抗人CD33单链抗体与CD80胞外区融合基因的构建、表达及其生物活性检测

目的构建及表达CD80胞外区与抗人CD33单链抗体(scFv)融合基因,并初步检测融合蛋白的生物活性。方法扩增CD80胞外区,利用人血清白蛋白(HAS)第三结构域亲水性的403-427位氨基酸作为链间连接肽将其与抗人CD33 scFv连接,并克隆至原核表达载体PET22b(+)中,经IPTG诱导,在大肠杆菌Rosseta(DE3)内得到融合蛋白的表达。表达产物经过溶解包涵体,镍柱亲和层析纯化和体外复性过程,获得了高纯度的融合蛋白。并用间接免疫荧光法检测融合蛋白与人CD33抗原结合活性。结果克隆出CD80胞外区序列,大小为633 bp,正确合成作为链间连接肽的人血清白蛋白(HAS)第三结构域的403~427位氨基酸。成功构建融合基因表达载体,SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,融合蛋白在Rosseta(DE3)中得到高效表达,融合蛋白相对分子质量(Mr)约为55 000,复性后经过间接免疫荧光检测表明具有与人CD33抗原结合活性。结论成功构建PET22b(+)-CD80胞外区-CD33 scFv(ExCD80-CD33scFv)融合基因表达质粒,融合蛋白在宿主菌Rosetta(DE3)中获得了表达,并初步检测其生物学活性。     

超声心动图诊断部分性肺静脉异位引流的价值

目的探讨超声心动图对部分性肺静脉异位引流(PAPVC)的诊断价值。方法回顾性分析29例PAPVC患者二维超声及彩色多普勒图像表现并与心血管造影、手术结果对比分析,总结其诊断特点,找出漏诊的原因。结果术前确诊25例,漏诊3例,1例提示诊断。右上肺静脉引流入右心房19例;右上肺静脉引流入上腔静脉2例;右上肺静脉及右下肺静脉均引流入右心房2例;右下肺静脉引流入右心房2例;右上肺静脉及右下肺静脉引流入冠状静脉窦1例;左上及左下肺静脉通过垂直静脉引流入左无名静脉3例。合并房间隔缺损(ASD)27例,其中静脉窦型ASD 20例,继发孔ASD 7例,1例房间隔完整,1例合并卵圆孔未闭。25例超声诊断与心血管造影、手术结果符合。结论超声心动图诊断PAPVC具有较高的准确度,但在成人时期容易漏诊。     

扁咽口服液抗炎及其对急性咽炎模型大鼠治疗作用的实验研究

目的观察评价扁咽口服液的抗炎作用,并考察其对急性咽炎的治疗作用和对常见呼吸道病原菌的抑菌活性。方法运用小鼠耳廓肿胀实验、大鼠足肿胀实验和小鼠腹腔白细胞游走实验,评价扁咽口服液的抗炎作用;并采用大鼠急性咽炎模型,观察扁咽口服液的治疗作用;采用平皿法测定扁咽口服液对常见呼吸道病原菌的最低抑菌浓度。结果扁咽口服液可显著降低二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀度,减轻角叉菜胶所致大鼠的足肿胀(P<0.05或P<0.01);扁咽口服液高、中剂量显著降低羧甲基纤维素钠致小鼠腹腔白细胞游走(P<0.05);扁咽口服液可减轻急性咽炎模型大鼠咽部黏膜的炎症表现,缓解急性咽炎症状,并且随着药物剂量的增加,其抗炎作用和对咽部黏膜的改善作用均增强。扁咽口服液对金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌均较为敏感,其最小抑菌浓度分别为56、28、56、28、14 mg/mL。结论扁咽口服液具有良好的抗炎作用,对急性咽炎有明显的疗效。     

乏氧微环境对人外周血来源的树突状细胞迁移活性的影响

肿瘤微环境对肿瘤转移行为具有重要作用，人与动物实体肿瘤组织内存在局部乏氧的特殊微环境。肿瘤侵袭转移能力不仅有赖于肿瘤本身恶性表型的变化，还与宿主免疫监视机制的变化有关，其中启动特异性抗肿瘤免疫应答最重要的树突状细胞(DC)功能缺陷是肿瘤细胞逃脱机体免疫监视而转移的重要机制之一。DC能否发挥强大功能同其在机体迁移密切相关。最近的研究表明，     

