定量遗传毒性风险评估研究进展

传统方法上，通过成组遗传毒性试验后，在阐释和应用遗传毒性数据时均使用的是定性分析，而非基于剂量-反应关系的定量分析。然而近年来，随着高通量、高涵盖面、高准确度的试验方法的建立，以及定量遗传毒性风险评估策略的提出，化学物遗传毒性评估正面临着新的挑战和机遇。本篇综述讨论和总结了定量遗传毒性风险评估研究进展，包括以下3个内容：定量遗传毒性风险评估对遗传毒性试验方案/方法的要求；基于剂量-反应关系分析的定量评估方法；定量遗传毒性风险评估在管理毒理学中的意义。     

Ames试验剂量反应关系的最小均方误差估计方法

Ames试验中剂量反应关系在高剂量区常受到毒性作用的影响,为在剂量反应关系的统计分析中消除或减少这一影响,目前常采用适应(adaptivc)方法。即由最高剂量组开始,逐组检验数据是否受到毒性作用的影响,如是则舍去这一组数据,直到发现余下的数据不受毒性作用的影响,再进行统计分析,     

白藜芦醇对小鼠的急性经口毒性和遗传毒性试验研究

目的：了解白藜芦醇的急性经口毒性和遗传毒性,为白藜芦醇的食用、药用安全性评价提供实验依据。方法：按照《GB 15193-2003食品安全性毒理学评价程序和方法》的规定,对白藜芦醇进行急性经口毒性测定,并通过Ames试验（每皿分别加入5000、1000、200、40、8μg白藜芦醇）、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠精子畸形试验（分别以7.500、3.750、1.875g/kg剂量的白藜芦醇给小鼠灌胃）对其遗传毒性进行评价。结果：白藜芦醇的急性经口最大耐受剂量〉15.0g/kg;3项遗传毒性试验结果均为阴性。结论：在本实验条件下,白藜芦醇对小鼠的急性经口毒性属无毒,未见遗传毒性作用。     

重组人乳铁蛋白的遗传毒性研究

目的：评价重组人乳铁蛋白的遗传毒性。方法：以重组人乳铁蛋白为受试物,按每皿62、185、556、1667、5000μg5个剂量进行Ames试验,按1.88、3.75和7.50g/kg进行小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微核试验和精子畸形试验,并设立对照组。结果：重组人乳铁蛋白各剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照菌落数的2倍,亦无剂量-反应关系;各剂量组PCE百分比均未少于阴性对照组的20%,微核发生率与阴性对照组比较差异均无统计学意义（P均〉0.05）;各剂量组小鼠精子畸形发生率均显著低于阴性对照组（P〈0.05）。结论：在本实验条件下,重组人乳铁蛋白未见遗传毒性。     

枇杷叶水提物的急性毒性和遗传毒性

目的：研究枇杷叶水提物（AEEJL）的急性毒性和遗传毒性。方法：采用急性经口毒性试验、Ames试验、哺乳动物骨髓微核试验及体外哺乳细胞染色体畸变试验对枇杷叶水提物进行急性毒性和遗传毒性研究。结果：急性经口毒性试验显示枇杷叶水提物对小鼠的半数致死量（LD₅₀）大于20.00 g/kg。Ames试验在剂量为8~5 000 μg/皿范围内,回变菌落数均未达到自发回变菌落数的2倍,亦无剂量-反应关系;微核试验在剂量为20.0、10.0和5.00 g/kg时微核细胞率均<3.0‰,与阴性对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05）;染色体畸变试验在剂量为625~5 000 μg/mL范围内,畸变细胞率均≤5.0%,与阴性对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：在本实验条件下,枇杷叶水提物属无毒级物质,未显示遗传毒性。     

