下咽鳞癌免疫细胞的分布特征及对生存预后的影响

目的∶ 研究下咽鳞癌患者治疗前免疫细胞的分布特征及其对预后的影响。方法∶收集 2009年11月至2019年 10 月昆明医科大学第三附属医院收治的650 例下咽鳞癌患者临床资料,同时纳入650 例健康志愿者作为对照组,采用SPS 21.0对下咽鳞癌患者治疗前和对照组两组间的免疫细胞数进行比较。根据免疫细胞的分布特征对下咽鳞癌患者治疗前机体的免疫状况进行分类,运用Kaplan-Meier 法和Log-rank 检验对不同免疫状态的患者进行生存分析,比较不同免疫状态对下咽鳞癌患者生存率的影响,以 P<0.05 为差异有统计学意义。结果∶与对照组相比,下咽鳞癌组 CD3+T细胞、CD4＋T细胞、CD4+/CD8＋比值、NK 细胞、CIK 细胞数显著降低,CD8＋T细胞显著升高。650例下咽鳞癌患者根据治疗前免疫细胞的分布特征分为5类∶第Ⅰ类免疫耐受型（221 例,34%）、第Ⅱ类免疫低下型（143 例,22%）、第Ⅲ类肿瘤反应型（169 例,26%）、第ⅣV类免疫消耗型（6 例,10%）、第V类免疫亢进型（52 例, 8%）;免疫细胞特征分布为第1~V类患者的中位生存期分别为 16个月（95% C∶14.11～17.88）、11 个月（95% CI∶ 9.11～12.88）、32个月（95% CI∶29.9～34.41）、29个月（95% CI∶23.39~34.61）和23个月（95% CI∶15.%～ 30.04）。结论∶下咽鳞癌患者机体存在细胞免疫功能紊乱,不同免疫状态的下咽鳞癌患者预后不同,免疫细胞分布为第 ⅢI 类的患者预后最好,分布为第 Ⅳ 类、第Ⅴ类的患者预后较好,分布为第 1类、第Ⅱ类的患者预后最差。     

新辅助化疗对乳腺癌细胞周期及干细胞的影响

目的：探讨新辅助化疗对乳腺癌患者细胞周期中 G0-G1期细胞比例以及三磷酸腺苷结合转运蛋白 G 超家族成员2（ABCG2）、CD44＋CD24－／low表达的影响。方法选取2013年5月至2014年3月收治的60例经空芯针穿刺活检明确病理诊断的初治乳腺浸润性导管癌患者为研究对象,比较化疗前后乳腺癌细胞周期中 G0-G1期细胞比例及 ABCG2、CD44＋CD24－／low 含量的变化。结果患者化疗后ABCG2为（25．10±1．50）％,CD44＋CD24－／low 为（36．40±3．80）／105,G0-G1期细胞比例为（70．50±1．50）％,均高于化疗前的（15．88±1．22）％、（25．00±3．40）／105、（60．65±1．30）％,差异具有统计学意义（t ＝8．685,P ＜0．05;t ＝9．226,P ＜0．05;t ＝8．898,P ＜0．05）。所有患者完成4个疗程的化疗后,cCR率、cPR 率、SD 率分别为18．3％（11／60）、73．3％（44／60）、8．3％（5／60）。结论新辅助化疗后患者肿瘤细胞发生周期阻滞,肿瘤干细胞比例上升,疗效确切,具有临床推广价值。     

乳腺癌组织和MCF-7细胞株中SP细胞水平和生物学特性的比较

目的 比较乳腺癌组织和MCF-7细胞株中SP细胞的含量和生物学特性.方法 采用Altra流式细胞仪分选出乳腺癌组织原代培养6代细胞和MCF-7细胞株中SP细胞,检测2种来源SP细胞的表面标记和细胞周期增殖状况.结果 乳腺癌组织和MCF-7细胞株中SP水平分别为4.68％和12.43％,MCF-7细胞株中SP水平显著高于乳腺癌组织.2种来源的SP细胞的生物学标记(ABCG2、CD133、CD43、CD24、Ki-67、MDR表达率)及细胞周期时相分布(G0/G1期、S期、G2/M期、凋亡率、坏死率),细胞生物学特性差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 乳腺癌实体组织中存在SP细胞,但低于MCF-7细胞株中SP细胞水平,不论是乳腺癌实体组织或MCF-7,其SP细胞都具有肿瘤干细胞的生物学特性.为乳腺癌组织干细胞的分选提供了一定的实验基础和理论依据.     

