融合蛋白TNFR1/DED介导舌癌细胞凋亡的实验研究

目的 :构建含FADD及TNFR1基因功能结构域的融合基因TFL ,稳定转染入舌癌细胞后 ,通过体内、外实验初步观察融合蛋白TNFR1/DED在重组人肿瘤坏死因子 α(rhTNF α)作用下介导舌癌细胞凋亡的效应。方法 :反转录及重组PCR构建融合基因TFL ;鉴定融合蛋白TNFR1/DED在建系舌癌细胞T TFL中的表达 ,通过MTT法、形态学观察、DAN片段及体内抑瘤实验 ,观察融合蛋白TNFR1/DED介导舌癌细胞凋亡的效应。结果 :获得了人FADD及TNFR1基因并构建成功融合基因TFL ,转染入Tca 8113细胞后 ,能表达融合蛋白TNFR1/DED活性 ,体外实验观察到rhTNF α可有效地杀伤舌癌细胞 ,体内可明显抑制移植瘤的生长 ,且荷瘤动物内脏器官无病理性改变。结论 :融合蛋白TNFR1/DED可有效地介导舌癌细胞凋亡 ,为舌癌基因治疗研究提供实验基础。     

骨髓纤维化患者的临床特点和骨髓病理学特征分析

目的：探讨骨髓微环境中纤维组织、血管系统的病理改变对部分血液系统疾病的病程及预后的影响。方法重新评估该院诊治的骨髓纤维化患者100例骨髓病理切片,尤其是骨髓微环境中纤维组织、血管系统的病理改变,结合患者的临床症状、肝脾肿大程度、血细胞计数、骨髓细胞学检查及细胞遗传学等相关临床资料,分析骨髓纤维组织增生在血液系统疾病病程网状纤维中的意义。结果所有骨髓活检标本（ Gomori）染色均有不同程度阳性,原发性骨髓纤维化（ PMF）15例,继发性骨髓纤维化（ SMF）85例,SMF病因学分析显示慢性粒细胞白血病、多发性骨髓瘤、原发性血小板增多症易合并骨髓纤维化,SMF纤维化程度较轻,治疗后纤维组织增生程度有所降低。 PMF Gomori染色多为强阳性,改善微循环治疗后纤维化程度缓解不显著,差异无统计学意义。结论 PMF较SMF纤维化程度重,SMF与疾病的病程有一定的相关性。     

舌癌细胞系T-TFL的建立和生物学性状检测

背景：基因治疗已成为恶性肿瘤研究领域的热点和发展趋势，但舌癌基因治疗的研究报道极少。目的：构建含相关死亡结构域蛋白(FADD)及肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)基因功能结构域的融合基因TFL，稳定转染入人舌鳞状细胞癌细胞系(Tca-8113)中，检测建系细胞T-TFL的生物学性状，探讨一种更有利于舌癌患者治疗期及治疗后期内生活质量的治疗手段。设计：以诊断为依据，前瞻性研究。地点和对象：实验在第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科完成，研究对象为人舌鳞状细胞癌细胞系(Tca-8113)，上海第二医科大学口腔医学院建系。干预：反转录PCR获得人FADD及TNFR1基因cDNA，重组PCR法构建含二者功能结构域的融合基因TFL，通过阳离子脂质体法稳定转染TFL基因入Tca-8113细胞中。主要观察指标：Westem blot检测融合蛋白TNFR1／DED表达，通过形态学观察、生长曲线等检测T-TFL细胞的生物学性状。结果：获得了人FADD及TNFR1基因并构建成功融合基因TFL，转染入Tca-8113细胞后，能表达融合蛋白TNFR1／DED活性，且T-TFL细胞与亲本Tca-8113细胞的生物学性状无明显差异。结论：T-TFL细胞能表达融合蛋白TNFR1／DED活性，可以为进一步深入研究舌癌基因治疗提供实验基础。     

