抗人微管不稳定蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备人微管不稳定蛋白（Stathmin）的单克隆抗体,检测Stathmin蛋白在真核细胞中的表达,为探讨Stathmin 生物学功能奠定基础。方法利用重组Stathmin蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得稳定分泌抗Stathmin单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Western blot和免疫组织化学实验等方法分别对其效价和特异性进行鉴定。结果成功地建立了2株稳定分泌抗Stathmin的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为F001和F002。两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。两株单克隆抗体通过免疫组织化学实验和Western blot实验都能特异性地结合真核细胞内源性的Stathmin蛋白。结论成功建立了两株效价高、特异性好的抗Stathmin蛋白的单克隆抗体,为进一步研究Stathmin的生物学功能及其与肿瘤的关系创造了条件。     

西黄丸含药血清对人结直肠癌细胞SW480凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:研究西黄丸对人结直肠癌细胞SW480凋亡的影响及其作用机制的初步探讨。方法:以人结直肠癌细胞SW480为研究对象,MTT法检测不同剂量西黄丸含药血清对SW480细胞活性的影响,并用流式细胞术检测西黄丸含药血清引起的细胞凋亡率改变;用Western blot的方法检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平,初步探讨其凋亡机制。结果:西黄丸含药血清可浓度依赖性降低SW480的细胞活力并增加细胞凋亡率,Western blot结果显示西黄丸含药血清增加了Bax蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白表达。结论:西黄丸含药血清可抑制SW480细胞活力、诱导细胞凋亡并减小Bcl-2、Bax蛋白表达比例,其机制可能与以线粒体为核心的凋亡途径有关。     

在神经胶质瘤组织中的表达及其临床意义

  目的  探讨神经胶质瘤组织中CCNG2的表达,其表达状况与临床病理参数的相关性及意义。  方法  收集2007年1月至2012年8月在本院手术切除的神经胶质瘤组织标本129例。采用QRT-PCR及免疫组织化学染色方法,在基因及蛋白水平检测其中临床资料完整的109例神经胶质瘤标本中CCNG2的表达。  结果  在109例神经胶质瘤组织标本中,CCNG2在高级别的神经胶质瘤组织中的表达较低级别的明显降低,其表达与肿瘤的分级呈负相关,差异具有统计学意义（P < 0.05）。CCNG2的表达与患者性别、年龄无关（均P>0.05）;而与肿瘤的分级、对放化疗的敏感性及总生存时间相关（均P < 0.001）。  结论  检测CCNG2的表达有助于阐释神经胶质瘤发生发展的机制,并可作为评估神经胶质瘤恶性生物学行为及预后的参考指标。      

西黄丸含药血清对SW480人结肠癌细胞迁移及侵袭的影响

目的:研究西黄丸对人结肠癌细胞SW480迁移及侵袭的影响,并初步探讨其作用机制。方法:以人结肠癌细胞SW480为研究对象,细胞划痕试验检测不同剂量西黄丸含药血清对SW480细胞迁移的影响,并Transwell侵袭实验检测西黄丸含药血清对细胞侵袭能力的改变;用Western blot的方法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p-ERK蛋白表达水平,RTq PCR法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin),多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)、波形蛋白(Vimentin)和转录因子Snail的mRNA水平。结果:与空白组比较,西黄丸含药血清可降低SW480细胞迁移及侵袭的能力,增加E-cadhenrin mRNA表达水平,并抑制PARP-1,Vimentin和Snail mRNA表达水平,明显降低ERK蛋白的磷酸化水平,均具有统计学意义(P0.05)。结论:西黄丸含药血清可抑制SW480细胞的体外侵袭及迁移,并影响上皮-间皮转化(EMT)相关基因E-cadherin,PARP-1,Vimentin和Snail的mRNA表达,其机制可能与ERK/MAPK信号通路有关,本研究为西黄丸抑制结肠癌转移提供了科学证据。     

肝肠钙粘连蛋白单克隆抗体的制备及其对HepG2的生长抑制作用

目的 制备及鉴定肝肠钙粘连蛋白(CDH17)的单克隆抗体,研究其对肝癌细胞系HepG2的生长抑制作用.方法 利用重组CDH17蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得稳定分泌抗CDH17的单克隆抗体杂交瘤细胞株,通过ELISA和Western blotting分别对其效价和特异性进行鉴定,以不同浓度的单抗分别作用于HepG2细胞24、48、72和96 h.观察细胞数量和形态的变化,MTT法检测其对HepG2细胞的增值抑制作用.结果 成功建立了2株稳定分泌抗CDH17的单克隆抗体杂交瘤细胞株.两株单抗通过Western blotting实验都能特异性地结合真核细胞内源性的CDH17蛋白.不同浓度的单抗作用后细胞数量明显减少、形态不规则.不同浓度的单抗均能抑制HepG2细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,药物浓度和用药时间之间有交互效应(P<0.05).结论 成功建立了两株效价高、特异性好的抗CDH17蛋白的单克隆抗体,其能抑制HepG2细胞增殖,并呈剂量-时间依赖效应.     

抗人stathmin单克隆抗体与紫杉醇联用对人肝癌细胞增殖的抑制作用

目的: 探讨抗人stathmin单克隆抗体和紫杉醇单用或联用对肝癌细胞系HepG2增殖的抑制作用。方法: 以不同浓度的抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇分别组成单药组和联合用药组, 另设不加药的空白对照组,分别作用于HepG2细胞24、48、72和96 h,观察细胞数量和形态的变化,MTT法检测各用药组对HepG2细胞增殖的抑制作用,AnnexinV/PI双染法检测各组细胞凋亡率的改变。结果: 不同浓度的各组药物作用后细胞数量明显减少,形态不规则,部分细胞变圆、细胞核固缩和胞质减少,而对照组细胞生长状态良好。抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇单药与联用均能抑制HepG2细胞增殖, 呈剂量时间依赖效应, 联用组细胞增殖抑制率较单药组明显增高(P<0.05),两药联用有交互效应( P<0.05)。抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇单用与联用均能诱导HepG2细胞凋亡, 联合组作用更为明显(P<0.05)。结论: 抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇单药与联用均能抑制HepG2细胞增殖和诱导其凋亡,两药联合使用具有协同作用。     

肝肠钙粘连蛋白与肿瘤的研究进展

肝肠钙粘连蛋白（CDH17）是结构及功能都不同与传统钙粘连蛋白的一类蛋白,它在胃癌、结肠癌及肝癌等肿瘤的发生、发展过程中具有重要的临床意义。本文对比了CDH17与传统钙粘连蛋白的异同,综述了其特殊的结构和生物学特性,研究了其在胃癌、结肠癌与肝癌领域中的研究进展,以及该蛋白与肿瘤的发生发展之间关系的研究进展,随着研究的深入,该蛋白有望成为肿瘤早期诊断和生物治疗的靶点之一。