人淋巴瘤Raji细胞系中的边缘细胞：淋巴瘤干细胞存在之可能

背景：已有研究提示急性白血病、多发性骨髓瘤中肿瘤干细胞富集于SP细胞中,且免疫表型及生物学特性相比于主群细胞存在明显的异质性。而关于淋巴瘤淋巴瘤干细胞的研究报道甚少。 目的：检测人淋巴瘤Raji细胞系中是否存在SP细胞,分选该群细胞后观察其与非SP细胞在分化抗原和P-糖蛋白表达以及细胞周期方面的差异,探讨淋巴瘤干细胞存在的可能性。 方法：Hoechst-33342染色细胞后运用带紫外激发光的流式细胞仪进行Raji细胞系SP细胞的检测及分选。观察不同质量浓度维拉帕米对SP细胞抑制的程度,选择最佳抑制浓度。分选后分别检测SP和非SP细胞P-糖蛋白、分化抗原CD34,CD19,CD20,CD5表达以及细胞周期,并进行对比。 结果与结论：Raji细胞系中存在SP细胞,比例在2%左右,当维拉帕米质量浓度为50 mg/L时能被完全抑制。SP和非SP细胞CD20阳性表达率分别为18.2%和93.6%,CD5阳性表达率分别为78.0%和22.2%;P-糖蛋白表达差异无显著性意义,但SP中阳性细胞的平均荧光强度强于非SP细胞。提示Raji细胞系中SP与非SP细胞在分化程度、多药耐药性方面具有明显的差异,SP细胞是具有明显“异质性”的细胞亚群。据此可初步推测,Raji细胞系的构成也类似肿瘤干细胞分级组成模式,而淋巴瘤干细胞则有可能富集于SP亚群中。     

云南元宝枫黄酮诱导个旧肺鳞癌细胞YTMLC凋亡的实验研究

目的研究云南元宝枫黄酮对个旧肺鳞癌细胞(YTMLC)凋亡诱导作用及相关基因表达的影响,为开发应用元宝枫黄酮提供实验依据。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测元宝枫黄酮对YTMLC细胞的生长抑制作用,流式细胞术TUNEL法检测元宝枫黄酮对YTMLC细胞凋亡的影响,RT-PCR检测元宝枫黄酮对YTMLC细胞 p53、p21、bcl-2、bax和caspase-3基因表达的影响。结果元宝枫黄酮作用YTMLC细胞48 h后,IC50为（108.53±8.22）mg/L。流式细胞术显示元宝枫黄酮既可以诱导YTMLC细胞凋亡,也可以引起YTMLC细胞坏死。元宝枫黄酮对p53、p21、bax和caspase-3的基因表达均有明显上调作用;对bcl-2基因表达有下调作用。结论云南元宝枫黄酮可以抑制个旧肺鳞癌细胞(YTMLC)体外生长,引起肿瘤细胞坏死,诱导肿瘤细胞凋亡,其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制是通过上调p53、p21、bax和caspase-3基因的表达,下调bcl-2基因表达。     

