VEGF在精索静脉曲张大鼠睾丸和附睾中表达的研究

血管内皮生长因子 ( VEGF)是新生血管形成的主要调控者之一。 VEGF不但作用与内皮细胞 ,而且也作用于非内皮细胞 ,它可能对男性生殖具有调节作用。精索静脉曲张 ( VC)是男性不育的一个主要原因 ,VC的睾丸流体动力学和血管系统有所改变 ,睾丸和附睾中 VEGF的表达是否会有改变 ,VEGF在精索静脉曲张性不育中是否起作用等至今未见报道。本研究通过免疫组织化学方法对正常大鼠和 VC大鼠睾丸和附睾中VEGF的定位及变化作了研究。材料和方法 :建立青春期大鼠左侧精索静脉曲张动物模型 ,并进行了验证。取曲张组及对照组大鼠双侧睾丸和附睾…     

腺病毒介导的NT4p53(N15)Ant异源融合基因对肝癌细胞的杀伤作用

目的 构建包括神经营养因子4(NT4)信号肽,p53氨基端短活性肽(12～26位氨基酸)及蛋白质转导结构域-黑腹果蝇触足肽(Ant)序列在内的异源融合基因,并以腺病毒作为基因转移载体观察NT4p53(N15)Ant基因在体外对肝癌细胞系HepG2的杀伤效应.方法 应用互为模板的引物PCR技术及T载体克隆法获得p53(N15)Ant基因克隆,经酶切后连入pBV220/NT4质粒,再将融合基因NT4p53(N15)Ant亚克隆至腺病毒的穿梭质粒内,与辅助质粒pJM17共转染HEK293细胞,通过同源重组获得重组腺病毒,经PCR鉴定后,NT4p53(N15)Ant重组腺病毒感染HepG2细胞,用MTT比色法和PI染色流式细胞计数仪分析Ad.NT4p53(N15)Ant对肿瘤细胞和正常细胞的杀伤效应及凋亡率.结果 克隆出NT4p53(N15)Ant基因,得到高滴度的重组腺病毒,提取病毒DNA经PCR证实含目的基因.MTT测定结果显示,与平行对照病毒Ad.GFP相比,Ad.NT4p53(N15)Ant对HepG2细胞有强烈的杀伤效应,且以病毒感染后48 h作用最为明显,对肿瘤细胞抑制率达到63.3%,而对正常细胞NIH3T3的影响很小.Ad.NT4p53(N15)Ant感染HepG2细胞30 h后的流式细胞仪分析结果显示:Ad.NT4p53(N15)Ant可使HepG2细胞发生凋亡,凋亡率为18.16%.结论 通过分子克隆体外重组技术我们首次成功制备了NT4p53(N15)Ant复制缺陷型重组腺病毒;初步的研究发现Ad.NT4p53(N15)Ant对HepG2细胞有强烈的杀伤效应,这种效应部分是通过诱导HepG2细胞的凋亡而实现的.     

猪胆汁提取物对人阴道毛滴虫杀伤作用的体外实验研究(摘要)

1982年我们在总结临床试用猪胆汁阴道杀精避孕药膜的工作中,发现猪胆汁及提取物不仅能杀灭精子,而且有碎解阴道毛滴虫的作用,为了进一步验证,我们进行了体外试验,用相差显微镜进行活体观察,现将结果报告如下。材料与方法虫株由本院寄生虫学教研室提供的615号人阴道毛滴虫虫株,以肝浸汤培养液传代保种。     

甲醛急性染毒对性成熟期雄性大鼠睾丸支持细胞结构和功能的影响

目的探讨甲醛急性染毒对性成熟期雄性大鼠支持细胞结构和功能的影响。方法选用性成熟期健康SD雄性大鼠24只,随机分为甲醛染毒高[10mg／（kg·d）]、中[1mg／（kg·d）]、低[0．1mg／（kg·d）]剂量和对照组4组。腹腔注射染毒3d后,利用透射电镜观察支持细胞的超微结构,利用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）测定雄激素结合蛋白（ABP）mRNA的相对表达量。结果①染毒3d后,高剂量甲醛染毒组精子数与对照组相比显著下降（P〈0．05）;中、高剂量甲醛染毒组精子活动率与对照组相比显著下降（P〈0．05）而精子畸形率与对照组相比显著升高（P〈0．05）;②中、高剂量甲醛染毒组大鼠支持细胞线粒体空泡化、核染色质边集;③各剂量甲醛染毒组的ABPmRNA表达水平与对照组相比均有明显的差异（P〈0．05）。相关检验发现甲醛染毒剂量与ABPmRNA表达水平显著负相关（r=-0．896,P〈0．05）。结论对支持细胞结构和功能的影响可能是甲醛雄性生殖毒性的重要机制。 献标志码：A     

Y染色体上9个STR基因座基因频率在不育和生育力正常人群间分布的比较

目的 评估某些Y染色体单倍型是否为导致男性不育的Y染色体微缺失的易感或保护因素,以确定并比较Y染色体上9个STR基因座基因频率在不育患者和有生育力正常人群中的分布.方法 应用STR复合扩增、基因扫描、基因分型方法检测69例特发性不育男性患者及66例生育力正常男性Y染色体上9个STR基因座基因频率,并比较Y染色体微缺失及无缺失不育男性之间这些基因频率的差异.结果 不育组与对照组相比,DYS393和DYS392基因座频率分布差异较大,特发性无精子症和严重少精子症不育人群的DYS393的等位基因13的基因频率明显高于正常生育力人群,PC<0.05,DYS393的等位基因15和DYS392的等位基因10在特发性无精子症和严重少精子症不育人群中的分布明显低于正常生育力人群,PC<0.05.携带Yq缺失与不携带Yq缺失不育男性之间9个STR基因座基因频率分布比较发现DYS439和DYS392基因座基因频率差异较大,DYS439等位基因10和DYS392等位基因15在Y染色体微缺失和无Y染色体微缺失的不育男性之间的分布差异具有统计学意义,PC<0.05.结论 携带DYS393等位基因13和不携带DYS393等位基因15和DYS392等位基因10的男性可能具有发生不育的倾向,而携带DYS439的等位基因10以及不携带DYS392的等位基因15的不育男性可能更易于发生Y染色体微缺失,提示男性的生育力及Y染色体微缺失可能受Y染色体特殊的遗传背景的影响.     

