两面针根抗菌活性成分研究

目的 研究两面针Zanthoxylum nitidum根提取物中具有抗菌活性的化学成分.方法 以药理活性测试为导向,综合利用硅胶柱、氧化铝柱、制备TLC和制备HPLC等色谱技术分离两面针提取物活性成分,采用NMR和MS谱学数据及其理化性质鉴定化合物结构.结果 从两面针根提取物中分离得到11个化合物,分别鉴定为茵芋碱(1)、氧化白屈菜红碱(2)、8-甲氧基二氢白屈菜红碱(3)、β-谷甾醇(4)、L-芝麻脂素(5)、8-甲氧基-9-羟基白屈菜红碱(6)、4-羟基-Ⅳ-甲基脯氨酸(7)、鹅掌楸碱(8)、勒樘碱(9)、两面针碱(10)、苯甲酸异丁酯(11).抗菌测试表明化合物1、3、6、8和10均能显著抑制金黄色葡萄球菌,其中化合物8抑菌效果最强,MIC为31.3 μg/mL,较优于对照药磺胺甲噁唑;进一步测试表明化合物8能显著抑制临床分离的对6大类抗生素均耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),MIC为93.8 μg/mL.结论 基于活性 导向法从两面针根提取物中分离鉴定出能显著抑制金黄色葡萄球菌生物碱活性成分,化合物7、9和11为首次从该植物分离获得,首次发现化合物8对临床多药耐药性MRSA具有较强杀菌活性,为开发新型超级细菌抗菌素提供参考.     

飞龙掌血根的质量研究

【目的】建立飞龙掌血根的质量标准。【方法】采用薄层色谱法（TLC）对飞龙掌血根中氯化两面针碱和毛两面针素进行鉴别,采用高效液相色谱法（HPLC）测定飞龙掌血根中氯化两面针碱和毛两面针素的含量,同时参照《中国药典》附录相关方法,测定其水分、灰分含量。【结果】 TLC法可对飞龙掌血根中氯化两面针碱和毛两面针素进行鉴别,且斑点清晰,与其他成分分离度好; HPLC测定结果显示：氯化两面针碱在2.84～42.6μg／mL,毛两面针素在25.6～384μg／mL线性关系良好,平均回收率分别为99．2％（相对标准偏差sR＝1．12％）和100％（sR＝0．71％）;水分含量为75．8～98．9 mg／g,总灰分含量为12．4～33．6 mg／g。【结论】本研究所建立的方法专属性和准确性良好,可为飞龙掌血根质量标准的建立提供实验依据。     

两面针根抗菌活性成分研究

目的 研究两面针Zanthoxylum nitidum根提取物中具有抗菌活性的化学成分。方法 以药理活性测试为导向,综合利用硅胶柱、氧化铝柱、制备TLC和制备HPLC等色谱技术分离两面针提取物活性成分,采用NMR和MS谱学数据及其理化性质鉴定化合物结构。结果 从两面针根提取物中分离得到11个化合物,分别鉴定为茵芋碱（1）、氧化白屈菜红碱（2）、8-甲氧基二氢白屈菜红碱（3）、β-谷甾醇（4）、L-芝麻脂素（5）、8-甲氧基-9-羟基白屈菜红碱（6）、4-羟基-N-甲基脯氨酸（7）、鹅掌楸碱目的 研究乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensis根及根茎的化学成分。方法 应用溶剂法和色谱法进行分离纯化,利用波谱技术鉴定化合物结构;并测试化合物的细胞毒活性。结果 从乌拉尔甘草50%乙醇提取物中分离得到14个皂苷类化合物,分别鉴定为uralsaponin C（1）、uralsaponin D（2）、licorice-saponin A3（3）、uralsaponin F（4）、22β-acetoxyl-glycyrrizin（5）、24-hydroxyl-licorice-saponin E2（6）、licorice-saponin E2（7）、licorice-saponin G2（8）、22β-acetoxyl-glyrrhaldehyde（9）、3β-O-[β-D-glucuronopyranosyl-(1→2)-β-D-glucuronopyranosyl]-glycyrretol（10）、araboglycyrrhizin（11）、licorice-saponin J2（12）、甘草酸（13）、单葡糖醛酸基甘草次酸（14）。化合物1～14对3种人源肿瘤细胞MGC-803、SW620、SMMC-7721的半数抑制率（IC₅₀）均大于100 μmol/L,化合物2、6～8、13的水解后苷元对3种人源肿瘤细胞的抑制率为18.3～41.6 μmol/L。结论 化合物14是一个新的天然产物,化合物11为首次从该植物中分离得到;化合物1～14对3种人源肿瘤细胞MGC-803、SW620、SMMC-7721均无显著的细胞毒活性,化合物2、6～8、13水解后苷元细胞毒活性增强。     

6种动物类药材中黄曲霉毒素污染的液质联用检测

目的:建立一种快速检测动物类药材污染黄曲霉毒素B1(AFB1)和黄曲霉毒素G1(AFG1)的液质联用方法,并用于水蛭等6种动物类中药材污染情况的分析。方法:药材样品加84%乙腈提取,提取液挥干后用甲醇溶解,采用高效液相串联质谱检测方法,C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,3μm),以甲醇-4.0 mmol·L~(-1)乙酸铵-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,质谱使用ESI离子源,正离子扫描模式,选择反应检测(SRM)模式进行定量。结果:6种药材中AFB1,AFG1的基质效应介于82%~119%;以水蛭作为代表性基质,进行加样回收率试验,按低、中、高3个浓度水平添加时,AFB1与AFG1的提取回收率、绝对回收率介于80%~117%。方法学考察精密度RSD 1.8%~7.5%,重复性RSD 5.1%~14%。将该方法应用于55份动物药材样品检测,结果显示包括水蛭和土鳖虫在内的4份样品受到污染,其中土鳖虫污染率达33.3%,污染水平处于1.26~26.3μg·kg~(-1)。结论:土鳖虫等动物类药材受黄曲霉毒素污染的情况应当引起足够的重视。针对药材生产的各个环节,采取恰当的措施降低黄曲霉毒素污染的风险是十分必要的。     

