罗汉果甜苷对体外人肝星状细胞活化和凋亡的影响

目的研究罗汉果甜苷对体外培养人肝星状细胞LX-2活化及凋亡的影响。方法体外培养LX-2,将其分为空白对照组、不同质量浓度的罗汉果甜苷干预组(80、160、240、320μg/mL),每组8瓶细胞,药物与细胞共同孵育24 h后,采用CCK-8试剂检测细胞增殖状态,用酶联免疫吸附法测定转化生长因子-β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原的蛋白分泌,用RT-PCR法检测TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA的表达。用流式细胞仪双染法检测细胞凋亡。结果 CCK8结果显示罗汉果甜苷各剂量组作用LX-2细胞24 h后,细胞增殖均明显降低(P<0.05);ELISA和RT-PCR结果表明,与空白对照组比较,罗汉果甜苷各剂量组可抑制LX-2中TGF-β1和Ⅰ型胶原的蛋白分泌;并能抑制TGF-β1和α-SMA的mRNA表达(P<0.05)。流式细胞检测结果显示罗汉果甜苷各剂量组亦可剂量依赖性显著增加LX-2凋亡率。结论罗汉果甜苷可通过抑制TGF-β1和I型胶原的蛋白及TGF-β1和α-SMA的mRNA的表达来抑制肝星状细胞活化,还能促进肝星状细胞凋亡,从而发挥抗肝纤维化的作用。     

黄芩苷对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞增殖、凋亡及侵袭性的影响

目的观察黄芩苷对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞增殖活性、凋亡指数、侵袭性及PCNA、CAS-3蛋白表达水平的影响,并探讨其可能机制。方法将对数生长期HXO-RB44细胞制成单细胞悬液接种于96孔培养板中,分为对照组及50,100,200μg/m L黄芩苷组并给予相应剂量药物处理,MTT法测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术测细胞凋亡指数,Transwell侵袭小室实验测细胞侵袭能力,Western Blot法检测PCNA、CAS-3蛋白表达情况。结果 MTT结果显示黄芩苷对HXO-RB44细胞增殖有明显抑制作用,且呈时间依赖性;流式细胞术结果显示黄芩苷各组中HXO-RB44细胞凋亡指数显著高于对照组;Transwell侵袭小室实验显示黄芩苷能明显降低HXO-RB44细胞的侵袭能力,均呈剂量依赖性;Western blot显示随着黄芩苷浓度的增加,PCNA蛋白表达逐渐下降,而CAS-3蛋白表达增加,呈剂量依赖性。结论黄芩苷可抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,并抑制其侵袭能力,其可能是通过调控PCNA、CAS-3蛋白的表达,激活相关细胞凋亡信号通路来完成的。     

川芎嗪对肝星状细胞的增殖及凋亡的影响

目的:考察川芎嗪对肝星状细胞的细胞周期与凋亡的影响,并探讨潜在的分子机制。方法:以MTS试验分析川芎嗪对肝星状细胞增殖的影响;3H-TdR渗入法分析肝星状细胞的DNA合成速度;以LDH释放实验检测川芎嗪的毒性;以流式细胞术检测肝星状细胞周期;以Western blot检测肝星状细胞内Cyclin D1、p21、p27、p53蛋白的表达;以免疫荧光染色检测各时间点p53的表达;以JC-1试剂盒检测肝星状细胞线粒体膜电位;以Western blot检测川芎嗪作用后的肝星状细胞内Bcl-2、Bcl-x L、Bak、Bax、cleavedcaspase 8、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3以及cleaved-PARP-1以及细胞质内Cyt c的表达。结果:MTS结果显示40μmol/L川芎嗪能显著抑制肝星状细胞活力;3H-TdR掺入法显示川芎嗪显著抑制肝星状细胞的DNA复制;LDH实验表明川芎嗪高达100μmol/L时可对肝星状细胞产生毒性;流式细胞术显示川芎嗪(10、20、40μmol/L)可诱导细胞周期停滞在G0/G1期;Western blot实验表明川芎嗪可抑制Cyclin D1而促进p21、p27和p53的蛋白表达;20μmol/L川芎嗪诱导p21与p27蛋白表达的作用可被p53抑制剂PFT削弱;JC-1线粒体膜电位检测结果显示川芎嗪能浓度(10~40μmol/L)依赖性地增强肝星状细胞绿色荧光强度;Western blot结果显示川芎嗪抑制Bcl-2和Bcl-x L表达而促进Bak、Bax、cleaved-caspase 8、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3以及cleaved-PARP-1以及细胞质内Cyt c的蛋白表达。结论:川芎嗪抑制肝星状细胞增殖并促进其凋亡。     

