人源性抗肝癌单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的建立产生人源性抗肝癌单克隆抗体的人-鼠杂交瘤.方法用IL-2和美洲商陆(PWM)体外刺激肝癌病人外周血淋巴细胞,再与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合,待杂交瘤生长进行筛选、克隆化及特性分析.结果建立了3株产生人源性抗肝癌单克隆抗体的人-鼠杂交瘤-AF3,CB7、CH1.三种单抗均识别肝癌细胞表面抗原,并具有显著的补体依赖的细胞毒活性.其中AF3的效价最高.结论通过人-鼠杂交瘤技术获得了产生人源性抗肝癌单克隆抗体的杂交瘤细胞系.抗体效价高,是一种较理想的单克隆抗体.     

抗人肝癌细胞膜单克隆抗体HCMP—1的制备及其生物学特性的初步鉴定

用超选择免疫法，诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠对正常人肝细胞抗原产生选择性低兔疫反应后，二步腹腔注射人肝癌细胞悬液，２－４周后用人肝癌细胞作强化免疫动物１次，取出脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞用ＰＥＧ法融合制备杂交瘤。采用细胞抗原ＥＬＩＳＡ法，同时测定培养上清对肝癌细胞及正常肝细胞的免疫反应，筛出一株能稳定分泌抗人肝癌细胞膜抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ是一种ＩｇＧ２亚型的单抗，它与ＨＢｓ     

抗人骨唾液蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备高亲和力、高特异性的抗人骨唾液蛋白（BSP）单克隆抗体（mAb）,并对其生物学特性进行鉴定,为BSP作为乳腺癌骨转移临床诊断靶点的研究奠定基础。方法重组BSP蛋白免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与Sp2／0细胞融合,经筛选建立可稳定分泌抗BSPmAb细胞株,制备腹腔积液,ProteinG纯化。ELISA检测抗体的效价和亲和力,并用亚型鉴定试纸条鉴定mAb的亚型。应用Western blotting检测mAb的特异性,进一步利用纯化的mAb经免疫组织化学法检测乳腺癌细胞MDA-MB-231中BSP的表达情况。结果获得9株抗BSPmAb细胞株,选择其中2株（D001和D002）进一步鉴定,其上清效价分别为1：5120和1：10240,腹腔积液效价分别为1：25600和1：51200。2株抗体亚型均为IgG1型,轻链均为K型。Western blotting结果均在预期位置出现阳性条带。利用此2株细胞株所得抗体均可在乳腺癌细胞MDA-MB-231中检测到BSP的表达。结论成功制备能特异性识别BSP的mAb,为进一步研究BSP的生物学功能以及对BSP作为乳腺癌骨转移的标志物进行临床评价奠定基础。     

抗人肺腺鳞癌单克隆抗体的研制

将人肺腺癌细胞ＳＰＣ、Ａ５４９、Ａ４２７序贯免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合。获得一株稳定分泌抗肺腺鳞癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株──Ｓ５Ａ１０─２，制备了小鼠腹水抗体并进行了纯化，腹水效价为１．０２×１０７，亚型测定为ＩｇＧ１．免疫组化分析ｓ５Ａ１０－２单抗与肺腺、鳞癌和肺鳞癌有较好的选择反应性，与正常组织无交叉反应，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ测定Ｓ５Ａｌ０─２在ＳＰＣ细胞膜上的抗原分子量为４０Ｋｄ、５０Ｋｄ和８０Ｋｄ，在Ａ５４９，细胞膜上的抗原分子量为４３Ｋｄ，而与Ａ４２７细胞膜蛋白无明显反应。该抗体的亲和常数为８．４３×１０１０Ｍ－１，Ｓ５Ａ１０－２杂交瘤细胞株，经液氮冻存后复苏，其分泌抗体能力不受影响。     

