骨髓纤维化患者的临床特点和骨髓病理学特征分析

目的：探讨骨髓微环境中纤维组织、血管系统的病理改变对部分血液系统疾病的病程及预后的影响。方法重新评估该院诊治的骨髓纤维化患者100例骨髓病理切片,尤其是骨髓微环境中纤维组织、血管系统的病理改变,结合患者的临床症状、肝脾肿大程度、血细胞计数、骨髓细胞学检查及细胞遗传学等相关临床资料,分析骨髓纤维组织增生在血液系统疾病病程网状纤维中的意义。结果所有骨髓活检标本（ Gomori）染色均有不同程度阳性,原发性骨髓纤维化（ PMF）15例,继发性骨髓纤维化（ SMF）85例,SMF病因学分析显示慢性粒细胞白血病、多发性骨髓瘤、原发性血小板增多症易合并骨髓纤维化,SMF纤维化程度较轻,治疗后纤维组织增生程度有所降低。 PMF Gomori染色多为强阳性,改善微循环治疗后纤维化程度缓解不显著,差异无统计学意义。结论 PMF较SMF纤维化程度重,SMF与疾病的病程有一定的相关性。     

地西他滨诱导多发性骨髓瘤KMS-18细胞凋亡及其机制研究

目的:研究地西他滨对多发性骨髓瘤KMS-18细胞的抑制增殖及诱导凋亡的作用及其可能机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度地西他滨干预后KMS-18细胞增殖抑制率;流式细胞术检测地西他滨干预的细胞凋亡变化;实时荧光定量PCR检测地西他滨干预前、后P53基因mRNA表达水平;MSP法检测地西他滨干预前后P53基因启动子甲基化的状态。结果:地西他滨干预后KMS-18细胞增殖抑制率呈时间及浓度依赖性增加(r=0.9790,P 0.05);干预后细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义(P 0.05);地西他滨干预后KMS-18细胞P53基因mRNA表达增加(P 0.05);地西他滨可以部分逆转KMS-18细胞P53基因启动子甲基化状态。结论:地西他滨可抑制细胞增殖,并诱导其凋亡,与其部分逆转KMS-18细胞P53基因启动子甲基化有关。     

淋巴瘤细胞白血病骨髓细胞形态学和免疫分型的特点及其在诊断中的价值

目的:探讨淋巴瘤细胞白血病骨髓细胞形态学和免疫分型的特点以及两者在疾病诊断中的价值。方法:回顾性分析本院2012年1月至2017年1月收治的35名淋巴瘤细胞白血病患者的骨髓涂片及骨髓免疫分型资料,观察淋巴瘤细胞白血病患者的骨髓形态和免疫分型特点及两者在淋巴瘤细胞白血病中的诊断价值。结果:所有患者骨髓中均有典型的淋巴瘤细胞的形态,免疫分型中分化抗原表达与原疾病病理类型相吻合,T细胞淋巴瘤细胞白血病患者细胞主要表达CD7、CD3、CD2、CD5、CD11b、CD34及HLA-DR,其中CD7最为敏感,其阳性率为69.2%。B细胞淋巴瘤白血病患者细胞主要表达CD19、CD20、CD22、CD79a、skappa及早期抗原HLA-DR等,其中CD19阳性率最高为89.5%。35例患者中28例骨髓涂片中淋巴瘤细胞比例与骨髓免疫分型中淋巴瘤细胞比例吻合,7例骨髓涂片的淋巴瘤细胞比例与免疫分型中淋巴瘤细胞比例相差1.5倍以上。结论:淋巴瘤细胞白血病骨髓涂片结合免疫分型在判断淋巴瘤细胞是否骨髓侵犯方面可以相互补充、取长补短,减少漏诊率,有利于淋巴瘤白血病患者的早期诊断。     