黄芩苷联合TRAIL对人肺癌细胞株A549增殖、凋亡的影响

目的:观察黄芩苷联合TRAIL对人肺癌细胞株A549增殖、凋亡的影响。方法:采用2mg/L、4mg/L、8mg/L黄芩苷和100ng/mLTRAIL单用或联用处理肺癌细胞株A549。利用MTT法检测各组细胞增殖,倒置荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法及Western blot法检测Survivin、X连锁凋亡抑制蛋白基因(XIAP)、死亡受体4(DR4)及死亡受体(DR5)mRNA及蛋白相对表达量。结果:相比较于对照组,黄芩苷和TRAIL单用或联用均能呈浓度依赖性抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡(P0.05),而黄芩苷和TRAIL联用比单用时细胞抑制率及凋亡率更高(P0.05)。相比较于对照组,黄芩苷组和TRAIL组A549细胞数明显降低,漂浮细胞数增多,Survivin及XIAP mRNA及蛋白表达量显著降低,DR5mRNA及蛋白表达量显著升高(P均0.05),而DR4mRNA及蛋白表达无明显差异。与黄芩苷组或TRAIL组比较,联用组A549细胞数明显降低,漂浮细胞数增多,Survivin及XIAP mRNA及蛋白表达量显著降低,DR5mRNA及蛋白表达量显著升高(P均0.05),而DR4mRNA及蛋白表达无明显差异。结论:黄芩苷联合TRAIL可协同抑制肺癌细胞株A549增殖,并促进凋亡,其作用机制可能与两者联用能增加死亡受体DR5的表达,进而抑制Survivin和XIAP蛋白表达有关。     

黄芩苷对Hela细胞凋亡的影响

目的探讨黄芩苷诱导Hela细胞的凋亡作用及对PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法培养Hela细胞后分为空白组、卡铂组(40μg/mL)及黄芩苷低、高剂量组(40、80μmol/L),处理24 h。MTT法检测细胞增殖,Annexinv-FITC/PI双染色和hoechst 33342染色检测细胞凋亡,Western blot法检测p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达。结果与空白组比较,黄芩苷(40、80μmol/L)能抑制细胞增殖(P<0.01),增加细胞凋亡率(P<0.01),抑制p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达(P<0.01),且细胞出现明显的染色质凝集、核萎缩、凋亡小体增多现象。结论黄芩苷可能通过下调PI3K/AKT/mTOR通路,从而具有抑制HeLa细胞增殖、促进凋亡的作用。     

抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞整合素信号及凋亡的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞增殖、凋亡的影响及整合素信号通路的下游信号分子FAK在其中的作用。方法:将传代培养的大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)与中药复方抗纤软肝颗粒药物血清(5%、10%、20%)共同培养48h后,应用MTT法测定细胞增殖;应用流式细胞仪测定细胞凋亡;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测FAK mRNA的表达。结果:抗纤软肝颗粒药物血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,20%药物血清组作用最强(P<0.05);流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物血清均可诱导HSC凋亡(P<0.05);抗纤软肝颗粒药物血清能够使HSC的FAK mRNA的表达下调。结论:抗纤软肝颗粒能够抑制HSC增殖及诱导凋亡HSC。其作用可能与其抑制整合素信号通路下游信号分子FAK mRNA的表达有关。     

苦参碱对肝星状细胞P75表达的影响

目的研究苦参碱对肝星状细胞P75表达的影响,探讨苦参碱促进肝星状细胞凋亡的可能机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞系rHSC-99,用不同浓度的苦参碱（0.05 mg/mL、0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/mL）干预培养,采用免疫组化和半定量RT-PCR方法检测各浓度组大鼠肝星状细胞的P75 mRNA及蛋白的表达。结果苦参碱明显促进肝星状细胞（HSC）的P75 mRNA及蛋白的表达。结论苦参碱诱导HSC凋亡的机制,可能与其促进HSC的P75的表达有关。     