抗人肝癌细胞膜单克隆抗体HCMP－1的制备及其生物学特性的初步鉴定

用超选择免疫法，诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠对正常人肝细胞抗原产生选择性低免疫反应后，二步腹腔注射人肝癌细胞悬液，２～４周后用人肝癌细胞作强化免疫动物１次，取出脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞用ＰＥＧ法融合制备杂交瘤。采用细胞抗原ＥＬＩＳＡ法，同时测定培养上清对肝癌细胞及正常肝细胞的免疫反应，筛出一株能稳定分泌抗人肝癌细胞膜抗原的单克隆抗体（ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ）的杂交瘤细胞株。ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ是一种ＩｇＧ２ａ亚型的单抗，它与ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、ＨＢｅＡｇ等乙型肝炎病毒相关抗原无交叉免疫反应，与ＡＦＰ－亦无阳性反应。免疫萤光法证实ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ对ＱＧＹ－７７０３、ＢＥＬ－７４０２及ＳＭＭＣ－７７２１等人肝癌细胞株呈阳性反应。改良ＡＢＣ免疫组织化学证明ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ与肝细胞癌组织呈阳性反应。说明ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ对肝癌反应的阳性率较高，特导性较好。超选择免疫法，先联合应用免疫抑制药物使动物对正常肝细胞抗原产生低免疫反应性。再以肝癌细胞免疫时，有利于动物免疫系统对肿瘤相关抗原的识别及特异性抗体的产生。从而提高了杂交瘤制备的成功率。我们认为这一方法在单抗制备方面有较高的应用价值。     

抗乳腺癌单克隆抗体的制备及其应用

目的:制备抗人乳腺癌单克隆抗体(McAb),用于临床肿瘤的免疫病理诊断与分型研究,为药物导向诊断和治疗奠定基础.方法:以乳腺癌细胞系ZR75免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经选择培养、筛选及克隆化,获得恒定分泌抗ZR75单克隆抗体的杂交瘤细胞系BM109.结果:单抗BM109的Ig亚类为IgG1,BM109抗原主要表达在靶细胞膜上,为分子量37KD的蛋白质抗原.在乳腺癌的免疫反应率为86.7%(26/30),与胃癌、食管癌、卵巢癌等6种肿瘤的免疫反应率为9.5%(4/42),而对乳腺纤维瘤、囊性增生症和周围正常乳腺组织未见阳性反应.结论:所获一株抗乳腺癌单克隆抗体,具有较好的特异性,可望进一步用于乳腺癌的诊断、治疗及其发生发展的研究.     

人白介素24单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备抗白细胞介素24（Interleukin 24,IL-24）的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法：应用分子生物学技术,构建含人IL-24编码序列的原核表达载体,表达并纯化了人IL-24融合蛋白。用纯化人IL-24融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,有限稀释法进行亚克隆,采用免疫印迹及免疫组化染色对抗体的特异性进行了鉴定。结果：获得3株能稳定分泌抗IL-24单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G2,3F4,4A6。通过免疫印迹及免疫组化染色检测显示,这3株单抗均能够与IL-24特异性结合。结论：成功制备抗IL-24单克隆抗体,为进一步探索IL-24在抗肿瘤中的作用机制奠定了基础。     

人白介素24单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗白细胞介素24(Interleukin 24,IL-24)的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法:应用分子生物学技术,构建含人IL-24编码序列的原核表达载体,表达并纯化了人IL-24融合蛋白。用纯化人IL-24融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,有限稀释法进行亚克隆,采用免疫印迹及免疫组化染色对抗体的特异性进行了鉴定。结果:获得3株能稳定分泌抗IL-24单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G2,3F4,4A6。通过免疫印迹及免疫组化染色检测显示,这3株单抗均能够与IL-24特异性结合。结论:成功制备抗IL-24单克隆抗体,为进一步探索IL-24在抗肿瘤中的作用机制奠定了基础。     

抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体(mAb),对其进行特性鉴定,为在恶性肿瘤诊断和治疗中的应用打下基础。方法：构建膜联蛋白Ⅰ基因480 bp的原核表达载体pQE30-ANXⅠ,异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,并用Ni-NTA树脂亲和层析柱纯化蛋白。用纯化的膜联蛋白Ⅰ作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化,制备抗膜联蛋白Ⅰ蛋白的单克隆抗体。用ELISA、Western blot及免疫组织化学染色法进行特性鉴定。结果：获得5株分泌抗膜联蛋白ⅠmAb的杂交瘤细胞,分别命名为1A8、1D2、1E2、4E7和5G3,所产抗体,均为IgG1亚型,轻链均为κ链,亲和力为(2．3～3．03)×10~8 L/mol。经Western blot证实获得的mAbs可以特异性识别膜联蛋白Ⅰ抗原；免疫组织化学染色结果也显示这些mAbs可以特异识别肿瘤组织中的膜联蛋白Ⅰ。结论：成功地获得了5株抗膜联蛋白Ⅰ的mAbs,为进一步在肿瘤诊断和治疗中应用膜联蛋白Ⅰ抗体打下了基础。     