生理困难气道在急诊气道管理中的风险及管理策略

生理困难气道是指从开始气管插管至过渡到正压通气期间,患者的生理变化会增加心肺及其他并发症的风险。低血压、低氧血症、代谢性酸中毒及右心功能障碍等生理紊乱因素,显著增加了围插管期发生低血压和心力衰竭的风险。生理困难气道在急诊重症患者中尤为明显,但也可发生在生理紊乱的健康人中,如肥胖者、妊娠期和儿童。了解生理困难气道患者的生理变化和风险,对优化生理紊乱和采取相关措施避免气管插管并发症尤为重要。本文回顾临床上常见的生理性困难气道,并根据现有证据对其的管理策略进行综述。     

经肺热稀释技术对急性肺损伤犬血管外肺水的监测

目的探讨经肺热稀释技术对不同原因急性肺损伤（ALI）血管外肺水（EVLW）测定的准确性。方法18只杂种犬随机分为正常组、外源性急性肺损伤组和内源性急性肺损伤组，每组6只，通过静脉注射油酸制备外源性ALI模型，气管内注入十六烷磺基丁二酸钠盐制备内源性ALI模型，然后分别向肺内灌注一定量的生理盐水，采用经肺热稀释法在灌注的前后测定EVLW，观察灌注前后EVLW变化与所灌注生理盐水量之间相关性。结果正常肺组织EVLW含量为（254．5±413．0）ml，肺泡灌注前后EVLW的变化与实际肺泡灌注生理盐水量之间具有良好的相关性（r=0．986，P〈0．01）；外源性ALI组EVLW含量为（483．3±11．5）ml，与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．01），ALI组肺泡灌注前后EVLW的变化与实际肺泡灌注生理盐水量之间也具有良好的相关性（r=0．978，P〈0．01）。内源性ALI组EVLW含量为（526．2±12．9）ml，与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。肺内源性ALI组肺泡灌注前后EVLW的变化与实际肺泡灌注生理盐水量之间具有较好的相关性（r=0．890，P〈0．01），但不如外源性ALI组相关性高。结论经肺热稀释技术对EVLW的监测具有良好的准确性，但不同原因导致的EVLW增加的监测准确性不同。     

延时低温对急性肺损伤早期炎症反应和肺水的影响

目的研究延迟开始的低温对肠缺血再灌注所致急性肺损伤早期炎症反应和肺水的影响。方法新西兰大白兔60只（10只/组）,随机分为空白对照组（肛温37～38℃,假手术组）、缺血对照组（肛温37～38℃）、浅低温组（肛温32～35℃）、中低温组（肛温28～31.9℃）、延迟浅低温组（直肠目标温度32～35℃）、延迟中低温组（直肠目标温度28～31.9℃）。实验组采用完全夹闭肠系膜上动脉（super mesenteric artery,SMA）1h,开放后再灌注的方法制备肠缺血再灌注（Intestine Ischemia Reperfusion,IIR）致急性肺损伤（acute lung injury,ALI）模型。采用体表降温的方法控制实验动物体温。再灌注6h后测定支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar Lavage Fluid,BALF）TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10水平;再灌注6h后处死动物取肺组织标本,测定肺组织湿/干比值。结果和空白对照组比较,实验组BALF中TNF、IL-1、IL-6、IL-10水平升高,肺组织肺水增加。在实施低温治疗后,同缺血对照组相比,上述肺损伤的表现得到了改善,延迟开始的低温治疗也有一定的效果。结论浅低温和中低温可以有效改善IIR导致ALI动物模型的早期炎症反应,减轻肺组织损伤的程度;延迟开始的低温也有一定的效果。     