川芎嗪对人结肠癌LoVo细胞增殖与凋亡的影响

目的研究川芎嗪对人结肠癌LoVo细胞增殖与凋亡的影响及作用机制。方法采用质量浓度为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/mL川芎嗪分别作用LoVo细胞24 h、48 h和72 h,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot分别检测细胞基因p53正向凋亡调节因子(PUMA)及Bax、Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果川芎嗪可有效抑制人结肠癌LoVo细胞的增殖,并诱导凋亡,且显示质量浓度时间依赖性(P<0.01);但川芎嗪对293T细胞的生长无显著性影响。质量浓度为1.0、2.0、4.0 mg/mL川芎嗪均能提高PUMA mRNA和蛋白表达,进而促进Bax mRNA和蛋白表达上调,同时下调抗凋亡基因Bcl-2 mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论PUMA及其下游信号通路介导了川芎嗪抑制人结肠癌LoVo细胞增殖及促凋亡作用。     

黄芩苷对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的基于STAT3/Bcl-2信号通路探究黄芩苷对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响。方法实验分为空白组及黄芩苷25,50,100,200,400μg/mL组,空白组用不含黄芩苷Gibco RPMI 1640培养基培养,黄芩苷各组采用相应浓度黄芩苷培养,分别处理结肠癌SW480细胞24 h后,采用CCK-8法、Edu染色法、Annexin V-FITC/PI法检测经上述处理细胞的增殖和凋亡情况,采用Western blot法检测人结肠癌SW480细胞中促进凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3和抑制凋亡相关蛋白Bcl-2以及转录相关蛋白STAT-3的表达情况。结果黄芩苷各组的细胞增殖率均明显低于空白组(P均0.05),且细胞增殖率随着黄芩苷浓度的增高而缓慢下降,当黄芩苷浓度达400μg/mL时,增殖率下降1/4;人结肠癌SW480细胞凋亡率有随着黄芩苷浓度的增加而逐渐升高的趋势。随着黄芩苷浓度的增加,Bax蛋白表达量逐渐增加,黄芩苷100,200,400μg/mL组明显高于空白组(P均0.05),但黄芩苷200μg/mL和400μg/mL组比较差异无统计学意义(P0.05);STAT-3和Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,黄芩苷50,100,200,400μg/mL组均明显低于空白组(P均0.05);黄芩苷50,100,200,400μg/mL组Caspase-3蛋白表达量呈下降趋势,但与空白组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论黄芩苷能诱导人结肠癌SW480细胞凋亡并抑制其增殖,且与黄芩苷浓度呈一定的量效关系,其机制可能与调节STAT3/Bcl-2通路有关。     

虎杖苷通过PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导人宫颈癌细胞凋亡的初步研究

通过观察虎杖苷对宫颈癌HeLa细胞体外生长的抑制作用,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。不同浓度的虎杖苷(50,100,150μmol·L~(-1))处理HeLa细胞后,采用MTT法检测虎杖苷对HeLa细胞增殖的抑制作用,AO/EB染色法荧光显微镜观察HeLa细胞凋亡的形态学变化;Annexin/PI双标记法检测HeLa细胞凋亡率;流式细胞仪分析HeLa细胞周期分布;RTPCR和Western blot法检测HeLa细胞中PI3K,AKT,mTOR,P70S6K的mRNA和蛋白表达。结果显示,虎杖苷显著抑制HeLa细胞增殖,且具有一定剂量依赖性;虎杖苷能够引起HeLa细胞发生S期阻滞,促进细胞凋亡,显著下调HeLa细胞中PI3K,AKT,mTOR,P70S6K的mRNA和蛋白表达。表明虎杖苷具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路及其下游基因蛋白表达有关。     