树突细胞介导的独特型瘤苗的体外抗骨髓瘤作用

目的研究树突细胞（DC）介导的独特型瘤苗诱导骨髓瘤抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的抗肿瘤免疫反应。方法从多发性骨髓瘤（MM）患者外周血中分离获取DC前体细胞，使用GM-CSF、IL-4与TNF-α诱导分化促成熟。加入MM患者的M蛋白F（ab′），片段（Id），诱导MM肿瘤特异性CTL。光学显微镜下观察其培养过程中形态特征变化，电镜观察其超微结构，间接免疫荧光观察其表型特征，采用MTT法检测致敏DC促自体T淋巴细胞增殖的能力以及患者CTL对自体骨髓瘤细胞的特异性细胞毒杀伤作用。结果 GM-CSF、IL-4和TNF-α配伍可有效地从MM患者外周血单陔细胞中诱导出大量成熟的功能性DC。MM患者自体血清Id冲击致敏的成熟DC能够显著地提高T细胞的增殖能力，并且使幼稚T细胞活化成为肿瘤独特型CTL，各个剂量的CTLs均能够产牛针对自体MM细胞的抑制性杀伤反应。结论 在MM患者外周血中可获得典型的DC，使用负载了Id的DC疫苗能够诱导出有效的抗肿瘤免疫应答反应，以DC为基础的疫苗可能在MM免疫治疗中发挥重要的作用。     

不同声压级次声对大鼠海马细胞凋亡的影响

目的　探讨 8Hz ,90dB/13 0dB次声作用对海马细胞凋亡的影响。方法　将雄性SD大鼠 88只随机分为 11个组 ,即对照组、90dB次声作用 1d组、7d组、14d组、2 1d组及 2 8d组 ,13 0dB次声作用 1d组、7d组、14d组、2 1d组及 2 8d组 ,每组 8只。采用细胞分离技术、荧光染色和流式细胞仪观察大鼠脑海马细胞凋亡率。结果　与对照组比较 ,90dB/1d组、13 0dB/1d组、13 0dB/7d组次声作用后 ,海马细胞未显示凋亡率增高 (P >0 .0 5 ) ;90dB/7d组、90dB/14d组、90dB/2 1d组、13 0dB/14d组、13 0dB/2 1d组次声作用后 ,海马细胞凋亡率显著增高 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,90dB/2 1d组比 90dB/14d组明显回落 (P <0 .0 1) ,但仍高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,90dB/14d组海马细胞凋亡率达到高峰 (P <0 .0 1) ,90dB/2 8d组及 13 0dB/2 8d组与对照组相比 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论　 8Hz ,90dB/13 0dB次声作用一定时间后 ,均可导致海马细胞凋亡数量显著增高 ,尤以 90dB/14d组效应最强 ;8Hz ,90dB/13 0dB次声作用对大鼠海马细胞具有损伤效应。随作用时间延长 ,海马细胞对 8Hz ,90dB/13 0dB次声作用均可产生适应性。     

酪氨酸激酶抑制剂STI571与P21WAF基因克隆治疗慢性粒细胞白血病的实验研究

本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂ST1571和P21^WAF基因克隆对慢性粒细胞白血病急变K562细胞株的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的治疗作用。RT—PCR扩增P21^WAF基因，胶纯化回收后连接到T载体测序，序列正确后构建P21—pcDNA3．1栽体，将P21—pcDNA3．1与空载体分别以脂质体转染入P21蛋白表达缺如的K562细胞，经筛选得到G418抗性的K562细胞株，Westernblot证实转染后有P21蛋白表达，MTT法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果表明：表达外源性P21蛋白的P21—pcDNA3．1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株，流式细胞仪显示G0／G1期细胞增多，MTT法显示P21—pcDNA3．1-K562细胞与ST1571联合应用后，与单用ST1571作用的K562细胞相比，凋亡细胞比例轻度减少，细胞存活率下降较慢。结论：表达外源P21蛋白能抑制K562细胞增殖，同时对ST1571的促凋亡作用有轻度抑制，并降低K562细胞对ST1571的敏感性。     

罗丹明123分离肝癌细胞系HepG2异质性亚群的鉴定

目的:建立分离肝癌细胞系HepG2中对罗丹明123(Rho123)染料具有不同排斥能力细胞亚群的方法,并探讨其在肝癌异质性研究中的意义.方法:利用流式细胞分选术(FCM)并结合不同浓度的Rho123染料,分析和分选肝癌细胞系HepG2细胞中具有不同染料排斥能力的肝癌细胞亚群,再通过细胞生长的测定、软琼脂克隆形成以及免疫组织化学检测和裸鼠成瘤实验等方法,以比较不同肝癌细胞亚群的差异.结果:根据不同染料排斥能力可以将肝癌细胞系HepG2细胞分为Rholow和Rhohigh2个亚群,2个亚群在倍增时间(16.9 h vs 24.7 h)、最大增生倍数(15.2 vs 12.3)、克隆形成率(50%vs 20%)以及甲胎蛋白(AFP)的表达(31/32 vs 20/26)以及裸鼠成瘤实验(7/10 vs 1/10)上具有显著性差异(均P＜0.01),Rholow亚群是具有干细胞特性的.结论:Rho123结合FCM可以富集具有干细胞特性的Rholow亚群,同时进一步证实肝癌的异质性.     