重组腺病毒介导血小板衍生生长因子感染人类脐带间质干细胞的实验研究

 目的　检测重组腺病毒方法介导血小板衍生生长因子（PDGF）对人类脐带间质干细胞（MSC）的感染能力,为将其用于基因治疗奠定基础。方法　反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法扩增人类PDGF的cDNA序列,构建重组病毒载体AdPDGF。分离培养人类脐带MSC。体外以不同感染复数感染MSC后,流式细胞术检测感染效率,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白（GFP）表达。锥虫蓝染色及四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测感染后细胞生存活力及增殖能力。酶联免疫吸附（ELISA）法检测细胞上清液中PDGF分泌水平。结果　成功构建病毒载体AdPDGF。其对MSC的感染效率随感染复数增加而增高,当感染复数为50时,达到最高,为87.36 %。未感染的MSC、感染AdPDGF和对照病毒的MSC活力分别为（97.8±2.3）%、（91.9±4.0）%和（92.8±4.0）%,增殖能力分别为（100±16.8）%,（95.9±12.0）%和（87.5±9.7）%,感染AdPDGF的MSC与两个对照比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。感染48 h后MSC能有效分泌PDGF,感染复数为10、30、50时,PDGF分泌水平分别为（1.53±0.37）、（3.03±0.68）和（5.25±0.92）ng／ml,MSC-GFP及MSC组未检测到有PDGF分泌。结论　成功构建AdPDGF重组腺病毒并高效感染人类脐带MSC。     

医院感染现患率调查分析

目的 了解医院感染现状,为医院感染的深入研究提供科学依据.方法 采用横断面调查方法、床旁与住院病历调查相结合.结果 实查1033例,现患率为3.87%,感染郎位依次为呼吸道、表浅切口、皮肤软组织;抗菌药物使用率60.31%,用药前病原菌送检率较低,仪为7.73%.结论 现患率凋查方法简单,结果可靠,可基本反映医院感染情况;需进一步加强侵入性操作管理,提高病原菌送检率,减少预防性用药,降低抗菌药物使用率.     

咽拭子、肺泡灌洗液肺炎支原体-DNA 水平与社区获得性肺炎支原体肺炎炎性反应及免疫功能的关系

目的探究咽拭子、肺泡灌洗液肺炎支原体-DNA(MP-DNA)水平与社区获得性肺炎支原体肺炎(CA-MPP)病儿病情、炎性反应及免疫功能指标的关系。方法选取2018年1月至2019年5月南阳市中心医院收治的92例CA-MPP病儿作为研究对象,对比重症组(n=30)与轻症组(n=62)病儿咽拭子、肺泡灌洗液MP-DNA水平。根据咽拭子、肺泡灌洗液MP-DNA水平分为低菌量组、中菌量组、高菌量组,比较三组血清炎性反应因子［C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)］水平、免疫功能指标［免疫球蛋白A(IgA)、IgM、IgG］水平,分析咽拭子、肺泡灌洗液MP-DNA与炎性反应、免疫功能指标的相关性。结果重症病儿咽拭子［(5.68±0.73)比(5.14±0.51)］、肺泡灌洗液MP-DNA水平［(6.87±0.85)比(5.70±0.63)］高于轻症病儿(P<0.05);咽拭子、肺泡灌洗液MP-DNA高菌量组血清CRP、TNF-α、IL-18水平高于中菌量组、低菌量组(P<0.05);咽拭子、肺泡灌洗液MP-DNA表达量与CA-MPP病儿血清CRP、TNF-α、IL-18水平存在显著正相关关系(P<0.05);咽拭子、肺泡灌洗液MP-DNA高菌量组血清IgA低于中菌量组、低菌量组,IgM、IgG高于中菌量组、低菌量组(P<0.05);咽拭子、肺泡灌洗液MP-DNA表达量与CA-MPP病儿血清IgA水平存在显著负相关关系,与血清IgM、IgG水平存在显著正相关关系(P<0.05)。结论咽拭子、肺泡灌洗液MP-DNA水平随着CA-MPP病儿病情加重而升高,且与病儿炎性反应、免疫功能存在密切相关性,监测其水平有助于临床明确病儿病情,指导合理治疗方案的制定。