10种中药材和3种食品污染赭曲霉毒素A的LC-MS/MS检测研究

目的:通过优化液相色谱条件和质谱条件,并结合稀释法克服基质效应的影响,建立适用于10种中药材和3种食品污染赭曲霉毒素A(OTA)的LC-MS/MS检测方法。方法:样品经84%乙腈提取后,上清液用色谱甲醇复溶(稀释4倍),直接上样检测;流动相采用4.0 mmol·L-1醋酸铵-0.1%甲酸水溶液和甲醇,经C18色谱柱分离后注入质谱仪,在选择反应监测模式(SRM)下进行正离子检测。结果:经方法学验证,赭曲霉毒素A质量浓度在25.00~50 000 ng·L-1范围内呈现良好的线性关系,r>0.998 7;定量限25.0 ng·L-1;高、中、低3个浓度水平的绝对回收率89.6%~95.2%,提取回收率84.2%~100.0%;13种样品的基质效应91.5%~118.7%。将该方法应用于实际100批样品的检测,结果显示100批样品中仅有1批的检测结果呈阳性(0.7μg·kg-1),表明该地区这些样品中OTA的污染情况不严重。结论:本研究建立的LC-MS/MS方法具有预处理简便、经济等优点,适用于这10种中药材及3种食品污染赭曲霉毒素A的快速检测。     

中药饮片中黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的液质联用检测分析

目的 应用高效液相色谱-串联质谱联用技术,建立中药饮片中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和玉米赤霉烯酮等5种霉菌毒素的同时检测方法,并对市售中药饮片进行分析.方法 样品经84％乙腈提取,浓缩后不经纯化步骤直接进C18色谱柱分离,选用4.0 mmol/L NH4Ac-0.1％甲酸水溶液和甲醇作为流动相,在20 min内经线性梯度洗脱将5种真菌毒素得以分离.质谱采用ESI源,在选择反应监测模式下进行正负离子同时检测.结果 经方法学验证,5种真菌毒素在各自定量范围内呈现良好的线性关系,r＞0.990,平均回收率在62.4％ ～ 124％之间.结论 该方法具有预处理简便、快速等优点,适用于多种中药饮片中黄曲霉毒素B1、B2 G1、G2和玉米赤霉烯酮的测定.     

苦杏仁中黄曲霉毒素B1, B2, G1, G2的液质联用检测分析

基质效应是影响液质联用定量准确性的一个重要因素,在方法学评价阶段中必不可少。该研究采用稀释法,并通过优化色谱和质谱条件,成功克服苦杏仁的基质效应对整个分析过程的干扰,建立了一种可对苦杏仁污染黄曲霉毒素B₁,B₂,G₁,G₂进行大量筛查及检测的液质联用方法,与Mycosep226净化柱纯化的方法相比,具有回收率高、经济、简便的特点;对11批样品进行检测发现有2批样品的黄曲霉毒素检测结果呈阳性,其中黄曲霉毒素B₁的污染水平为1.590~2.340 μg·kg^-1,黄曲霉毒素总量(B₁+B₂+G₁+G₂)的污染水平为2.340~3.304 μg·kg^-1,表明苦杏仁污染黄曲霉毒素这一现象应当引起重视,并且有必要对其贮藏方式进行考察,以减少黄曲霉毒素的污染。     

15种中药材表面污染真菌的分离与分子鉴定

为了了解中药材受真菌污染的状况,探索中药材表面污染真菌的快速鉴定方法.利用PDA培养基进行中药材污染真菌的分离与纯化.根据真菌基因组ITS序列设计特异引物,通过PCR扩增和序列分析进行菌株鉴定.从15种湖北市售中药材上分离得到50株真菌,污染率为93.3%.利用分子鉴定方法成功鉴定了其中的27株.中药材受真菌污染现象较为普遍,各菌属污染中药材情况不同,其中以曲霉属真菌的污染较严重,存在潜在的风险.该实验所设计的引物通用性较好,可用于中药材表面污染真菌的鉴定.     

稀释法结合LC-MS/MS检测在10种中药材污染黄曲霉毒素高通量筛查中的应用研究

该研究运用稀释法,克服了基质效应对10种中药材污染黄曲霉毒素B₁,B₂,G₁,G₂的液质联用检测的影响,高、中、低3个浓度水平的基质效应检测结果在80.23%~115.5%,符合准确定量的要求。为增强检测结果的特异性和准确性,研究结合保留时间窗、定量离子与定性离子的峰面积比值2个指标对83批中药材的检测进行色谱峰的辨认,并以苦杏仁为基质溶液配制的3个浓度的质控样品对检测体系的稳定性进行考察。检测结果显示医院和药店的药材污染率分别为13.89%和17.02%,其中以使君子和红枣的污染率较高。质控样品的RSD<6.6%,表明该分析方法可用于这10种中药材的高通量的筛查和检测,具有经济、快速的优点。