抗乳腺癌单克隆抗体的制备及其应用

目的：制备抗人乳腺癌单克隆抗体（McAb），用于临床肿瘤的免疫病理诊断与分型研究，为药物导向诊断和治疗奠定基础。方法：以乳腺癌细胞系ZR75免疫Balb/c小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0进行融合，经选择培养、筛选及克隆化，获得恒定分泌抗ZR76单克隆抗体的杂交瘤细胞系BM109。结果：单抗BM109的Ig亚类为IgG1，BM109抗原主要表达在靶细胞膜上，为分子量37KD的蛋白质抗原。在乳腺癌的免疫反应率为86．7％（26／30），与胃癌、食管癌、卵巢癌等6种肿瘤的免疫反应率为9．5％（4／42），而对乳腺纤维瘤、囊性增生症和周围正常乳腺组织未见阳性反应。结论：所获一株抗乳腺癌单克隆抗体，具有较好的特异性，可望进一步用于乳腺癌的诊断、治疗及其发生发展的研究。     

Stathmin蛋白在大肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨Stathmin蛋白在大肠癌中的表达及其与肿瘤病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学SP法检测56例大肠癌组织Stathmin蛋白的表达,同时选取16例大肠腺瘤组织作对照.结果:Stathmin蛋白在大肠癌中的阳性表达率为60.7%(34/56),明显高于大肠腺瘤组织的31.3%(5/16),P <0.05.Stathmin蛋白表达与肿瘤部位、大小、分化程度、Duke's临床分期及淋巴结转移均无明显相关,P >0.05.结论:Stathmin蛋白过表达与大肠癌的发生密切相关,但它不能作为判断大肠癌恶性程度的指标.     

分泌抗人甲胎蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用免疫亲和层析法纯化的正常胎儿组织中的甲胎蛋白(AFP)为抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0采取淋巴细胞杂交瘤技术进行融合,经有限稀释法进行四代克隆化后。获得十株稳定分泌抗人AFP单克隆抗体杂交瘤细胞株。其细胞培养上清中AFP单抗滴度为1:160～640,诱生同系小鼠腹水中单抗滴度为1:4000～100,000。特异性中和抑制试验显示单抗是针对AFP的。放射免疫分析示某些单抗具有较强的亲和力。杂交瘤细胞染色体数目为100～110,其分泌的抗体分别属于IgG_(2a)、IgG_1和IgM型。     

Stathmin蛋白:一个潜在的肿瘤标志物

人stathmin也称原癌基因蛋白18(oncogene protein 18, Op18), 是一种广泛存在于细胞质的蛋白质,其相对分子质量约为19×10~3,可与微管蛋白结合,参与微管和纺锤体的组装;与细胞的增殖、分化、再生和运动均有关,并具有信号活性调节的功能.近年来有研究发现,stathmin在多种肿瘤中高表达,并可通过调节微管的解聚,促进肿瘤细胞的运动及侵袭.Stathmin翻译后修饰状态的改变,可影响与p53蛋白的相互作用,参与肿瘤的发生发展.目前单独或者联合化疗药物使用的抗stathmin效应剂已用于某些肿瘤的治疗.虽然stathmin与肿瘤病因学的内在联系尚不十分清楚,但其作为一个潜在的肿瘤标志物或药物靶点值得进一步研究探讨.     

抗卵巢癌相关抗原单克隆抗体的制备及免疫分析方法的建立

目的　研究从卵巢浆液性乳头状囊腺癌患者的腹腔积液中 ,纯化获得携带CA 12 5抗原决定簇的卵巢癌相关抗原。以此为免疫原 ,制备单克隆抗体 ,并建立放射免疫分析方法并应用于临床中。方法　腹腔积液经高氯酸分离 ,凝胶层析及亲和胶蓝柱层析纯化CA 12 5相关抗原。应用细胞融合技术 ,抗体采用ELISA方法、免疫印记技术进行鉴定。单克隆抗体经碘原法标记放射性核素1 2 5I ,初步建立 1种碘标固相双位点夹心模式的免疫放射分析法。结果　腹腔积液中CA12 5相关抗原经纯化 ,其比活度达 1.1× 10 6 U mg。共获得 6株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株 ,采用 2株配对最佳的抗体 ,初步建立 1种碘标免疫放射分析法。该方法可测下限为 1.2U ml ,批内变异系数为 4.4% ,批间变异系数为 9.6% ,平均回收率为 97.0 %。初步临床应用的结果表明在正常人血清中CA 12 5相关抗原平均值为 (2 .14 7± 3 .0 92 )U ml。在 60例卵巢癌患者中 ,平均值为 (10 6.5± 187.5 )U ml ,两者比较有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　以患者腹腔积液中纯化的CA12 5相关抗原制备单克隆抗体 ,并建立放射免疫分析方法 ,初步应用于临床血清学测定中 ,对卵巢癌的辅助诊断具有一定价值     

