为槲皮素、山奈酚、鞣花酸、黄芩苷,最核心的GO功能有活性氧代谢过程、脂多糖、核受体活性、细胞因子受体结合、细胞膜微区、囊腔作用等; 最核心的作用通路有VERF通路、Toll样受体通路、肿瘤坏死因子(TNF)通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶b(P13K-Akt)通路等。结论:本文基于网络药理学方法对赤芍-牡丹皮药对干预中风的作用机制进行了分析发现,赤芍-牡丹皮药对可能是通过VERF通路、Toll样受体通路、TNF通路、IL-17信号通路、P13K-Akt等通路协同作用发挥治疗缓解中风功效,上述预测结果可为赤芍-牡丹皮药对在中风治疗的药理作用研究及临床应用提供一定的理论依据。     

黄芩苷对心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制

目的:考察黄芩苷(BA)对心肌缺血再灌注损伤大鼠模型的保护作用机制。方法:体内通过线栓法建立缺血再灌注动物模型,利用H9C2细胞缺氧/复氧(H/R)建立体外模型。采用四导仪器检测各种动物心电图,检测各种动物血清心肌酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平、血清超氧化歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平。检测大鼠血清与细胞上清细胞因子水平。采用HE染色检测大鼠心脏病理学改变。采用蛋白印迹检测大鼠心脏与H9C2细胞MAPK/Nrf-2/HO-1/NF-κB信号蛋白表达水平。结果:黄芩苷能显著恢复心电图改变,逆转心脏病理学改变,降低大鼠CK、LDH水平,升高血清与细胞上清SOD活性,降低MDA水平,显著降低大鼠血清与细胞上清细胞因子水平,同时也显著逆转MAPK/Nrf-2/HO-1/NF-κB信号。结论:黄芩苷具有心脏保护作用与调节心脏氧化应激与炎症相关。     

黄芩苷对DSS诱导结肠炎小鼠Th22细胞及IL-22的影响

目的：观察黄芩苷对炎症性肠病小鼠模型Th22细胞比例及IL-22浓度的影响,通过体内和体外实验探讨黄芩苷治疗该病的免疫学机制。方法: C57BL/6小鼠用3.5%葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate）建立结肠炎小鼠模型,随机分成空白对照组、模型组、黄芩苷组。应用流式细胞术和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测各组小鼠Th22细胞比例和外周血血清IL-22的表达;分离小鼠脾脏淋巴细胞,用含黄芩苷（0、10、20、40 μmol·L^-1）培养基培养48 h, 应用流式细胞术检测各组小鼠淋巴细胞中Th22细胞比例。结果：黄芩苷在体内外实验中均降低Th22细胞比例与IL-22的表达。结论：黄芩苷能够在体外和DSS诱导的结肠炎小鼠体内抑制Th22的分化及IL-22的表达,提示黄芩苷对Th22介导的炎症性疾病具有较好的治疗潜力。     

黄芩甙对肾盂肾炎大鼠肾脏表面活性蛋白A表达的影响

目的：探讨正常及肾盂肾炎大鼠肾脏表面活性蛋白A（SP-A）的表达变化及黄芩甙对SP-A表达的影响。方法：将24只雄性Wistar大鼠随机分成4组,每组6只,A组：假手术＋生理盐水;B组：假手术＋黄芩甙;C组：模型＋生理盐水;D组：模型＋黄芩甙。用致肾盂肾炎大肠杆菌（uropathogenic E．coli）制备Wistar大鼠急性肾盂肾炎模型。采用免疫组化方法观察肾组织SP-A的表达,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法观察SP-A mRNA的表达变化。结果：假手术组肾组织SP-A蛋白主要表达于肾小管上皮细胞,以外髓质处较为明显。模型组中SP-A表达的肾小管数量明显增多,染色变深,其阳性表达率于造模后显著高于假手术组,SP-A mRNA表达显著增强（P〈0．05）,模型＋黄芩甙组中SP-A的表达较模型＋生理盐水组增强（P〈0．05）。结论：本实验证实了肾组织SP-A蛋白主要表达于小管上皮细胞,以外髓质处明显。急性肾盂肾炎模型大鼠的SP-A蛋白表达增高,SP-A mRNA表达增强。SP-A可能在急性肾盂肾炎的发病过程中起着重要的防御作用。     

