金骨莲胶囊对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用及机制

目的 研究金骨莲胶囊对人三阴性乳腺癌（TNBC）细胞MDA-MB-231增殖的影响,探讨金骨莲胶囊对TNBC的治疗作用机制。方法 利用超高效液相色谱-质谱联用（UPLC-MS/MS）技术,对金骨莲胶囊的成分进行分析鉴定。通过用噻唑蓝（MTT）比色法观察金骨莲胶囊（0.125,0.25,0.5,1,2 g·L^-1）对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用。采用Hoechst 33258染色检测金骨莲胶囊处理MDA-MB-231细胞24 h后的细胞核凋亡形态学的变化。采用流式细胞仪检测金骨莲胶囊不同质量浓度和作用时间对MDA-MB-231细胞凋亡及周期分布情况。通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶（PARP）,原癌基因蛋白（c-Myc）,细胞周期蛋白B₁（cyclin B₁）和磷酸化胞外信号调节激酶（p-ERK）的蛋白表达水平。结果 该研究利用UPLC-MS/MS技术鉴定了金骨莲胶囊提取物中113个化合物成分。MTT比色法显示,与空白组比较,金骨莲胶囊组（0.125,0.25,0.5,1,2 g·L^-1）细胞抑制率显著增加（P<0.01）,半数抑制浓度（IC₅₀）为（0.13±0.02）g·L^-1;流式细胞术结果显示,与空白组比较,金骨莲胶囊组（1 g·L^-1）细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,金骨莲胶囊组（0.5,1 g·L^-1）细胞处于S期的数量明显增加（P<0.05,P<0.01）;Western blot结果显示,与空白组比较,金骨莲胶囊组（0.5,1 g·L^-1）细胞中的PARP,c-Myc,cyclin B₁蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,金骨莲胶囊组（1 g·L^-1）p-ERK蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。结论 金骨莲胶囊可抑制MDA-MB-231细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期,并诱导其凋亡,其机制可能与其抑制MDA-MB-231细胞MAPK信号通路有关。     

一清颗粒联合环磷酰胺对三阴性乳腺癌荷瘤小鼠移植瘤的影响＊

目的 研究一清颗粒联合环磷酰胺对三阴性乳腺癌荷瘤小鼠移植瘤的影响。方法 建立小鼠乳腺癌移植瘤模型，并随机分为阴性对照组、阳性对照组、实验组和联合组，每组8只。阳性对照组腹腔注射30 mg·kg^-1·d^-1环磷酰胺，实验组灌胃20 g·kg^-1·d^-1一清颗粒，联用组腹腔注射30 mg·kg^-1·d^-1环磷酰胺+灌胃20 g·kg^-1·d^-1一清颗粒。阴性对照组灌胃等体积0.9% NaCl+腹腔注射等体积0.9% NaCl，每天1次，连续干预17天。检测各组小鼠肿瘤生长情况；检测各组小鼠抑瘤率、脾指数和胸腺指数；检测各组中性粒细胞、外周血淋巴细胞和单核细胞的比例；检测肿瘤组织中CD4⁺T和CD8⁺T细胞比例；检测肿瘤组织中IL-6和TNF-α mRNA表达水平；检测各组小鼠体质量增加率。结果 联合组移植瘤生长速度最慢；阳性对照组、实验组和联合组抑瘤率分别为60.34%，24.71%和76.46%；阴性对照组、阳性对照组、实验组和联合组的胸腺指数分别为（0.50 ± 0.28）、（0.06 ± 0.04）、（0.54 ± 0.39）和（0.23 ± 0.04）；阴性对照组、阳性对照组、实验组和联合组的外周血淋巴细胞比例分别为（33.77 ± 2.29）%、（16.20 ± 4.52）%、（31.33 ± 10.01）%和（21.07 ± 4.37）%；阴性对照组、阳性对照组、实验组和联合组的CD4⁺T细胞比例分别为（36.43 ± 2.67）%、（33.57 ± 1.69）%、（45.96 ± 3.54）%和（62.8 ± 3.63）%；阴性对照组、阳性对照组、实验组和联合组的CD8⁺T细胞比例分别为（30.02 ± 1.97）%、（25.79 ± 2.32）%、（34.95 ± 1.93）%和（42.16 ± 2.57）%；阴性对照组、阳性对照组、实验组和联合组的IL-6 mRNA表达水平分别为1.00 ± 0.04、0.67 ± 0.02、0.61 ± 0.04和0.49 ± 0.05；阴性对照组、阳性对照组、实验组和联合组的TNF-α mRNA表达水平分别为1.00 ± 0.03、0.73 ± 0.01、0.69 ± 0.02和0.66 ± 0.03。阴性对照组、阳性对照组、实验组和联合组的体质量增加率分别为（12.50 ± 1.84）%，（5.00 ± 1.63）%，（8.30 ± 0.54）%和（8.10 ± 0.41）%。与阳性对照组相比，联合组抑瘤率、胸腺指数、外周血淋巴细胞比例、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞比例以及体质量增加率都显著增加，而IL-6的表达水平显著降低（P<0.05）。结论 一清颗粒联合环磷酰胺可显著抑制乳腺癌荷瘤小鼠移植瘤生长，一清颗粒可以减少环磷酰胺致小鼠免疫功能减退的毒性反应，改善生存质量。     

丁香脂素对谷氨酸钠诱导的SH-SY5Y细胞兴奋性损伤的保护作用

目的:基于谷氨酸钠诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞损伤构建的模型,观察从枫香槲寄生中提取得到丁香脂素的保护,并探讨其作用机制。方法:采用谷氨酸钠构建SH-SY5Y细胞损伤模型,实验分为正常组,损伤模型组(谷氨酸钠50 mmol·L~(-1),谷氨酸钠50 mmol·L~(-1)+DMSO),丁香脂素组(6. 25,12. 5,25μmol·L~(-1)),通过细胞计数法,细胞形态学观察,Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)细胞凋亡检测、活性氧(ROS)检测、线粒体膜电位以及蛋白免疫印迹法(Western blot)等方法,评价丁香脂素对谷氨酸钠诱导的神经兴奋性损伤的神经保护活性。结果:与正常组比较,模型组的细胞存活率明显降低(P 0. 01),ROS显著升高(P 0. 01),线粒体膜电位显著降低(P 0. 01),聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP),PARP1蛋白表达显著降低(P 0. 01),细胞的凋亡率显著增大(P 0. 01);与模型组比较,丁香脂素组(6. 25,12. 5,25μmol·L~(-1))呈浓度依赖性增加细胞的存活率(P 0. 01),减少ROS的积累(P 0. 01),显著恢复线粒体膜电位的变化(P 0. 01),显著上调PARP,PARP1蛋白(P 0. 01),显著降低细胞凋亡率(P 0. 01)。结论:提示丁香脂素对谷氨酸钠诱导的SH-SY5Y神经细胞的兴奋性损伤具有显著的保护活性,其作用机制可能是通过抗氧化应激,修复线粒体功能及DNA损伤等通路来显著降低谷氨酸钠诱导的神经细胞凋亡。