大黄素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察大黄素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及机制。方法:斑贴法培养大鼠主动脉VSMC,AngⅡ刺激VSMC建立细胞增殖模型。采用MTT法检测细胞增殖,观察大黄素(10,20,40,80μmol.L^-1)、亚硝基-精氨酸甲酯(L-NAME,100μmol.L^-1)对AngⅡ诱导VSMC增殖的影响。免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达;硝酸还原酶及化学比色法测细胞上清液中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平。半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VSMC iNOS mRNA的表达。结果:大黄素在10~80μmol.L^-1呈剂量及时间依赖性抑制VSMC增殖,但可被100μmol.L^-1的L-NAME部分抵消;大黄素能减少PCNA阳性细胞表达,升高NO,NOS,iNOS水平,增加iNOS mRNA的表达。结论:大黄素对AngⅡ诱导的VSMC增殖有抑制作用,抑制VSMC PCNA的表达,上调iNOS基因表达,升高NO水平可能是其发挥作用的机制。     

PUMA在EGCG调节肝癌细胞生长中的作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响及其可能作用机制。方法采用不同浓度的EGCG处理SMMC-7721细胞,以四唑氮蓝还原法(MTT)观察处理后细胞的生长情况,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测抑癌基因PUMA mRNA表达水平的变化,Western-Blot检测PUMA蛋白水平的表达。结果 EGCG处理后SMMC-7721细胞生长明显抑制,并且呈现时间、剂量依赖性,凋亡细胞比例明显上升。抑癌基因PUMA的mRNA水平和蛋白表达水平随着EGCG浓度的增加而升高。结论 EGCG可以明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,诱导其凋亡;其可能机制为上调抑癌基因PUMA的表达水平,从而促进细胞凋亡。     

半边旗中二萜类化合物5F诱导胰腺癌细胞凋亡机制的探讨

目的：观察研究半边旗中二萜类化合物5F（11a-羟基-15-氧-16-烯-ent贝壳杉烷-19酸）诱导人胰腺癌细胞株AsPC-1凋亡的效果及其机制。方法：用脂质体转染法将PUMA／siRNA导入AsPC-1细胞，G418筛选阳性细胞，获得稳定转染的阳性克隆。将转染载体的AsPC-1阳性克隆细胞和未转染载体的AsPC-1细胞分别暴露于浓度为8．875μmol·L^-1、37．5μmol·L^-1、142μmol·L^-1的5F中作用72h。RT—PCR检测不同组细胞经5F作用24h后的PUMA表达；MTF检测细胞生长抑制，流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡，Hoechst33258和PI双染色染色了解细胞凋亡的变化。结果：5F促进AsPC-1细胞凋亡，抑制细胞生长，并有明显的剂量依赖性，在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上调；当PUMA表达抑制后，受5F作用的细胞出现PuMA表达的降低，同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞的明显增殖。结论：5F促进体外AsPC—1细胞凋亡，并抑制其生长，其诱导凋亡与上调PUMA有关。     

Rac1通过调控JAK2/STAT1信号通路参与神经炎症

目的 研究BV2小胶质细胞上Ras相关C3肉毒菌素物底物1(ras-related C3 botulinum toxin,Rac1)参与神经炎症的作用.方法 采用脂多糖(lipopcly saccharide,LPS)诱导BV2小胶质细胞,加入Rac1抑制剂EHT1864,用MTT法检测细胞活力;G-LISA和免疫荧光...     

蜂毒素靶向PTEN/PI3K/Akt信号通路调控非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡

目的蜂毒素能否调控非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡,及其可能的作用机制。方法体外培养非小细胞肺癌细胞A549,在其中加入不同浓度蜂毒素进行干预(0、1、2、4 mg/L),MTT检测细胞增殖抑制率,Annexin V FITC/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot 检测细胞内PTEN、p-PI3K和p-Akt蛋白表达,RT-PCR检测细胞内p53和CyclinD1基因表达。结果蜂毒素能有效抑制A549细胞的增殖,促进细胞的凋亡,上调细胞PTEN的蛋白表达量,下调p-PI3K和p-Akt蛋白表达量,各浓度间差异具有统计学意义(P<0.05);蜂毒素能诱导p53 mRNA、抑制CyclinD1 mRNA的表达,各浓度间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论蜂毒素能通过调控PTEN/PI3K/Akt信号通路抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡。     