人精子质膜孕激素受体研究

目的 :观察人精子表面孕激素受体 (PR)的定位及阳性表达率。　方法 :精子体外获能后 ,应用异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白 孕酮复合物 (P BSA FITC)染色 ,荧光显微镜观察及流式细胞术 (FCM )定量分析法 ,分别观察与孕酮 (P)结合精子形态及标记精子所占比例。　结果 :P BSA FITC染色精子的形态主要表现为 2种类型 :整个顶体区域或仅赤道区呈绿色荧光 ,顶体后区及尾部不着色。与P结合精子的百分率为 (30 2± 2 4 ) %。　结论 :人精子顶体表面有PR表达 ,且这种表达呈选择性     

电刺激阴茎背神经和海绵体内注射药物诱导大鼠阴茎海绵体内压反应

目的:评价阴茎海绵体内压(ICP)监测在电刺激阴茎背神经和海绵体内注射罂粟碱诱导大鼠阴茎勃起反应中的应用。方法:选取性成熟雄性SD大鼠8只,20%氨基甲酸己酯(1000mg/kg)腹腔注射麻醉下,暴露阴茎并解剖阴茎背神经(DN),将充满肝素盐水并连接于压力传感器的25G针头插入一侧海绵体,取另一30G头皮针插入对侧海绵体,分别用于测定ICP和注射血管活性药物。分别以电刺激海绵体神经(刺激参数:电压4V,波幅0.5ms,频率16Hz,持续20s)和海绵体内注射罂粟碱(0.4mg)诱发阴茎勃起,采用SMUPPC型生物信号处理系统记录ICP变化。结果:麻醉大鼠的ICP基线水平为(12.3±3.1)mmHg(1mmHg=0.133kPa),DN电刺激后约30～60sICP明显升高[(36.4±2.3)mmHg,P<0.05],电刺激结束后缓慢下降至基线水平。海绵体内注射罂粟碱后5～8min可诱发ICP明显升高[(28.4±6.1)mmHg,P<0.05]。结论:监测电刺激大鼠DN及海绵体内药物注射诱发的ICP,为阴茎勃起这一复杂神经血管活动的动物模型在体实验研究提供了一种客观准确的科学工具,对于进一步研究阴茎勃起生理和勃起功能障碍的发病机制,评价治疗勃起功能障碍新疗法的疗效等具有重要意义。     

TCR Vβ7.1基因对IL-12基因修饰乳腺癌细胞的识别和杀伤作用

目的：探讨ICR Vβ7．1基因与IL-12基因在乳腺癌细胞株MCF—7／S识别和杀伤中的效应机制和相互作用。方法：用脂质分别包裹TCR Vβ7．1基因和IL-12基因并转染健康人PBMC和乳腺癌细胞株MCF—7／S，流式细胞仪检测TCR Vβ7．1基因表达，ELISA法检测IL-l2基因在MCF—7／S中的表达及淋巴细胞-肿瘤细胞共培养上清中IFN—γ和IL-4水平，改良MTT法检测TCR Vβ7．1基因修饰PBMC对IL-12基因转染前后MCF—7／S的杀伤活性。结果：TCR Vβ7．1基因和IL-l2基因在PBMC和乳腺癌细胞MCF—7／S中稳定表达；ELISA法检测提示IL-12基因修饰前后肿瘤细胞。淋巴细胞共培养上清中IFN—γ和IL-4水平有显著性差异；细胞毒活性检测表明IL-12基因修饰可明显增强TCR Vβ7．1基因对乳腺癌细胞株MCF-7／S的杀伤作用。结论：TCR Vβ7．1基因修饰CTL及IL-l2基因修饰乳腺癌细胞株共培养，提高了CTL的杀伤作用，说明TCR识别基因与杀伤基因在抗肿瘤效应中具有协同作用。     

TCRVβ7.1基因修饰T细胞对乳腺癌细胞杀伤作用的研究

目的：观察TCPVβ7．1基因转染前后正常人外周血淋巴细胞对乳腺癌细胞株杀伤活性的影响。方法：脂质体包裹PdWA3.1vβ7.1后转染健康人PBMC，流式细胞仪检测PdWA3.1Vβ7.1基因表达，改良MIT法检测TCRVβ7．1基因转染前后正常人外周血淋巴细胞对乳腺癌细胞株杀伤活性。结果：TCRVβ7．1基因转染可显著增加正常人PBMC该基因表达，转染前后正常人外周血淋巴细胞对乳腺癌细胞株杀伤活性有显著性差异。结论：用TCR基因修饰可明显提高正常人PBMC对乳腺癌细胞杀伤作用。     

与精索静脉曲张相关不育的机理研究

精索静脉曲张(varicocele．VC)是精索内蔓状静脉丛因各种原因引起回流不畅或因静脉瓣膜损坏引起血液倒流．而形成局部静脉扩张、迂曲、伸长的病理现象。VC的发病以左侧为主，占70％以上。VC在10岁以前较少发病，10～15岁间发病率明显增加．可高达15％，与成人水平一致且基本保持稳定。根据发病年龄可将VC分为两类：一类是从青春期