定量遗传毒性风险评估研究进展

传统方法上，通过成组遗传毒性试验后，在阐释和应用遗传毒性数据时均使用的是定性分析，而非基于剂量-反应关系的定量分析。然而近年来，随着高通量、高涵盖面、高准确度的试验方法的建立，以及定量遗传毒性风险评估策略的提出，化学物遗传毒性评估正面临着新的挑战和机遇。本篇综述讨论和总结了定量遗传毒性风险评估研究进展，包括以下3个内容：定量遗传毒性风险评估对遗传毒性试验方案/方法的要求；基于剂量-反应关系分析的定量评估方法；定量遗传毒性风险评估在管理毒理学中的意义。     

基于TK基因突变试验评价卷烟烟气的遗传毒性

目的采用TK基因突变试验研究卷烟烟气的遗传毒性。方法以L5178Y tk+/-3. 7. 2C小鼠淋巴瘤细胞为研究对象,3R4F参比卷烟的烟气为受试物,卷烟烟气经DMSO萃取后,设置试验剂量组为20、40、80、100、150μg/m L,另设二甲基亚砜溶剂对照组和环磷酰胺阳性对照组,对L5178Y tk+/-3. 7. 2C小鼠淋巴瘤细胞染毒处理及表达。结果在加S9的情况下,80μg/m L的突变频率是溶剂对照组3倍以上,实验结果呈阳性。结论在此次试验条件下,卷烟烟气具有TK基因致突变作用。     

大鼠体内Pig-a基因突变试验设计及统计学分析方法建议

目的对Pig-a基因突变试验设计和统计学分析方法提出建议。方法使用本实验室阴性对照历史数据128例,使用描述统计学获得数据分布特征。在此基础上对不同条件(检测细胞数目、每组动物数量、试验组数)进行模拟试验,提出可达到理想统计学功效的试验设计建议和统计学分析方法。结果阴性样本突变成熟红细胞(RBCs~(CD59-))和突变网织红细胞(RETs~(CD59-))均数为26.63×10~(-6)、35.85×10~(-6),标准差为27.71×10~(-6)、31.06×10~(-6)。频率分布图显示RBCs~(CD59-)和RETs~(CD59-)呈偏态分布,经对数转换后呈正态分布。在精度为2个标准差时,每样本1×10~6个RBCs和0.3×10~6个RETs的总体均数置信度分别为100%和92%;若RETs的检测数量扩大至1×10~6时,置信度可达100%。当检测最小差异为2倍时,使用每组5只动物的统计学功效均较低;当检测最小差异为4倍或5倍时功效为80%。结论本实验室对Pig-a基因突变时试验设计建议如下:①建议将数据进行log(10)转化后可进行参数检验,如方差分析。②建议选用年轻成年动物进行试验,大鼠约为6周龄。③进行流式细胞术检测时建议获取细胞量为:RETs1×10~6,RBCs5×10~7。④检测差异为4倍以上时,使用3个剂量组和1个阴性对照组可获得理想的统计学功效。⑤在剂量组为4组时(包括对照组),每组5只动物可基本满足试验要求,但为获得更良好的结果推荐使用的动物数量为每组6只或7只。     