白藜芦醇抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的实验研究

目的 观察白藜芦醇对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心脏成纤维细胞(cFs)增殖的影响及其机制。方法 差速贴壁法培养新生大鼠cFs,在体外建立AngⅡ诱导的cFs增殖模型。采用MTT法检测细胞增殖, 分别观察一氧化氮合酶抑制剂(L NAME)、鸟苷酸环化酶抑制剂(ODQ)及白藜芦醇对AngⅡ诱导的cFs增殖的影响;采用心钠素(ANP)及脑钠素(BNP) mRNA表达检测细胞肥厚反应;放免法及ELISA法测细胞培养液中ANP及BNP水平;RT-PCR方法检测ANP、BNP mRNA表达;硝酸还原酶法测细胞培养液中一氧化氮(NO)水平;化学比色法测细胞上清液中一氧化氮合酶(NOS)水平; 放免法测定细胞内环磷酸鸟苷（cGMP）水平。结果 白藜芦醇25～100 μmol/L呈时间及剂量依赖性抑制AngⅡ诱导的cFs增殖,但这种作用可被L-NAME及ODQ部分阻断。白藜芦醇作用细胞后NO、cGMP水平升高, ANP、BNP水平降低, ANP、BNP mRNA的表达下降。结论 白藜芦醇在一定浓度范围对AngⅡ诱导的cFs增殖及细胞肥厚有抑制作用,上调NO－cGMP信号通路可能是其发挥作用的途径之一。     

苦参碱和氧化苦参碱对SMMC-7721细胞增殖及Stat3,Stat5基因表达的影响

目的：观察苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞SMMC-7721增殖及Stat3, Stat5基因表达的影响。方法：苦参碱和氧化苦参碱干预肝癌细胞SMMC-7721，MTT法检测其对肝癌细胞增殖的影响，双荧光染色观察细胞凋亡率，RT-PCR法检测其对SMMC-7721细胞Stat3, Stat5 mRNA的影响。结果：苦参碱和氧化苦参碱作用于肝癌细胞后，能显著抑制肝癌细胞增殖，促进其凋亡，并呈时间剂量依赖性；二者均能下调Stat3, Stat5 mRNA表达水平。以相同浓度苦参碱和氧化苦参碱比较，苦参碱对肝癌细胞Stat3, Stat5 mRNA下调作用更显著(P<0.05或P<0.01)。结论：苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞增殖，其机制可能与下调Stat3, Stat5的基因表达，抑制细胞信号传导通路有关。     

2,3,4',5-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside inhibits proliferation of vascular smooth muscle cells: involvement of NO/cGMP/PKG pathway

The proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) induced by injury to the intima of arteries is an important etiologic factor in vascular proliferative disorders such as atherosclerosis and restenosis. 2,3,4',5-Tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside (TSG), an active component extracted from Polygonum multiflorum, has been found to have an antiatherosclerotic effect. The aim of this study was to investigate the effects of TSG on platelet derived growth factor (PDGF)-BB induced VSMCs proliferation and to explore the possible mechanisms of such effects. Pretreatment of VSMCs with TSG significantly inhibited PDGF-BB-induced cell proliferation in a concentration-dependent but not time-dependent manner. In addition, flow cytometry analysis of the DNA content revealed blocking of the PDGF-BB-inducible cell cycle progression by TSG. On the contrary, an inhibitory effect of TSG on VSMCs proliferation and expression of cell cycle regulators were markedly attenuated by addition of an nitric oxide (NO) synthase inhibitor, a soluble guanylate cyclase inhibitor and a cyclic GMP (cGMP)-dependent protein kinase (PKG) inhibitor: N(G)-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME), 1H-[1,2,4] oxadiazolo [4,3-α] quinoxalin-1-one (ODQ) and KT5823, respectively. It was also demonstrated that TSG enhanced NO and cGMP formation through up-regulating endothelial NO synthase expression in VSMCs. The findings indicate that TSG inhibited VSMCs proliferation induced by PDGF-BB may involve the NO/cGMP/PKG signal pathway.