大鼠多器官彗星试验方法的验证研究

目的：采用对氯苯胺、氯化钠、对乙酰氨基酚和庆大霉素4个不同作用机制的化合物，对已建立的大鼠多器官（肝、胃和肾）彗星试验方法进行验证。方法：SD雄性大鼠分别在0、24和45 h经口灌胃不同剂量的对氯苯胺[37.5、75和150 mg/（kg·d）]、氯化钠[500、1 000和2 000 mg/（kg·d）]、对乙酰氨基酚[20、100和500 mg/（kg·d）]，或肌肉注射庆大霉素[20、40和80 mg/（kg·d）]，各组均设置溶剂对照品，以及在24和45 h经口灌胃阳性对照甲基磺酸乙酯[EMS，200 mg/（kg·d）]，所有动物在末次给予受试物约3 h后经戊巴比妥钠麻醉放血处死，制备肝脏、胃和肾脏单细胞悬液后制片，再经裂解、解旋、电泳、中和、染色以进行彗星显像分析；对乙酰氨基酚处理的大鼠肝脏和庆大霉素处理的大鼠肾脏经10%福尔马林溶液固定后进行组织病理学检查。结果：与溶剂对照组比较，对氯苯胺处理组大鼠肝、胃和肾的尾部DNA百分率增加，并呈剂量-反应关系（P < 0.05）；氯化钠、对乙酰氨基酚和庆大霉素处理组大鼠肝、胃和肾的尾部DNA百分率与溶剂对照比较，差异均无统计学意义（P均 > 0.05）；对乙酰氨基酚各剂量组动物出现肝脏不同程度的肝脏细胞炎症反应或细胞坏死等病理学改变。结论：本研究采用已知遗传毒性化合物、有和无靶器官毒性的非遗传毒性化合物，验证了多器官（肝、胃和肾）彗星试验方法具有很好的灵敏度和特异性，有望为体内碱性彗星试验方法在新药遗传毒性评价领域的推广提供技术参考。     

一种孕宝营养液致畸和遗传毒性的检测

背景与目的:研究某孕宝营养液的致畸性和遗传毒性,为其应用提供安全性毒理学评价依据。材料与方法:设0.83、1.67、3.33g/kg3个剂量组,进行传统致畸研究;设8、40、200、1000和5000μg/皿5个剂量组,进行Ames试验;设2.5、5.0和10.0g/kg3个剂量组,观察其对小鼠骨髓细胞微核和小鼠精子畸形的影响。结果:3个剂量组各项指标均未见有明显的母体毒性和胚胎毒性、致畸性。各剂量组在体内体外致突变性研究中未见有遗传毒性。结论:在本实验条件下,某孕宝营养液无致畸性和遗传毒性。     

牛黄解毒片的遗传毒性研究

背景与目的：评价牛黄解毒片是否具有遗传毒性作用。材料与方法：采用Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验对牛黄解毒片进行遗传毒性检测。结果：Ames试验各剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照组的2倍,3个剂量组的微核率和精子畸形率与溶剂对照组比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论：在本试验条件下,牛黄解毒片未见遗传毒性作用。     

汉防己甲素对小鼠遗传毒性的研究

通过精子畸形试验,微核试验及姐妹染色单体变换试验,进行了汉防己甲素对小鼠遗传毒性的实验研究,结果表明：汉离己甲素组的小鼠精子畸形率及小鼠骨髓细胞微核率显著增高,且与微核率之间存在剂量－反应关系。但小鼠姊妹染色单体交换频率的改变不显著,表明该药对实验动物具有遗传毒性。     

Ames试验剂量反应关系的最小均方误差估计方法

Ａｍｃｓ试验中剂量反应关系常受到毒性作用的影响，为在剂量反应关系统计分析中消除或减少毒性作用的影响，目前常采用适应（ａｄａｐｔｉｖｅ）法。本文采用对有毒性作用的剂量组数据适当加权的方法，使估计的剂量反应关系具有最小的均方误差。我们采用随机模拟的方法在不同的毒性作用的强度下对其与适应法进行了比较。结果表明：对于多数情况，本文的方法优于适应法。本文方法容易在计算机上实现，可以作为适应法的补充。     

杜仲的快速毒性筛选试验

背景与目的:杜仲属于可用于保健食品的中药,但是其安全性毒理学评价的资料相对缺乏,对其安全性进行评价,以便为杜仲的综合利用提供依据.材料与方法:运用急性毒性试验、细胞毒性试验、遗传毒性试验对杜仲进行了较系统的安全性评价.结果:杜仲的LD50为160.0 g/kg;对CHO和CHL细胞的IC50均为109.38 mg/ml,并且在该剂量之下为阴性结果.结论:杜仲属无毒物,在较高剂量下对CHO和CHL细胞均表现出一定的毒性;本实验条件下无细胞染色体畸变的遗传毒性.     