成都市市售一次性塑料食品袋中邻苯二甲酸酯类迁移试验研究

目的掌握成都市市售一次性塑料食品袋中邻苯二甲酸酯类(phthalic acid esters,PAEs)的迁移特征。方法根据GB 31604.1—2015《食品安全国家标准食品接触材料及制品迁移试验通则》和GB 5009.156—2016《食品安全国家标准食品接触材料及制品迁移试验预处理方法通则》,采集成都市市售一次性塑料食品袋(聚乙烯材料,共12份)进行迁移试验。预期食物接触类别为所有类别(酸性食品、酒精性食品、油脂性食品),预期使用情况包括室温接触、较高温度短时间接触、长时间冷藏贮存(T≤70℃、t2 h,或T≤100℃、t15 min,或0～4℃、t30 d),因此选择GB 31604.1—2015中推荐的特定迁移升温加速试验(40℃、10 d),使用气相色谱-质谱法对三种食品模拟液(4%乙酸水溶液、10%乙醇水溶液和植物油)中7种PAEs含量进行检测。结果本批次一次性塑料食品袋样品的食品模拟液中共检出邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸异丁酯(DIBP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、邻苯二甲酸二异壬酯(DINP)、邻苯二甲酸二异癸酯(DIDP)6种PAEs,未检出邻苯二甲酸二甲酯(DMP)。其中,DBP、DEHP、DINP的平均迁移量较小,均低于国内外设立的相关限量标准;DEP、DIBP、DIDP是GB 9685—2016《食品安全国家标准食品接触材料及制品用添加剂使用标准》中不允许添加的物质,但仍有检出。结论鉴于PAEs的毒性可能存在累积效应,且此次调查仅为一次性塑料食品袋,还可能存在其他多种途径的暴露情况,因此长期不规范使用一次性塑料食品袋可能存在一定风险性。     

基于流式细胞术的大鼠骨髓网织红细胞微核实验方法的建立

  目的  建立并验证大鼠骨髓网织红细胞（reticulocytes,RETs）微核的流式细胞术检测方法。  方法  选用CD71-异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）标记骨髓网织红细胞,CD45-藻红蛋白（phycoerythrin,PE）标记白细胞,核酸染料DRAQ5标记DNA,建立骨髓微核的流式细胞术检测方法。SD大鼠随机分为甲基磺酸乙酯（ethyl methanesulfonate,EMS）、环磷酰胺（cyclophosphamide,CP）、N-乙基-N-亚硝基脲（ethyl nitrosourea,ENU）和秋水仙素（colchicine,COL）染毒组,各组大鼠按染毒剂量不同再分为4亚组,每亚组5只。以染毒剂量为0,作为各组溶剂对照。染毒方案为间隔24 h两次经口给药。末次给药后24 h采集双侧股骨骨髓,采用本研究建立的基于流式细胞术的骨髓微核检测方法测定骨髓中的RETs微核率和RETs比例,并同时使用人工显微镜下计数方法进行检测。  结果  成功建立基于流式细胞术的骨髓微核检测方法。采用该方法检测20只溶剂对照大鼠骨髓微核率（背景微核率）为0.83‰±0.12‰,采用人工显微镜下计数微核的方法检测的溶剂对照大鼠背景微核率为1.43‰±0.44‰,基于流式细胞术计数骨髓微核的方法背景微核率更低,且更为稳定。两种方法均可检测到EMS、CP、ENU、COL染毒后RETs微核率呈染毒剂量依赖性上升趋势,RETs比例呈染毒剂量依赖性下降。两种方法检测4种受试物诱导的RETs微核率相关性良好（相关系数为0.834 3～0.913 7）。  结论  本实验建立的基于流式细胞术的骨髓微核检测方法具有操作简便、灵敏快捷、背景微核率较低等优势,是人工微核计数方法的良好替代,可应用于化学物的遗传毒性评价。     