淫羊藿素通过PI3K/AKT信号通路抑制非小细胞肺癌H460细胞增殖

目的:探讨淫羊藿素（icaritin）通过PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌H460细胞增殖的影响。方法:采用MTT比色实验检测,不同浓度（0、5、10、20、40、80μmol/L）淫羊藿素处理H460细胞24、48、72h后细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测不同浓度淫羊藿素对H460细胞凋亡的影响,Western blot实验检测不同浓度淫羊藿素对H460细胞中PI3K、AKT、p-AKT、Cleaved-Caspase-9蛋白质表达水平的影响。结果:淫羊藿素可抑制非小细胞肺癌H460细胞的增殖,并表现为剂量和时间依赖性（P＜0.05）。0、5、10、20μmol/L淫羊藿素处理H460细胞24h后,H460细胞凋亡率分别为（4.90±1.20）%、（13.5±2.32）%、（16.47±1.90）%和（27.43±3.15）%,P＜0.05。淫羊藿素可下调PI3K、AKT的表达水平,降低AKT的磷酸化(p-AKT)水平,上调Cleaved-Caspase-9表达水平(P＜0.05)。结论:淫羊藿素可能通过抑制PI3K/AKT信号通路激活,抑制H460细胞增殖。     

老年晚期非小细胞肺癌循环肿瘤细胞表皮生长因子受体表达与酪氨酸激酶抑制剂疗效的相关性

目的探讨老年晚期非小细胞肺癌(NSCLC)外周血中循环肿瘤细胞(CTC)的表皮生长因子受体(EGFR)的表达水平与EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)靶向治疗疗效及预后的相关性。方法通过流式细胞技术(FCM)检测CTC的EGFR表达水平,根据中位数分为高表达组和低表达组,患者都给予TKI治疗至少1个月后与TKI疗效及预后关系进行分析。结果 EGFR表达水平在不同病理类型间有统计学差异(P<0.05);在不同性别,分期及功能状态(PS)评分间无统计学差异(P>0.05)。EGFR高表达组治疗有效率(50%)及疾病控制率(70%)均明显高于低表达组(35.7%,53.5%,均P<0.05)。在TKI治疗有效的老年患者中,治疗前后EGFR表达水平有统计学差异(P<0.05);在TKI治疗无效的老年患者中,治疗前后EGFR表达水平无统计学差异(P>0.05)。EGFR高表达组中位生存期(21个月)及无疾病进展期(11个月)均明显长于低表达组(10个月,4个月,均P<0.05);1年生存率(77.8%),2年生存率(38.1%)及3年生存率(22.2%)均明显高于低表达组(63.3%,31.2%,3.3%,均P<0.05)。结论老年晚期NSCLC外周血CTC的EGFR高表达患者对EGFR-TKI靶向治疗反应有效率较高,生存期较长。     

抗肿瘤药物职业暴露对PIVAS工作人员的健康危害评估★

目的 采用环境检测与生物检测方法评估静脉药物配置中心（PIVAS）工作人员抗肿瘤药物职业暴露情况。方法 于2020年4月随机选取本院PIVAS工作人员50例作为研究对象，根据是否接触过抗肿瘤药物分为暴露组（25例）和非暴露组（25例）。以5-氟尿嘧啶（5-Fu）及环磷酰胺（CTX）为检测标志物，采用超高效液相串联质谱法（UHPLC-MS）连续2年（2020年、2021年）测定PIVAS环境中不同物体擦拭样本及两组研究对象血液、尿液中的5-Fu及CTX浓度；流式细胞术测定外周血细胞凋亡率；酶联免疫吸附法测定8-羟化脱氧鸟苷（8-OHdG）水平。结果 工作人员一般情况比较，差异无统计学意义。PIVAS环境中物体表面存在不同程度的5-Fu和CTX污染，配置区振荡器、传递仓内把手及电话表面的5-Fu平均浓度分别为2 286.26、976.82、202.42 ng·mL^-1，CTX平均浓度分别为2 991.26、88.12、155.40 ng·mL^-1；5-Fu及CTX储存箱存在CTX残留。2021年流式结果显示，暴露组单核细胞早期及总凋亡率均显著高于非暴露组（P=0.024， P=0.024）；暴露组中性粒细胞早、晚期凋亡率均高于非暴露组（P=0.004， P<0.001）。两年均在研究对象尿液中检出了CTX残留，暴露组CTX尿液检出率高于非暴露组（χ² =11.52， P<0.001）。暴露组CTX血药浓度高于非暴露组［Z=-7.500， P<0.001 （2020）； Z=-4.500， P<0.001 （2021）］。8-OHdG是公认的评估DNA损伤和氧化应激的敏感生物标志物，暴露组8-OHdG水平明显高于非暴露组（Z=-4.605， P<0.001），提示暴露组DNA损伤程度明显高于非暴露组。结论 PIVAS存在一定程度抗肿瘤药物污染，应重视抗肿瘤药物职业暴露对人体健康的影响并加强防护。     