5—氟尿嘧啶发育毒性的生物学剂量—反应模型

以生物学效应机制为基础的剂量—反应（ＢＢＤＲ）模型是毒性反应中生物学过程的数学描述。作为对非致癌化学物危险评价常规方法的一种改进，它可将毒作用的效应机制和剂量—反应关系联系起来，因而能大大降低评价结果的不确定度。本文以５—氟尿嘧啶（５—ＦＵ）为例，介绍一种对大鼠发育毒性评价的ＢＢＤＲ模型。结果表明，胚胎组织中胸苷酸合成酶抑制、ＤＮＡ合成障碍和细胞周期阻滞是５—ＦＵ发育毒作用中的关键性事件；其剂量—反应关系可通过ＢＢＤＲ模型给出准确的预测。     

正衡片遗传毒性及致畸性实验研究

目的与方法：为保证保健食品正衡片应用的安全性，进行了Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、小鼠睾丸染色体畸变试验和大鼠传统致畸试验。结果：4项遗传毒性试验均为阴性致畸试验未对大鼠母体及胚胎毒性。结论：在本受试剂量范围内，正衡片对遗传物质无损伤，对胎鼠无致畸作用。     

转人α-乳清白蛋白奶粉的遗传毒性研究

目的： 评价转人α-乳清白蛋白奶粉的遗传毒性。方法：以转人α-乳清白蛋白奶粉为受试物,设每皿62、185、556、1 667、5 000μg 5个剂量进行Ames试验,按2.5、5.0和10.0 g/kg进行小鼠骨髓嗜多染红细胞 (polychromatic erythrocytes,PCE)微核试验和精子畸形试验,并设立环磷酰胺阳性对照组和蒸馏水阴性对照组。结果：转人α-乳清白蛋白奶粉各剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照菌落数的2倍,亦无剂量-反应关系;各剂量组PCE百分比未少于阴性对照组的20%,微核发生率与阴性对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05);各剂量组小鼠精子畸形发生率与阴性对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05)。结论：在本实验条件下,转人α-乳清白蛋白奶粉未见遗传毒性。     

计划生育药HG提取物的特殊毒理学研究

本文用Ａｍｅｓ试验，小鼠微核试验和中国仓鼠肺细胞体外染色体畸变试验研究了ＨＧ提取物的致突变作用。用受孕小鼠研究了ＨＧ提取物的致畸胎作用。结果表明，Ａｍｅｓ试验在１０ｍｇ／皿浓度下未见回复突变作用；微核在试验在１０．５ｇ／ｋｇ剂量下未诱发微核率增高；染色体畸变试验在３００μｇ／ｍｌ浓度下不出现细胞染色体畸变率升高；小鼠致畸胎试验在９ｇ／ｋｇ剂量下不存在胚胎毒性和致畸毒性。     

大鼠多器官彗星试验方法的验证研究

目的:采用对氯苯胺、氯化钠、对乙酰氨基酚和庆大霉素4个不同作用机制的化合物,对已建立的大鼠多器官(肝、胃和肾)彗星试验方法进行验证。方法:SD雄性大鼠分别在0、24和45 h经口灌胃不同剂量的对氯苯胺[37.5、75和150 mg/(kg·d)]、氯化钠[500、1 000和2 000 mg/(kg·d)]、对乙酰氨基酚[20、100和500 mg/(kg·d)],或肌肉注射庆大霉素[20、40和80 mg/(kg·d)],各组均设置溶剂对照品,以及在24和45 h经口灌胃阳性对照甲基磺酸乙酯[EMS,200 mg/(kg·d)],所有动物在末次给予受试物约3 h后经戊巴比妥钠麻醉放血处死,制备肝脏、胃和肾脏单细胞悬液后制片,再经裂解、解旋、电泳、中和、染色以进行彗星显像分析;对乙酰氨基酚处理的大鼠肝脏和庆大霉素处理的大鼠肾脏经10%福尔马林溶液固定后进行组织病理学检查。结果:与溶剂对照组比较,对氯苯胺处理组大鼠肝、胃和肾的尾部DNA百分率增加,并呈剂量-反应关系(P<0.05);氯化钠、对乙酰氨基酚和庆大霉素处理组大鼠肝、胃和肾的尾部DNA百分率与溶剂对照比较,差异均无统计学意义(P均>0.05);对乙酰氨基酚各剂量组动物出现肝脏不同程度的肝脏细胞炎症反应或细胞坏死等病理学改变。结论:本研究采用已知遗传毒性化合物、有和无靶器官毒性的非遗传毒性化合物,验证了多器官(肝、胃和肾)彗星试验方法具有很好的灵敏度和特异性,有望为体内碱性彗星试验方法在新药遗传毒性评价领域的推广提供技术参考。     