造血干细胞移植相关早期并发症的防治

目的总结造血干细胞移植(HSCT)相关早期并发症的预防和治疗经验。方法 50例恶性血液病患者接受不同方法治疗,其中自体HSCT20例、异基因HSCT19例、混合HSCT10例和脐血HSCT1例。预处理方案包括白消安+环磷酰胺,卡莫司汀+依托泊苷+阿糖胞苷+马法兰,大剂量马法兰等。异基因HSCT患者采用环孢素+甲氨蝶呤为主的移植物抗宿主病(GVHD)预防方案,其中非亲缘异基因HSCT患者则采用环孢素+甲氨蝶呤+吗替麦考酚酯+抗胸腺细胞免疫球蛋白为主的GVHD强化预防方案。所有患者均采用小剂量肝素及复方丹参,部分联合前列腺素E1脂质体微球预防肝静脉闭塞病。所有献血员进行CMV特异性抗体筛查和分次全身照射。结果 50例患者中发生肝静脉闭塞病1例(2.0%),该患者合并Ⅳ度GVHD,症状持续加重且治疗无效,于+26d死亡。CMV血症4例(8.0%),1例发生CMV间质性肺炎,经过抗病毒治疗后痊愈。30例异基因及混合HSCT患者中16例(53.3%)发生急性GVHD,其中Ⅰ度3例、Ⅱ度6例和Ⅲ～Ⅳ度7例,经过治疗后,4例重度患者死亡,其余12例病情控制;6例(20.0%)发生慢性GVHD。发生出血性膀胱炎2例(4%),经对症治疗后痊愈。结论通过筛查献血员CMV-IgM和CMV-IgA抗体,输注经照射及白细胞滤除的血制品,监测CMV-pp65及抗CMV抗体,预防性使用抗病毒药物及分次全身照射等综合措施可以有效地防治CMV感染。对不同移植种类的受者采用不同强度的GVHD预防方案十分必要。     

树突细胞介导的独特型瘤苗的体外抗骨髓瘤作用

目的研究树突细胞（DC）介导的独特型瘤苗诱导骨髓瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的抗肿瘤免疫反应。方法从多发性骨髓瘤（MM）患者外周血中分离获取DC前体细胞，使用GM-CSF、IL-4与TNF-α诱导分化促成熟。加入MM患者的M蛋白F（ab′），片段（Id），诱导MM肿瘤特异性CTL。光学显微镜下观察其培养过程中形态特征变化，电镜观察其超微结构，间接免疫荧光观察其表型特征，采用MTT法检测致敏DC促自体T淋巴细胞增殖的能力以及患者CTL对自体骨髓瘤细胞的特异性细胞毒杀伤作用。结果 GM-CSF、IL-4和TNF-α配伍可有效地从MM患者外周血单陔细胞中诱导出大量成熟的功能性DC。MM患者自体血清Id冲击致敏的成熟DC能够显著地提高T细胞的增殖能力，并且使幼稚T细胞活化成为肿瘤独特型CTL，各个剂量的CTLs均能够产牛针对自体MM细胞的抑制性杀伤反应。结论 在MM患者外周血中可获得典型的DC，使用负载了Id的DC疫苗能够诱导出有效的抗肿瘤免疫应答反应，以DC为基础的疫苗可能在MM免疫治疗中发挥重要的作用。     

IFN-α和IFN-γ逆转MR2细胞维甲酸耐药的实验研究

目的:探讨IFN-α和IFN-γ与全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)联合逆转MR2细胞对ATRA耐药的可能性及其机制。方法:IFN-α、IFN-γ及ATRA单独或两种IFN分别与ATRA联合作用于对ATRA耐药的细胞株MR2后,采用MTT比色法检测细胞的增殖,用光镜观察、NBT还原实验及流式细胞仪检测细胞的分化,用间接免疫荧光法检测早幼粒细胞白血病(promyelocytic leukemia,PML)蛋白的表达。结果:两种IFN均能抑制MR2细胞的增殖;IFN与ATRA联合应用时抑制作用更加显著;但两种IFN无论是单独应用还是与ATRA联合应用,二者之间均无统计学意义(P>0.05)。两种IFN也能诱导MR2细胞发生一定程度的分化;二者分别与ATRA联合应用时作用更加显著,但IFN-γ ATRA组诱导MR2细胞分化的作用明显强于IFN-α ATRA组(P<0.05)。两种IFN都能诱导PML蛋白的表达。结论:IFN-γ与ATRA联合应用逆转MR2细胞对ATRA耐药的作用强于IFN-α与ATRA的联合,可能与IFN-α和IFN-γ信号传导途径的不同有关。     