微管不稳定蛋白Stathmin在食管鳞癌组织中的表达及意义

目的 探讨Stathmin蛋白在食管鳞癌组织中的表达及意义.方法 收集新乡医学院2006年4月至9月期间食管鳞癌切除标本及其相应癌旁组织31例,以免疫组织化学法检测Stathmin蛋白在所取标本中的表达情况.结果 在31例食管鳞癌标本中,Stathmin蛋白表达阳性的标本为23例,阳性率为74.2%,阳性颗粒可见于细胞质;分别按年龄、性别、组织类型、分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度及TNM分期将31例食管癌标本分组,Stathmin蛋白表达差异有统计学意义的因素有分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度及TNM分期(P＜0.05).结论 食管鳞癌组织中Stathmin蛋白高表达,其表达与食管鳞癌的分化程度、淋巴结转移、肿瘤浸润深度及TNM分期显著相关,Stathmin蛋白可能为人食管癌的生物治疗提供一个新靶点.     

Stathmin 基因在非小细胞肺癌中的表达

目的：检测 Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达,探讨其与临床病理因素的关系。方法：用免疫组织化学 SP 法检测135例非小细胞肺癌及20例癌旁肺组织中 Stathmin 蛋白的表达,分析其与患者年龄、性别、肿瘤分化程度等临床病理特征之间的相关性。结果：小细胞肺癌组织中 Stathmin 基因蛋白的表达水平明显高于癌旁肺组织（P ＜0．05）,Stathmin 的表达与淋巴结转移有关（P ＜0．05）。结论：Stathmin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达显著上调;Stathmin 基因的表达与淋巴结转移有关,而与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、组织类型无关。     

Stathmin在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义

背景与目的:Stathmin是一种重要的微管调节蛋白,参与多种肿瘤的发生、发展.本研究旨在验证并探讨Stathmin在上皮性卵巢癌中的表达及意义.方法:利用免疫组化和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测22例卵巢正常上皮组织,16例良性肿瘤和50例上皮性卵巢癌组织中Stathmin的表达.结果:上皮性卵巢癌中Stathmin mRNA的表达明显高于卵巢良性肿瘤(P<0.05)和正常卵巢上皮(PO.05).进一步利用x2检验统计分析得出,Stathmin蛋白与卵巢癌的临床分期、病理分级、淋巴转移相关(P<0.05),而与年龄、病理类型及腹水量无相关性(P>0.05).结论:Stathmin在上皮性卵巢癌中高表达,可能与卵巢癌的发生、发展相关.     

Generation and Characterization of Novel Diagnostic Mouse Monoclonal Antibodies Against Human Estrogen Receptor Alpha and Progesterone Receptor

Background: Estrogen and progesterone regulate the growth and development of several human cells and tissues. Their corresponding receptors (ER and PR) are important diagnostic and prognostic indicators for cancers of the breast and reproductive organs. Immunohistochemical analysis of ER and PR is the current standard method for evaluating the expression of these receptors in different cancers. Nonetheless, there is a significant lack of reproducibility of IHC results in laboratories worldwide, necessitating to develop more sensitive and specific antibodies for ER and PR IHC staining. Methods: ER and PR-specific monoclonal antibodies (MAbs) were generated by immunizing mice with synthetic peptides from ERα and PR. The isotypes and affinity constants of the selected MAbs were determined, and their specificities were assessed by peptide-specific ELISA, IHC, Western-blot analysis, and flow cytometry. In addition, the reactivity of generated MAbs was compared with that of the commercially-available anti-ER and anti-PR antibodies in IHC using normal and cancerous tissue sections. Moreover, 200 breast cancer tissue samples were stained using the newly generated MAbs along with commercial antibodies by IHC, and the sensitivity, specificity and accuracy of our MAbs were evaluated. Results: Among different MAbs generated in this study, two anti-ER and one anti-PR MAbs specifically detected the target antigens in normal and cancerous tissues in IHC. Further analyses confirmed the specificity of the MAbs in Western blotting and flow cytometry using a panel of ER and PR positive cell lines. The sensitivity, specificity and accuracy calculated for clone 1B9 (anti-ER) were 92.3%, 94.8% and 93%, and for clone 3D6 (anti-PR) were 93.0%, 94.3% and 93.5%, respectively. Conclusion: Our novel anti-ER and PR MAbs could be considered as suitable tools for diagnostic and research purposes.