溪黄草袋泡茶的急性毒性和遗传毒性研究

目的： 探讨溪黄草袋泡茶的急性毒性和遗传毒性。方法：急性毒性实验,分别对小鼠灌服剂量为21.5、10.0、4.64、2.15 g/kg的溪黄草袋泡茶提取液,采用霍恩氏(Horn)法计算其半数致死剂量(LD50)。设每皿5 000、1 000、200、40、8 μg共5个剂量组进行Ames试验;分别按 10.0、5.00、2.50 g/kg进行小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验,检测溪黄草袋泡茶的遗传毒性。结果：溪黄草袋泡茶对雌雄小鼠LD50＞21.5 g/kg;Ames试验中,溪黄草袋泡茶对 TA97、TA98、TA100、TA102这4种试验菌株,在加与不加S9条件下,样品各剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照组菌落数的2倍,亦无剂量-反应关系;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和精子畸形试验结果显示,各剂量组的微核率和精子畸形率与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论：在本实验条件下,溪黄草袋泡茶属无毒级物质,未见遗传毒性。     

某调节血糖保健食品遗传毒理学评价

目的: 评价某调节血糖保健食品有无遗传毒性,为应用该功能食品提供毒理学资料.方法:依据国标进行Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验.结果:Ames试验阴性:经口给予受试物剂量1.25 g/kg～5.0 g/kg,未发现对试验小鼠骨髓PCE有致突变作用和致小鼠精子畸形作用.结论:未发现该功能食品有遗传毒性.     

紫荷植物固体饮料的急性毒性和遗传毒性试验研究

目的：对紫荷植物固体饮料的急性毒性和遗传毒性进行评价。方法：急性毒性试验,采用限量法,设雌雄2组,每组10只SPF级昆明小鼠,累积剂量为10 g/（kg·d）。Ames试验,采用平板掺入法,设5000、1000、200、40、8μg/皿共5个剂量组;小鼠精原细胞染色体畸变试验,设2000、1000、500 mg/（kg·d）剂量组;哺乳动物红细胞微核试验,设2000、1000、500 mg/（kg·d）剂量组。3个遗传毒性试验均另设置阴性对照组和阳性对照组。结果：在14 d观察期内受试动物未见任何急性毒性反应,根据急性毒性分级,属于实际无毒级。Ames试验结果显示,该固体饮料属无致突变性。小鼠精原细胞染色体畸变试验结果显示,各剂量组小鼠染色体畸变率（0～1.6%）,与阴性对照组（0.6%）比较,差异无统计学意义（P>0.05）。哺乳动物红细胞微核试验结果显示,各剂量组雌雄性小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率与阴性对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。3项遗传毒性试验结果显示该固体饮料未见遗传毒性。结论：在本实验条件下,紫荷植物固体饮料无明显急性毒性反应和遗传毒性。     

用Ames试验和SOS显色法研究水源水有机提取物的遗传毒性

本文应用Ａｍｅｓ试验和ＳＯＳ显色法２个细菌测试系统研究了广州南部流域某些河段水中有机物的遗传毒性．１３个水样中，４个可诱导鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型菌株的回复突变；６个可诱导大肠杆菌的ＳＯＳ反应；２个水样在２个测试系统中均有诱导作用．结果还表明；采集的水样量及受试物的配制对试验结果有显著影响；在ＳＯＳ显色法中，ｕｖｒＡ菌株和ｕｖｒ＋菌株对相同水样有不同反应。