Effects of varied interferons in combination with all-trans retinoic acid （ ATRA ） on proliferation and differentiation of ATRA-resistent APL cell

Objective：To investigate the effects and mechanisms of interferon in combination with alltrans retinoic acid （ATRA） on proliferation and differentiation of ATRA-resistent APL cell. Methods ：After MR2 cells （ATRA-resistance cell line） were treated with IFN-α, IFN-γ and ATRA alone or IFN-α and IFN-γ in combination with ATRA respectively. The cell proliferation was tested by MTT test and the cell differentiation was tested through light microscope by NBT test and flow cytometry （FCM）. The expres sion of promyelocytic leukemia （PML） protein was observed by indirect immune fluorescent method. Results： Both IFN-α and IFN-γ could inhibit the proliferation and induce the differentiation of MR2 cells to some extent. The effects were more obvious after both interferons in combination with ATRA respectively （P〈0.05）. Moreover, the maturation of MR2 cells induced by IFN-γ＋ATRA group was more higher than that by IFN-α＋ATRA group （P〈0. 05）. Both interferons could induce the expressions of PML protein. Conclusion：Both interferons can inhibit MR2 cells proliferation, which may be related to the expression of PML protein induced by both interferons. The inducing differentiation effects of IFN-γ＋ATRA group on MR2 cells are more powerful than those of IFN-aq-ATRA group, which may be related to the different signal transduction pathway of both interferons.     

小鼠脾细胞在混合骨髓移植中的作用

目的:观察同异基因小鼠脾细胞输注比例和输注量在混合半相合骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)和嵌合状态的影响.方法:受鼠全身照射后,经尾静脉回输同基因和半相合异基因供鼠骨髓及两者不同比例脾细胞.A组未加入异基因供鼠脾细胞,B组加入的同异基因供鼠脾细胞量相等,C组加入异基因供鼠脾细胞量是同基因供鼠脾细胞量的两倍.回输后观察GVHD临床表现,取肝、皮肤、小肠送病理学检查评定GVHD分级.测定 70天、 150天嵌合率.监测造血重建和受鼠生存率.结果:混合骨髓移植各组小鼠生存期均超过50天.其中A组,临床和病理无GVHD表现, 150天嵌合水平大幅度下降.B组,临床和病理无明显GVHD表现, 150天嵌合水平中等幅度下降.C组病理有GVHDⅡ级表现, 150天嵌合水平下降不明显.半相合骨髓移植对照组小鼠出现典型的GVHD临床和病理表现,仅20%小鼠生存期超过50天.结论:小鼠混合半相合骨髓移植中,同异基因小鼠脾细胞输注比例和输注量对移植排斥和GVHD有协调作用.     

多细胞过继性免疫治疗治疗晚期恶性肿瘤的近期疗效及安全性分析

目的:初步观察DC、CIK、γδT、CD3AK及NK细胞多细胞过继性免疫治疗对晚期恶性肿瘤患者的近期临床疗效及安全性分析。方法:对我院在2014年10月至2015年10月收治的162例次晚期恶性肿瘤患者进行多细胞过继性细胞免疫治疗,血细胞分离机单采自体外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC),体外培养扩增DC、CIK、γδT、CD3AK及NK细胞,采用FCM法检测各细胞表型,并按计划序贯回输给患者进行治疗。结果:69例（43%）患者临床症状有不同程度改善,尤其是精神、食欲及睡眠质量改善最为明显,安全性分析显示主要不良反应为发热,占15%,28例完成3疗程免疫治疗患者瘤体变化为部分缓解（partial remission,PR）2例,疾病稳定（stable disease,SD）16例,疾病控制率（disease control rate,DCR）为64%。结论:DC、CIK、γδT、CD3AK及NK细胞过继性免疫治疗对晚期恶性肿瘤安全有效,可明显改善其生活质量,具有一定的临床应用前景。