瘢痕子宫中央型前置胎盘36例临床分析

目的：分析36例瘢痕子宫中央型前置胎盘的诊断、治疗及预后,达到降低并发症、减少孕产妇及新生儿死亡率的目的。方法36例瘢痕子宫中央型前置胎盘全部通过彩超诊断,并通过剖宫产术中探查确诊,通过选择适当子宫出血部位缝合、宫腔填塞、子宫切除等方法进行术中大出血控制,保证患者生命安全。结果36例全部实施剖宫产术,子宫切开前均予以静脉输血,胎盘植入原子宫瘢痕处者并子宫切除12例,其中2例侵犯到膀胱和1例侵犯左侧输尿管,1例术中发生膀胱撕裂伤,予以修补;1例术中发生输尿管损伤,予以输尿管修补,并置放输尿管导管,术后1个月拔出输尿管导管,预后良好;宫腔填塞9例, FOLEY尿管充水压迫子宫下段3例,胎盘附着部位缝合8例,胎盘部分植入、子宫肌层楔形切除4例,平均产后出血量2000 ml,其中发生失血性休克5例,无产妇死亡病例发生,术后均恢复良好。早期新生儿死亡1例,余35例均存活。结论瘢痕子宫前置胎盘又称凶险型前置胎盘,于妊娠的任何时期均可发生致命性的阴道流血,尤其是妊娠晚期至分娩期,极大地危害母婴安全,终止妊娠的方法及时机对于母婴预后至关重要。降低剖宫产率,减少瘢痕子宫的绝对值,对于避免此类病例的发生具有重要意义。     

31例子痫患者的临床分析

目的探讨子痫及其并发症对母儿预后的影响。方法回顾性分析自1999年4月至2014年1月新郑市人民医院收治的31例子痫患者发生的孕周、产检情况、发病地点、病情发展、治疗方法、终止妊娠的方式以及母婴并发症等。结果 31例子痫患者均无正规的产前检查,发病最早者孕27周,最晚者41周,其中家中发生子痫抽搐者25例,医院内发生者6例,合并有的严重并发症者22例,主要并发症包括胎盘早剥4例、HELLP综合征2例,舌咬伤1例、脑出血2例、呼吸、心脏停搏1例、急性左心衰竭4例、急性肾功能衰竭2例、产后出血6例。宫内死胎2例,早期新生儿死亡2例。结论 31例子痫患者中,其起病孕周、产检情况、子痫发病地点以及终止妊娠时机选择对子痫患者的预后密切相关,科学的管理、规范的治疗对于降低子痫患者严重的母婴并发症有重要意义。     

非霍奇金淋巴瘤继发骨髓纤维化的骨髓病理学特征及其与疾病预后的关系

目的:观察非霍奇金淋巴瘤(NHL)继发骨髓纤维化患者的骨髓病理学特征及其与疾病预后的关系。方法:回顾性分析2012年1月至2013年12月期间西安交通大学医学院第一附属医院血液内科收治的14例NHL继发骨髓纤维化患者的临床资料,观察继发骨髓纤维化患者的骨髓病理学特征,同时比较同期收住的未合并骨髓纤维化的30例NHL患者与继发骨髓纤维化患者间总生存率及无疾病进展生存率的差异。结果:继发骨髓纤维化的14例NHL患者均为Ⅳ期,其中9例为淋巴瘤细胞白血病,继发骨髓纤维化患者骨髓纤维组织不同程度增生,Gomori染色+至+++,经治疗后骨髓淋巴瘤细胞减少或成为增生性骨髓象时,Gomori染色转为阴性,疾病复发时再次出现骨髓纤维化。未继发骨髓纤维化的30例NHLⅣ期患者的1、3、5年总存率及无疾病进展生存率分别为100%、93.1%、57.6%和100%、92.6%、52.6%。继发骨髓纤维化的14例患者的1、3、5年总存率及无疾病进展生存率分别为92.9%、81.3%、48.8%和71.8%、62.3%、47.9%。结论:NHL继发骨髓纤维化患者多处于Ⅳ期,尤其是淋巴瘤细胞白血病患者中继发骨髓纤维化者多见。继发骨髓纤维化患者骨髓活检表现为纤维组织不同程度增生,疾病缓解时骨髓纤维化程度减轻或消失。继发骨髓纤维化的NHL患者总生存率及无疾病进展生存率较未继发骨髓纤维化患者降低,继发骨髓纤维化是疾病预后不良的指标之一。