人淋巴瘤Raji细胞系中的边缘细胞：淋巴瘤干细胞存在之可能

背景：已有研究提示急性白血病、多发性骨髓瘤中肿瘤干细胞富集于SP细胞中,且免疫表型及生物学特性相比于主群细胞存在明显的异质性。而关于淋巴瘤淋巴瘤干细胞的研究报道甚少。目的：检测人淋巴瘤Raji细胞系中是否存在SP细胞,分选该群细胞后观察其与非SP细胞在分化抗原和P-糖蛋白表达以及细胞周期方面的差异,探讨淋巴瘤干细胞存在的可能性。方法：Hoechst-33342染色细胞后运用带紫外激发光的流式细胞仪进行Raji细胞系SP细胞的检测及分选。观察不同质量浓度维拉帕米对SP细胞抑制的程度,选择最佳抑制浓度。分选后分别检测SP和非SP细胞P-糖蛋白、分化抗原CD34,CD19,CD20,CD5表达以及细胞周期,并进行对比。结果与结论：Raji细胞系中存在SP细胞,比例在2%左右,当维拉帕米质量浓度为50mg/L时能被完全抑制。SP和非SP细胞CD20阳性表达率分别为18.2%和93.6%,CD5阳性表达率分别为78.0%和22.2%;P-糖蛋白表达差异无显著性意义,但SP中阳性细胞的平均荧光强度强于非SP细胞。提示Raji细胞系中SP与非SP细胞在分化程度、多药耐药性方面具有明显的差异,SP细胞是具有明显＂异质性＂的细胞亚群。据此可初步推测,Raji细胞系的构成也类似肿瘤干细胞分级组成模式,而淋巴瘤干细胞则有可能富集于SP亚群中。     

转录因子sox4在宣威女性肺腺癌XWLC-05细胞生长和转移中的作用

目的:研究RNA干扰抑制宣威女性肺癌细胞XWLC-05中转录因子sox4的表达对细胞生长、侵袭和迁移能力的影响.方法:从不同类型肺癌细胞株中,通过实时荧光定量PCR法筛选出高表达sox4的宣威女性肺癌细胞XWLC-05作为研究细胞.将sox4-siRNA转染入XWLC-05细胞后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测sox4表达水平的变化.分别采用MTS法、细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验分析抑制sox4表达对XWLC-05细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响.FCM评估抑制sox4表达对细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:转染sox4-siRNA的实验组细胞在转染后24 h时与空白对照组和阴性对照组相比,sox4 mRNA及蛋白表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05);转染后48 h和72 h时与空白对照组和阴性对照组相比,sox4 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).转染sox4-siRNA的XWLC-05细胞的增殖活性与空白对照组和阴性对照组相比,差异均无统计学意义(P值分别为0.059和0.113),而其迁移能力和侵袭能力却明显低于空白对照组(P值均为0.000)和阴性对照组组(P值分别为0.023和0.000).转染sox4-siRNA的XWLC-05细胞的凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组(P值均为0.000),但sox4-siRNA转染组的细胞增殖指数与空白对照组和阴性对照组相比,差异均无统计学意义(P值分别为0.168和0.225).结论:转录因子sox4可能通过抑制凋亡并促进肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,在宣威女性肺癌的生长和转移中发挥作用.