大鼠体内Pig-a基因突变试验的优化及ENU时-效关系和 量-效关系评估

目的 对大鼠Pig-a基因突变试验方法进行优化,并初步探讨阳性诱变剂N-乙基-N-亚硝基脲（ENU）在该实验中的时-效关系和量-效关系。方法 30只雄性SD大鼠随机平均分为5组,即溶剂对照组,ENU 10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg和80 mg/kg 4个剂量组,连续3 d经口灌胃染毒。分别于实验第0、15、30、45、60、75、90天尾静脉取血,分离红细胞,经Anti-CD59-APC和SYTO 13核酸染料标记后采用流式细胞仪分析CD59表型突变为成熟红细胞（RBCCD59-）率、CD59表型突变为网织红细胞（RETCD59-）率以及RET占总红细胞百分率。结果 ENU各组大鼠在染毒后第15~90天的RBCCD59-率呈现随时间和剂量反应性地增高。RETCD59-率随时间延长,ENU各组表现为先增后基本稳定伴小幅波动趋势,但均保持在较高水平,在染毒后30 d出现最高峰,在45 d时出现下降;同时,随着ENU剂量的增加,ENU各组RETCD59-率也随之增加。随时间延长,ENU各组大鼠RET百分率有所下降,30 d后呈现较为稳定的轻微波动,5组间RET%在各时间点处差异均无统计学意义。结论 本研究改良的大鼠Pig-a基因突变试验可进行快速检测,ENU短期（3 d）染毒诱导大鼠红细胞Pig-a基因突变具有时-效关系和量-效关系。     

丙烯酸-2-乙基己酯的遗传毒性研究

目的： 检测丙烯酸-2-乙基己酯的遗传毒性,为其安全性评价提供资料。方法：采用鼠伤寒沙门菌回复突变试验 (Ames试验),小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠淋巴瘤细胞TK基因突变试验检测丙烯酸-2-乙基己酯的遗传毒性。Ames试验设每皿0.08、0.4、2.0、10.0和50.0 μL剂量组,另设空白、溶剂、阳性对照;微核试验设350、700和1 400 mg/kg剂量组,另设溶剂、阳性对照;TK基因突变试验设12.5、25、50和100 μmol/L剂量组,另设溶剂、阳性对照。 结果：Ames试验中,加或不加S9的情况下,丙烯酸-2-乙基己酯对TA97、TA98、TA100和TA102菌株均显示致突变作用。微核试验中,雌雄鼠微核率均呈现剂量-反应关系;雄鼠高剂量组微核率与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);雌鼠各剂量组微核率与溶剂对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。TK基因突变试验中高剂量组突变频率与对照组比较,差异具统计学意义(P<0.05)。结论：在本实验条件下,Ames试验和TK基因突变试验均显示阳性结果,微核试验显示可疑阳性。丙烯酸-2-乙基己酯遗传毒性需结合其他检测系统综合评定。     

基于流式细胞术的大鼠外周血网织红细胞微核试验方法的建立

目的建立基于流式细胞术的大鼠外周血网织红细胞微核试验,检测阳性诱变剂甲基磺酸乙酯(ethyl methanesulphonate,EMS)和环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)在所建立的试验方法中的表现。方法使用CD71-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记大鼠外周血网织红细胞,核酸染料DRAQ5标记DNA,建立流式细胞术检测方案。采用该方案测定EMS和CP的遗传毒性时,将40只雄性SD大鼠随机分为8组,EMS染毒剂量为0、50、100、200mg/kg.bw,CP为0、5、10、15 mg/kg.bw,间隔24 h2次经口染毒。在给药前1 d和给药后24、48、72、96、120 h取尾静脉血,使用流式细胞术测定外周血网织红细胞和成熟红细胞微核率。结果本试验方法所得历史阴性对照成熟红细胞和网织红细胞背景微核率均数分别为0.04‰和0.42‰,标准差分别为0.02‰和0.18‰。在所建立的试验系统中观察到EMS及CP可诱导外周血网织红细胞微核显著升高。结论本实验室建立的基于CD71-FITC和DRAQ5双染的外周血流式微核技术操作简便快捷,背景微核率较低,检测结果稳定,在化学物的遗传毒性评价方面具有较大的推广价值和良好的应用前景。     

高尿酸血症动物模型研究进展

高尿酸血症是由于嘌呤代谢紊乱和/或尿酸排泄减少所引起的一组异质性疾病。近年来,高尿酸血症发病趋势不断升高,构建合理的动物模型是研究高尿酸血症发病机制及防治途径的基础。本文对目前常见的高尿酸血症动物模型的造模方法、机制和检测指标进行了综述,并对其中存在的问题进行了阐释。