黄芩苷调控活化Toll样受体4/核因子-κB信号通路对复发性流产小鼠的影响

目的:探讨黄芩苷对复发性流产小鼠的影响及作用机制。方法:参照Clark经典模型构建复发性流产小鼠,并将成功构建好的小鼠随机分为模型组和实验组,每组10只;同时建立正常妊娠小鼠模型10只作为对照组。于妊娠第2天,实验组灌胃0.4 mL/mg黄芩苷,模型组和对照组灌胃等量0.9%氯化钠注射液,1次/d,连续干预7 d。酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中激素水平及母胎界面中炎性反应递质水平;免疫组织化学检测小鼠子宫组织巨噬细胞分布情况;蛋白免疫印迹法检测各组小鼠子宫组织活化Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB、髓样分化因子88(MyD88)蛋白表达情况。结果:对照组、模型组和实验组小鼠母胎界面中TNF-α/IL-4为(2.78±0.36),(4.89±0.58)和(3.39±0.34),血清中E 2为(25.16±3.69),(17.56±4.52),(22.36±4.16)ng/L。小鼠子宫组织中分化抗原14(CD14)蛋白相对表达量分别为(9.36±2.34),(68.12±13.52),(33.46±2.85)%,子宫组织中TLR4蛋白表达量为(0.23±0.02),(1.25±0.33),(0.45±0.12),核因子-κB蛋白表达量为(0.59±0.14),(1.52±0.36),(0.78±0.25),MyD88蛋白表达量为(0.63±0.24),(2.34±0.22),(1.26±0.31),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芩苷可提高复发性流产小鼠雌激素水平,降低母胎界面中炎性状态,与抑制子宫内膜巨噬细胞浸润,调控TLR4-核因子-κB信号通路活性有关。     

黄芩苷对海人酸致痫小鼠海马x染色体连锁凋亡抑制蛋白表达的影响

目的探讨黄芩苷对海人酸诱导的小鼠癫痫持续状态后海马组织x染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）表达的影响。方法将90只ICR雄性小鼠随机分为对照组、癫痫持续状态（sE）组、黄芩苷治疗组,每组30只;采用侧脑室注入海人酸建立小鼠癫痫持续状态模型。通过苏木素一伊红（HE）染色观察黄芩苷对小鼠癫痫持续状态后海马神经细胞的形态学改变;应用免疫组化和Westernblot方法检测小鼠海马组织中XIAP的表达量。结果黄芩苷明显改善sE后小鼠海马组织的病理形态学,海马CA3区XIAP在sE后6h起逐渐增加,12h达高峰,24h有所下降;与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。黄芩苷治疗组海马XIAP蛋白表达在6h、12h和24h均高于sE组（P〈0．05）。结论黄芩苷对小鼠癫痫持续状态后海马神经细胞的保护作用,可能与其促进XIAP的表达有关。     

黄芩主要成分黄芩甙的测定及体外抑菌作用研究

目的 研究分析黄芩主要成分黄芩甙的测定方法及体外抑菌作用。方法 采用煎煮法、温浸法、超声波法、加碱温浸法、醇提法提取黄芩内的有效成分黄芩甙,对比黄芩甙提取率;采用滤纸片平板扩散法检测黄芩甙对不同菌群的抑菌活性;采用试管稀释法检测黄芩甙对不同菌群的最小抑菌浓度。结果 黄芩甙提取率由高到低的方法依次为加碱温浸法、醇提法、超声波法、煎煮法、温浸法;黄芩甙对不同细菌的抑菌活性由高到低依次为绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、嗜酸乳杆菌、沙门氏杆菌;黄芩甙对不同细菌的最小抑菌浓度由低到高依次为金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、枯草杆菌、大肠杆菌、嗜酸乳杆菌、沙门氏杆菌。结论 加碱温浸法是黄芩甙的最佳提取方法,黄芩甙对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌及大肠杆菌抑菌作用相对较强,对沙门氏杆菌抑菌作用相对较弱,具体作用机制有待进一步深入研究探讨。